曲安奈德对人视网膜色素上皮细胞(ARPE-19)增生抑制作用的实验研究

目的观察曲安奈德（triamcinolone acetonide，TA）对培养的人视网膜色素上皮细胞（ARPE-19）增生的影响。设计实验性研究。研究对象ARPE-19。方法采用MTT比色法和TUNEL染色法观察不同终质量浓度（0、10、30、300mg／L）TA分别作用于培养的ARPE-19细胞24、72小时后细胞的增生和凋亡的情况。主要指标吸光度，凋亡指数。结果（1）TUNEL法：质量浓度10mg／LTA不影响ARPE-19细胞的生长，随着质量浓度增大，细胞凋亡程度逐渐增强（t=2．921，P〈0．01），随着时问延长，ARPE-19细胞的凋亡指数逐渐增大（t=2．306，P〈0．01）。（2）MTT法：TA浓度和作用时间均对ARPE-19细胞的增生具有显著影响，随着浓度增加和时间延长，其抑制作用的差别有显著性意义（F0．05，3．16=3．24，P〈0．05；F0.05,1．16=4．49，P〈0．05），而且，TA浓度和作用时间相互影响着ARPE-19细胞的生长，对其抑制作用具有统计学意义（F0.05,1．16=4．49，P〈0．05）。结论TA能够抑制ARPE-19细胞的增生，通过玻璃体腔内注射TA或联合玻璃体切割手术可能成为增生性玻璃体视网膜病变的有效治疗。     

曲安奈德对体外人视网膜色素上皮细胞增生的影响

目的 探讨曲安奈德（triamcinolone acetonide，TA）对人视网膜色素上皮细胞（human retinal pigment epithelium，ARPE-19）增生的影响。方法 采用MTT比色法测定终质量浓度为10、30、300mg／LTA分别作用于ARPE-19细胞24h和72h后的吸光度A值。结果 不同药物浓度TA对ARPE-19增殖的抑制作用差异有显著性（F0.05,3．16=3．24，P〈0．05）；此外，TA作用时间对ARPE-19增生的影响显著（F0.05 1,16=4．49，P〈0．05）；而且TA药物浓度和作用时间之间相互影响，对ARPE-19细胞增殖的抑制作用具有显著性意义（F0.04,1．16=4．49，P〈0．05）。结论 TA能够抑制视网膜色素上皮细胞的增殖，有望成为增殖性玻璃体视网膜病变的治疗药物。     

曲安奈德对培养人视网膜色素上皮细胞表达survivin的影响

目的 观察曲安奈德(TA)对体外培养的人视网膜色素上皮(RPE)细胞表达survivin基因的影响,探讨TA治疗增生性玻璃体视网膜病变(PVR)的机制.方法 四甲基偶氮唑盐比色(MTT)法和流式细胞术检测不同质量浓度(0.01、0.1、1.0 g/L)TA对人RPE细胞增生及凋亡的作用,免疫组织化学法、RT-PCR检测药物在蛋白和基因水平对survivin表达的影响. 结果 在不同质量浓度的TA作用下,人RPE细胞的增生受到抑制,凋亡率增加,在蛋白水平和基因水平,药物均对RPE细胞survivin的表达有明显的抑制作用,且均与药物的作用时间和剂量呈正相关.各组与对照组比较差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 TA能抑制人RPE细胞的增生及survivin蛋白和mRNA在人RPE细胞的表达,诱导RPE细胞的凋亡.     

曲安奈德对兔视网膜色素上皮细胞DNA 的损伤作用

目的观察曲安奈德(triamcinolone acetonide,TA)对兔视网膜色素上皮(retinal pigment epithelium,RPE)细胞DNA的损伤作用。方法应用单细胞凝胶电泳技术,分别测定0g.L-1、0.001g.L-1、0.01g.L-1、0.1g.L-1和1.0g.L-1TA作用于5组(空白对照组、Ⅰ组、Ⅱ组、Ⅲ组和Ⅳ组)兔RPE细胞24h后细胞DNA的损伤情况。结果兔RPE细胞在含有不同浓度TA的培养液中培养24h后,Ⅱ、Ⅲ和Ⅳ组的尾DNA含量、尾矩、Olive尾矩均高于空白对照组(10.40±2.83,9.72±3.45,12.73±3.38;12.24±4.34,10.45±5.99,12.72±5.07;17.37±5.00,17.62±5.95,20.02±5.72;P<0.05)。Ⅳ组的尾DNA含量、尾矩、Olive尾矩与Ⅰ组相比差异有统计学意义(P<0.05)。结论TA可导致兔RPE细胞DNA损伤且具有量效相关性。     

曲安奈德体外对人视网膜色素上皮细胞功能和结构的影响

目的:探讨曲安奈德(triamcinolone acteonide,TA)对人视网膜色素上皮(retinal pigment epithelium,RPE)细胞功能和活性的影响.方法:通过MTT(四甲基偶氮唑盐比色法),细胞移行实验,细胞黏附实验,RT-PCR检测不同浓度TA(包括含赋形剂的和去除赋形剂的,以及纯赋形剂)在不同时间段对RPE细胞增殖,RPE细胞移行,RPE细胞黏附和线粒体DNA(mitochondrialDNA,mtDNA)损伤的影响.结果:浓度大于0.1g/L含赋形剂和不含赋形剂的TA以及单纯赋形剂对细胞增殖有明显的抑制作用(P＜0.05).细胞移行实验:0.1g/L浓度TA在3个时间点与含血清对照组相比,对100mL/L血清刺激的RPE细胞的移行有显著的抑制作用(P＜0.05).在24,48h与含血清对照组相比各实验组对RPE细胞的黏附有显著的抑制作用(P＜0.05).不同浓度TA(含赋形剂)与RPE细胞作用24h后,结果mtDNA缺失片段不明显,未见明显差异,长片段明显,各组无明显差异.结论:TA对RPE细胞功能(移行能力,黏附能力,增殖能力)有抑制作用,对RPE细胞mtDNA影响不明显.     

曲安奈德对正常人视网膜色素上皮细胞

目的研究曲安奈德（TA）对视网膜色素上皮（RPE）细胞的毒性作用。方法四甲基偶氮唑盐比色（MTT）法测定不同浓度(0.4、0.2、0.1、0.05、0.025 mg/ml)TA对RPE细胞增生的影响；流式细胞术检测TA［当生长抑制率达到50%时的药物浓度(IC₅₀)］作用72 h后细胞周期的变化；倒置相差显微镜和透射电子显微镜观察细胞形态和超微结构的改变。结果0.4~0.025 mg/ml浓度范围内，与对照组比较，TA作用后RPE细胞生长均有明显抑制 (P＜0.05)，且呈浓度依赖性。TA组S期细胞较对照组减少10.6%（P＜0.05）。光学显微镜下TA组细胞密度稀疏，形态不规则，有较多突起及细胞空泡。电子显微镜下TA组细胞核染色质分布不均，细胞质空化，甚至可见细胞坏死。结论TA可抑制培养人RPE细胞有丝分裂S期，抑制细胞增生；明显破坏细胞结构甚至导致细胞死亡。(中华眼底病杂志,2005,21:233-236)     

曲安奈德对人视网膜色素上皮细胞活性与 屏障功能的影响

目的观察曲安奈德 (TA)对人视网膜色素上皮（RPE）细胞活性与屏障功能的影响。方法用ARPE-19细胞，96孔板中培养至４周，加入不同浓度的TA（0.02、0.05 mg/ml），继续培养3 d或7 d，四甲基偶氮唑盐比色法（MTT）检测细胞活性；将细胞培养在多聚酯滤膜上，４周时记录跨上皮电阻（TER），然后分别在培养液中加入0.02、0.05 mg/ml TA继续培养１周，再次测量TER，并以辣根过氧化物酶（HRP）作示踪剂、酶联免疫吸附试验（ELISA）法评价不同浓度TA组ARPE-19细胞的通透性。结果在含0.02 mg/ml TA培养液中培养3 d或7 d，细胞平均存活率分别为93.70%和90.63%，其细胞活性与对照组相比，差异无统计学意义（P=0.147，0.091）；在含0.05 mg/ml TA培养液中培养相同时间后，细胞活性较对照组显著降低（平均存活率为87.75%、88.98%；P=0.025，0.043）；经过1周培养，2个处理组的TER与对照组相比均有极显著降低（P 均＜0.001）；两个处理组HRP的通透性均显著高于对照组（0.001＜P＜0.05）。结论TA可以使ARPE 19细胞的活性降低，并破坏其屏障功能的完整性。(中华眼底病杂志,2005,21:237-239)      

曲安奈德对高糖培养人视网膜色素上皮细胞细胞间黏附分子-1表达的影响

目的:观察曲安奈德(TA)对高浓度葡萄糖条件下体外培养人视网膜色素上皮(hRPE)细胞细胞间黏附分子-1(I-CAM-1)表达的影响。方法:用MTT方法检测不同浓度(0.01,0.10和1.00g/L)的TA对hRPE细胞增生的影响,用免疫荧光法检测加用和未加用0.10g/LTA的30.0mmol/L葡萄糖作用1,2和3d后hRPE细胞表面ICAM-1的表达强度。结果:在0.01～1.00g/L浓度TA的作用下,hRPE细胞生长受到抑制,呈剂量依赖性和时间依从性。加用0.10g/LTA的30.0mmol/L葡萄糖作用1,2和3d后,hRPE细胞表面荧光染色密度分别比未加用TA的30.0mmol/L葡萄糖作用下荧光着色减弱20%,25%和50%,有统计学显著性差异(P<0.05)。结论:TA可以抑制体外高浓度葡萄糖培养的hRPE细胞的增生,也抑制高糖作用下hRPE细胞表面的ICAM-1表达。     

三氧化二砷对体外培养的人视网膜色素上皮细胞作用的实验研究

目的 观察三氧化二砷（As2O3）对体外培养的人视网膜色素上皮（RPE）细胞的增生抑制及凋亡诱导作用。方法 不同浓度的As2O3理细胞，倒置显微镜下观察细胞形态，四唑盐（MTT）比色法检测人RPE细胞对As2O3的药物敏感性，流式细胞仪检测细胞周期变化和凋亡率。结果 药物处理后细胞出现凋亡形态改变。MTT比色法结果显示，As2O3作用血清组人RPE细胞后各实验组与对照组之间吸光度比较有统计学意义，药物剂量分别为：作用24h为6．25μmol／L（P=0．018）、48h为6．25μmol／L（P〈0．01）、72h为1．56μmol／L（P〈0．01）；作用无血清组细胞48h后为12．5μmol／L（P〈0．01）。流式细胞仪分析结果显示As2O3作用人RPE细胞周期改变表现为S期阻滞及G2／M期延长。As2O3处理人RPE细胞后出现凋亡峰。结论 As2O3可抑制体外培养的人RPE细胞的生长并诱导其凋亡，有望为临床防治增生性玻璃体视网膜病变（PVR）提供新的药物干预。     

视网膜色素上皮细胞凋亡机理的探讨

了解诱导视网膜色素上皮细胞在体外发生凋亡的以推测该细胞凋亡在体内发生的可能机理。方法培养的人ＲＰＥ细胞分别给予低氧，肿瘤坏死因子，蛋白激酶抑制剂及抗Ｆａｓ抗体处理２４－７２ｈ，同时也观察了纤维母细胞生长因子对体外凋亡诱导因子所致ＲＰＥ细胞凋亡的保护作用。     

吲哚菁绿对人视网膜色素上皮细胞的影响

目的　研究吲哚菁绿 (ICG)对培养的人视网膜色素上皮 (RPE)细胞的影响 ,为黄斑裂孔手术中ICG着染并剥除视网膜内界膜寻求合适的质量浓度和作用时间。方法　以质量浓度分别为 2 0、1 0、0 5、0 2 5mg/mLICG分别作用于培养的人RPE细胞 ,用四唑盐比色法 (MTT)、电镜及免疫组织化学方法从形态、功能方面观察RPE细胞的损伤。结果　 ( 1)MTT检测ICG对RPE细胞活性的抑制与时间无关 (F =1 96,P =0 173 3 ) ,与质量浓度有明显相关性 (F =80 96,P =0 0 0 0 1)。ICG质量浓度小于或等于 0 5mg/mL时 ,RPE细胞活性与阴性对照组无明显差异 (P >0 0 5 )。( 2 )电镜观察以上质量浓度ICG对RPE细胞形态均有损伤 ,以变性为主 ,表现为细胞器肿胀且与质量浓度呈正相关。( 3 )以上 4种质量浓度ICG作用RPE细胞后 ,各组细胞增殖核抗原 (PCNA)表达与阴性对照组无明显差异 (P >0 0 5 )。结论　质量浓度≤ 0 5mg/mL时ICG可安全地着染视网膜内界膜。     

氧化损伤对体外培养人视网膜色素上皮细胞PEDF的影响

目的研究氧化损伤对人视网膜色素上皮(retinal pigment epithelial,RPE)细胞表达色素上皮细胞衍生因子(pigment epithelium derived factor,PEDF)的影响。方法体外培养人RPE细胞,加入浓度为600μmol.L-1H2O2分别作用不同时间(2h、8h、24h),采用免疫细胞化学法检测PEDF蛋白的表达,逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)法检测PEDF mRNA。结果免疫细胞化学染色对照组即有PEDF的阳性表达,而氧化损伤2h、8h、24h PEDF蛋白阳性表达量逐渐减少,染色由棕黄色变为黄色。各时间段两组结果比较,差异均具有统计学意义(P<0.05)。RT-PCR检测PEDF mRNA量与PEDF蛋白表达变化一致。结论氧化损伤能促使人RPE细胞PEDF表达下调,并在一定范围内与作用时间有关。     

人类视网膜色素上皮细胞体外培养的转分化

目的:研究人类视网膜色素上皮细胞(human retinal pig-ment epithelium,HRPE)体外培养的转分化现象。方法:倒置显微镜观察体外培养HRPE细胞形态变化;采用免疫细胞化学染色方法检测HRPE细胞角蛋白及α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的变化。结果:HRPE细胞体外培养时形态由上皮细胞特征变化成为间质样细胞;细胞角蛋白表达与传代代数呈负相关(r=-0.831,P<0.001),α-SMA表达与传代代数呈正相关(r=0.456,P=0.002);角蛋白18表达高密度组较低密度组强(t=2.591,P=0.027);而α-SMA表达高密度组较低密度组弱(t=2.938,P=0.015)。结论:HRPE细胞体外培养转分化主要是体内外环境差异引起。     

Pattern dystrophies of the retinal pigment epithelium

Three members of a family in one generation were affected by a pattern dystrophy of the retinal pigment epithelium. The patients present typical hyperpigmented macular RPE lesions in a butterfly-shaped to (macro-)reticular pattern, and were all asymptomatic. Examination of 26 family members in 3 generations suggests autosomal recessive inheritance. The family showed some cases of congenital deutanomaly, and a female subject presented both disorders.     

金雀异黄素对高糖诱导的人RPE细胞损伤的保护作用

目的 探讨金雀异黄素(genistein,Gen)对高糖诱导的人视网膜色素上皮(retinal pigment epithelium,RPE)细胞的保护作用.方法 培养人RPE细胞,分别以Gen 0 μmol·L-1、50 μmol·L-1、100 μmol·L-1、200 μmol·L-1的药物浓度作用高糖(33 mmol·L-1)培养的RPE细胞48 h,噻唑蓝比色法检测细胞活性;流式细胞仪检测细胞周期;激光共聚焦显微镜检测细胞内活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平;黄嘌呤氧化酶法测定细胞内超氧化物歧化酶(SOD)活性.结果 高糖组细胞活力(0.308±0.022)明显低于正常对照组(0.424±0.014)(P＜0.01);高糖 Gen组细胞活力较高糖组升高(P＜0.05),且随Gen浓度增大,细胞活力增加更明显.与正常对照组比较,高糖组细胞增殖受到抑制,被阻滞于S期和G2期;与高糖组比较,Gen可减轻高糖对细胞增殖的抑制作用.与正常对照组比较,高糖组细胞内ROS的产生明显增多;Gen以浓度依赖方式抑制高糖组RPE细胞内ROS的产生.与正常对照组(31.04±0.02)比较,高糖组SOD活性(12.32±0.02)显著降低(P＜0.01);与高糖组比较,高糖 Gen组SOD活性随Gen浓度的增加而升高(均P＜0.05).结论 Gen可保护和修复高糖诱导的人RPE细胞的损伤,其作用可能与抗氧化、增强SOD活性有关.     

溶血磷脂酸对人视网膜色素上皮细胞增殖的影响

目的 :探讨建立体外原代培养人类视网膜色素上皮细胞 (RPE)方法。方法 :取自愿者贡献的意外事故成年眼球 ,用 0 .2 5 %胰酶消化获取人RPE细胞、置 15 %胎牛血清的DMEM培养液中培养 ,细胞接近融合状态时进行传代培养。用溶血磷脂酸 (lysophosphatidicacid ,LPA)观察RPE增殖的影响。结果 :RPE原代细胞镜下为圆形 ,大小不一 ,内含较多的色素颗粒 ,胞核无法辨认。原代细胞培养贴壁后第 3天增殖速度明显加快 ,至 4～ 5d即可基本融合 ,细胞浆内色素颗粒则随传代次数增多而逐渐减少。第 3代培养的视网膜色素上皮细胞膜表面可见微绒毛 ,细胞质内细胞器丰富 ,线粒体量多 ,体积较小 ,内外膜分界清晰 ,嵴较短。色素颗粒散在分布于胞浆内 ,多数细胞质内含量较少 ,呈高电子密度包含物。LPA对原代培养的视网膜色素上皮细胞增殖有促进作用。结论 :LPA可促进人类RPE细胞体外培养的增殖 ,第 3代培养的视网膜色素上皮细胞可保留原代细胞的生物学特性