乳腺癌反义基因治疗动物模型建立的研究

目的建立一种简便、可靠的荷人乳腺癌MCF-7细胞移植瘤裸鼠动物模型,以供survivin反义寡核苷酸对乳癌荷瘤裸鼠的抑瘤作用研究。方法常规培养MCF-7人乳腺癌细胞株细胞,注射于30只雌性裸鼠右前肢腋下皮下,以移植后肿瘤体积生长到直径为0.5cm为成瘤,并将这些实验动物分成3组分别以阳离子脂质体、硫化反义寡核苷酸(ASODN)或无义寡核苷酸在不同时间对荷瘤裸鼠的瘤体及瘤周注射3次。观察肿瘤抑制率、细胞凋亡率及细胞凋亡情况。结果成功建立了荷人乳腺癌MCF-7细胞移植瘤裸鼠动物模型,应用Survivin反义核酸技术实验治疗发现ASODN/Lip组抑瘤率达70.1%,细胞凋亡率为38.6%,与其他两组比较有显著性差异(P<0.05)。结论应用裸鼠前肢腋下皮下注射法建立的荷人乳腺癌MCF-7细胞移植动物模型方法简便,成瘤率高,可用于对人乳腺癌反义基因治疗的动物实验研究。     

FANCF基因沉默对人乳腺癌细胞生物学特性的影响

目的研究FANCF基因沉默对乳腺癌MCF-7细胞生物学特性的影响,并检测相关指标的变化,探讨FANCF基因是否参与乳腺癌的发生、发展及耐药性的形成。方法构建FANCF-shRNA质粒,转染FANCF-shRNA使乳腺癌MCF-7细胞FANCF基因沉默;MTT法检测FANCF基因沉默对MCF-7细胞增殖的影响;流式细胞仪PI单染法及AnnexinV-FITC/PI双染法检测FANCF基因沉默对MCF-7细胞周期及凋亡的影响;RT-PCR检测FANCF基因沉默前后耐药相关基因mRNA表达水平的变化。结果成功构建FANCF-shRNA质粒,RT-PCR验证转染FANCF-shRNA后48h出现FANCF基因沉默;与阴性对照组相比,FANCF基因沉默后,MCF-7细胞增殖明显受到抑制,转染FANCF-shRNA后48h和72h的抑制率分别为12.65%±1.24%和29.64%±0.87%(P<0.05);S期MCF-7细胞比率增加(33.38%±0.68%,P<0.05),细胞周期阻滞在S期;转染FANCF-shRNA后MCF-7细胞凋亡率明显增加,转染后48h和72h的凋亡率分别为28.95%±1.81%和49.00%±2.32%(P<0.05);P-gp、BCRPmRNA表达水平降低,MRP、LRPmRNA表达水平无明显变化(P>0.05)。结论FANCF基因沉默可抑制人乳腺癌MCF-7细胞增殖,促进细胞凋亡,并使细胞周期阻滞于S期;并可抑制BCRP等耐药相关基因的mRNA表达,参与乳腺癌细胞耐药性的调控。     

RY10-4对乳腺癌MCF-7裸鼠移植瘤的抑制作用及其机制

目的:探讨2-(1-羟基-4-酮-2,5-环己二烯)-吡喃-4-酮(RY10-4)对乳腺癌裸鼠移植瘤抑制作用及其可能的作用机制。方法:建立乳腺癌(MCF-7)裸鼠移植瘤模型,将造模裸鼠随机分为模型组、RY10-4低剂量组(7.5 mg·kg^-1)、 RY10-4高剂量组(15 mg·kg^-1)和紫杉醇组(15 mg·kg^-1);各组均采取隔天腹腔注射给药,检测各组荷瘤裸鼠移植瘤体积和体质量变化。给药16 d后,处死所有裸鼠,称取各组移植瘤质量,TUNEL法检测凋亡指数,并通过Western blot测定移植瘤中Bcl-2、Bax和MAPK 通路蛋白的表达。结果:与模型组比较,RY10-4低、高治疗组和紫杉醇组瘤体积明显减小,瘤质量明显减轻,抑瘤率分别为29.8%,47.2%,53.8%。TUNEL法结果显示,各治疗组能明显引起移植瘤细胞凋亡(P<0.01)。Western blot结果显示,随着RY10-4治疗量的增加抗凋亡蛋白Bcl-2表达减弱,促凋亡蛋白Bax的表达增强,Bcl-2/Bax值显著下降,与模型组相比差异均有统计学意义(P<0.05);另外,RY10-4治疗组移植瘤细胞中的p-p38和p-ERK表达量明显增加。结论:RY10-4能够抑制乳腺癌移植瘤的生长和诱导乳腺癌细胞的凋亡,其诱导凋亡作用可能与下调Bcl-2蛋白和上调Bax蛋白,降低Bcl-2/Bax值,并激活p38和ERK信号通路有关。     

双硫仑螯合铜对耐紫杉醇乳腺癌细胞增殖、迁移、凋亡及自噬的影响

目的 探讨双硫仑螯合铜(DSF-Cu)对耐紫杉醇乳腺癌细胞增殖、迁移、凋亡及自噬的影响。方法 2018年1月至2019年10月,培养MCF-7人乳腺癌细胞和耐紫杉醇乳腺癌MCF-7/紫杉醇细胞,用定量紫杉醇持续诱导MCF-7/紫杉醇细胞维持耐药性。通过CCK-8法检测MCF-7/紫杉醇细胞耐药指数;通过CCK-8法检测MCF-7/紫杉醇细胞在不同浓度DSF-Cu(5、10、15、20、25μmol/L)干预不同时间(24 h和48 h)后的抑制率,并分析细胞抑制率与DSF-Cu浓度和作用时间的关系;通过划痕实验检测DSF-Cu对MCF-7/紫杉醇细胞迁移能力的影响;通过实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)和蛋白质印迹法检测MCF-7和MCF-7/紫杉醇细胞中B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)和自噬效应蛋白Beclin-1基因和蛋白的表达,并在紫杉醇和DSF-Cu单药及联合干预MCF-7/紫杉醇细胞中后,检测Bcl-2、Bax和Beclin-1蛋白的表达;通过流式细胞计数技术检测不同浓度DSF-Cu(5、10、15、20μmol/L)干预MCF-7...     

地西他滨联合紫杉醇对耐药MCF-7细胞增殖抑制和诱导凋亡的增敏作用

摘 要 目的：本研究旨在探讨地西他滨联合紫杉醇对紫杉醇耐药细胞MCF-7的细胞增殖抑制和诱导凋亡作用的影响。方法: 采用CCK-8方法检测联合用药（地西他滨+紫杉醇）或单独用药（地西他滨、紫杉醇）组不同给药浓度在24,48,72 h对耐药细胞的增殖抑制作用,流式细胞仪检测不同给药组给药后48 h的细胞凋亡率。结果: CCK-8结果显示联合用药组相较于单药组对细胞增殖抑制作用显著增加（P＜0.05）,呈剂量依赖性,不同给药组的细胞增殖抑制率随着时间延长而增大;诱导细胞凋亡结果显示,48 h地西他滨单药组和紫杉醇单药组的细胞凋亡率分别是（20.4±1.98）%和（21.8±3.34）%,联合用药组的细胞凋亡率增加至（70.8±8.23）%。结论:地西他滨联合紫杉醇对紫杉醇耐药MCF-7细胞株的增殖抑制作用增加,促进耐药细胞的凋亡,地西他滨联合紫杉醇对耐药细胞株具有协同抗肿瘤作用。     

马蔺子甲素诱导鼻咽癌细胞凋亡的研究

目的:初步探讨马蔺子甲素体外抗鼻咽癌作用和诱导鼻咽癌细胞凋亡作用.方法:细胞毒测定以MTT法,细胞凋亡的测定以流式细胞仪法.结果:马蔺子甲素对多种鼻咽癌细胞株均具有细胞毒作用,对CNE_2、SUNE_1、Fadu细胞的IC50分别为18.8±3.1、22.4±12.0、19.3±6.8μmol/L;马蔺子甲素也能诱导鼻咽癌细胞株CNE_2细胞凋亡.Fadu细胞与58.8、29.4μmol/L浓度马蔺子甲素共同培养48h,其诱导细胞的凋亡率分别为59.3%±4.5%、33.2%±2.3%,半数凋亡浓度为56.3μmol/L,且具有剂量依赖性.结论:马蔺子甲素本身也具有抗鼻咽癌作用及诱导鼻咽癌细胞凋亡的作用.     

血管内皮生长因子受体-1抗体对人喉鳞癌细胞裸鼠移植瘤生长的影响

目的研究血管内皮生长因子受体-1(VEGFR-1)抗体对人喉鳞癌细胞(Hep-2)裸鼠移植瘤模型的影响。方法利用Hep-2细胞建立裸鼠喉癌模型。20只裸鼠成瘤后分别皮下注射VEGFR-1抗体和生理盐水0.2ml,用药15d后观察肿瘤体积及质量,计算抑瘤率;光镜观察移植瘤的形态学变化;进行肿瘤微血管计数;流式细胞仪检测瘤细胞凋亡情况。结果治疗组与生理盐水组移植瘤体积和质量差异有统计学意义(t体积=-5.058,P<0.001;t′重量=-3.4,P=0.003)。VEGFR-1抗体抑瘤率为49.88%,微血管密度(MVD)治疗组为6±4,对照组为13±8(t=2.486,P=0.023)。治疗组与对照组瘤细胞凋亡率分别为(23±4)%,(10±4)%。两组比较差异有统计学意义(t=8.222,P<0.001)。结论VEGFR-1抗体可以导致肿瘤血管生成减少,并抑制裸鼠Hep-2移植瘤的生长,其作用机制可能与VEGFR-1作用位点的封闭和瘤细胞的凋亡增加有关。     

灵芝破壁孢子粉的抗肿瘤活性研究

目的 研究灵芝破壁孢子粉对乳腺癌和口腔癌生长的抑制作用。方法 采用灵芝破壁孢子粉乙醇提取物处理乳腺癌MCF-7细胞、口腔癌KB细胞和宫颈癌HeLa细胞,检测三种细胞的增殖情况。构建裸鼠乳腺癌MCF-7移植瘤和口腔癌KB移植瘤模型,评价灵芝破壁孢子粉进行灌胃治疗后的肿瘤生长抑制情况。结果 灵芝破壁孢子粉乙醇提取物显著抑制MCF-7、KB和HeLa细胞的增殖,且该抑制效应呈剂量依赖性。在MCF-7移植瘤模型中,低、中、高3组灵芝破壁孢子粉给药剂量均有显著的肿瘤生长抑制作用,肿瘤抑制率分别为50.35%、65.72%和80.55%;但在KB移植瘤模型中,低剂量组没有显示显著的肿瘤生长抑制作用,而中剂量组和高剂量组表现出明显的抗肿瘤作用,3组肿瘤抑制率分别为4.03%、37.63%和40.59%。结论 灵芝破壁孢子粉能够抑制MCF-7乳腺癌和KB口腔癌荷瘤裸鼠肿瘤的生长。     

抗人stathmin单克隆抗体及其联合紫杉醇对人乳腺癌细胞的生长抑制作用

目的：探讨抗人stathmin单克隆抗体、紫杉醇分别单用或联用对乳腺癌细胞系MCF-7的生长抑制及促凋亡作用。方法：以不同浓度的抗人stathmin单克隆抗体、紫杉醇分别组成单药组和联合用药组,另设不加药的空白对照组,分别作用于MCF-7细胞24、48、72、96h,观察细胞数量和形态的变化。MTT法检测单克隆抗体、紫杉醇单用组、联用组以及对照组对MCF-7细胞的增殖抑制作用,用流式细胞仪通过AnnexinV/PI双染法检测各组细胞凋亡率的改变。结果：不同浓度的各实验组作用后细胞数量明显减少、形态不规则,部分细胞核固缩和胞质减少,而对照组细胞生长状态良好。抗人stathmin单克隆抗体、紫杉醇单用与联用均能抑制MCF-7细胞增殖,呈剂量-时间依赖效应,联用组细胞抑制率较单药组明显增高,差异具有统计学意义（P〈0.05）,两药联用有交互效应（P〈0.05）。抗人stathmin单克隆抗体、紫杉醇单用与联用均能诱导MCF-7细胞凋亡,联合组更为明显（P〈0.05）。结论：抗人stathmin单克隆抗体、紫杉醇单用与联用均能抑制MCF-7细胞增殖,诱导其凋亡;两药联合作用于人乳腺癌MCF-7细胞具有协同作用。     

沙苑子黄酮抗裸鼠人肝癌移植瘤的实验研究

目的观察沙苑子黄酮(ACF)对人肝癌细胞SMMC7721裸鼠移植瘤生长的影响。方法30只裸小鼠建立人肝癌SMMC7721细胞皮下移植瘤模型后随机分为模型组、环磷酰胺(CTX,25mg·kg-1)组、ACF-1(400mg·kg-1)、ACF-2(200mg·kg-1)和ACF-3(100mg·kg-1)5组,给予相应药物,观察肿瘤生长曲线和移植瘤重量,计算肿瘤抑制率;免疫组化方法检测增殖细胞核抗原(proliferationcellnuclearantigen,PCNA)在肿瘤组织中的表达;光镜和电镜观察肿瘤组织病理变化。结果ACF-1组和ACF-2组裸鼠肿瘤体积和重量明显降低,ACF各给药组平均抑瘤率分别为68.20%、41.19%、26.79%;ACF-1组和ACF-2组肿瘤组织PCNA表达率明显减少(P<0.01,P<0.05);病理学观察结果,ACF可引起SMMC7721细胞坏死,诱导SMMC7721细胞凋亡。结论ACF可抑制SMMC7721裸鼠移植瘤的生长,其作用可能与下调肿瘤组织PCNA表达和诱导肿瘤细胞凋亡有关。     

氯通道参与姜黄素诱导的乳腺癌MCF-7凋亡

目的： 探讨姜黄素（curcumin）诱导的乳腺癌细胞MCF-7凋亡性途径中氯通道是否参与。方法： MTT检测姜黄素对MCF-7细胞的增殖抑制作用,及用氯通道阻断剂5-nitro-2-（3-phenylpropyl-amino）-benzoate （NPPB）预孵2 h后再加入姜黄素的增殖抑制作用;流式细胞术验证姜黄素诱导细胞的凋亡;采用全细胞膜片钳技术记录加入姜黄素后,细胞氯电流的变化。结果： （1）姜黄素对MCF-7细胞的增殖抑制作用呈现剂量依赖性和时间依赖性。NPPB组与单加入姜黄素组相比,细胞生存率存在明显差异,提示阻滞氯通道可导致姜黄素抑制MCF-7细胞增殖的作用减弱。（2）流式结果表示,加入姜黄素（25 μmol·L^-1）24 h后凋亡率33.16%;而姜黄素（25 μmol·L^-1）+NPPB （100 μmol·L^-1）组凋亡率仅为9.16%,相比对照组（6.26%）、NPPB组（7.31%）,氯通道阻断剂明显抑制姜黄素诱导的MCF-7乳腺癌细胞的凋亡,且对早期凋亡的抑制作用明显。（3）全细胞膜片钳技术结果,细胞外灌流姜黄素（25 μmol·L^-1）可激活乳腺癌细胞MCF-7氯通道的开放,产生氯电流,翻转电位（－3.18±1.30） mV,外向电流密度（3.16±1.42） pA·pF^-1,内向电流密度为（－2.76±1.38） pA·pF^-1,该电流可被氯通道阻断剂NPPB、DIDS完全抑制,细胞外灌流高渗溶液亦可完全抑制该电流。结论： 姜黄素可能通过激活容积敏感性氯通道而诱导细胞的凋亡,氯通道的激活可能在姜黄素诱导肿瘤凋亡通路中起着重要的作用。     

4-[4″-(2″,2″,6″,6″-四甲基-1″-哌啶氮氧自由基)氨基]-4′-去甲表鬼臼毒素对K562/ADM细胞的抑制作用

目的比较4-[4″-(2″,2″,6″,6″-四甲基-1″-哌啶氮氧自由基)氨基]-4′-去甲表鬼臼毒素(GP-7)对多药耐药人慢性粒细胞白血病K562的多柔比星耐药株细胞(K562/ADM细胞)的抑制作用是否优于依托泊苷。方法以依托泊苷和K562细胞为对照,用不同浓度GP-7处理K562/ADM细胞不同时间,MTT比色法测定细胞增殖,流式细胞仪测定细胞周期和细胞凋亡率,普通光学显微镜观察细胞凋亡形态,琼脂糖凝胶电泳观察细胞DNA凋亡性降解。结果8~128mol.L-1GP-7处理48h或64μmol.L-1GP-7处理24~72h,GP-7对K562/ADM细胞的增殖抑制呈剂量依赖性(r=0.947,P<0.05)和时间依赖性(r=0.999,P<0.01)。GP-7及依托泊苷对K562/ADM的IC50分别为(45.9±1.8)及(68.7±4.6)μmol.L-1;64μmol.L-1GP-7作用48h可使G2/M期细胞明显增多,相同情况下依托泊苷则使S期细胞明显增多;GP-7可引起K562/ADM和K562细胞凋亡,但其引起的K562/ADM和K562细胞凋亡率与依托泊苷无明显差异;GP-7可引起K562/ADM和K562细胞典型的凋亡形态学变化和DNA凋亡性降解,但GP-7引起的K562/ADM细胞DNA凋亡性降解弱于K562细胞;128及256μmol.L-1GP-7或依托泊苷处理K562/ADM和K562细胞48h,GP-7诱导DNA凋亡性降解的作用强于依托泊苷,但32和64μmol.L-1时作用则相反。结论GP-7可抑制多药耐药白血病细胞株K562/ADM的增殖,诱导细胞凋亡。GP-7抑制多药耐药白血病细胞株K562/ADM的作用优于依托泊苷。     

ClC-3氯通道对Thapsigargin触发的Ca~(2+)运动的影响

目的探讨ClC-3氯通道与Thapsigargin(TG)触发的Ca2+运动的关系。方法在PC12细胞中转染全长ClC-3cDNA,利用生物荧光影像分析系统测定胞质Ca2+技术探讨ClC-3氯通道对TG触发的Ca2+运动的影响。结果与对照组相比,ClC-3蛋白过表达对TG触发的PC12细胞静息[Ca2+]i的Ratio值和Ca2+释放的Ratio值无影响(P>0.05)。但使Ca2+内流量明显降低(P<0.05)。SK&F96365可以浓度依赖的抑制TG触发的Ca2+内流,但与对照细胞及空载体转染细胞相比,SK&F96365对ClC-3蛋白过表达细胞Ca2+内流的抑制作用明显减弱(P<0.05)。结论ClC-3蛋白参与TG触发的经Ca2+池操纵的Ca2+内流(store-operated Ca2+entry,SOCE)调节。     

塞来昔布联合多柔比星对乳腺癌细胞增殖及凋亡的影响

目的研究COX-2选择性抑制剂塞来昔布与多柔比星(doxorubicin,ADM)联合应用对乳腺癌MCF-7细胞和Sk-Br-3细胞的抗肿瘤作用,探讨塞来昔布是否对多柔比星具有减毒增效作用。方法实验分为对照组,塞来昔布组,多柔比星组和联合用药组。用MTT法检测药物对MCF-7细胞和Sk-Br-3细胞的生长抑制效应;Western blot测定MCF-7细胞和Sk-Br-3细胞bcl-2的表达;PI染色检测细胞凋亡;克隆形成法测定药物对MCF-7细胞和Sk-Br-3细胞系的细胞毒作用。结果 MTT结果显示,30μmol·L-1塞来昔布与0.625mg·L-1多柔比星联合作用于MCF-7细胞的72 h存活率为68.53%,作用于Sk-Br-3细胞的72 h存活率为32.66%,较多柔比星单用能明显降低乳腺癌细胞的存活率,且具有时间和剂量依赖性。流式细胞仪PI染色结果显示,联合用药诱导的细胞凋亡率分别为MCF-7细胞59.7%,Sk-Br-3细胞65.8%,较单用多柔比星诱导的凋亡率(MCF-7细胞25.9%,Sk-Br-3细胞28.7%)明显提高。Western blot结果显示单用多柔比星可以使蛋白bcl-2表达下调,合用后较单用下调更加明显。两者联合处理乳腺癌细胞后,caspases-3的活性明显增强。结论塞来昔布和多柔比星对乳腺癌MCF-7细胞和Sk-Br-3细胞有增殖抑制及促凋亡作用,两药联合表现为协同或相加作用。     

熊果酸衍生物与查耳酮缀合物的合成及抗肿瘤活性研究

目的 设计、合成喹喔啉熊果酸-查耳酮缀合物.方法 以喹喔啉熊果酸为先导化合物,将查耳酮通过酯化反应拼接到喹喔啉熊果酸得到了一系列喹喔啉熊果酸-查耳酮缀合物,并通过MTT法测试其抗癌活性.结果 合成了6个喹喔啉熊果酸-查耳酮缀合物,其结构均通过1H NMR,13C NMR和HRMS加以确认.初步的生物活性结果表明,这些缀合物对MCF-7、PC-3、GBC-823和KB细胞均有抑制活性,尤其是对MCF-7细胞的抑制活性与熊果酸相比均有提高,其中化合物5(IC50=14.2μmol·L-1),6(IC50=15.3μmol·L-1)和7(IC50=10.6μmol·L-1)对MCF-7细胞的抑制活性甚至强于临床上应用的药物他莫昔芬(IC50=15.9μmol·L-1).同时,这些缀合物对正常的乳腺上皮细胞MCF-10A没有毒性.结论 本研究为开发高效、低毒的的熊果酸衍生物提供了信息和依据.     

8-溴-7-甲氧基白杨素诱导人胃癌SGC-7901细胞凋亡

目的观察8-溴-7-甲氧基白杨素(8-bromo-7-methoxy-chrysin,BrMChR)诱导人胃癌(SGC-7901)细胞凋亡作用。方法体外培养SGC-7901细胞,MTT法测定细胞存活率;PI染色流式细胞术(FCM)分析细胞凋亡率;DNA琼脂糖凝胶电泳观察梯形条带。结果MTT测定结果显示,BrMChR明显抑制SGC-7901细胞增殖,呈浓度依赖性,其IC50为2.6μmol·L-1,BrMChR的效价强度约是白杨素(ChR,IC50为16.5μmol·L-1)的8倍,约为氟尿嘧啶(5-FU,IC50为7.7μmol·L-1)的3倍。PI染色FCM分析发现BrMChR(1.25、5.00、20.00μmol·L-1)作用SGC-7901细胞48h的细胞凋亡率分别是19.8%±0.2%,36.8%±1.9%,45.5%±3.5%,BrMChR(1.25μmol·L-1)处理的细胞凋亡率较ChR(20.00μmol·L-1)的凋亡率(12.9%±1.5%)高;DNA琼脂糖凝胶电泳观察BrMChR(20.00μmol·L-1)作用24h和48h后SGC-7901细胞的基因DNA呈现典型梯形条带,且能被PPARγ阻断剂GW9662(10.00μmol·L-1)预孵育减弱。结论BrMChR可能部分通过活化PPARγ诱导SGC-7901细胞凋亡。     

Effect of Juglone in qinglongyi on cell cycle status and apoptosis in A-549 cells

Objective To explore the inhibition of juglone in Qinglongyi on A-549 cells in vitro.Methods MTT assay was used.Laser confocal scanning microscope was used to observe apoptotic morphology.Changes of cell cycle are studied by flow cytometry analysis.Results MTT assay showed that juglone had a marked growth inhibition in A-549 cells and the IC50 is respectively 3.4×10-5 mol·L-1,1.8×10-5 mol·L-1 and 2.6×10-6 mol·L-1 after treatment for 24,48 and 72 h by juglone.Through Laser confocal scanning microscope,we can see that juglone can induce the apoptosis.Cell cycle changes are analyzed by flow cytometry with cells at G1 phase significantly less than those of control and cells at G2 phase significantly more than those of control.Conclusions It suggests that juglone could apoptosis of A-549 cells with the cell cycle arrest on G2 phase in distinct dose-dependent manner.     

氯唑沙腙对抗HepG2肿瘤细胞的作用研究

目的研究氯唑沙腙(chlorzoxazone)对HepG2细胞存活和凋亡的影响。方法采用MTT法检测氯唑沙腙对体外培养的HepG2细胞存活率的影响,通过检测LDH释放观察氯唑沙腙对HepG2细胞的致坏死作用,通过TUNEL法评价细胞凋亡率,透射镜评价细胞的超微结构。结果氯唑沙腙在50～500μmol.L-1浓度范围内对HepG2细胞的存活率均有抑制作用,呈明显的剂量依赖效应关系。荧光显微镜和透射电镜下可见典型的肿瘤细胞凋亡改变。氯唑沙腙在100、200、300及500μmol.L-1浓度下作用48h均可诱导HepG2细胞凋亡,具有明显的剂量效应关系。氯唑沙腙100、200、300及500μmol.L-14种浓度分别作用于HepG2细胞24、48及72h,发现以上各种浓度在48h即可诱导细胞凋亡,作用时间越长,凋亡率越高,有明显的时间效应关系。结论氯唑沙腙能够抑制HepG2细胞存活和诱导细胞凋亡。     

槲皮素、补骨脂素对乳腺癌细胞株MCF-7增殖的影响

目的探讨槲皮素(quercetin,Que)和补骨脂素(psor-alen,Pso)对人类乳腺癌细胞株增殖的影响。方法采用流式细胞术和蛋白印迹法检测槲皮素和补骨脂素对雌激素依赖性乳腺癌细胞MCF-7的影响,并以雌激素受体拮抗剂ICI182,780为工具药来评价槲皮素和补骨脂素发挥雌激素样作用与雌激素受体的关系。结果①槲皮素、补骨脂素在10μmol.L-1可使MCF-7细胞增殖指数明显升高,增加S期细胞的比例,与10-3μmon.L-1E2阳性对照组的变化趋势一致。当ICI182,780分别与E2、金雀异黄素、槲皮素、补骨脂素共孵育48 h后,E2、金雀异黄素、槲皮素、补骨脂素的增殖效应被抑制,细胞周期S期细胞数比例下降,G0/G1期细胞数比例上升。②10μmol.L-1槲皮素和10μmol.L-1补骨脂素均上调MCF-7细胞ERα蛋白水平,而对ERβ蛋白表达没有影响;当分别与ICI182,780共孵育MCF-7细胞ERα蛋白表达被拮抗。结论槲皮素和补骨脂素具有雌激素活性,此作用是通过雌激素受体(ER)介导的;产生的类似金雀异黄素促进MCF-7细胞增殖的作用是通过增加ERα表达实现的。     

人类表皮生长因子受体 2对胃癌细胞增殖、迁移侵袭和凋亡的影响

目的 研究人类表皮生长因子受体2(HER2)对胃癌细胞增殖、迁移侵袭和凋亡的影响,并探讨其机制.方法 2018年11月至2019年6月,运用实时定量PCR(qRT-PCR)和蛋白质印迹法(Western blot)检测永生化的正常胃上皮细胞GES-1、胃癌细胞SGC-7901、MGC-803、BGC-823中HER2的表达;将空载体(pcDNA 3.1)、HER2过表达载体(pcDNA 3.1-HER2)、小干扰RNA阴性对照(si-NC)、HER2小干扰RNA(si-HER2)用脂质体法转染至SGC-7901细胞.噻唑蓝(MTT)法检测细胞增殖;Tran-swell小室检测细胞迁移和侵袭;流式细胞术检测细胞凋亡;Western blot检测细胞中p16、p21、基质金属蛋白酶9(MMP-9)、基质金属蛋白酶2(MMP-2)、裂解的聚腺苷二磷酸核糖聚合酶(cleaved-PARP)、裂解的半胱氨酸蛋白酶3(cleaved caspase-3)蛋白表达.结果 与正常胃上皮细胞GES-1相比,胃癌细胞SGC-7901、MGC-803、BGC-823中HER2的表达[(3.02±0.28),(2.51±0.21),(2.36±0.19)比(1.00±0.08)]明显升高,其中SGC-7901细胞中的表达最高(P<0.05);过表达HER2后,SGC-7901细胞的增殖[(1.12±0.09)比(0.61±0.06)]、迁移[(170±15)比(100±9)]和侵袭[(130±12)比(75±6)]能力均明显上调,细胞的凋亡力[(8.03±0.69)％比(19.46±1.44)％]明显下调(P<0.05);敲减HER2则可下调SGC-7901细胞的增殖[(0.59±0.05)比(0.89±0.08)]、迁移[(55±5)比(100±8)]和侵袭[(36±4)比(75±6)]能力,上调细胞的凋亡[(16.82±1.15)％比(8.01±0.65)％]能力(P<0.05).重要的是,过表达HER2可明显抑制SGC-7901细胞中增殖抑制蛋白p16、p21,迁移侵袭相关蛋白MMP-2、MMP-9,凋亡促进相关蛋白cleaved-PARP、cleaved caspase-3的表达,敲减HER2具有相反的作用.结论 HER2可促进胃癌细胞的增殖、迁移侵袭,抑制凋亡,其可能与调控功能增殖、迁移侵袭及凋亡相关蛋白表达有关.