Stat3反义寡核苷酸联合化疗调控结肠癌细胞增殖与凋亡的分子机制

目的　探讨Stat3反义寡核苷酸 (Stat3AS ON)联合 5 氟尿嘧啶 (5 FU )治疗结肠癌的作用机制。方法　应用Stat3AS ON与 5 FU处理结肠癌细胞HCT116,Westernblot检测Stat3、p Stat3、CyclinD1与bcl xL表达 ,MTT法检测细胞增殖状态 ,流式细胞技术检测细胞周期与凋亡。结果　Stat3AS ON与 5 FU作用于HCT116细胞 72h后 ,G1期细胞比率由 63 .7%上升至 82 .2 % ,S期细胞比率分别由 17.6% ,下降至 9.9% ,凋亡细胞百分比由 6.1%增加至 3 2 .0 %。Stat3AS ON与 5 FU可以抑制结肠癌细胞增殖 ,促进结肠癌细胞凋亡 ,联合应用Stat3AS ON与 5 FU可以起协同作用 ,明显抑制结肠癌细胞Stat3信号转导通路活化。结论　选择性阻断细胞内信号转导通路可能为治疗结肠癌提供新途径     

SIX4和miR-103a-3p在胆囊癌组织中的表达及其对胆囊癌细胞增殖和侵袭的影响

目的 探究SIX同源盒蛋白4(SIX4)、微小RNA(miR)-103a-3p在胆囊癌组织中的表达情况,以及二者对胆囊癌细胞增殖、侵袭的影响。方法 胆囊癌组织及癌旁组织取自永州市中心医院2019年10月至2021年9月32例接受手术治疗的胆囊癌患者,并将体外培养的胆囊癌细胞系GBC-SD分为对照组、mimic NC组、miR-103a-3p mimic组、miR-103a-3p mimic+pc DNA3.1组、miR-103a-3p mimic+SIX4组。实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测SIX4 mRNA、miR-103a-3p水平;蛋白印迹法检测SIX4、增殖细胞核相关抗原Ki-67、增殖细胞核抗原(PCNA)以及基质金属蛋白酶(MMP)2、MMP9蛋白水平;CCK-8法检测细胞增殖情况;Transwell检测细胞侵袭情况。双荧光素酶验证SIX4 mRNA 3’UTR与miR-103a-3p的结合作用。结果 与癌旁组织相比,胆囊癌组织中SIX4 mRNA水平升高,miR-103a-3p水平降低(P<0.05)。miR-103a-3p靶向负调控SIX4。与对照组、mi...     

骨桥蛋白反义寡核苷酸对微缺氧下人结肠癌细胞HT-29体外侵袭游走能力的影响

性地抑制,表达量分别是对照组的31.5%和35.4%.ASODN组HT-29细胞穿过微孔膜的细胞数仅为(52.6±3.8)个;明胶酶活性下降71%,与各对照组比较,差异有统计学意义(P＜0.01).结论 靶向OPN的ASODN明显抑制微缺氧诱导的OPN mRNA和蛋白表达,并显著下调微缺氧诱导的细胞分泌MMP2/9的活性及其侵袭游走能力.OPN在微缺氧促进肿瘤向恶性表型转化中起着重要作用.     

反义GAcDNA重组质粒的构建及其对结肠癌细胞增殖的影响

谷氨酰胺(Gln)是肿瘤细胞的主要呼吸燃料和重要氮源。谷氨酰胺酶(GA)是肿瘤细胞酵解Gln的起始酶和关键酶，封闭GA基因则可能阻断肿瘤细胞内Gln的酵解，进而抑制其生长，我们将GAcDNA反向构建在PcDNA3．0真核表达载体上，转染人结肠癌细胞，观察它对结肠癌细胞生长曲线和增殖能力的影响。     

PSF1在结肠癌组织中的表达及其对结肠癌细胞增殖的影响

目的检测PSF1在结肠癌组织中的表达,探讨RNA干扰沉默PSF1表达对人结肠癌细胞增殖的影响及其可能的机制。方法收集2004年5月至2006年12月间经病理确诊的40例结肠癌标本．采用Westerllblot检测标本中PSF1蛋白表达水平;应用脂质体法将靶向PSF1的短发夹RNA（shRNA）干扰质粒转染人结肠癌细胞株LOVO、HT．29和HCT116,Westernblot法检测PSF1蛋白表达变化．分别应用MTY法、软琼脂克隆形成实验及荧光定量PCR检测转染PSF1shRNA干扰质粒对结肠癌细胞增殖活性、锚定非依赖性生长能力及PSF2、PSF3和SLD5mRNA表达的影响。结果结肠癌组织中PSF1蛋白相对表达量为0．485±0．113,显著高于正常黏膜组织的0．056±0．014（P〈0．01）。转染PSF1sbRNA干扰质粒后,LOVO、HT-29和HCT116细胞中PSF1蛋白表达水平均显著下降（P〈0．05）,细胞增殖能力显著降低,软琼脂克隆形成率明显下降。与阴性对照组及正常生长组细胞比较,差异均有统计学意义（P〈0．05）。转染PSF1shRNA干扰质粒后．LOVO、HT-29和HCT116细胞中PSF2、PSF3和SLD5mRNA表达均明显下降（P〈0．05）。结论PSF1与结肠癌的发生发展具有一定关系。利用RNA干扰技术能有效抑制结肠癌细胞中PSF1表达。并抑制结肠癌细胞增殖。PSF1基因有望成为结肠癌靶向治疗的新靶点。     

miR-16和miR-302在乳腺癌组织中的表达及临床意义

探究微小RNA-16(miR-16)、微小RNA-302(miR-302)在乳腺癌组织中的表达及其临床意义.2016年1月—2017年3月,经手术切除且经病理证实的乳腺癌组织标本40例,癌旁正常组织40例.采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测乳腺癌组织及癌旁正常组织中miR-16、miR-302表达水平;采用K...     

miR-155在结肠癌组织中的表达及其临床意义

目的 研究miR-155在结肠癌组织中的表达并探讨其表达与结肠癌临床病理特征的关系.方法 收集2011年3月至9月襄阳市中心医院手术切除的原发性结肠癌标本57例,分别提取结肠癌和正常黏膜组织中总RNA并行逆转录反应,应用实时荧光逆转录聚合酶链反应检测肿瘤组织及正常黏膜组织中miR-155的表达水平,探讨其表达与结肠癌临床病理参数间的关系.配对标本采用非参数Wilcoxon秩和检验,两独立样本采用u检验.结果 miR-155在结肠癌组织中相对表达水平为0.421(0.016 ～1.241),显著高于其在正常黏膜组织中表达的0.128(0.000～0.337),两者比较,差异有统计学意义(u=3.783,P＜0.05);miR-155的表达增高与TNM分期、肿瘤浸润程度、淋巴结转移、肿瘤分化程度明显相关(u=2.364,2.152,2.338,2.214,P＜0.05).结论 miR-155在结肠癌组织中表达增高,miR-155可能作为原癌基因参与结肠癌的发生、发展,与结肠癌的侵袭、转移密切相关.     

内皮素受体A反义寡核苷酸对人前列腺间质细胞增殖的抑制作用

目的　探讨内皮素受体A反义寡核苷酸 (ETAR ASODN)对人前列腺间质细胞体外增殖活性的抑制作用。　方法　原代培养前列腺间质细胞 ,第 4～ 6代细胞经鉴定后加入不同浓度人工合成的ETAR ASODN片段 ,观察细胞增殖情况 ,放射配基结合实验检测内皮素受体A(ETAR)蛋白合成。　结果　加入 5、10、15 μmol/LETAR ASODN的前列腺间质细胞A540 值分别为 0 .30 4± 0 .0 82、0 .2 96± 0 .0 0 8和 0 .194± 0 .0 6 1,增殖活性均较对照组明显降低 (P <0 .0 1) ,且呈浓度依赖性 (P<0 .0 5 ) ;15 μmol/LETAR ASODN对ETAR蛋白合成有明显抑制作用。 　结论　ETAR ASODN能有效抑制前列腺间质细胞的ETAR蛋白表达及体外增殖活性。     

反义Survivin对人结肠癌细胞凋亡及耐药性的影响

目的 观察Survivin ASODN联合长春新碱（VCR）、5-氟尿嘧啶（5-Fu）对人结肠癌细胞系HT-29凋亡的影响。方法 设计合成特异性Survivin反义寡核苷酸（ASODN）。HT-29细胞分成6组：空白对照组、空脂质体转染对照组、正义链转染对照组、100、200、300nmol／L反义链转染组。以阳离子脂质体为载体转染至HT-29细胞内，用Westernblot法检测各组细胞Survivin蛋白表达情况；流式细胞仪检测细胞凋亡情况；MTT法检测VCR、5-Fu对转染前后细胞的生长抑制情况。结果各浓度ASODN转染组癌细胞Survivin蛋白表达有不同程度减少，而各对照组细胞Survivin蛋白表达无明显变化。各ASODN转染组VCR、5-Fu对肿瘤细胞生长抑制率明显高于各对照组（P〈0．05），且300nmol／L转染组明显高于100和200nmol／L组（P〈0．05）。ASODN转染组细胞凋亡指数明显高于各对照组（P〈0．05），以300nmol／L转染组加VCR作用后凋亡指数最高（P〈0．01）。结论Survivin ASODN转染人结肠癌细胞能下调Survivin蛋白的表达，诱导结肠癌细胞凋亡，抑制细胞增值，增加结肠癌细胞对化疗药物的敏感性。     

miR-338-5p在结直肠癌组织中的表达及其对结肠癌细胞增殖的影响

目的探讨miR-338-5p在结直肠癌组织中的表达状况,以及miR-338-5p过表达对结肠癌细胞系HCT116和SW620增殖、凋亡及细胞周期的影响。方法使用实时定量PCR方法检测miR-338-5p在40例临床诊断为结直肠癌患者配对癌组织及癌旁组织中的表达情况。随后使用miR-338-5p-mimics转染结肠癌细胞系HCT116和SW620,确认过表达成功后,分别使用CCK-8法、FITC-AnnexinV．PI法及Propidiumiodide法检测肿瘤细胞的增殖、凋亡和细胞周期的改变。结果①miR-338-5p在结直肠癌组织中的表达明显低于其在相应的癌旁组织中的表达（P〈0．01）。②与转染阴性对照比较,转染miR-338．5p．mimics后,HCT116和SW620细胞增殖能力明显减弱（P〈0．01）,凋亡率明显增加[HCT116细胞：（11．43±0．67）％比（7．98±0．36）％,P〈0．01;SW620细胞：（10．5±0．2）％比（7．93±0．5）％,P〈0．01],诱导HCT116和SW620细胞G1期阻滞[HCT116细胞：（80．41±1.34）％比（64．87±1．83）％,P〈0．01;SW620细胞：（68．76±0．41）％比（54．89±0．78）％,P〈0．01]。结论miR-338-5p可能作为抑癌基因在结直肠癌中发挥作用,并对细胞增殖、凋亡和周期有显著影响。     

结肠癌组织miR-192和miR-23a水平的变化及其临床意义

目的:探究结肠癌组织中微小RNA(miR)-192和miR-23a水平变化及其临床意义。方法:收集2009年3月—2012年10月我院手术切除并经病理学检查确诊的结肠癌标本71例及肠息肉标本45例,采用原位杂交法检测结肠癌组织及肠息肉组织中miR-192和miR-23a水平,分析结肠癌组织中miR-192和miR-23a水平与临床病理特征的关系。选用结肠癌SW620细胞系作为研究对象,分为对照组、miR-192组及miR-23a组,其中对照组不作处理,miR-192组及miR-23a组细胞分别进行miR-192及miR-23a转染,采用Transwell实验检测3组结肠癌细胞的侵袭能力。结果:结肠癌组织中miR-192水平明显低于肠息肉组织(P<0.05),miR-23a水平明显高于肠息肉组织(P<0.05);miR-192及miR-23a水平与结肠癌浸润深度、淋巴结转移情况及Dukes分期有关(P<0.05);结肠癌组织中miR-192表达水平与miR-23a表达水平呈负相关(r=-0.805,P<0.05)。miR-192组结肠癌细胞相同时间内穿过小室数明显低于对照组及miR-23a组,miR-23a组结肠癌细胞相同时间内穿过小室数明显高于对照组(P<0.05)。结论:结肠癌组织中miR-192水平下降,miR-23a水平上调;miR-192和miR-23a表达水平与浸润深度、淋巴结转移情况及Dukes分期有关;结肠癌组织中miR-192和miR-23a水平呈负相关;miR-192抑制结肠癌细胞侵袭能力,miR-23a能增强结肠癌细胞侵袭能力。     

miR-1246在肝癌组织中的表达及其对人肝癌细胞增殖和凋亡的影响

目的 观察微小RNA-1246（miR-1246）在肝癌组织中的表达及其对人肝癌细胞增殖和凋亡的影响,探讨其在肝癌发生发展中的作用和意义。方法应用实时定量PCR（qRT-PCR）方法检测miR-1246在肝癌以及癌旁组织的表达;对人肝癌细胞株（BEL7402、SMMC7721）转染miR-1246 抑制剂后,采用MTT法观察肝癌细胞的增殖活性,流式细胞仪检测细胞凋亡的变化。结果 miR-1246 在肝癌组织中表达显著高于癌旁组织[（65.39±8.77）vs（10.23±2.58）,P=0.002]。MTT和凋亡实验结果显示,与阴性对照组相比,转染miR-1246抑制剂后,BEL7402细胞增殖能力下降,凋亡增加（P均＜0.05）;SMMC7721细胞也出现增殖能力下降,凋亡增加（P均＜0.05）。结论 miR-1246 在肝癌组织中高表达,并且与肝癌细胞的增殖及凋亡有关,其表达的上调可能与肝癌的发生发展有关。     

雄激素受体在乳腺癌细胞中的表达及其对细胞增殖的影响

目的 检测雄激素受体(AR)在乳腺癌细胞中的表达,并观察雄激素刺激对乳腺癌细胞增殖的影响.方法 选择雌激素受体(ER)阳性的MCF-7和ER阴性的MDA-MB-453乳腺癌细胞,体外培养,Western blot技术检测两乳腺癌细胞株中AR蛋白的表达,MTT法检测用1×10-7、1×10-8和1×10-9 mol/L不同浓度的雄激素二氢睾酮(DHT)分别干预48、96、144 h后的细胞增殖,并应用流式细胞术检测DHT刺激乳腺癌细胞72 h后细胞周期的变化.结果 两个乳腺癌细胞株经DHT作用后AR蛋白表达均增多,DHT通过AR抑制MCF-7和MDA-MB-453两个乳腺癌细胞株的生长,各时间段不同浓度组比较A值差异无统计学意义(P＞0.05),细胞周期结果显示G1期细胞比例增高,S期细胞比例降低.结论 雄激素受体途径对ER阳性的MCF-7和ER阴性的MDA-MB-453乳腺癌细胞均有抑制生长作用,可能通过抑制细胞由G1期到S期转化来实现的.

Abstract：

Objective To evaluate the expression of androgen receptor (AR) in the breast cancer cell lines and its effect on proliferation of breast cancer cells. Methods The estrogen receptor (ER) -positive MCF-7 and ER-negative MDA-MB-453 cells were involved in this study and cultured in vitro. The expression of AR was detected by using Western blotting. Cell proliferation was determined by methyl thiazol tetrazolium (MTT) assay after the treatment with different concentrations of dihydrotestosterone (DHT) ( 1 x 10 -7, 1 x 10- 8, 1 x 10 -9 mol/L) for 48, 96 and 144 h respectively. Cell cycle was analyzed by flow cytometry following culture for 72 h. Results DHT increased the AR expression in the two breast cancer cell lines. AR pathway could inhibit proliferation of MCF-7 and MDA-MB-453 cells. There was no significant difference in absorbance values among three treatment groups at different time points (P ＞ 0. 05). Cell cycle analysis revealed that the proportion of cells at G1 phase was increased, and that at S phase decreased. Conclusion AR pathway may inhibit proliferation of ER-negative MDA-MB-453 breast cells as well as ER-positive MCF-7 cells, by suppressing the process of G1 to S phase progression.     

miR-3189-3p在肾癌组织中的表达及对肾癌细胞增殖和侵袭的影响

目的:探讨miR-3189-3p在肾癌组织和癌旁组织中的表达差异及其对肾癌细胞生物学功能的影响。方法:通过实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测miR-3189-3p在肾癌组织及癌旁组织、肾癌细胞株(Caki-1、ACHN、A498、OS-RC-2)和正常肾小管上皮细胞HK-2中的表达。分别转染miR-NC或m...     

miR-154对前列腺癌细胞功能影响的实验研究

目的 研究miR-154在对前列腺癌组织中的表达及其对前列腺癌细胞生物学功能的影响.方法 采用RT-PCR方法检测前列腺癌和癌旁正常组织样本中miR-154的表达.运用细胞增殖实验(CCK-8法)、克隆形成实验及细胞周期分析评估上调miR-154对前列腺细胞系DU145和PC-3的作用.结果 与癌旁正常前列腺组织相比,miR-154在前列腺癌组织中的表达水平显著下调.体外实验中,miR-154过度表达能显著抑制癌细胞的生长,细胞克隆形成数明显降低.流式细胞术检测发现癌细胞的生长受到抑制,在G0/G1期比率明显升高,而上调miR-154可以使前列腺癌细胞阻滞在G1期,而抑制细胞的增殖.结论 miR-154可以影响前列腺癌细胞的增殖功能,有望成为前列腺癌治疗的新靶点.     

核糖核苷酸还原酶M2在结肠直肠癌组织的表达及对癌细胞增殖和迁徙的影响

目的:研究核糖核苷酸还原酶M2(RRM2)在结肠直肠癌组织的表达及对癌细胞增殖和迁徙的作用。方法:应用组织芯片免疫组化技术测组织中RRM2的表达。用siRNA转染RRM2高表达的细胞株HCT116以验证干扰效果,CCK-8法检测细胞增殖能力,Transwell实验评估转染后癌细胞迁移能力。结果:结肠直肠癌组织中RRM2的表达明显高于癌旁正常组织(P<0.05),且与浸润深度、分化程度、TNM分期均有相关性;在结直肠细胞株中,HCT116细胞RRM2在mRNA和蛋白水平表达量最高,用干扰效率最高的siRNA下调RRM2表达可以明显抑制HCT116细胞的增殖能力。在Transwell迁徙实验中,RRM2干扰组穿膜细胞数为(11±2)个,显著低于阴性对照组[(29±4)个]和空白对照组[(23±3)个](P<0.01)。结论:数据显示RRM2在结肠直肠癌组织中呈过表达,且在结肠直肠癌进展和预后发挥重要作用,其有望成为评估结肠直肠癌进展及预后的潜在指标。     

雄激素受体在乳腺癌细胞中的表达及其对细胞增殖的影响

Objective To evaluate the expression of androgen receptor (AR) in the breast cancer cell lines and its effect on proliferation of breast cancer cells. Methods The estrogen receptor (ER) -positive MCF-7 and ER-negative MDA-MB-453 cells were involved in this study and cultured in vitro. The expression of AR was detected by using Western blotting. Cell proliferation was determined by methyl thiazol tetrazolium (MTT) assay after the treatment with different concentrations of dihydrotestosterone (DHT) ( 1 x 10 -7, 1 x 10- 8, 1 x 10 -9 mol/L) for 48, 96 and 144 h respectively. Cell cycle was analyzed by flow cytometry following culture for 72 h. Results DHT increased the AR expression in the two breast cancer cell lines. AR pathway could inhibit proliferation of MCF-7 and MDA-MB-453 cells. There was no significant difference in absorbance values among three treatment groups at different time points (P ＞ 0. 05). Cell cycle analysis revealed that the proportion of cells at G1 phase was increased, and that at S phase decreased. Conclusion AR pathway may inhibit proliferation of ER-negative MDA-MB-453 breast cells as well as ER-positive MCF-7 cells, by suppressing the process of G1 to S phase progression.     

雄激素受体在乳腺癌细胞中的表达及其对细胞增殖的影响

Objective To evaluate the expression of androgen receptor (AR) in the breast cancer cell lines and its effect on proliferation of breast cancer cells. Methods The estrogen receptor (ER) -positive MCF-7 and ER-negative MDA-MB-453 cells were involved in this study and cultured in vitro. The expression of AR was detected by using Western blotting. Cell proliferation was determined by methyl thiazol tetrazolium (MTT) assay after the treatment with different concentrations of dihydrotestosterone (DHT) ( 1 x 10 -7, 1 x 10- 8, 1 x 10 -9 mol/L) for 48, 96 and 144 h respectively. Cell cycle was analyzed by flow cytometry following culture for 72 h. Results DHT increased the AR expression in the two breast cancer cell lines. AR pathway could inhibit proliferation of MCF-7 and MDA-MB-453 cells. There was no significant difference in absorbance values among three treatment groups at different time points (P ＞ 0. 05). Cell cycle analysis revealed that the proportion of cells at G1 phase was increased, and that at S phase decreased. Conclusion AR pathway may inhibit proliferation of ER-negative MDA-MB-453 breast cells as well as ER-positive MCF-7 cells, by suppressing the process of G1 to S phase progression.