用聚合酶链反应检测宫颈癌组织中人巨细胞病毒DNA相关序列

为建立检测人巨细胞病毒（ＨＣＭＶ）感染的ＰＣＲ方法并探讨ＨＣＭＶ与宫颈癌的关系，从石蜡包埋和活检宫颈癌组织中提取ＤＮＡ，用聚合酶链反应体外扩增ＨＣＭＶＥｃｏＲＩＤ片段上一段长１５２ｂｐ的核酸序列，再用地高辛末端转移酶标记法标记和扩增片段互补的ＨＣＭＶ寡核苷酸探针，用该探针证实扩增片段的特异性。检测宫颈癌标本４３例，阳性率为２５．６％（１１／４３），正常宫颈组织８例，阳性率为０。宫颈癌标本阳性率高于正常宫颈标本，提示ＨＣＭＶ与宫颈癌的发生有关。     

用聚合酶链反应检测宫颈癌组织中人巨细胞病毒DNA相关序列

为建立检测人巨细胞病毒感染的ＰＣＲ方法并探讨ＨＣＭＶ与宫颈癌的关系，从石蜡包埋和活检宫颈癌组织中提取ＤＮＡ，用聚合酶链反应体外扩增ＨＣＭＶＥｃｏＲＩＤ片段上一段长１５２ｂｐ的核酸序列，再用地高辛末端转移标记法标记和扩增片段互补的ＨＣＭＶ寡核苷酸探讨，用该探针证实扩增片段的特异性。     

聚合酶链反应检测尖锐湿疣组织中HPV DNA

为分析尖锐湿疣组织中人乳头瘤病毒感染情况。     

双温聚合酶链反应检测喉乳头瘤中HPV—DNA

应用双温聚合酶链反应（ＰＣＲ）检测喉乳头瘤石蜡包埋组织中的人乳头瘤病毒（ＨＰＶ）ＤＮＡ》结果与常规ＰＣＲ（三温循环）相同；３０例喉乳头瘤中ＨＰＶ总检出率为４６．７％（１４／３０），ＨＰＶ－６／１１／１６的检出率分别为４０％（１２／３０）、１６．７％（５／３０）和６．７％（２／３０）１６．７％（５／３０）和６．７％（２／３０），ＨＰＶ－６的检出率极显著高于ＨＰＶ－１１／６（ｘ＾２＝１０．６，Ｐ〈）．     

双温聚合酶链反应检测喉乳头瘤中HPV－DNA

应用双温聚合酶链反应（ＰＣＲ）检测喉乳头瘤石蜡包埋组织中的人乳头瘤病毒（ＨＰＶ）ＤＮＡ。结果与常规ＰＣＲ（三温循环）相同：３０例喉乳头瘤中ＨＰＶ总检出率为４６．７％（１４／３０），ＨＰＶ－６／１１／１６的检出率分别为４０％（１２／３０）、１６．７％（５／３０）和６．７％（２／３０），ＨＰＶ－６的检出率极显著高于ＨＰＶ－１１／６（ｘ２＝１０．６，Ｐ＜０．０１）。初步结果表明，本地区喉乳头瘤主要与ＨＰＶ－６的感染密切相关。该法具有缩短检测时间、节省一个恒温水浴箱等优点。     

聚合酶链反应检测口腔鳞癌及癌旁组织中人类乳头瘤病毒DNA

采用聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术检测２６例口腔鳞癌及１５例癌旁组织中人类乳头瘤病毒（Ｈｕｍａｎ ＰａｐｉｌｌｏｍａＶｉｎｕｓ，ＨＰＶ）ＤＮＡ。口腔鳞癌组织阳性率７６．９％（２０／２６），比癌旁组织阳性率２０．０％（３／１５）明显增高（Ｐ〈０．０５），说明ＨＰＶ感染与口爱鳞癌的发生发展有关。     

二步温控法聚合酶链反应检测宫颈癌中HPV-16E_6/E_7相关序列

应用改良的二步温控法 PCR 技术,检测34例人宫颈癌组织 DNA,发现宫颈癌中 HPV-16 E_6/E_7相关序列存在的阳性率为67.6%(23/34)。结果提示:HPV-16可能在宫颈癌的发生发展过程中起重要作用,采用改良 PCR 技术选择性地检测 HPV-16的转化基因(E6、E7)对深入探讨宫颈癌发生的机理、早期发现宫颈癌患者等有重要意义。     

聚合酶链反应检测卵巢癌中人乳头瘤病毒DNA的研究

用聚合酶链反应检测了１５例卵巢癌新鲜标本，结果发现人乳头瘤病毒ＤＮＡ阴性，该结果可能与下列因素有关：①与卵巢的解剖、生理特性有关，卵巢不象子宫颈及子宫内膜直接受到ＨＰＶ的侵犯，上生殖道感染ＨＰＶ的机会较下生殖道少；②与人乳头瘤病毒的增殖条件有关，ＨＰＶ主要侵犯复层拄状上皮与鳞状上皮交界处，病毒仅在一定分化程度的上皮角蛋白细胞内增殖，卵巢上皮为单层立方上皮，是否不适宜ＨＰＶ的增殖，尚需做更深入的研究。     

宫颈癌组织中人乳头状瘤病毒16型DNA序列的检测

应用DNA斑点分子杂交技术检测了54例宫颈癌组织中人乳头状瘤病毒16型DNA序列,并应用DNA Southern印迹杂交技术分析了部分斑点杂交阳性的标本。结果表明,50%的宫颈癌标本中HPV16DNA阳性,而在18例正常宫颈组织中未测到HPV16DNA序列;Southern印迹杂交发现HPV16DNA以整合状态存在。提示HPV16与宫颈癌的发生密切相关。     

应用聚合酶链反应检测淋病奈瑟氏菌

根据已知淋球菌隐蔽性质粒的ｃｐｐＢ基因序列，设计了一对聚合酶链反应引物，对２１株淋球菌进行扩增均获得３９０ｂｐ片段，６株其它奈瑟氏菌及９株共生菌未能扩增出任何片段。该３９０ｂｐ片段能被限制性内切酶ＭｓｐＩ降解为２５０ｂｐ，１４０ｂｐ两个片段。经过３５个ＰＣＲ循环可检测出４００ｃｆｕ淋球菌。用ＰＣＲ法检测８２份临床标本，其敏感度、特异度、阳性预测值、阴性预测值分别为：１００％，９０％，９１．３％及１００％。     

PCR对脑膜炎双球菌DNA片段的检测

用聚合酶链反应(PCR)检测脑膜炎双球菌,在该菌染色体DNA中的保守区域中选择一段核苷酸作为靶DNA,用PCR技术进行扩增,经过35个循环后可将1ngDNA扩增到能通过凝胶电泳检测出其596bp的特异性DNA产物,与其设计的该菌核苷酸序列长度一致.该方法对人有致病性的A,B,C 3型细菌均能扩增出阳性结果,且能快速、敏感、特异地检测出脑膜炎双球菌,在临床上具有重要的应用价值和广泛的应用前景.     

喉鳞癌及乳头状瘤组织中人乳头瘤病毒DNA的PCR检测

①目的探讨人乳头瘤病毒１６型和１８型（ＨＰＶ１６和ＨＰＶ１８）与喉鳞癌、喉乳头状瘤的关系。②方法应用聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术检测３４例喉乳头状瘤、８３例喉鳞状细胞癌石蜡包埋组织中ＨＰＶ１６及ＨＰＶ１８的ＤＮＡ．③结果喉乳头状瘤及喉鳞癌组织中ＨＰＶ１６的检出率为１４．７１％和３０．１２％，两组比较差异无显著性（χ２＝３．００６，Ｐ＞０．０５）；ＨＰＶ１８在喉乳头状瘤组织中未检出，而在喉鳞癌组织中为６．０２％，两组比较，差异无显著意义（χ２＝０．０８７，Ｐ＞０．０５）。高分化喉鳞癌组织中ＨＰＶ１６的检出率显著高于中分化鳞癌（χ２＝６．０３２，Ｐ＜０．０５），而高分化与低分化、中分化与低分化鳞癌之间的差异均无显著性（χ２＝０．３５１，１．５００，Ｐ均＞０．０５）；不同病理分化喉鳞癌组织中ＨＰＶ１８的检出率差异无显著性（χ２＝０．０６０，Ｐ＞０．０５）。④结论喉鳞癌的发生与ＨＰＶ感染密切相关，尤以ＨＰＶ１６明显     

PCR检测HBVDNA对HBsAg无症状携带者传染性的监测

用多聚酶链反应和斑点杂交技术检测了５０例ＨＢｓＡｇ无症状携带者血清中ＨＢＶＤＮＡ，检出率分别为５０％（２５／５０）和５８％（２９／５０）。抗－ＨＢｃ、抗－ＨＢｅ和ＨＢｅＡｇ阳性者ＨＢＶＤＮＡ的检出率高于阴性者。单，ＮＨＢｓＡｇ阳性无症状携带者ＨＢＶＤＮＡ在血中呈不同程度地波动，其排毒情况无明显规律可循。     

建立检测血清HBV DNA的多聚酶链反应技术

建立检测血清HBV DNA的多聚酶链反应技术。人工合成adr、adw和ayw三个业型HBV的两个共有序列NC1和NC2作为引物扩增一长428bp且含一BglⅡ酶切点的HBV C基因片段。含FD酶的反应体系在水浴93℃30秒、55℃60秒、72℃90秒依序循环30周期,当克隆HBV DNA模板最小加量为10 fg时,产物作琼脂糖凝胶电泳经溴化乙锭染色在紫外线下观察仍可见428 bp位置的阳性荧光带。阳性产物经BgⅠⅡ酶切后分为125 bp和303 bp的两个特异片段。同一条件下的阴性对照则出现阴性结果。这一技术用以检测经常规DNA提取的127例HBsAg阳性血清,结果HBV DNA检出率达88％,其中HBeAg阳性血清HBV DNA检出率为97％,抗HBeAg阳性血清HBV DNA检出率为82％。     

人乳头瘤病毒16型完整E6开放读码框的基因克隆和鉴定

利用聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术从人乳头瘤病毒１６型（ＨＰＶ１６）基因组中扩增得到５５５ｂｐ的Ｅ６ＤＮＡ片段，并重组到载体ｐＧＥＭＥＸＴＭ－１中，构建克隆扩增质粒ｐ１６Ｅ６－Ｇ，将此重组质粒转化大肠杆菌ＪＭ１０９，经菌落原位杂交鉴定和限制性酶切图谱分析，证实该产物为Ｅ６基因完整开放读码框（ＯＲＦ），从而为获得Ｅ６ＯＲＦ基因片段提供了一个高效、方便的新方法     

用聚合酶链反应检测喉鳞癌细胞内人乳头状瘤病毒DNA

用聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术检测喉鳞状细胞癌患者的经福尔马林固定、石蜡包埋的组织标本２８例。从石蜡包埋的癌组织提取的人乳头状瘤病毒ＤＮＡ（ＨＰＶＤＮＡｓ）用ＨＰＶ－１６，１８试剂盒进行ＰＣＲ扩增。其中５例（１８％）扩增阳性。声带癌ＨＰＶ－１６，１８的阳性率较其它部位的高（占阳性８０％）。结果提示：ＨＰＶ－１６，１８的感染在喉癌的发生中起到一定的作用。声门区的喉鳞癌与宫颈癌的发生类似，与ＨＰＶ－１６，１８的感染有密切的联系。     

聚合酶链反应对结核杆菌DNA重复序列的检测

本文用聚合酶链反应(PCR)检测结核杆菌(TB)DNA,在TB染色体DNA中的一个片段多次重复出现,将此片段作为靶DNA,用PCR技术进行扩增。引物的DNA核苷酸序列为5’CCT GCG AGC GTA GGC GTC GG3’和5’CTC GTC CAG CGC CGC TTC GG3’在反应中用94℃变性,68℃退火延伸,43个循环可将1fgTBDNA扩增到能通过凝胶电泳检测出其特异性产物,此产物在作为对照的其他细菌中不能检出,加入100ng人基因组DNA对检测效果无影响。本方法为快速、敏感、特异地检测临床标本中的TB打下了基础。