神经妥乐平对兔脊髓放射性损伤的治疗作用

目的:观察神经妥乐平(NTP)对兔放射性脊髓损伤的治疗效果。方法:新西兰大白兔60只,体重2.5~3kg,随机分成实验组与对照组,每组30只,各组再随机分成5小组接受不同剂量的放射性照射,每组6只,照射剂量分别为20Gy,25Gy,35Gy,40Gy,45Gy。照射部位为T4水平,所有兔在照射前以及照射后均做MRI检查。兔出现临床表现后实验组每天肌肉注射NTP3.6NU一次,共4周;对照组每天肌肉注射生理盐水3ml一次,共4周。观察两组治疗前后兔症状变化和脊髓MRI的表现及病理改变。结果:照射后平均16周时,动物受照射脊髓节段MRI出现明显异常信号,而临床症状的出现约在照射后平均18周。在治疗结束后3周,实验组各项指标(瘫痪、尿潴留和针刺反应)与对照组相比均明显改善(P<0.05);MRI图像上实验组治疗后病灶面积比治疗前明显缩小;神经元肿胀明显减轻,髓鞘结构趋于正常。而对照组变化不明显。结论:神经妥乐平对放射性脊髓损伤有一定的治疗作用。     

神经妥乐平治疗交感型颈椎病的疗效评价

目的比较神经妥乐平针剂与扶他林＋弥可保治疗交感型颈椎病的临床效果．方法选取75例确诊为交感型颈椎病的患者,随机分为两组,治疗组45例,为神经妥乐平针剂静脉注射,剂量为6ml qd,连续14d;对照组30例,为口服弥可保500μg tid＋扶他林25mg tid,连续14d观察第1、2、4、8、12周病情改善程度。结果在治疗的第1～12周的各个时间点,治疗组病情改善率均明显高于对照组,两者差异有显著性（P〈0．05）,未出现副反应结论神经妥乐平用于治疗交感型颈椎病,临床疗效上明显优于扶他林＋弥可保,为交感型颈椎病的药物治疗提供了新的选择,似其具体作用机制尚有待进一步研究。     

复方红芪提取液对雪旺细胞增殖的影响

目的：研究复方红芪提取液的作用机制。方法：分别使用1600、3200、6400、12800倍稀释的复方红芪提取液，培养新鲜切取的纯系SD大鼠坐骨神经，于培养后24、48和72h,使用[γ-^32P]ATP掺入法，观察雪旺细胞中蛋白激酶A活性变化。使用神经生长因子作阳性对照，正常培养液作阴性对照。结果：正常培养条件下，离体神经中雪旺细胞的活化蛋白激酶A比率在24、48、72h时分别7．42、0．17、0．07；神经生长因子组分别为73．70、629．71、44．64；红芪1600稀释组分别为842．11、133．40、13．26；3200稀释组分别为130．16、107．37、16．21；6400稀释组分别为88．76、19．23、2．67；12800释释组分别为150．51、63．08、21．50。分析以上数据显示，神经生长因子组与红芪组均可见蛋白激酶A活性显著增加，后者呈明显的时间负相关及浓度正相关。秩和检验不同浓度的红芪提取液及不同的作用时间，对蛋白激酶A活性的影响差异均有非常显著性（P＜0．005）。结论：复方红芪提取液促进神经修复的功能是通过G蛋白、环磷酸腺苷、蛋白激酶A途径促进雪旺细胞增生，产生促修复的功能。     

雪旺细胞浆神经营养蛋白高效液相分离纯化及其生物活 …

目的 分离纯化雪旺细胞浆神经营养蛋白并研究其生物活性。方法 取３００只出生后１～３天ＳＤ大鼠双侧坐骨神经,纯化培养,收集雪旺细胞,超声粉碎超速离心,不同孔径分子筛滤膜（ＰＭ１０、３０、５０）超滤浓缩,收集分子量１０～３０ｋｕ,３０～５０ｋｕ、〉５０ｋｕ三种组份乐蛋白浓缩液,分别加入体外无血清培养的Ｅ１４ＳＤ胎鼠脊髓运动神经元培养液中,用ＭＴＴ酶标法检测证实１０～３０ｋｕ,〉５０ｋｕ两组份蛋白有神经     

围手术期使用神经妥乐平预防颈椎后路手术后轴性痛的前瞻性研究

[目的]观察围手术期使用神经妥乐平对颈椎后路术后轴性痛的预防作用和近期疗效。[方法]2012年3月~2013年3月间,将颈椎后路手术患者随机分为治疗组(神经妥乐平组,n=62)和对照组(Vit-B12组,n=58)。术前1 d用药,连续应用至术后7 d。比较两组轴性痛发生率、疼痛模拟视觉评分(VAS)、日本骨科学会(JOA)、生活质量评分(QOL)差异。MRI测量比较两组颈后伸肌群肌萎缩程度(MAD)。[结果]术后早期轴性痛发生率两组无显著性差异(P0.05),4、12周治疗组轴性痛发生率显著低于对照组(P0.05),术后3 d两组平均疼痛水平无统计学差异,术后4、12周治疗组平均疼痛水平明显低于对照组(P0.05)。两组术后JOA评分及恢复率差异无统计学意义(P0.05)。治疗组术后12周QOL显著优于对照组(P0.05),治疗组颈后伸肌群MAD明显小于对照组(P0.05)。[结论]围手术期使用神经妥乐平可减轻颈椎后路手术后颈后深肌群萎缩,预防轴性痛发生。     

神经牵拉延长器修复神经缺损的实验研究

探讨神经牵拉延长器修复神经缺损,为临床应用提供依据。方法：健康家兔３０只,分３组,右侧坐骨神经造成１．０ｃｍ缺损,Ａ组：自制神经牵拉延长器延长,二期端－端缝合;Ｂ组：神经原位移植;Ｃ组：直接拉扰缝合。术后不同时期分别进行电生理、组织学、神经纤维计数等检查。     

神经妥乐平在骨科的应用

神经妥乐平（Neurotropin,NTP）为牛痘免疫病毒疫苗接种到家兔的皮肤组织。从其炎性组织中提纯而成的一种非蛋白小分子生物活性物质。其有效成分化学结构至今尚未清楚。但多项实验证实其药理作用包括：通过恢复神经突触传导功能、保护缺氧状态下的神经元、促进神经轴突生长、改善病损神经的传导速度、促进雪旺细胞增殖,从而达到营养修复神经的作用;调节中枢5-羟色胺能系统及去甲肾上腺素能系统（α2受体）,激活疼痛下行性抑制系统。在脊髓水平以上抑制疼痛递质的释放,抑制外周激肽酶活性而减少缓激肽的释放,缓解化学性刺激．减轻局部软组织及神经的水肿。     

细胞外ATP防治失神经肌肉萎缩的实验研究

目的　探索细胞外ATP是否对失神经支配肌肉有保护作用。方法　SD大鼠 12只 ,在梨状肌下缘切断坐骨神经 ,制作腓肠肌失神经支配模型。左侧为实验组 ,术后于腓肠肌内注射ATP 0 .1mg/d ;右侧为对照组 ,腓肠肌内注射等量生理盐水。于术后 8、12周取 2组标本称肌湿重 ,检测运动终板、肌纤维横截面积及组织学变化。结果　实验侧的腓肠肌饱满有弹性、色泽好 ;对照侧肌纤维萎缩变细、色泽苍白。实验组运动终板边缘清晰 ,终板乙酰胆碱酯酶染色较深。比较两组的运动终板平均灰度值和平均光密度值 ,差异有显著性意义 (t =3 .0 5 7、4.13 8,P <0 .0 5 ) ,两组肌纤维横截面积相比 ,差异有显著性意义(t =4.191,P <0 .0 5 )。结论　ATP具有明显延缓失神经肌肉肌萎缩和减轻皮肤溃疡的作用     

神经妥乐平对单开门颈椎管扩大椎板成形术后轴性症状的疗效观察

[目的]研究神经妥乐平对单开门颈椎管扩大椎板成形术后轴性症状的疗效。[方法]选取本院采用单开门颈椎管扩大椎板成形术治疗颈椎管狭窄症术后出现轴性症状患者,随机分为2组,对照组:服用塞来昔布,实验组:服用神经妥乐平,服用8周,分别于治疗前、治疗第1、4、8周选取4个时间点,对轴性症状进行VAS评分。[结果]实验组治疗后不同时间点相对于对照组VAS值显著降低,有效率大大提高。[结论]神经妥乐平对单开门颈椎管扩大椎板成形术后轴性症状具有较好的疗效。     

雪旺细胞分泌神经营养蛋白的提纯

目的：寻找出提纯神经营养蛋白的实用而有效的方法。方法：收集ＳＤ乳鼠周围神经的雪旺细胞无血清条件培养液，离心，将上清液超滤浓缩（ＰＭ１０）收集分子量大于１０ＫＤａ浓缩蛋白液，经ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－７５凝胶过滤获得三个蛋白峰，经生物活性检测，证明洗脱Ⅱ峰液生物活性最大。将冼脱Ⅱ峰液再经ＰＭ１０超滤膜浓缩收集浓缩蛋白液，分别用ＴＨＫ２４、ＴＴＫ２４微型过滤器去除大于１００ＫＤａ和小于３０ＫＤａ蛋白，过分子筛高效液相色谱柱。结果：得到４个主要蛋白峰，前三峰蛋白分子量均超过１５０ＫＤａ，第四峰分子量为６７ＫＤａ，经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ和银染色法进一步证实该蛋白分子量为６７ＫＤａ，基本为单一蛋白带。结论：Ｓｅｐｈａｄｅｘ凝胶过滤、多次超滤和分子筛高效液相色谱技术综合应用是纯化雪旺细胞源神经营养蛋白较好的方法。     

红细胞生成素对体外培养许旺细胞的作用

目的 观察促红细胞生成(erythropoietin,EPO)对体外培养许旺细胞分泌胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)和细胞周期的影响,探讨EPO促进外周神经再生的可能机制. 方法 将原代培养、纯化的许旺细胞随机分成三组:A组(10%胎牛血清DMEM液)、B组(10%胎牛血清DMEM液加10U/ml EPO),C组(10%胎牛血清DMEM液加50 U/ml EPO),应用ELISA测定培养上清液中的GDNF水平,流式细胞术检测细胞周期分布. 结果 与A组相比,B组和C组培养上清液中的GDNF明显增高,许旺细胞处于S期百分比(S%)和(S+G_2M)%都有明显升高. 结论 EPO可增加体外培养许旺细胞分泌GDNF,并且能提高许旺细胞的增殖活性,这可能是其促进外周神经再生的重要机制之一.     

化学萃取同种异体神经种植许旺细胞的体外实验

目的：通过自体许旺细胞与化学萃取同种去细胞异体神经桥接物体外结合培养的研究，寻找一种在结构功能上与自体神经相似而抗原性少或无的物质来修复较长距离的神经缺损。方法：使用近交系F344乳鼠和双差速贴壁及Arab-C抑制成纤维细胞生长的细胞培养方法来获得大量纯度的许旺细胞。成年SD大鼠作为异体神经来源，利用化学萃取去除其中细胞成分降低其抗原性，制备去细胞神经桥接物，再把前者通过微注射方法注入到后者内部继续培养观察细胞生长情况。用抗S-100标记许旺细胞计算纯度，用HE染色、电镜观察神经萃取及细胞种植其内后生长情况。结果：许旺细胞培养纯度达92%以上。Triton-X-100及脱氧胆酸钠具有完全萃取掉神经纤维中的许旺细胞及髓鞘，萃取后所得到的桥接物适合于许旺细胞体外生长，并且细胞在其内有迁移排成行的特性。结论：通过化学萃取方法所得到的异体去细胞神经桥接物种植自体许旺细胞后可能为一种理想的神经缺损修复材料。     

甲基强的松龙对体外培养许旺氏细胞的作用

目的探讨甲基强的松龙(MP)对体外培养许旺氏细胞的作用.方法取成年SD大鼠坐骨神经以植块法分离纯化许旺氏细胞,将纯化后的细胞培养2周后分为5组移入96孔板,A、B、C组为MP组(按加入药物浓度不同分组20μg/ml,2μg/ml,0.2μg/ml),D组为神经生长因子(NGF)组(药物浓度0.1μg/ml),E组为对照组.继续培养9d后倒置显微镜下观察细胞生长情况并以MTT法测定各组许旺氏细胞的存活与增殖能力.结果倒置显微镜下观察小剂量MP组及NGF组细胞生长优于其他各组.570nm波长分光光度计测定A值,小剂量(0.2μg/ml)MP组为0.376±0.079,中剂量(2μg/ml)MP组0.286±0.116,大剂量(20μg/ml)MP组0.280±0.086,NGF组0.320±0.121,对照组0.252±0.115,小剂量MP组明显优于大剂量MP组(P＜0.05),同时优于对照组(P＜0.05),余各组间均无明显统计学差异.结论小剂量MP能够促进体外培养许旺氏细胞增殖,从而促进周围神经损伤的修复,细胞培养用药浓度为0.2μg/ml.MP浓度过大(相当于临床冲击剂量的血峰浓度)将抑制细胞增殖.     

陈旧性神经损伤后雪旺细胞的变化实验研究

目的 观察大鼠坐骨神经损伤后雪旺细胞的变化。方法 切断成年SD大鼠右侧坐骨神经，形成10mm缺损。于术后1～12个月不同时间段取材。标本用p75受体（p75 neurotrophin receptor．p75NTR）、S-100免疫荧光染色，激光共聚焦显微镜观察，另部分标本进行超微结构观察。结果 神经损伤后1个月，损伤远端神经中p75NTR和S-100的表达最多，在损伤后6个月时p75NTR降至正常水平，S-100则在损伤后9个月时消失。电镜下，雪旺细胞出现在神经内膜管内，神经内膜管下及内膜管周围有大量胶原原纤维增生。结论 大鼠坐骨神经损伤后，雪旺细胞中p75NTR的表达增加，但随损伤时间的延长呈进行性下降，伤后6个月时消失。     

小肠粘膜下层与雪旺细胞生物相容性的研究

目的研究猪小肠粘膜下层(SIS)与体外培养的鼠雪旺细胞(SCs)的生物相容性。方法在体外将分离培养的SD乳鼠SCs接种于制备好的猪SIS上进行复合培养,通过相差显微镜和扫描电镜观察不同时间段SCs在SIS上的黏附、生长与增殖情况,用酶联免疫吸附测定和逆转录聚合酶链反应方法检测SCs分泌神经生长因子-β和脑源性神经生长因子的情况。对照组为接种于未平铺SIS的孔中正常培养的SCs。结果培养3～5 d后,相差显微镜下见SIS边缘SCs较为密集,黏附良好,多呈长梭形生长;扫描电镜观察见SIS表面SCs增殖黏附良好,胞体突起显著,呈端对端连接或成束排列,细胞表面可见蛋白颗粒分泌。酶联免疫吸附测定和逆转录聚合酶链反应方法检测发现,SCs与SIS复合培养后,神经生长因子-β和脑源性神经生长因子分泌良好,与对照组的SCs差异无统计学意义。结论猪SIS与鼠SCs有良好的生物相容性,有望用作支架,供SCs黏附生长,构建组织工程神经,用于修复周围神经缺损。     

人体许旺细胞培养及扩增的实验研究

目的探索适合于人体应用的人类许旺细胞的培养方法及其扩增条件,为其应用于组织化人工神经作准备。方法人体截肢或神经移植中多余的肢体外周神经共19条,显微镜下去除结缔组织,修剪成2～3mm神经段,进行组织块培养,其中12条加入F-12培养液,7条神经用标准培养液;经重复种植6～8次,在倒置显微镜下观察,当主要为许旺细胞生长时,用无细胞毒性的胶原酶消化分离许旺细胞。得到的细胞用台酚蓝染色计数细胞数和存活率,S-100蛋白染色鉴定许旺细胞纯度。结果两种培养液经培养消化后获得的细胞存活率分别为85.54%和86.93%,许旺细胞纯度分别为82.64%和86.37%,差异均无统计学意义,但用F-12培养液获得的细胞数明显多于标准培养液,分别为14.2×10~7和5.9×10~7。结论F-12培养液的添加物均为能应用于人体的制剂,它与标准培养液一样能用于人类许旺细胞的培养,且能促进许旺细胞的增殖。     

许旺细胞与小肠黏膜下层体外复合培养的形态学研究

目的观察体外培养的许旺细胞在小肠黏膜下层（SIS）表面的黏附生长状况，探讨SIS与许旺细胞（SCs）的生物相容性。方法体外分离培养SD乳鼠的许旺细胞，接种于制备好的SIS进行复合培养，不同时间段通过相差显微镜、组织学、扫描电镜和透射电镜观察SCs在SIS上的黏附、生长和增殖情况。结果相差显微镜下见3—5d后SIS边缘SCs生长良好；组织学观察见5d时许旺细胞与SIS表面黏附紧密；扫描电镜观察见SIS表面SCs增殖黏附良好，胞体突起显著，呈端对端的相互连接或排列成束，细胞表面可见有蛋白颗粒分泌。透射电镜观察见SIS表面许旺细胞生长状态良好，细胞紧密贴附生长于SIS表面；许旺细胞与SIS交界部见细胞底部形成一些突起与SIS接触。结论SCs能够在SIS表面良好地黏附生长，SIS作为支架材料，与SCs具有良好的生物相容性。     

雪旺细胞移植与周围神经再生

广泛阅读近年来有关人工神经方面的文献，重点了解桥接神经的移植体和雪旺细胞移植方面的研究进展。自体材料，异体材料和合成材料均可作为桥接神经缺损的神经导管，以化学萃取的同种异体神经较为理想，雪旺细胞体外纯化和培养后仍具有生物活性，用微注入法把雪旺细胞植入移植物内可促进神经轴突的再生。理想的人工神经应由有特定的三维结构的生物材料和有生物活性的雪旺细胞构成，雪旺细胞在支架内有序的分布，类似于Bungner带。     

雪旺氏细胞植入硬脊膜管修复周围神经缺损的实验研究

本文报道两组10mm大鼠坐骨神经缺损,分别用含雪旺氏细胞和不含雪旺氏细胞的硬脊膜管桥接修复,术后2、4个月行光镜、电镜、神经电生理和计算机图像分析检测,证实植入雪旺氏细胞者,再生神经生长及成熟较早,肢体功能恢复较快,雪旺氏细胞和硬脊膜管结合,对周围神经再生有更大的促进作用。     

FK506促进乳鼠雪旺细胞增殖的实验研究

目的观察FK506对体外培养的乳鼠雪旺细胞增殖的影响。方法将纯化的雪旺细胞分两组,一组设为对照,另一种加含终浓度为0.5ng/mlFK506的DMEM/F12培养液培养,用MTT法检测不同时间点的OD值并绘制生长曲线,另在培养第48、72小时后用3H-胸腺嘧啶核甙测定法检测其DPM值。结果经含0.5ng/mlFK506培养液培养的雪旺细胞,其对数生长期提前出现,并且在峰值上高于对照组;接种后48h和72h,3H-胸腺嘧啶核甙检测DPM值实验组也高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论FK506有促进雪旺细胞分裂增殖的作用,可能是其促进周围神经再生的重要机制之一。