C-FLIP基因在甲基硫代腺苷诱导结肠癌RKO细胞凋亡过程中的作用

目的：探讨甲基硫代腺苷（MTA）对结肠癌RKO细胞凋亡的作用及其相关机制的研究.方法：采用Hoechst33258染色技术检测MTA对结肠癌RKO细胞凋亡的影响,并采用Realtime PCR和Western Blot的方法在mRNA和蛋白水平研究cFLIP基因在MTA诱导的结肠癌RKO细胞凋亡过程中的作用.结果：MTA对结肠癌RKO细胞具有明显促进凋亡的作用.在这一过程中,cFLIP基因在mRNA和蛋白水平上均出现明显下调情况.结论：MTA对RKO细胞具有明显凋亡诱导作用,cFLIP基因的下调可能起到了重要的作用.     

甲基硫代腺苷对结肠癌HCT116细胞凋亡的影响及其机制

目的 探讨甲基硫代腺苷对结肠癌HCT116细胞凋亡的作用及其相关机制.方法 采用Hoechst33258染色技术检测甲基硫代腺苷对结肠癌HCT116细胞凋亡的影响,并采用RT-PCR方法在mRNA水平研究cFLIP基因在甲基硫代腺苷诱导的结肠癌HCT116细胞凋亡过程中的作用.结果 甲基硫代腺苷对结肠癌HCT116细胞具有明显促进凋亡作用.在这一过程中,cFLIP基因在mRNA水平上出现明显下调情况.绪论甲基硫代腺苷对HCT116细胞具有明显凋亡诱导作用.cFLIP基因的下调可能起到了重要作用.     

褪黑素对结肠癌细胞系RKO增殖和凋亡的影响

目的研究褪黑素(Mel)作用下,结直肠癌细胞系RKO细胞增殖和凋亡发生的变化。方法 MTT法检测Mel对RKO细胞增殖的影响,并同时观察不同浓度Mel作用下相应受体表达的变化,通过Hoechst染色观察细胞核染色结果,判断细胞凋亡情况,并同时用Western blot观察凋亡相关蛋白表达的变化。结果毫摩尔级的Mel可以抑制细胞增殖,膜受体MEL1AR随着浓度的增加表达上调,Hoechst染色显示Mel作用下细胞凋亡增加,抑制凋亡的相关蛋白,如Bcl-2和Bcl-XL的表达明显下降,而促进凋亡的相关蛋白,如Bax、Bak等表达量相应提高。结论 Mel通过受体MEL1AR发挥作用,抑制细胞的增殖,并促进细胞凋亡。     

索拉非尼对人RKO结肠癌细胞增殖、周期及凋亡的影响

目的 研究索拉非尼对人RKO肠癌细胞增殖、周期及凋亡的影响.方法 将人肠癌RKO细胞给予不同浓度(0.5、1.0、5.0、10.0、20.0、40.0μmol/L)的索拉非尼处理,MTT法检测索拉非尼对RKO细胞增殖的抑制作用,确定半数抑制浓度(IC50),设为实验组.对照组为二甲基亚砜处理.针对两组细胞,通过细胞克隆...     

甲基硫代腺苷对结肠癌RKO细胞增殖及RNA聚合酶Ⅲ依赖基因转录影响实验研究

目的:探讨甲基硫代腺苷(MTA)对结肠癌RKO细胞增殖的影响及其转录水平相关机制。方法:采用MTT比色技术及细胞计数作生存曲线的方法分析MTA对结肠癌RKO细胞增殖的影响,并采用Realtime PCR的方法分析RNA聚合酶Ⅲ依赖基因(tRNAs、5SrRNA)。结果:0.5、1、2、3mmol/L MTA作用16h后,RKO细胞的增殖能力分别为对照组的(84.1±4.5)%、(69.4±5.2)%、(55.3±3.8)%、(40.9±3.5)%(P均<0.01);MTA 0.5mmol/L作用4、8h后,RKO细胞tRNAs、5SrRNA的转录水平分别为对照组的0.584±0.033、0.624±0.035,0.453±0.025、0.372±0.027(P均﹤0.01)。结论:MTA对RKO细胞具有明显的抗肿瘤活性,且对RNA聚合酶Ⅲ依赖基因转录的下调可能起到重要作用。     

三叶青提取物对人结肠癌细胞系RKO细胞凋亡的影响

[目的]观察三叶青提取物对人结肠癌细胞系RKO细胞凋亡的作用,初步探讨其可能的机制。[方法]采用体外细胞培养技术,用MTT法观察三叶青提取物RKO细胞的影响;琼脂糖凝胶电泳检测细胞凋亡;RT-PCR检测Bid,Bax,Bcl-2和Bcl-XL的表达改变。[结果]三叶青提取物能显著地抑制人结肠癌细胞系RKO细胞的生长,并且具有浓度依赖性,且细胞有明显的凋亡特征性改变,并能下调Bcl-XL、上调Bid来诱导凋亡。[结论]三叶青提取物具有对人结肠癌细胞系RKO细胞抗增殖和诱导凋亡的作用,且呈剂量依赖性。     

LHRH-PE40对人结肠癌细胞增殖抑制和凋亡的影响

目的：探讨一种新型免疫毒素LHRH-PE40与人结肠癌细胞系Lovo表面LHRH受体结合的特性,观察其对细胞增殖产生的抑制作用及检测细胞凋亡。 方法：用125Ⅰ标记法检测LHRH-PE40与Lovo结合的特异性; MTT比色法检测LHRH-PE40对胃癌细胞的杀伤活性,流式细胞仪检测细胞凋亡情况。 结果：人结肠癌细胞系Lovo细胞表面可见配基-受体特异性结合,LHRH-PE40对Lovo细胞的半数致死量为0.24 mg·L^-1,0.1～10.0 mg·L^-1LHRH-PE40作用于Lovo细胞,其凋亡明显（P<0.01）。 结论：结肠癌细胞Lovo细胞表面存在LHRH受体,LHRH-PE40对结肠癌细胞的增殖状态有明显的抑制作用及促凋亡作用。 LHRH-PE40,结肠肿瘤,细胞凋亡,受体;LHRH     

醋酸甲羟孕酮对人结肠癌细胞增殖和凋亡的影响

目的:检测醋酸甲羟孕酮(MPA)对人结肠癌细胞LS174T增殖和凋亡的影响并初步分析其机制.方法:人结肠癌细胞LS174T体外培养,以不同浓度的MPA(12.5、25、50和100 μmol/L)进行干预120 h,MTT法测定其对细胞增殖的抑制作用,流式细胞仪分析细胞周期、凋亡率和细胞表面Fas表达.结果:不同浓度MPA对结肠癌细胞具有显著的抑制作用. MPA处理后阻止G1期细胞向S期的进程,S期和G2/M期细胞相对减少.LS174T细胞的自然凋亡率为4.8%,12.5 μmol/L组细胞凋亡率为15.1%,25 μmol/L组细胞凋亡率为25.6%; MPA作用后结肠癌细胞表面Fas表达显著增强.结论:MPA对结肠癌细胞具有显著的抑制作用和诱导凋亡的作用,其机制可能与MPA使结肠癌细胞停滞于G1期及细胞表面Fas表达上调有关.     

桦木醇对人结肠癌SW480细胞增殖和凋亡的影响

目的: 研究桦木醇对人结肠癌SW480细胞增殖及凋亡的影响,并探讨其相关作用机制。方法: 培养结肠癌SW480细胞,传代后用于实验。SW480细胞分为对照组和不同剂量桦木醇(1、5、10、20、50和100 mg·L^-1)组,MTT法测定各组细胞的增殖抑制率;以不加桦木醇的SW480细胞为对照组,DAPI染色观察15 mg·L^-1桦木醇作用SW480细胞6、12和24h后的形态学变化;流式细胞术分析Sub-G₁细胞百分比即细胞凋亡率,体外caspase活力测定法检测凋亡相关蛋白caspase-3、caspase-8和caspase-9的激活情况,Western blotting法检测各组细胞caspase-3底物多聚(ADP-核糖)聚合酶(PARP)断裂和凋亡蛋Bcl-2、Bcl-xL和cytochrome C的表达情况。结果: MTT法检测,与对照组比较,随着桦木醇剂量(1、5、10、20、50和100 mg·L^-1)增加SW480细胞的增殖抑制率逐渐增加(P<0.05或P<0.01),其增殖抑制率呈剂量效应关系,半数抑制浓度(IC₅₀)为12.875 mg·L^-1。DAPI染色,与对照组比较,15 mg·L^-1桦木醇组正常细胞数量减少,在12和24 h时呈现出典型的细胞凋亡特征(膜气泡,核固缩、变形及染色质浓缩等)。流式细胞术检测,与对照组比较,随着作用时间的延长,15 mg·L^-1桦木醇组SW480细胞中处于Sub-G₁期的细胞逐渐增多,即细胞凋亡率逐渐增加。caspase活力测定,与对照组比较,caspase-3和 caspase-9活性明显增加(P<0.05或P<0.01)。免疫印迹检测,与对照组比较,15 mg·L^-1桦木醇组SW480细胞中PARP出现断裂,凋亡蛋白Bcl-xL表达下调,cytochrome C表达上调,而Bcl-2蛋白表达无明显变化。结论: 桦木醇可抑制结肠癌SW480细胞增殖并诱导其凋亡,其作用机制可能是通过下调Bcl-xL表达启动线粒体介导的cytochrome C释放进而激活caspase-9凋亡途径实现。     

光甘草定对结直肠癌细胞RKO增殖和凋亡的影响

目的 研究光甘草定(Gla)对人结直肠癌细胞株RKO增殖和凋亡的影响,并初步探讨其可能的作用机制.方法 选取RKO细胞为研究对象,采用MTT比色法测定Gla对RKO细胞增殖的影响,通过Hoechst 33258染色检测RKO细胞凋亡情况;Western blot法检测RKO细胞内丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路蛋白以及B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)、B细胞淋巴瘤/白血病-2相关X蛋白(Bax)、半胱天冬氨酸蛋白酶-8(Caspase-8)、半胱天冬氨酸蛋白酶-9前体(Procaspase-9)、半胱天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)表达水平.结果 Gla抑制RKO细胞的增殖,并呈浓度与时间依赖性(P<0.05);Gla能调节MAPK信号通路JNK1/2,p38磷酸化的水平;Gla可诱导RKO细胞凋亡,下调抗凋亡蛋白Bcl-2、Procaspase-9的表达水平(P<0.05),上调Bax、Caspase-3蛋白的表达(P<0.05),而Caspase-8蛋白水平在各组变化均不明显.结论 Gla能抑制结直肠癌RKO细胞的增殖,并通过下调Bcl-2/Bax的比值诱导凋亡,其可能与MAPK信号通路的激活有关.     

氧化槐果碱对人结肠腺癌细胞增殖及凋亡的影响

目的：观察氧化槐果碱（OSC）对人结肠腺癌细胞株 SW480的增殖抑制及诱导凋亡的作用,探讨其作用机制。方法体外培养 SW480细胞,使用 OSC（作用浓度分别为0.5～2 mg／mL）和阳性对照药5－氟尿嘧啶（作用浓度10μg／mL）作用于细胞12～48 h;采用 MTT 法测定 SW480细胞增殖情况,荧光双染观察细胞形态变化,计数凋亡细胞所占比例,流式细胞仪分析细胞周期变化及细胞凋亡率,Real －time PCR 检测凋亡基因 Caspase －3和 Bcl －2的表达。结果MTT 结果显示,各浓度 OSC 对体外培养的 SW480细胞增殖具有明显抑制作用,该作用呈一定的时间和剂量依赖性;OSC 作用后细胞的体积变小变圆,核变形、皱缩,凋亡细胞所占比例显著增加;流式细胞仪分析结果表明,随着 OSC 作用时间的延长,G0／G1期细胞比例增加,同时 S 期细胞比例也相应增加;凋亡基因 Caspase －3 mRNA 表达上调,Bcl －2 mRNA 表达下调。结论OSC 可抑制体外培养的 SW480细胞生长增殖,其作用机制与阻滞细胞周期进程、诱导细胞凋亡有关。     

西地那非对Caco-2细胞增殖及对NCM460细胞炎症反应的影响

为了探究西地那非对Caco-2细胞增殖的抑制作用及其对甲萘醌诱导的NCM460细胞炎症模型的抗炎作用,采用MTT法测定细胞的增殖能力;荧光探针法测定细胞内活性氧(ROS)及一氧化氮(NO)水平;Western blot检测Caco-2细胞中eNOS/ERK/JNK通路相关蛋白表达水平及NCM460细胞中相关炎症因子的蛋白表达水平;分光光度法测定西地那非对干酪乳杆菌及鼠李糖杆菌两种益生菌生长的影响。结果显示:西地那非可显著抑制Caco-2细胞的增殖,上调Caco-2细胞内eNOS、p-eNOS、p-JNK1/2及p-ERK1/2蛋白表达水平。西地那非与N^G-L-硝基精氨酸甲酯(L-NAME)联用后,eNOS、p-eNOS、p-JNK1/2及p-ERK1/2蛋白表达水平较西地那非组明显降低。与甲萘醌组相比,西地那非可明显降低NCM460细胞内ROS水平,下调IL-6、IL-1β、p62、TNF-α蛋白表达水平。且高浓度西地那非对干酪乳杆菌及鼠李糖乳杆菌并无明显毒性。研究结果表明:西地那非在不破坏菌群稳态平衡的情况下,有效地抑制了肠道细胞炎症反应,通过抵抗外界条件引起的肠道细胞内的氧化应激反应,预防结直肠癌的发生。     

氟尿嘧啶联合渥曼青霉素对人结肠癌细胞增殖和凋亡的影响

目的：探讨氟尿嘧啶(Fu)联合渥曼青霉素(wortmannin)对人野生型及突变型p53结肠癌细胞株（HCT-116和SW-480）增殖和凋亡的影响,阐明p53对人结肠癌细胞增殖和凋亡的作用。方法：将处于对数生长期的 HCT-116和SW-480人结肠癌细胞株分为空白对照组、氟尿嘧啶组、氟尿嘧啶联合渥曼青霉素组和氟尿嘧啶联合渥曼青霉素及p53抑制剂（PFT-α）组,分别给予氟尿嘧啶、渥曼青霉素及PFT-α,采用噻唑盐比色法(MTT)、Annexin V-FITC流式细胞术（FCM）检测各组细胞12、24和48 h的存活率和细胞凋亡率。结果：与氟尿嘧啶组比较,渥曼青霉素联合氟尿嘧啶组HCT-116和SW-480细胞存活率显著降低（P<0.05）,并随时间延长而逐渐降低;流式细胞术（FCM）检测,各组细胞凋亡率随时间的延长而增高（P<0.05）;与渥曼青霉素联合氟尿嘧啶组比较,氟尿嘧啶联合渥曼青霉素及PFT-α组HCT-116细胞存活率及细胞凋亡率无明显变化（P>0.05）,而SW-480细胞48 h的存活率显著降低（P<0.05）,凋亡率显著增高（P<0.05）。结论：渥曼青霉素能显著增强氟尿嘧啶对人结肠癌细胞增殖的抑制作用并促进结肠癌细胞凋亡;抑制p53表达能进一步增强渥曼青霉素联合氟尿嘧啶对p53突变型SW-480细胞增殖的抑制作用并促进细胞凋亡。
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芹菜素对人肺癌NCI-H460细胞增殖及凋亡的影响

目的研究芹菜素对人肺癌NCI-H460 细胞增殖及凋亡的影响。方法应用10~80 μmol/L 芹菜素处理NCI-H460 细胞,
MTT法检测细胞增殖抑制率;Hoechst 33258细胞核染色法观察细胞凋亡的形态学改变;流式细胞仪AnnexinV-FITC/PI双染色
法检测细胞凋亡率;Western blotting检测凋亡相关信号分子Bax、Bcl-2和caspase-3的蛋白表达水平。结果芹菜素对NCI-H460
细胞的增殖抑制作用呈浓度和时间依赖性;芹菜素处理组细胞出现核固缩、染色质凝集和核碎片化等典型的细胞凋亡特征;
NCI-H460细胞凋亡率随着芹菜素浓度增加逐渐增高;芹菜素处理组细胞Bax和caspase-3蛋白表达增加,Bcl-2蛋白表达降低。
结论芹菜素能够抑制人肺癌NCI-H460细胞的增殖,并诱导其凋亡,其机制可能与上调Bax和下调Bcl-2的表达,导致Bcl-2/Bax
比值下降,caspase-3活化有关。
     

细梗香草总皂苷诱导肺癌细胞H460凋亡及其机制的研究

目的：观察细梗香草总皂苷（LC）对非小细胞肺癌H460细胞增殖和凋亡的影响。方法在H460肺癌细胞培养时加入不同浓度的LC,采用MTT法和克隆形成实验检测细胞的增殖活性,AnnexinⅤ/PI（FCM）法观察LC对肺癌细胞凋亡的诱导作用和周期分布的影响。DCFH- DA荧光探针FCM检测细胞内活性氧生成,Western blot法检测NF-κB、I-κB、Bax、Bcl-2、Capase-3的蛋白表达。结果 LC可抑制H460细胞生长,具有剂量、时间依赖性;LC作用H460细胞后克隆形成率明显下降。LC可引起H460细胞凋亡,并可将H460生长阻滞在S期。LC以浓度依赖方式增高H460细胞内活性氧水平,还可使H460细胞I-κB、Bax和Capase-3表达增加,而使NF-κB和Bcl-2表达降低。结论 LC可以抑制H460细胞增殖,可能是通过增加细胞内活性氧表达,激活了肺癌细胞线粒体凋亡途径。     

JS-K 对人结肠癌细胞HCT116 增殖及凋亡的影响

目的 研究JS-K 对人结肠癌细胞HCT116 增殖及凋亡的影响。方法 不同浓度JS-K 处理 HCT116 细胞48 h 后,采用MTS 法检测JS-K 对HCT116 细胞增殖活性的影响;PI 单染流式细胞术检测 JS-K 对HCT116 细胞周期的影响;Annexin V-FITC/PI 双染流式细胞术检测JS-K 对HCT116 细胞凋亡的 影响;Texas Red-X 鬼笔环肽荧光染色观察细胞骨架形态;实时荧光定量聚合酶链反应检测Bcl-2 家族基 因mRNA 表达。结果 JS-K 对人结肠癌细胞HCT116 增殖有抑制作用,且呈浓度和时间依赖性（P <0.05）。 JS-K 诱导HCT116 细胞被阻滞在G2/M 期（P <0.05）。JS-K 可致HCT116 细胞发生晚期凋亡（P <0.05）。 JS-K 可改变HCT116 细胞骨架形态、微丝结构与分布。随着JS-K 浓度增加,促凋亡基因Bax、Bik、Bim、 Puma mRNA 相对表达量上调,抗凋亡基因Mcl-1 mRNA 相对表达量下调（P <0.05）。结论 JS-K 对人结肠 癌HCT116 细胞增殖有明显抑制作用,通过调节Bcl-2 家族基因表达,阻滞细胞G2/M 期,促进细胞发生晚 期凋亡。     

AGAP2-AS1对结肠癌细胞增殖、凋亡的影响

目的探究AGAP2-AS1在结肠癌组织中的表达及对结肠癌细胞增殖、凋亡的影响。方法从美国TCGA(The Cancer Genome Atlas)数据库结直肠数据下载结肠癌患者的RNA-Seq数据。通过TCGA数据库获得356例结直肠癌,145例健康样本,通过定量实时PCR(Polymerase Chain Reaction)检测结直肠癌细胞和正常肠黏膜上皮细胞AGAP2-AS1表达水平。用siRNA(Small interfering RNA)抑制结直肠癌细胞中AGAP2-AS1的表达,再次分析其细胞增殖、凋亡的改变。结果 AGAP2-AS1在结肠癌组织和细胞中表达均显著增加。抑制AGAP2-AS1后肿瘤细胞增殖能力显著降低,凋亡显著增加(P0.05)。结论 AGAP2-AS1在结肠癌细胞系中高表达,抑制AGAP2-AS1表达可抑制结肠癌细胞增殖,并诱导其凋亡。     

木犀草素通过CTGF/EGFR通路对人结肠癌细胞LoVo增殖和凋亡的影响

目的探讨木犀草素通过结缔组织生长因子(CTGF)/表皮生长因子受体(EGFR)通路对人结肠癌细胞LoVo增殖和凋亡的影响。方法MTT法确定木犀草素半数抑制质量浓度、作用时间。将细胞实验分为阴性对照组、阳性对照组、木犀草素低、中、高剂量组。阴性对照组细胞不进行处理,阳性对照组用40 μg/L西妥昔单抗干预,木犀草素低、中、高剂量组分别用20、40、80 μg/L木犀草素干预。采用流式细胞术检测各组细胞凋亡率,蛋白印迹法检测细胞CTGF、EGFR、蛋白质丝氨酸苏氨酸激酶(Akt)、B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、半胱氨酸天冬氨酸酶3(Caspase-3)蛋白水平。结果MTT法确定木犀草素半数抑制质量浓度40 μg/L,半数抑制时间24 h。随着木犀草素质量浓度增加,LoVo细胞增殖率降低(P＜0.05)。与阴性对照组比较,其余各组细胞凋亡率、Bax和Caspase-3蛋白均增加,细胞CTGF、p-EGFR/EGFR、Akt和Bcl-2蛋白均降低(P＜0.05)。与阳性对照组比较,木犀草素各剂量组细胞凋亡率、Bax和Caspase-3蛋白均降低,细胞CTGF、p-EGFR/EGFR、Akt和Bcl-2蛋白均增加,且随木犀草素剂量增加呈剂量效应关系(P＜0.05)。结论木犀草素抑制LoVo细胞增殖,诱导LoVo细胞凋亡,其机制可能与抑制CTGF/EGFR通路的激活有关。