毛细管区带电泳法及其在药物分析中的应用

高效毛细管电泳法 ( high performance capillary elec-trophoresis,HPCE) [1 ,2 ] 作为一种新型快速高效的分离分析手段 ,近 15年来得到了迅速的发展 ,是当今分析化学公认前沿 ,也是我国分析化学领域与国际先进水平差距最小的分支之一。其已被收入 2 0 0 0年版《中国药典》二部附录[3] ,确定为执行药典 ,考察药品质量所制定的指导性规定。根据不同的分离模式主要可分为毛细管区带电泳 ( CZE) ,胶束电动毛细管争谱 ( MECC) ,毛细管凝胶电泳 ( CGE) ,毛细管等速电泳( CITP) ,毛细管等电聚焦电泳 ( CIEF)以及新近发展的毛细管电色谱 …     

高效毛细管电泳在临床体液中药物分析的应用

高效毛细管电泳 (ＨＰＣＥ)是以高电场为驱动力 ,在细内径毛细管内带电荷粒子按其淌度或分配系数的不同而进行分离的一种电泳新技术。由于其分离效能高、分析速度快、样品用量少 ,在中药成分[1] 、抗生素[2 ] 、生物大分子[3 ] 等分析方面应用较广 ,近来在体内药物分析中的应用逐渐增多。1　基本原理ＨＰＣＥ主要的分离模式[4 ] 分为毛细管区带电泳(ＣＺＥ)、胶束电动毛细管电泳 (ＭＥＣＣ)、毛细管凝胶电泳 (ＣＧＥ)、毛细管等电聚焦电泳 (ＣＩＥＦ)、毛细管等速电泳 (ＣＩＴＰ) ,而ＣＺＥ和ＭＥＣＣ是体内的药物分析中最常用的 2种模式。…     

高效毛细管电泳法在生物技术产品分析研究中的应用进展

本文综述了高效毛细管电泳法在生物技术产品分析研究中的应用。并概述了毛细管等速电泳法，双向毛细管等速电泳法及毛细管等速电泳法与毛细管自由溶液区带电泳法联用技术等的进展。     

垂直板等电聚焦法测定基因重组人红细胞生成素(rhEPO)各异构体组分含量

建立了测定基因重组人红细胞生成素(rhEPO)各异构体组分含量的垂直板等电聚焦方法,该方法经济,测定结果准确、可靠,与《欧洲药典》6.0版规定的毛细管区带电泳法的测定结果基本一致,本法为rhEPO生产过程控制及原液质量控制提供了准确、可行的检测手段。     

运用优化的毛细管等电聚焦电泳方法评价叶酸受体α单抗电荷不均一性

目的:用优化的cIEF方法分析叶酸受体α单抗(McAb)及其参照品的异构体分布,根据等电点差异,将样品带电荷的异构体分离开来,更好地评价叶酸受体α单抗电荷不均一性。方法:毛细管等电聚焦电泳条件:中性涂层的毛细管50μm×30cm(有效长度为20cm);阳极电泳缓冲液200mmo·lL-1磷酸,阴极电泳缓冲液300 mmo·lL-1氢氧化钠;聚焦电压25 kV,迁移电压30 kV,温度20℃检测波长280 nm。结果:用优化后的方法使样品的电荷异构体能够有效分离,电泳图谱与参照品电泳图谱一致。样品主峰峰面积百分比为60.59%,等电点为7.78,次主峰面积百分比为24.38%,等电点为7.59,主峰与次主峰分离度为1.185(USP)。连续5针进样,主峰面积百分比的RSD为7.05%,等电点的RSD为0.31%;次主峰面积的百分比RSD为5.99%,等电点的RSD为0.69%;待测样品在12 h内稳定。结论:采用优化的cIEF方法分析叶酸受体α单抗的电荷不均一性,具有更高的分离度,更好的重现性,为质量控制提供了更准确的手段。     

高效毛细管电泳法在药物分析中的应用

高效毛细管电泳法(HPCE)是样品中各组分以高压电场为驱动力，在毛细管中按其淌度和分配系数不同进行高效快速分离分析的一种新技术。HPCE根据不同的分离模式，主要可分为：毛细管区带电泳(Capil—lary zone electrophoresis，CZE)、胶束电动毛细管色谱(Micallar electrokinetic capillary chromatography，     

几种色谱技术在中药质量控制中的应用进展

目的：为了促进现代分析方法应用中药分析,方法：总结了几种色谱在中药质量控制中的进展,结果：毛细管电泳法,超临床色谱法、高效液相色谱法、气相色谱法和薄层色谱扫描法已大量用于中药质量控制。结论：现代色谱方法可用于中药的质量控制。     

毛细管电泳法测定黄酮类化合物(英文)

黄酮类化合物由于其在生物学及生理学中的重要作用受到了广泛的关注。本文综述了毛细管电泳法测定黄酮类化合物的应用,包括手性分离以及毛细管电泳-质谱联用技术。此外,还讨论了提高毛细管电泳法灵敏度的技术,如样品堆积法、扫集法和等速电泳法等。     

高效毛细管电泳在中药分析中的应用

近年来许多药学临床研究实验表明，使用高效毛细管电泳法（HPCE）来分析中草药和中药制剂取得很好的效果。目前国内主要应用区带毛细管电泳法（CZE）和胶束毛细管电泳法（MECC）对中药材中有效成分的不同类型及中药制剂含量进行测定。为使医药工作对毛细管电泳法的自身独特优势及不断发展的新型检测方法有所新的认识，对今后的使用提供更为科学的依据。现综述如下。[第一段]     

高效毛细管电泳法测定肌苷注射液含量

肌苷为辅酶类药物 ,它能参与体内能量代谢及蛋白质的合成 ,具有提高各种酶 (特别是辅酶Ａ)的活性及改善机体代谢作用。其注射液加苯甲酸钠作助溶剂 ,不能直接用紫外分光光度法测肌苷含量 ,部颁标准采用纸层析 -紫外分光光度法[1] 测定含量 ,操作复杂 ,费时 ,且重现性差。文献报道有ＨＰＬＣ法[2 ] 、差示分光光度法[3] 、旋光度法[4 ] 、比色法[5] 和转换曲线分光光度法[6 ] 测定肌苷注射液含量。本文选用合适内标 ,采用高效毛细管电泳法同时测定肌苷和苯甲酸钠的含量 ,该法操作简单、快速 ,结果准确。1　仪器与试药ＣＥ - 2 32型毛细管电泳…     

Glycosylation profiles of therapeutic antibody pharmaceuticals

Recombinant antibodies specific for human targets are often used as therapeutics and represent a major class of drug products. Their therapeutic efficacy depends on the formation of antibody complexes resulting in the elimination of a target molecule or the modulation of specific signalling pathways. The physiological effects of antibody therapeutics are known to depend on the structural characteristics of the antibody molecule, specifically on the glycosylation which is the result of posttranslational modifications. Hence, production of therapeutic antibodies with a defined and consistent glycoform profile is needed which still remains a considerable challenge to the biopharmaceutical industry.To provide an insight into the industries capability to control their manufacturing process and to provide antibodies of highest quality, we conducted a market surveillance study and compared major oligosaccharide profiles of a number of monoclonal antibody pharmaceuticals sampled on the Swiss market.Product lot-to-lot variability was found to be generally low, suggesting that a majority of manufacturers have implemented high quality standards in their production processes. However, proportions of G0, G1 and G2 core-fucosylated chains derived from different products varied considerably and showed a bias towards the immature agalactosidated G0 form. Interestingly, differences in glycosylation caused by the production cell type seem to be of less importance compared with process related parameters such as cell growth.     

治疗性单克隆抗体类制品质量控制标准的思考

治疗性单克隆抗体制品在肿瘤、自身免疫、器官移植和感染性疾病的治疗中均取得了显著疗效,其品种和市场份额逐年显著提高。随着新的治疗性单克隆抗体制品的研发和上市,不同产品的质量控制研究,特别是新技术在质量控制中的应用被提到新的高度。由于治疗性单克隆抗体制品结构和生产的复杂性,使得质量控制的复杂程度也相应提高。本文结合治疗性单克隆抗体质量控制的工作经验和国际上的最新进展,对治疗性单克隆抗体质量控制项目设定、标准和方法进展进行论述。     

An overview of safety and regulatory aspects of the new biotechnology

New technology is producing new drugs and biologic products that present novel safety issues for the regulatory agencies. These products are produced using recombinant DNA or hybridoma techniques. Examples are growth hormone, antihemophilic factor, and interferon, produced by recombinant DNA. Very special proteins, namely, monoclonal antibodies, can be made by hybridoma technology that are extremely pure and potent. At present over two dozen in vitro monoclonal antibody products are approved by FDA and many more are expected. Regulating these products posed some new questions for the FDA, regarding the kinds of safety tests that should be done to establish reasonable levels of safety before clinical trials or marketing of these agents. The production methods are novel and thus require careful consideration to ensure that risks inherent in those methods do not cause disease when these products are administered to human subjects. A general overview of the regulatory safety issues of these new products is given.     

单克隆抗体颗粒表征的现状与挑战

随着生物技术的快速发展,治疗性单克隆抗体已成为生物技术药物中增长最快速的部分,也成为临床医疗的重要组成部分,并不断为患者提供创新的治疗选择.单克隆抗体中的颗粒物是影响药物安全性和有效性的重要因素.本文论述了近年来单克隆抗体药物药典监测要求、重要的检测技术及各自应用范围、在药物研发不同阶段的监测考虑及对颗粒进行全面表征与...     

《欧洲药典》6．0版与7．5版单克隆抗体总论的介绍与比较

目的介绍《欧洲药典》7．5版在6．0版基础上单克隆抗体总论所做的修订和变化,为2015年版《中国药典》三部中单克隆抗体总论的起草和完善提供参考。方法对《欧洲药典》6．0版和7．5版单克隆抗体总论进行列表比对分析,了解《欧洲药典》对于单克隆抗体产品安全性、有效性和质量可控性的新的关注点和要求,并对2015年版《中国药典》三部单克隆抗体总论的起草提出几点建议。结果与结论《欧洲药典》7．5版比6．0版表述更加严谨,对于生产过程的控制和要求更为合理,充分体现了质量源于设计以及质量风险控制的理念。     

抗体偶联药物临床前安全性评价考虑要点

抗体偶联药物（Antibody Drug Conjugate,ADC）,是通过连接子将高细胞毒性化合物连接到靶向肿瘤抗原的抗体上,利用抗体靶向识别将化合物递呈至肿瘤细胞表面,杀死肿瘤细胞。ADC药物同时具有抗体和化学药物属性,是将两者的优势结合,极大地提高了药物安全有效性。ADC药物结构复杂,在抗原识别表位、连接位点、连接子以及小分子药物各组分均存在特异性,所以在开展安全性评价研究时有一定的特殊性。本文将从动物种属选择、一般毒性研究、毒代动力学研究、组织交叉反应、免疫原性检测、安全药理研究、遗传毒性研究等方面,阐述ADC药物临床前安全性评价的考虑要点和研究策略。     

组织交叉试验中多路径体系技术难点的探索和研究

组织交叉反应（tissue cross reactivity,TCR）是单克隆抗体药物开发过程中临床前安全评价的重要组成部分。TCR试验的目的是发现单抗药物和靶抗原以外表位结合,为体内试验毒副作用的监控提供参考。按照FDA、EMA和CFDA要求,TCR需在新药临床申请Ⅰ期临床试验前完成。近年随着单克隆抗体研发由鼠源型向全人源化单抗的转变和发展,免疫组织化学在很多技术环节上出现了新的问题和挑战。结合自身实际工作的经验和近年来国内外组织交叉反应研究的进展,探讨并总结单抗药物研发中TCR试验中的相多路径体系技术难点的探索和研究经验,期望能为进一步提高我国TCR试验质量,并增加TCR试验对体内毒理学评价及安全用药的参考价值提供一定的参考。     

高效毛细管电泳/前沿分析及其在手性药性药物-蛋白结合研究中的应用

目的：综述了高效毛细管电泳／前沿分析（HPCE／FA）方法的原理、特点、及其在手性药物－蛋白结合研究中的应用。方法：采用HPCE／FA方法。结果：不同的手性药物对映体与蛋白结合可能存在判别,同一药物对映体之间与不同蛋白结合率可能存在差别,HPCE／FA仅需极少量样品即可同时测定手性药物各对映体在蛋白结合中的游离浓度。结论：HPCE／FA是一种高效、分析迅速、样本用量极少的研究蛋白结合方法,特别是对于手性药物与昂贵不易获得的蛋白结合研究。     

从质量管理角度看药品的一致性评价

目的：探讨实施药品质量一致性评价工作的方法,使一致性评价真正发挥提高仿制药质量水平的作用。方法：基于质量管理的核心理念,从仿制药的原辅料、处方、工艺流程、最终产品和生产线5个方面入手,实现仿制药与原研药过程控制的一致性。结果：我国要全面提高仿制药的质量,开展仿制药与原研药的一致性评价,这对于保障药品安全、有效、质量可控有着十分重要的意义。结论：药品的安全性和有效性一直是公众关注的热点问题。仅通过溶出度试验来判断仿制药的安全有效存在一定的局限性,应当将GMP理念引入一致性评价工作中,全方位地保证仿制药与原研药具有相同的安全性和有效性。     

Advancements in high throughput biophysical technologies: applications for characterization and screening during early formulation development of monoclonal antibodies

The formulation development of monoclonal antibodies is extremely challenging, due to the diversity and complexity contained within this class of molecules. The physical and chemical properties of a monoclonal antibody dictate the behavior of the protein drug during manufacturing, storage and clinical administration. In the past few years, the use of high throughput technologies has been widely adapted to delineate unique properties of individual immunoglobulin G's (IgG's) important for their development. Numerous screening techniques have been designed to reveal physical and chemical characteristics of a protein relevant to stability under production, formulation and delivery conditions. In addition, protein stability under accelerated stresses has been utilized to predict long-term storage behavior for monoclonal antibodies in the formulation. In this review, we summarize the recent advancements in the field of biophysical technology, with a specific focus on the techniques that can be directly applied to the formulation development of monoclonal antibodies. Several case studies are also presented here to provide examples of combining existing biophysical methods with high throughput screening technology in the formulation development of monoclonal antibody drugs.