β-榄香烯对人骨髓瘤细胞RPMI-8226增殖与凋亡的影响

为了研究β-榄香烯对人骨髓瘤细胞系RPMI-8226增殖、凋亡的影响,探讨其作用的分子机制,用MTT法检测β-榄香烯对人骨髓瘤细胞系RPMI-8226增殖的影响;Annexin V/PI双染色流式术检测β-榄香烯对RPMI-8226骨髓瘤细胞凋亡的作用;Western blot法检测β-榄香烯对RPMI-8226骨髓瘤细胞BCL-2、caspase-3、DR-4和NF-κB P65蛋白表达影响。结果表明:β-榄香烯对RPMI-8226骨髓瘤细胞生长具有明显抑制作用,且呈浓度和时间依赖性;10-80μmol/Lβ-榄香烯作用48小时可诱导骨髓瘤细胞凋亡,凋亡率随药物浓度而递增;β-榄香烯以时间依赖方式上调caspase-3、DR-4蛋白表达,并可下调BCL-2、NF-κB P65蛋白表达。结论:β-榄香烯通过诱导细胞凋亡有效抑制骨髓瘤细胞增殖,其诱导细胞凋亡与细胞内、外凋亡通路激活、抗凋亡机制被抑制有关。     

阿奇霉素对胃癌细胞增殖、凋亡及炎症因子表达水平的影响

目的 探讨阿奇霉素对人胃癌细胞(AGS细胞)上清液中炎症因子表达、增殖和凋亡的影响及核转录因子-κB(NF-κB)信号通路的调控作用。方法 体外培养AGS细胞,将其分为对照组(不进行干预)和不同水平(12.5、25.0、50.0、100.0μg/mL)阿奇霉素组,干预24 h,筛选阿奇霉素最适水平用于后续实验。细胞分组：对照组、阿奇霉素组(50.0μg/mL阿奇霉素)、阳性药物组(50.0μg/mL 5-氟尿嘧啶)、抑制剂组(50.0μg/mL阿奇霉素+1.0μmol/L NF-κB通路抑制剂BAY11-7082)和激活剂组(50.0μg/mL阿奇霉素+1.0μmol/L NF-κB通路激动剂Prostratin),干预24 h。采用细胞计数试剂盒-8(CCK-8)检测细胞活力;采用酶联免疫吸附试验(ELISA)测定细胞上清液中的炎症因子[白细胞介素(IL)-10及IL-1β]水平;采用5-乙炔基-2′脱氧尿嘧啶核苷(EdU)测定细胞增殖率;采用Hoechst33258染色试剂盒测定细胞凋亡率;采用蛋白免疫印迹(WB)法测定增殖细胞核抗原(PCNA)、半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase...     

反义RelA下调白血病耐药细胞株HL—60／E6bcl—XLmRNA

为了探讨NF-κB对白血病耐药细胞株HL-60/E6 bcl-x基因转录的影响,首先在体外采用间歇小剂量表阿霉素(6 ng/ml)作用于HL-60细胞的方法,建立了性能稳定的广谱耐药细胞株HL-60/E6.然后用RT-PCR方法检测5 μmol/L硫代修饰反义RelA作用于HL-60/E6细胞后bcl-x基因mRNA水平的变化.同时应用免疫荧光技术和流式细胞术分别对HL-60/E6细胞中NF-κB-RelA的功能状态及脂质体作为寡核苷酸载体的转染效率进行评估.结果表明,在HL-60/E6细胞中RelA表达于胞核,NF-κB处于持续活化状态.脂质体介导的寡核苷酸(ODN)的转染效率明显高于裸ODN组,在4,6和12小时时有显著差异(P＜0.01).反义RelA作用于HL-60/E6细胞后,bcl-xL mRNA水平下降呈时间依赖性,8小时抑制达到最高峰,15小时后逐渐恢复,而对照组bcl-xL mRNA水平变化不明显.分析结果认为,NF-κB对bcl-x有转录调节作用,反义技术封闭RelA亚基可以减弱NF-κB对bcl-xL基因的转录激活,进而推测NF-κB可能是白血病细胞耐药的一个重要因子.     

NF-κB抑制剂PDTC对急性白血病细胞HL-60增殖与凋亡的影响

目的:探讨核因子κB(NF-κB)抑制剂吡咯烷二硫基甲酸盐(PDTC)对急性白血病细胞HL-60增殖与凋亡的影响。方法:用PDTC 0、25、50、100μmol/L处理HL-60细胞24、48、72 h,CCK-8实验检测细胞增殖抑制率,Hoechst染色检测细胞凋亡,流式细胞术检测细胞周期,Western blot检测细胞中B淋巴细胞瘤-2(BCL-2)、BCL-2相关X蛋白(BAX)、细胞周期蛋白D1 (cyclinD1)、活化型含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3 (cleaved caspase 3)、cleaved caspase 8及NF-κB信号通路相关蛋白表达。结果:25、50、100μmol/L PDTC处理HL-60细胞24、48、72 h后,同一时间点下随着PDTC浓度升高,细胞增殖抑制率越高(r=0.924,P 0.01),在同一PDTC浓度下,随着时间推移,细胞增殖抑制率增高(r=0.952,P 0.01)。在25、50、100μmol/L PDTC处理HL-60细胞48 h后,与对照组比较,PDTC能显著提高HL-60细胞凋亡率,并使细胞周期阻滞在G1期(P 0.01); PDTC能显著下调HL-60细胞BCL-2,cyclinD1、p-NF-κB p65表达(P 0.05),上调BAX、cleaved-caspase 3、cleaved-caspase 8表达(P 0.01); 50、100μmol/L PDTC能显著下调HL-60细胞p-NF-κB抑制蛋白(p-IκBα)表达(P 0.01)。结论:PDTC能显著抑制急性白血病细胞HL-60的增殖,并诱导细胞凋亡。     

Ad5F35嵌合腺病毒载体介导的突变性IκBα对白血病细胞凋亡的诱导作用

多种不同类型的白血病均存在持续活化的核转录因子κB(NF-κB),而抑制NF-κB活化诱导细胞凋亡有可能成为治疗白血病新的方法。本研究探讨修饰的5型腺病毒载体即Ad5F35嵌合腺病毒载体(Ad5F35 Vec)介导的突变性IκBα(IκBαDN)对白血病细胞凋亡的作用。将携带缺失5’端1-70个氨基酸编码序列的人IκBαAd5F35-IκBαDN Vec转染HL-60细胞。采用流式细胞术、DNA结合试验、实时定量PCR和Western blot技术分别检测细胞凋亡、NF-κB DNA结合活性、IκBα,cIAP-2和xIAP的表达。结果显示,转染48小时后,转染Ad5F35-IκBαDN Vec细胞、空白载体Ad5F35-EGFP Vec细胞以及未转染细胞的凋亡率分别为(22.53±2.999)%,(6.08±2.464)%和(4.86±1.366)%,其差异具有显著意义(Ad5F35-IκBαDN Vec vs未转染:p<0.001;Ad5F35-IκBαDNVec vs Ad5F35-EGFP Vec:p<0.001,p<0.002)。同时,NF-κB DNA结合活性降低,IκBα表达增加,但cIAP-2和xIAP mRNA的表达降低。结论:Ad5F35 Vec能够有效介导IκBαDN cDNA在HL-60细胞的表达,IκBαDN可抑制HL-60细胞NF-κB DNA结合活性并诱导其凋亡。     

结核分枝杆菌抗原激活核因子κB延迟中性粒细胞自发凋亡的作用

目的 探讨结核分枝杆菌抗原(Mtb-Ag)对中性粒细胞自发凋亡的影响.方法 取健康成人外周血分离中性粒细胞,加Mtb-Ag培养24 h,或用核因子κB(NF-κB)抑制剂N-甲苯磺基-L-苯乙胺酰氯甲基酮(TPCK)预处理30 min后,膜联蛋白V(AnnexinV/PI)染色,流式细胞术观察细胞凋亡情况;并用凝胶电泳迁移率变动分析(EMSA)化学发光法检测Mtb-Ag刺激0、1、2、4、6、24h后,中性粒细胞NF-κB的DNA结合活性.结果 加Mtb-Ag(1.125 mg/ml)培养的中性粒细胞凋亡率(32%±3%)与中性粒细胞体外培养24 h后自发凋亡率(55%±6%)相比,明显降低(P＜0.05).Mtb-Ag(1.125 mg/ml)作用中性粒细胞1 h后明显可见NF-κB活化,2 h NF-κB的DNA结合活性达高峰,24h回到静息水平;经TPCK(30 μmol/L)预处理后可阻断Mtb-Ag的抑制凋亡作用.结论 经激活NF-κB介导后,Mtb-Ag对中性粒细胞自发凋亡有抑制作用.     

核转录因子-κB在肝细胞生长因子介导的肝干细胞抗凋亡效应中的作用

目的:研究核转录因子-κB(NF-κB)在肝细胞生长因子(HGF)介导WBF-344细胞凋亡信号转导调控中的作用。方法:为明确HGF对肝干细胞的抗凋亡作用,在加或不加HGF情况下WBF-344细胞用放线菌素D(ActD)20ng/mL、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)诱导细胞凋亡,DNA电泳及流式细胞仪检测细胞凋亡。为检测NF-κB的活性,用NF-κB报告基因质粒BD Great EscA PeTMSEAP vector瞬时转染WBF-344细胞,通过BD Great EscAPeTMSEAP荧光检测系统检测NF-κB的转录活性。为明确NF-κB活化在HGF介导抗凋亡效应中的作用,我们用NF-κB抑制剂如BAY-11-7082和aspirin(ASA)预处理WBF-344细胞,然后用HGF刺激,再通过ActD20ng/mLTNF-α诱导细胞凋亡效应。为证实这一结论,我们用NF-κB抑制质粒转染WBF-344细胞,筛选稳定表达株。转染细胞用HGF刺激48h,然后检测抗凋亡效应。结果:TNF-α可以诱导ActD致敏的WBF-344细胞凋亡。HGF对WBF-344细胞的凋亡具有保护作用。HGF能够明显促进NF-κB活...     

黄芪多糖对粒单核系造血细胞的抗凋亡作用

本研究探讨黄芪多糖（astragalus polysaccharide,ASPS）体外对骨髓粒单核前体细胞的增殖作用和对HL-60细胞株凋亡的影响及其可能的作用机理.观察不同浓度（0,50,100,200 μg/ml）的黄芪多糖和TPO（100 ng/ml）对骨髓集落形成单位CFU-GM和HL-60集落生成的影响.用无胎牛血清（或1％）的改良型RPMI 1640培养液诱导HL-60细胞凋亡,加入或者不加入黄芪多糖共培养72 h后,进行细胞计数并用Annexin V/PI双标记流式细胞术检测凋亡指标Caspase-3和JC-1的表达,并与正常组比较.结果表明,黄芪多糖（100,200 μg/ml）与TPO在体外能明显促进人骨髓细胞集落CFU-GM形成,同时黄芪多糖（50,100 μg/ml）也能促进HL-60细胞集落生成且其最大作用浓度为100 μg/ml,未发现其与TPO具有协同促进增殖的作用.无胎牛血清的RPMI 1640培养液能降低HL-60细胞的增殖,诱导细胞凋亡.HL-60细胞经黄芪多糖作用72 h后,与对照组相比细胞计数明显上升,由19×104个上升到34×104个（P＜0.05）,caspase-3表达相对于对照组明显下降,分别由10.5％,14.1％降至7.2％（P＜0.05）,7.8％（P＜0.05）.结论：黄芪多糖和TPO均能促进骨髓CFU-GM和HL-60细胞集落的生成;在无胎牛血清RPMI 1640培养液诱导细胞凋亡的情况下,黄芪多糖显著减少HL-60细胞的凋亡,保护HL-60细胞.     

新生牛肝再生刺激素对HL-60细胞DNA的损伤作用

本研究旨在观察分子量小于10kD的肝再生刺激素(hepatocyte growth-promoting substance，HGS)在体外液体培养中对HL-60细胞增殖的影响，并探讨其作用机制。实验分为3组：22．5μg/ml组、40μg/ml组和对照组，用胎盘蓝染色法计数HL-60细胞生长曲线，观察HGS对HL-60细胞增殖的影响；应用单细胞凝胶电泳法比较不同剂量HGS引起HL-60细胞的DNA损伤情况；采用基因组DNA体外电泳技术，观察HL-60细胞在HGS作用后凋亡的DNA片段断裂情况。结果表明，22．5μg/ml和40μg/ml 2个组在2天培养后均观察到HL-60细胞的增殖受到抑制；基因组DNA体外电泳结果证明，在上述2个剂量的组内，出现了明显的DNA梯形条带，并于培养第2天有HL-60细胞凋亡；单细胞凝胶电泳(SEGE)显示，HL-60细胞在加入HGS后出现有慧尾的细胞数量增多。结论：HGS能够抑制白血病细胞系HL-60细胞的增殖，并通过诱导凋亡导致DNA损伤来杀伤对HL-60细胞。     

高三尖杉酯碱诱导HL-60细胞人端粒酶逆转录酶mRNA的变化

为了探讨高三尖衫酯碱(homohardngtonine，HHT)抑制HL-60细胞端粒酶活性的机制及意义，采用半定量RT-PCR和PCR-ELISA法检测HHT作用后的HL-60细胞人端粒酶逆转录酶(hTERT)mRNA表达和端粒酶活性的变化，用TUNEL法检测HL-60细胞的凋亡率。结果发现：与空白对照相比，0．005-0．03μg/ml,HHT作用HL-60细胞12小时，hTERTmRNA表达无明显变化，随HHT浓度增加至0．04-0．05μg/ml，hTERTmRNA表达明显下降至检测不出。与0小时相比，0．02μg/ml HHT作用6-18小时后，HL-60细胞hTERT mRNA表达无明显变化，24小时后hTERT mRNA表达明显减少，至30小时未能检出hTERT mRNA表达。HL-60细胞端粒酶活性的抑制与hTERT mRNA的表达下降趋势基本一致。随HL60细胞hTERT mRNA的表达下降和端粒酶活性的抑制，其凋亡率明显增加。结论：HHT能抑制HL-60细胞hTERT mRNA的转录，其与细胞凋亡的关系值得进一步研究。     

mPGES-1抑制剂MK886对白血病HL-60/A细胞凋亡及耐药性的影响

为了探讨膜结合型前列腺素E2合酶1(mPGES-1)抑制剂MK886对耐药白血病HL-60/A细胞诱导凋亡的作用及对其耐药性的影响,采用QT-PCR及Western blot法检测HL-60/A细胞mPGES-1的表达,CCK-8法观察药物对HL-60/A细胞增殖的影响,流式细胞术检测细胞凋亡,ELISA法检测PGE2的合成,Western blot法检测Akt、P-Akt表达,并观察低浓度(10μmol/L)MK886对HL-60/A细胞耐药性及多药耐药基因表达的影响。结果表明,HL-60/A细胞高表达mPGES-1,MK886可时间、浓度依赖性地抑制HL-60/A细胞增殖,诱导其凋亡(r=-0.83,P<0.05),同时,mPGES-1表达及PGE2合成减少,P-Akt表达明显下降。低浓度MK886可下调多药耐药基因mdr-1及蛋白P170表达,增强对化疗的敏感性。结论:MK886可抑制耐药白血病HL-60/A细胞增殖,诱导其凋亡,增强其化疗敏感性,其机制与下调mPGES-1/PGE2合成、抑制P-Akt蛋白及多药耐药基因表达有关。     

小檗碱对HL-60细胞增殖、凋亡及血管内皮生长因子受体2表达的影响

本研究旨在观察小檗碱对人早幼粒白血病HL-60细胞的增殖、凋亡及血管内皮生长因子受体-2(VEGFR2)表达的影响。选用HL-60细胞体外培养,在不同浓度的小檗碱(6-96μg/ml)作用下,应用CCK-8法检测小檗碱对HL-60细胞的增殖抑制作用;应用流式细胞仪检测HL-60细胞的凋亡水平及细胞周期的分布;用RT-PCR及Western blot分别检测VEGFR2 mRNA及VEGFR2蛋白表达的变化。结果显示,小檗碱能抑制HL-60细胞的增殖,促进其凋亡,呈浓度和时间依赖关系。随着小檗碱浓度增加,G1期细胞增多,S期细胞减少,同时VEGFR2 mRNA和VEGFR2蛋白表达减少。结论:小檗碱可抑制HL-60细胞增殖,促进细胞凋亡,改变HL-60细胞周期,下调VEGFR2 mRNA及VEGFR2蛋白的表达。     

硼替佐米对多药耐药HL-60细胞增殖的影响及耐药逆转作用

目的 观察硼替佐米对多药耐药白血病细胞增殖的影响及耐药逆转作用,初步探讨硼替佐米抑制多药耐药白血细胞增殖的分子机制.方法 以多药耐药白血病细胞系HL-60/DNR和HL-60/VCR细胞为模型,以HL-60细胞为对照,用四甲基偶氮唑盐反应比色法(MTT法)测定硼替佐米对HL-60、HL-60/DNR和HL-60/VCR细胞增殖的抑制作用,计算微毒剂量作为逆转耐药剂量.分4个实验组:HL-60/DNR+柔红霉素(DNR)、HL60/DNR+DNR+硼替佐米、HL-60/VCR+长春新碱(VCR)、HL-60/VCR +VCR+硼替佐米,计算硼替佐米逆转耐药倍数.硼替佐米按浓度递增(10、40、80nmol/L)作用于HL-60/DNR和HL-60/VCR细胞48 h,实时定量RT-PCR和Western blot方法检测XIAP、cIAP-1、cIAP-2 mRNA和蛋白表达水平及NF-κB活性.结果 硼替佐米呈浓度依赖性抑制HL-60、HL-60/DNR和HL-60/VCR细胞增殖,IC50值分别为(28.90 ±3.99)、(81.19 ±9.34)和(73.48±8.94) nmol/L.10 nmol/L硼替佐米预处理48 h后,DNR对HL-60/DNR细胞的IC50值由(12.90±1.75) μmol/L降低至(3.54±0.57) μmol/L(P ＜0.01),VCR对HL-60/VCR的IC50值由(33.25 ±7.28)μmol/L降低至(9.97±1.15) μmol/L(P ＜0.01),逆转耐药倍数分别为(3.32±0.53)和(2.64±0.28)倍.硼替佐米呈浓度依赖性下调XIAP、cIAP-1、cIAP-2 mRNA和蛋白的表达水平及抑制NF-κB活化.结论 硼替佐米可抑制多药耐药HL-60细胞增殖,并对多药耐药具有一定的逆转作用;其机制可能与下调凋亡抑制蛋白表达相关.     

对白细胞介素-1β激活核转录因子-κB介导A549细胞分泌细胞间黏附分子-1作用的研究

目的 研究白细胞介素-1β(IL-1β)对A549细胞表达细胞间黏附分子-1(ICAM-1)的诱导作用及相关细胞内信号通路的激活和转导机制.方法 以1 μg/L终浓度的IL-1β刺激经SC-514[核转录因子-κB(NF-κB)的IKK-2复合物抑制物]预处理的A549细胞,用蛋白质免疫印迹法(Western blotting)检测IL-1β刺激5、10、30、60 min时细胞内磷酸化NF-κB抑制蛋白(pIκBα)和IκBα蛋白表达水平;激光扫描共焦显微镜(LSCM)显像检测NF-κB p65的核转移过程;按试剂盒说明测定NF-κB DNA结合活性;p65抗体染色质免疫沉淀结合聚合酶链反应(ChIP-PCR)技术检测乙酰化组蛋白H4和p65与ICAM-1基因启动子的结合;逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测4 h后的ICAM-1 mRNA表达;酶联免疫吸附法(ELISA)检测24 h后细胞表面的ICAM-1蛋白表达.结果 IL-1β刺激后细胞内pIκBα蛋白表达水平明显升高,IκBα蛋白表达水平明显下降;LSCM检测显示激活的p65蛋白从胞质向胞核转移,p65与DNA结合活性明显升高(P<0.01).ChIP-PCR扩增发现,IL-1β促使乙酰化组蛋白H4和p65与ICAM-1基因启动子区域的DNA片断结合.IL-1β刺激4 h后ICAM-1 mRNA表达明显升高,刺激24 h后A549细胞表面ICAM-1蛋白表达亦明显升高(P均<0.01).SC-514阻断了pIκBα蛋白的升高和IκBα蛋白的下降;减少了p65蛋白的核转移和DNA结合活性;降低了ICAM-1的mRNA及蛋白表达水平(P均<0.01).结论 IL-1β通过激活NF-κB 介导了A549细胞表达ICAM-1.     

Bay 11-7082增强Fas介导的HL-60细胞凋亡作用

本研究观察NF-κB抑制剂Bay 11-7082对HL-60细胞Fas/FasL系统的作用及对Fas介导的HL-60细胞凋亡的影响。用RT-PCR和流式细胞术检测Bay 11-7082干预后HL-60细胞Fas、FasL和XIAP的mRNA和蛋白表达水平的变化;用ELISA方法检测Bay 11-7082干预前后sFasL水平的变化;流式细胞术检测Bay 11-7082干预前后CH-11(活性Fas抗体)诱导HL-60细胞凋亡的变化。结果表明:用Bay 11-7082干预后,HL-60细胞FasL和XIAP的mRNA和蛋白水平较对照组明显下降,差异具有显著性(p<0.05),Fas的mRNA、蛋白水平的变化和sFasL水平的变化无显著的差异(p>0.05);Bay 11-7082干预后HL-60细胞对CH-11诱导细胞凋亡敏感性显著增强。结论:Bay 11-7082可能通过下调FasL和XIAP水平增强HL-60细胞Fas介导的凋亡。     

PM2.5暴露后激活核转录因子/环氧化酶2/前列腺素E2信号通路引起氧化应激损伤雄性生殖功能的机制研究

目的分析大气细颗粒物(PM2.5)暴露后激活核转录因子κB(NF-κB)/环氧化酶2(COX-2)/前列腺素E2(PGE2)信号通路引起氧化应激损伤雄性生殖功能的机制。方法 20只清洁级别雄性小鼠随机分为对照组、暴露组各10只,对照组仅饲养于SPF级动物中心,暴露组予以PM2.5暴露,连续12周后均麻醉处死,评估生殖功能,进行考马斯亮蓝染色法、免疫组化法观察,测定睾丸组织匀浆及血清中睾酮(T)、雄性激素结合蛋白(ABP)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-1(IL-1)、白介素-6(IL-6),实时荧光定量PCR及Western blot法测定NF-κB、COX-2、PGE2。结果暴露组的睾丸系数、附睾系数、精子计数、精子活动率、精子成活率低于对照组,精子畸形率高于对照组(P0.05);考马斯亮蓝染色中暴露组细胞质骨架逐渐松弛回缩甚至断裂、消失,分布紊乱,生精细胞脱落;免疫组化染色中暴露组睾丸间质细胞体积较对照组变小,染色加深,细胞核固缩,胞浆含量少;暴露组睾丸组织匀浆及血清中T、ABP表达水平低于对照组,TNF-α、IL-1、IL-6水平高于对照组(P0.05);暴露组NF-κB、COX-2、PGE2的mRNA及蛋白表达水平均高于对照组(P0.05)。结论 PM2.5暴露可能增加睾丸Sertoli细胞形态结构及功能损伤,影响雄性大鼠生殖功能,机制可能为激活NF-κB/COX-2/PGE2信号通路引起氧化应激损伤。     

TGF-β1和(或)三氧化二砷作用于HL-60细胞后P27~(Kip1)表达及凋亡情况的研究

本研究观察三氧化二砷(As2O3)和/或TGF-β1对HL-60细胞凋亡及细胞周期的影响,以及作用前后P27Kip1、内源性TGF-β1、cyclinE和BCL-2的变化情况。As2O3和/或TGF-β1作用于HL-60细胞,用细胞形态学观察及流式细胞术检测细胞凋亡和细胞周期改变情况,应用免疫组织化学检测药物处理前后P27Kip1、内源性TGF-β1、cyclinE以及BCL-2表达的变化情况。结果表明:As2O3和TGF-β1单用均可以诱导HL-60细胞发生凋亡,联合处理对HL-60细胞生长抑制作用强于单药处理,其中5μmol/LAs2O3作用最强,5ng/mlTGF-β1处理可引起HL-60细胞的细胞周期阻滞于G1期(p0.05)。5ng/mlTGF-β1和联合处理组P27Kip1的表达较对照组增强(p0.05);5μmol/LAs2O3处理组P27Kip1的表达与对照组比较无明显差异(p0.05)。5ng/mlTGF-β1和联合处理组均可见cyclinE蛋白表达下调(p0.05)。5μmol/LAs2O3和联合处理组可见内源性TGF-β1表达上调(p0.05)。结论:As2O3、外源性TGF-β1均可诱导HL-60细胞凋亡,联合处理组诱导凋亡作用强于对照组和单药处理组,TGF-β1处理可引起HL-60细胞周期阻滞于G1期。TGF-β1诱导HL-60细胞凋亡过程中P27Kip1表达增强,拮抗cyclinE和BCL-2的作用,细胞周期阻滞,诱导细胞发生凋亡,这表明P27Kip1是TGF-β引起细胞周期阻滞的关键效应物,外源性TGF-β1又通过上调内源性TGF-β1的表达增强As2O3诱导原代APL细胞凋亡的作用。     

β-榄香烯联合热疗和顺铂对人非小细胞肺癌A549细胞HSP70及耐药基因的影响

目的探讨β-榄香烯联合顺铂和热疗对A549细胞中HSP70、MDR1、Bax/Bcl-2基因表达的影响。方法 15μg/ml和60μg/ml榄香烯分别联合热疗和顺铂处理细胞后,RT-PCR及WesternBlot法检测HSP70-1、MDR1基因mRNA转录和蛋白表达;RT-PCR检测Bax/Bcl-2基因mRNA转录水平。结果各实验组HSP70-1基因mRNA转录水平差异无统计学意义,而各实验组HSP70蛋白表达水平除了37℃下顺铂4μg/ml组、榄香烯15μg/ml、顺铂4μg/ml联合60μg/ml榄香烯组外其余各组均显著升高,差异有统计学意义(t分别=7.48～55.76,P均<0.05);37℃下各实验组MDR1基因mRNA转录多数降低,顺铂4μ/ml联合榄香烯15μg/ml与37℃对照组相比,差异有统计学意义(t=93.38,P<0.05),42℃下顺铂4μg/ml联合15μg/ml榄香烯组与42℃对照组比较,差异具有统计学意义(t=7.99,P<0.05)。各实验组MDR1蛋白表达均较低,与对照组比较,差异无统计学意义;部分实验组Bcl-2基因mRNA水平降低,与对照组比较,差异具有统计学意义(t分别=4.41、3.97、5.11、3.43、4.88、4.52,P均<0.05),而Bax基因mRNA水平未见明显变化。结论 37℃下高浓度榄香烯联合顺铂可能是通过抑制MDR1、Bcl-2等耐药相关基因协同杀伤细胞,而42℃下低浓度榄香烯和顺铂主要是通过抑制Bcl-2基因活性起到协同杀伤效应。     

藏红花素对HL-60细胞增殖抑制和诱导凋亡作用及其机制

本研究探讨藏红花素(crocin)对人急性白血病细胞HL-60增殖抑制的影响及其促凋亡机制。测定HL-60细胞在不同浓度crocin作用后的生长曲线,用荧光显微镜观察细胞形态学变化,MTT法检测细胞的增殖情况,流式细胞术检测细胞周期分布,RT-PCR检测bcl-2、bax基因的表达。结果表明,不同浓度crocin作用后HL-60细胞生长明显受抑制,并呈现出剂量时间依赖关系。在0-5mg/ml范围内HL-60细胞凋亡率逐渐升高。当crocin浓度高于5mg/ml时,HL-60细胞凋亡率并没有升高,反而下降,表现为细胞坏死。流式细胞术检测结果显示,细胞周期被阻滞于G0/G1,且在5mg/ml时阻滞作用最明显。RT-PCR结果显示,bcl-2基因表达明显下调,bax基因表达上调。结论:crocin可诱导HL-60细胞凋亡,并对细胞周期起阻滞作用,其作用机制可能与bcl-2基因表达抑制及bax基因表达激活有关。     

促肾上腺皮质激素对脐静脉内皮细胞株及星形胶质细胞的毒性作用研究

目的 探讨促肾上腺皮质激素[ACTH(1-24) ]对脐静脉内皮细胞株(ECV304)和星形胶质细胞的细胞毒性作用.方法 采用体外细胞培养技术,以细胞形态学、细胞活性、乳酸脱氢酶(LDH)释放量及细胞凋亡率的改变为指标,观察不同浓度的ACTH(1-24) 对ECV304和星形胶质细胞的影响.结果 ACTH(1-24)血药浓度在1 μg/ml、5 μg/ml、25 μg/ml、100 μg/ml、200 μg/ml范围内对ECV304和星形胶质细胞的形态、细胞活性、凋亡率及LDH的释放均无明显影响,组间比较差异无统计学意义(P＞0.05).结论 ACTH(1-24)在1～200 μg/ml的浓度范围内对ECV304和星形胶质细胞均无毒性作用.