山茱萸多糖抗HDF衰老与cyclinD1表达的关系

目的:探讨山茱萸多糖对抗HDF细胞衰老作用及对细胞周期蛋白的作用.方法:体外培养HDF细胞,实验组从40代开始加多糖含药血清.在培养至43代、47代和50代采用MTT法检测细胞活力,RT-PCR法检测cyclinD1的mRNA表达,并与30代时进行比较.结果:衰老组细胞活力下降,cyclinD1 mRNA表达升高;山茱萸多糖血清可提高细胞活力,降低HDF细胞cyclinD1 mRNA含量表达. 结论:山茱萸多糖可能通过改变细胞周期调控因子的表达而发挥其抗HDF细胞衰老作用.     

脂联素对高糖环境下RPE细胞氧化应激及凋亡的影响

目的 通过高糖环境下培养人RPE细胞建立RPE细胞的氧化应激模型,观察脂联素对RPE细胞各氧化应激指标及凋亡的影响,从而揭示脂联素对RPE细胞可能的保护机制.方法 将体外培养的人RPE细胞分为3组:正常对照组、高糖组、高糖+脂联素组,分别干预24、48、72 h.在倒置显微镜下观察RPE细胞形态变化,采用硫代巴比妥酸法测定MDA含量,用黄嘌呤氧化酶法检测SOD含量和活性,用荧光定量RT-PCR法测定p66Shc、Ho-1在各个时间点上的表达,通过流式细胞术检测RPE细胞的凋亡率.结果 与正常对照组相比,高糖组MDA含量显著上升,SOD含量显著下降(P<0.05),与高糖组相比,脂联素组MDA含量显著下降,SOD含量显著上升(P<0.05),并且呈时间依赖性.与正常对照组相比,高糖组Ho-1 mRNA表达增高;脂联素组较高糖组表达亦增高(P<0.05).与正常对照组相比,高糖组p66Shc mRNA表达增高;脂联素组较高糖组表达降低(P<0.05),呈时间依赖性.流式细胞术RPE细胞凋亡高糖组细胞凋亡率较正常对照组明显增加,而脂联素组细胞凋亡率较高糖组显著下降.结论 脂联素可通过减少p66Shc表达,从而减少线粒体ROS产生、增加Ho-1表达,增加抗氧化能力,减少氧化应激反应,减少细胞凋亡,对糖尿病RPE细胞起保护作用.     

枸杞多糖对外源一氧化氮损伤下小鼠胰岛细胞的保护作用

目的研究枸杞多糖对外源性的一氧化氮损伤下小鼠胰岛的保护作用。方法体外培养小鼠胰岛细胞NIT-1，用硝普钠和不同浓度枸杞多糖对它们的细胞活性、NO浓度、SOD活性、MDA含量、细胞凋亡率变化及凋亡相关基因bcl-2和bax进行检测。结果不同浓度枸杞多糖组可以明显抑制NO引起的胰岛细胞的活性下降、凋亡率增加、SOD浓度下降、NO和MDA含量增加，bcl-2mRNA表达降低，baxmRNA表达显著增加，抑制作用随枸杞多糖浓度的增加而增强。     

还原型谷胱甘肽对高糖环境下肾小管细胞活性氧、核因子-κB及骨桥蛋白的影响

目的 观察高糖对人肾小管上皮细胞(HK-2细胞)产生活性氧、核因子-κB(NF-κB)及骨桥蛋白(OPN)的影响及还原型谷胱甘肽(GSH)的干预作用.方法 用分光光度比色法测定上清液超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)含量,用RT-PCR法测定细胞内NF-κB mRNA的变化及用ELISA法测定上清液中OPN的含量.结果 高糖组SOD活力显著低于正常组(P＜0.01),MDA含量、NF-κB mRNA的表达及OPN含量明显高于正常组(P＜0.01),GSH可增加SOD活力(P＜0.05),并减少MDA及OPN的含量、NF-κB mRNA的表达(P＜0.01).结论 高糖可导致HK-2细胞活性氧产生增多及NF-κB、OPN的高表达,而GSH可进行有效干预.     

黄芩茎叶总黄酮对高甘油三酯血清致人脐静脉内皮细胞氧化损伤的保护作用及机制研究

目的研究黄芩茎叶总黄酮(SSTF)对高甘油三酯(HTG)血清致人脐静脉内皮细胞(HUVEC)氧化损伤的保护作用,并探讨其可能的作用机制。方法体外培养HUVEC,终浓度为100 mg.L-1、200 mg.L-1、400 mg.L-1的SSTF分别与HTG氧化损伤的HUVEC共同孵育16 h,通过检测细胞超氧化物歧化酶(SOD)活性、丙二醛(MDA)含量及细胞内活性氧(ROS)水平的变化,观察SSTF的保护作用,并通过RT-PCR法检测NADPH氧化酶4(NOX4)mRNA表达,Western blot法检测NOX4蛋白表达。结果各浓度组的SSTF均可明显升高HTG氧化损伤的HUVEC的SOD活性,明显降低MDA含量,减少HUVEC内ROS水平,下调NOX4mRNA表达和蛋白表达(P<0.01)。结论 SSTF对HTG致HUVEC氧化损伤具有保护作用,其可能通过抑制NADPH氧化酶表达进而减少ROS的生成来发挥它的抗氧化作用。     

姜黄素对高浓度葡萄糖培养的RF/6A的保护作用

目的 探讨高浓度葡萄糖对体外培养的恒河猴脉络膜-视网膜内皮细胞(RF/6A)的损伤及姜黄素对此的保护作用.方法 RF/6A为3组培养(n=6):对照组(DMEM完全培养基+10%胎牛血清),高浓度葡萄糖组(DMEM完全培养基+10%胎牛血清+30 mmol/L葡萄糖),姜黄素-葡萄糖组(DMEM培养基+10%胎牛血清+30 mmol/L葡萄糖+30 μmol/L姜黄素).以噻唑蓝(MTT)法检测分组培养1、3、5 d后各组细胞活力的变化,检测培养5 d后各组细胞丙二醛(MDA)含量及超氧化物歧化酶(SOD)活性.结果 高浓度葡萄糖组RF/6A活力逐渐降低,呈现明显的时间依赖性,与对照组相比高浓度葡萄糖组RF/6A活性降低明显(P<0.01).姜黄素-葡萄糖组RF/6A活力无明显变化,与对照组无统计学差异(P>0.05).氧化应激水平检测显示,与对照组相比,分组培养5 d后,高浓度葡萄糖组MDA含量增加(P<0.01),SOD活力降低(P<0.01).姜黄素-葡萄糖组MDA含量及SOD活力均无明显变化(P>0.05).结论 姜黄素可抑制RF/6A氧化应激水平,防止高浓度葡萄糖对细胞造成损伤.     

补肾活血方对大鼠血管内皮细胞p16基因表达的影响

目的：观察补肾活血方对大鼠血管内皮细胞p16基因表达的影响。方法将健康雄性SD大鼠24只随机分为中药组、黄芪组及0.9%氯化钠溶液组,每组8只,分别给予每组大鼠等量补肾活血方、黄芪、0.9%氯化钠溶液灌胃。提取含药血清培养人脐静脉内皮细胞,采用β-半乳糖苷酶（β-gal）染色鉴定细胞衰老;流式细胞术分析细胞周期变化,RT-PCR法检测p16基因的表达。结果中药组、黄芪组血清培养细胞与0.9%氯化钠溶液组比较, G0/G1期细胞比例均减少（P〈0.05）,且中药组G0/G1期细胞比例低于黄芪组（P〈0.05）。中药组、黄芪组血清培养细胞p16基因表达较0.9%氯化钠溶液组下调（ P〈0.05）,且中药组血清培养细胞p16基因的表达较黄芪组下调（P〈0.05）。结论补肾活血方具有延缓大鼠血管内皮细胞衰老的作用,其分子作用机制可能为通过调控血管内皮细胞p16的表达而使细胞周期停滞于G1期。     

PKC和MMPs在枸杞籽油抗动脉粥样硬化中的作用和机制

目的 研究枸杞籽油抗动脉粥样硬化的功效及其可能的作用机制.方法 高脂膳食制备家兔动脉粥样硬化实验模型,观测其血浆中TC、TG、LDL-C、HDL-C、ApoA、ApoB的变化;56 d后,测定血清SOD、GsH-Px、T-AOC活性和MDA的含量;石蜡切片进行病理学检测;免疫印迹检测PKC、MMP-2、MMP-9在血管中的表达.结果 枸杞籽油可增加实验家兔血浆中HDL-C、ApoA的含量,降低血浆中TC、TG、LDL-C、ApoB的含量,增强血清中SOD、GSH-PX、T-AOC的活性,降低血清中MDA的含量;降低PKC、MMP-2、MMP-9在血管中的表达.结论 枸杞籽油具有显著的抗动脉粥样硬化效应.其机制可能是通过PKC途径,减少MMPs的分泌、抑制SMC的增生、分泌胶原、降血脂和抗氧化等.     

芦丁对高糖模型大鼠肾小球系膜细胞的保护作用

目的:研究芦丁对高糖模型大鼠肾小球系膜细胞的保护作用。方法:以高糖(25 mmol/L)培养鼠肾小球系膜细胞。试验随机均分为正常对照(正常培养基)组、溶剂对照(0.1%DMSO)组、模型(正常培养基)组、卡托普利(1μmol/L)组与芦丁高、中、低质量浓度(40、10、5μg/ml)组,培养48 h。采用实时荧光定量-聚合酶链反应(RT-PCR)法测定细胞转化生长因子(TGF)-β1mRNA的表达,Western blot法检测细胞Smad 2/3与Smad 7的含量,分光光度法测细胞总超氧化物歧化酶(T-SOD)、丙二醛(MDA)、过氧化氢酶(CAT)与谷胱甘肽过氧化酶(GSH-Px)水平。结果:与溶剂对照组比较,模型组细胞Smad 2/3、TGF-β1mRNA的表达增强,T-SOD、CAT与GSH-Px活性减弱,MDA含量增加,Smad 7的表达减弱,差异有统计学意义(P<0.01)。与模型组比较,芦丁高、中、低质量浓度组细胞Smad 2/3表达减弱,T-SOD、CAT活性增强,MDA含量减少,Smad 7的表达减弱;芦丁高、中质量浓度组TGF-β1mRNA表达减弱,GSH-Px活性增强,差异有统计学意义(P<0.01或P<0.05)。结论:芦丁通过TGF-β1/Smad通路对高糖培养的大鼠肾小球系膜细胞产生保护作用,具有潜在的防治糖尿病肾病作用。     

清热活血补益方影响肝脏胶原代谢的分子生物学机制

目的 :从分子生物学水平研究中药复方清热活血补益方 (肝纤方 )如何影响大鼠肝脏的胶原合成及降解。方法 :运用血清药理学方法制备中药含药血清 ,将之作用于从SD大鼠肝脏分离培养的肝星状细胞 ,并测定Ⅰ型胶原含量、Ⅰ型前胶原mRNA的表达和胶原酶活性。结果 :与对照组相比 ,含药血清组Ⅰ型胶原含量降低 ,Ⅰ型前胶原mRNA的表达受到抑制 ,胶原酶的活性增加 (P <0 .0 5 )。结论 :清热活血补益方通过抑制Ⅰ型前胶原mRNA的表达来减少胶原的合成 ,通过提高胶原酶的活性来促进胶原的降解 ,这可能是其多位点抗肝纤维化的部分分子生物学机制。     

老年大鼠角膜和晶状体上皮细胞NADPH氧化酶表达的研究

目的研究NADPH氧化酶在青年和老年大鼠角膜和晶状体上皮细胞中的表达。方法实验分为青年组(3月龄)和老年组(16月龄),比色法测定血清中超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)含量,HE染色观察角膜和晶状体上皮细胞病理形态学变化,免疫组化检测角膜和晶状体上皮细PKCα、P47phox和NOX2的表达。结果与青年组大鼠比较,老年组大鼠血清SOD活性明显降低,MDA含量明显增加。病理结果显示,老年组角膜和晶状体上皮细胞核固缩、核深染细胞增多。免疫组化结果表明,老年组大鼠角膜和晶状体上皮细胞PKCα、P47phox和NOX2的表达明显增加。结论老年大鼠角膜和晶状体上皮细胞NADPH氧化酶表达明显增加,NADPH氧化酶介导的活性氧可能与老龄大鼠角膜和晶状体退行性变有关。     

降糖复方含药血清对氧化损伤内皮细胞的保护作用

目的：研究降糖复方含药血清对H2O2诱导的血管内皮细胞氧化损伤的保护作用。方法：采用H2O2诱导人脐静脉血管内皮细胞（ECV304）氧化损伤模型,观察细胞形态学变化并测定细胞活力、丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）的含量,NO含量以及内皮素（ET-1）含量。结果：降糖复方含药血清可明显改善氧化损伤的ECV304细胞形态学变化,提高细胞存活率,降低MDA含量、提高SOD活力、增加NO释放、减少ET-1释放。结论：降糖复方含药血清能对抗H2O2对血管内皮细胞的氧化损伤,起到保护血管内皮细胞的作用。     

黄芪多糖对严重烧伤大鼠心肌损伤的保护作用

目的观察黄芪多糖对严重烧伤大鼠心肌细胞凋亡的影响,并探讨其作用机制。方法 120只大鼠随机分为对照组、模型组、地塞米松(5 mg/kg)组和黄芪多糖10、20、40 mg/kg组,每组20只。采用92℃水浴18 s的方法制备大鼠30%总体表面积占比(TBSA)III度烧伤模型。各治疗组均ip给药1 m L/kg;对照组、模型组均ip给予生理盐水1 m L/kg。24 h后,TUNEL法检测心肌细胞凋亡情况并计算凋亡指数,测定血清中心肌酶天冬氨酸氨基转移酶(AST)、肌酸磷激酶(CPK)、乳酸脱氢酶(LDH)和肌钙蛋白T(c Tn T)水平,测定心肌组织中抗氧化酶超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、髓过氧化物酶(MPO)活性和丙二醛(MDA)含量;RT-PCR法检测心肌组织中AKT mRNA、bcl-2 mRNA、Bax mRNA表达并计算bcl-2/Bax表达比值;Western blotting法检测心肌组织中caspase-3、NF-κB蛋白表达。结果与模型组比较,黄芪多糖组大鼠心肌细胞凋亡数量明显减少。与模型组比较,黄芪多糖20、40 mg/kg治疗24 h能够显著降低严重烧伤大鼠心肌细胞凋亡指数;AST、CPK、LDH、c Tn T水平显著降低;SOD、CAT、MPO活性显著升高,MDA含量显著降低;AKT mRNA、bcl-2 mRNA表达显著上调、Bax mRNA表达显著下调,bcl-2/Bax比值显著升高;显著降低caspase-3、NF-κB蛋白表达量(P0.05、0.01)。结论黄芪多糖对严重烧伤大鼠心肌损伤具有保护作用,其作用机制可能与黄芪多糖能够有效降低氧化应激损伤和调节凋亡相关基因和蛋白表达有关。     

甘糖酯对高脂血症大鼠主动脉中MCP-1表达的抑制作用甘糖酯对高脂血症大鼠主动脉中MCP-1表达的抑制作用

目的探讨甘糖酯对高脂血症大鼠主动脉中单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)表达的影响。方法以甘糖酯或甘糖酯辅以超氧化物歧化酶(SOD)抑制剂diethyldithiocarbamate(DDC)治疗高脂血症大鼠3周,测定SOD活性、脂质过氧化产物丙二醛(MDA)的浓度变化及主动脉中MCP-1 mRNA的表达。结果甘糖酯治疗后MCP-1 mRNA的表达量显著降低,呈剂量依赖性关系;并升高SOD活性、降低MDA的含量;而在DDC作用下SOD活性被抑制,使MDA含量又升高,但是MCP-1 mRNA水平不受影响,仍处于降低状态。结论甘糖酯抑制高脂血症大鼠主动脉中MCP-1 mRNA的表达,且此抑制作用与其降低MDA的作用无关。     

海狗肾抗衰老作用的实验研究

目的：研究海狗肾对雄性老龄大鼠的抗衰老作用。方法：以环磷酰胺造成雄性大鼠生殖系统受损模型，灌胃海狗肾30d后，测定血清睾酮含量，血清SOD活性和MDA含量；采用石蜡包埋，H－E染色的方法，光镜下观察睾丸的组织学变化，结果：海狗肾能够显著提高正常大鼠和生殖系统受损模型大鼠的血清睾酮含量，改善其睾丸间质细胞的功能状态，促进精子的发生与发育，显著提高血清SOD活力，降低血清MDA含量，结论：海狗肾具有显著的抗衰老作用。     

虫草菌丝提取物对大鼠脂肪性肝炎与肝纤维化的影响

目的探讨虫草菌丝提取物对大鼠脂肪性肝炎与盱纤维化的作用。方法Wistar雄性大鼠,随机分为3 wk和6 wk的正常组、模型组和虫草菌丝组。造模后3 wk和6 wk分别观察肝组织脂肪变性、炎症与胶原沉积;分析血清ALT、AST水平与TBil、Alb、TG、TC含量;肝组织TG、MDA、GSH含量与SOD、γ-GT活性、羟脯氯酸(Hyp)含量及肝组织α-SMA表达。结果3 wk、6 wk模型大鼠血清ALT、AST、γ-GT活性与TBil含量均升高(P<0.05),Alb、TG含量下降(P<0.01),肝组织Hyp、TG、MDA含量明显增加(P<0.01),α-SMA表达增加。3 wk虫草菌丝组改善模型大鼠肝组织脂肪变性与炎症;降低血清TBil含量,提高血清Alb含量;降低肝组织TG、MDA含量(P<0.01),提高肝组织GSH含量与SOD活性(P<0.05)。6 wk虫草菌丝组减轻模型大鼠肝纤维化;降低血清ALT、AST水平(P<0.05);降低肝组织TG、MDA含量和γ-GT活性(P<0.05),提高SOD活性。虫草菌丝3 wk和6 wk组均明显减少α-SMA表达(P<0.05),且6 wk作用较3 wk更为明显。结论虫草菌丝提取物显著改善大鼠脂肪性肝炎、抑制脂肪性肝纤维化,其作用机制与抗肝脂质过氧化、抑制肝星状细胞活化有关。     

yy大黄酸对糖尿病大鼠肾脏还原型辅酶Ⅱ基因表达的影响

目的 观察大黄酸对糖尿病大鼠肾脏氧化应激的影响.方法链脲佐菌素(STZ)诱导的糖尿病肾病大鼠模型随机分为模型组与治疗组,治疗6周后,比较各组大鼠肾组织中丙二醛(MDA)含量和超氧化物歧化酶(SOD)活性,同时检测各组大鼠血糖、血肌酐、尿素氮、24 h尿蛋白定量等.采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测p22phox及p47phox的表达.结果治疗组较模型组明显改善尿清蛋白、尿素氮水平和肾脏肥大指数.肾脏MDA含量明显下降(P<0.05),SOD活性显著上升(P<0.05).与对照组比较,模型组p47phox和p22phox mRNA表达明显增多,大黄酸干预使其表达明显降低.结论大黄酸对2型糖尿病肾脏病变有一定的保护作用,其机制可能是通过抑制氧化应激反应,下调糖尿病大鼠p22phox及p47phox的表达对2型糖尿病模型大鼠肾脏产生保护作用.     

蝙蝠葛酚性碱抗兔心脑缺血再灌注损伤作用

目的：探讨蝙蝠葛酚性碱抗家兔心脑缺血再灌注损伤的作用及其机制。方法：结扎家兔左冠状动脉前降支及双侧颈总动脉,30min后复灌,制成心脑缺血再灌模型。分别于缺血前10min,缺血2、10、30min,再灌1、10、30、60、120、180、240min时经股动脉取血2mL,再灌240min后立即取出左心室、海马、皮层、小脑。测定血清及各组织中内二醛（MDA)含量和超氧化物歧化酶（SOD）活性。结果：与对照组相比,缺血再灌组（I－R）复灌10min后血清MDA含量显著升高,而SOD活性显著降低（P＜0．05）。与I－R组相比,应用RAMd后,血清MDA含量降低,而SOD活性升高（P＜0．05）。各组织中MDA含量与SOD活性变化与血清中相似。结论：蝙蝠葛酚性碱通过减轻脂质过氧化所造成的损伤及提高SOD活性,对心脑缺血再灌注损伤具有一定的保护作用。     

M3受体与大鼠缺血性心肌细胞凋亡关系的研究M3受体与大鼠缺血性心肌细胞凋亡关系的研究

目的观察M₃受体对大鼠缺血性心肌细胞凋亡的作用及其机制。方法结扎大鼠左冠状动脉前降支建立急性心肌缺血模型,给予M₃受体激动剂胆碱或阻断剂4DAMP进行干预,观察M₃受体对其的影响。结果缺血前15 min iv胆碱10 mg·kg^-1可提高血清超氧化物歧化酶(SOD)活力,降低丙二醛(MDA)含量,减少凋亡细胞的数量(P<0.01),并可增加Bcl-2表达,减少Fas表达。预先5 min iv 4DAMP 0.12 mg·kg^-1阻断心肌M₃受体可逆转胆碱的作用。结论激动M₃受体对结扎大鼠冠状动脉诱导的心肌损伤有保护作用,其机制可能与调节Bcl-2和Fas表达从而抑制心肌细胞凋亡有关。