慢病毒介导环氧化酶-2的沉默对食管鳞癌细胞增殖的抑制效应

目的制备环氧化酶-2(COX-2)的RNA干扰(RNAi)重组慢病毒(lentivirus),观察COX-2表达沉默对人食管鳞癌(ESCC)细胞增殖的影响。方法将目的基因短发卡RNA(sh RNA)载体与包装载体共转染293T细胞,收集上清液后浓缩纯化、滴度测定、感染ESCC细胞;应用荧光显微镜观察包装效率及感染效率,实时荧光定量PCR及Western blot评价COX-2基因沉默效应,MTS法检测细胞的增殖。结果成功制备了沉默COX-2的重组慢病毒,该病毒感染ESCC细胞后,COX-2 m RNA和蛋白的表达量分别降低了80%和50%左右,细胞的增殖明显减慢。结论慢病毒介导的sh RNA干扰能有效沉默ESCC细胞COX-2基因,COX-2表达沉默抑制ESCC细胞增殖。     

慢病毒感染稳定敲减eIF4E基因的鼻咽癌CNE2细胞系的建立

目的构建稳定干扰真核起始因子4E(eIF4E)基因的鼻咽癌CNE2细胞系。方法设计针对eIF4E基因mRNA序列的RNA干扰序列,以慢病毒载体pGC-LV为基础构建感染体系。慢病毒感染CNE2细胞后,经嘌呤霉素压力筛选稳定敲减eIF4E基因的CNE2细胞株。采用定量聚合酶链反应和免疫印迹法检测eIF4EmRNA和蛋白的表达水平;采用细胞增殖和迁徙实验验证eIF4E敲减对CNE2细胞的影响。结果成功构建并筛选获得带有eIF4E特异性短发夹RNA的慢病毒颗粒;将慢病毒颗粒转入CNE2细胞,经抗菌药物压力筛选获得稳定敲减eIF4E基因的CNE2细胞(CNE2siEp)及阴性对照细胞(CNE2siNC)。与CNE2siNC细胞相比,CNE2siEp细胞eIF4EmRNA表达水平下调76.0%,蛋白表达水平下调50.0%,细胞增殖活性下调85.0%,运动活性下调59.0%。结论成功构建稳定敲减eIF4E的CNE2细胞系,其eIF4E基因表达水平与功能明显受抑。     

靶向沉默HuR基因增强人肝癌细胞Hep3B对多柔比星的化疗敏感性

目的探讨沉默人抗原R(Hu R)基因对人肝癌细胞Hep3B多柔比星化疗敏感性的影响及相关机制。方法脂质体包裹靶向Hu R基因的短发夹RNA(sh RNA)转染Hep3B细胞,real-time PCR和Western blot分别检测沉默Hu R基因后Hu R、MDR1 m RNA和蛋白的表达,MTT法检测沉默Hu R基因后Hep3B细胞对多柔比星化疗的敏感性,流式细胞术(FCM)检测沉默Hu R基因后对Hep3B细胞凋亡的影响。结果 Hu R sh RNA质粒转染Hep3B细胞能有效沉默Hu R基因,m RNA和蛋白水平的抑制率分别为82%和75%。与未处理Hep3B细胞(Mock组)比较,沉默Hu R基因的Hep3B细胞(si Hu R组)对多柔比星的半数抑制浓度(IC50)显著降低[(86.36±6.54)μg/L vs.(318.56±9.89)μg/L,P<0.05],细胞凋亡率明显升高[(30.48±5.12)%vs.(8.86±1.35)%,P<0.05],MDR1 m RNA和P-gp蛋白表达显著降低,比值分别为0.36±0.08和0.28±0.11,差异均有统计学意义(P<0.05)。Mock组与转染对照sh RNA质粒Hep3B(Control组)的各检测指标均无统计学差异(P>0.05)。结论沉默Hu R基因可能通过抑制耐药蛋白P-gp的表达增强其对多柔比星的化疗敏感性。     

长链非编码RNA TUG1对鼻咽癌细胞生物学行为及放射敏感性的影响

目的 对长链非编码RNA TUG1进行泛癌分析，并评估其对鼻咽癌生物学行为及放射敏感性的影响。方法 基于TCGA数据库检测TUG1在泛癌中的表达情况和预后价值。用qPCR方法检测鼻咽癌组织和鼻咽癌细胞系中TUG1的表达情况。用TUG1 siRNA或阴性对照siRNA转染鼻咽癌CNE-1和CNE-2细胞。采用MTS法、transwell实验和划痕实验检测鼻咽癌细胞的增殖、侵袭和迁移能力。细胞克隆形成实验测定细胞放射敏感性。流式细胞仪检测细胞周期和凋亡情况。结果 基于TCGA数据库的分析发现，在12种癌症类型中TUG1的表达上调。TUG1表达增加与多种癌症类型的较差预后相关。体外实验研究发现lncRNA TUG1在鼻咽癌细胞系和组织中也显著上调。TUG1高表达与TNM分期恶化有显著相关性。TUG1的高表达与鼻咽癌患者不良预后有显著相关性。下调TUG1的表达可抑制鼻咽癌细胞的增殖、迁移和侵袭，促进鼻咽癌细胞凋亡，提高鼻咽癌细胞放射敏感性。结论 TUG1在多种癌症类型中发挥重要作用，并与鼻咽癌的不良预后相关。TUG1可能作为鼻咽癌治疗的潜在治疗靶点。     

牛磺酸上调基因1对人绒毛膜癌JEG-3细胞增殖及迁移和凋亡的影响

目的探讨牛磺酸上调基因1(taurine-upregulated gene 1,TUG1)在人绒毛膜癌JEG-3细胞增殖、迁移和凋亡中的作用。方法采用小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)技术构建TUG1慢病毒载体。将对数生长期人绒毛膜癌JEG-3细胞随机分为空白对照组(不作任何处理)、阴性对照组(转染阴性对照靶序列慢病毒载体)和转染组(转染siRNA-TUG1慢病毒载体)。采用实时荧光定量PCR法检测3组TUG1mRNA、caspase-3mRNA、caspase-9mRNA相对表达量,采用Western blot法检测3组TUG1、caspase-3、caspase-9蛋白相对表达量,采用Transwell小室试验检测3组培养24h细胞侵袭能力,采用CCK-8法检测3组细胞培养72h吸光度值,采用流式细胞术检测3组培养72h细胞凋亡率。结果构建siRNA-TUG1载体的慢病毒滴度为3×108 TU/mL;转染72 h,转染组TUG1 mRNA、caspase-3mRNA、caspase-9mRNA相对表达量(0.42±0.02、0.31±0.01、0.21±0.01)低于阴性对照组(1.09±0.03、1.29±0.03、1.02±0.01)和空白对照组(1.01±0.01、1.02±0.02、1.00±0.01)(P0.05),TUG1、caspase-3、caspase-9蛋白相对表达量(0.24±0.07、0.49±0.23、0.11±0.02)低于阴性对照组(7.32±0.05、10.12±1.47、9.98±2.78)和空白对照组(6.08±0.19、9.88±0.93、9.91±1.44)(P0.05);培养24h,转染组迁移细胞数[(52.11±4.09)个]较阴性对照组[(142.11±14.02)个]和空白对照组[(131.32±18.39)个]少(P0.05);培养72h,转染组细胞吸光度值(24.27±3.11)较阴性对照组(51.12±2.47)和空白对照组(60.34±1.24)低(P0.05),细胞凋亡率[(35.21±13.31)%]较阴性对照组[(3.09±1.13)%]和空白对照组[(4.21±1.24)%]高(P0.05);阴性对照组各观察指标与空白对照组比较差异均无统计学意义(P0.05)。结论 TUG1沉默表达慢病毒载体可明显抑制人绒毛膜癌JEG-3细胞增殖和侵袭,促进细胞凋亡。     

敲低卷曲螺旋结构域蛋白34表达对膀胱癌T24细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响

目的研究应用慢病毒介导的RNA干扰(RNA interference)技术敲低卷曲螺旋结构域蛋白34(CCDC34)的表达,分析其对膀胱癌T24细胞生物学行为的影响。方法选取膀胱癌T24细胞分别同时感染阴性对照si RNA(阴性对照组)和CCDC34-si RNA(CCDC34干扰组)慢病毒载体,荧光显微镜下观察慢病毒感染效率;实时定量PCR和Western blot验证CCDC34的干扰效率;Brd U掺入实验、流式细胞术、划痕实验和Transwell小室侵袭实验检测干扰CCDC34表达对T24细胞增殖、凋亡、迁移及侵袭能力的影响。结果与阴性对照组相比,感染CCDC34-si RNA的T24细胞中CCDC34 m RNA及蛋白表达水平均显著下降。Brd U实验显示CCDC34干扰组的细胞增殖能力较阴性对照组受到显著抑制(P<0.05),且细胞凋亡显著增加[(8.77±0.38)%vs.(3.91±0.08)%,P<0.01]。划痕实验显示,慢病毒感染24 h后CCDC34干扰组的细胞迁移率显著低于阴性对照组(0.40±0.04 vs.0.79±0.01,P<0.01)。Transwell侵袭实验同时显示CCDC34干扰组膀胱癌T24细胞的侵袭率也显著低于阴性对照组(1.44±0.03 vs.1.63±0.05,P<0.05)。结论慢病毒介导的RNA干扰技术可下调CCDC34蛋白在T24细胞中的表达,显著抑制了膀胱癌T24细胞的增殖、迁移和侵袭能力,并促进了肿瘤细胞的凋亡。CCDC34有望成为膀胱癌生物标记物和治疗的潜在新靶点。     

RNA干扰靶向抑制EGFR对鼻咽癌细胞凋亡及坏死的影响

目的:观察RNA干扰(RNA interference,RNAi)靶向抑制鼻咽癌CNE2细胞表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)表达对CNE2细胞辐射诱导的凋亡及坏死的影响.方法:用shRNA-EGFR转染人鼻咽癌细胞系CNE2,应用X射线照射转染EGFRSiRNA前后的细胞,MTT实验比较转染干扰质粒前后照射后细胞增殖变化,Annexin V/PI双标记法检测凋亡及坏死,并进行转染干扰质粒前后照射后凋亡及坏死率的比较.结果:shRNA-EGFR成功转染CNE2细胞.CNE2细胞干扰后照射较干扰前照射增殖减低.CNE2细胞干扰后照射较干扰前照射凋亡及坏死均增加;凋亡所占比例高过坏死.结论:抑制鼻咽癌细胞EGFR表达后,主要是通过提高辐射诱导的凋亡来抑制鼻咽癌细胞增殖.     

miR-98对鼻咽癌细胞生物学行为的影响及作用机制

目的探讨miR-98对鼻咽癌细胞生物学行为的影响及作用机制。方法选择我院收治的鼻咽癌25例,分别取癌组织和距离肿瘤1 cm的癌旁正常组织,并将用于后续试验的鼻咽癌细胞株CNE1分为对照组(NC组)和实验组(miR-98-inhibitor组)。NC组转染阴性对照慢病毒模拟物,miR-98-inhibitor组转染miR-98-inhibitor模拟物,同时选取4周龄雌性裸鼠制备肿瘤异种移植模型。检测miR-98在鼻咽癌组织、癌旁正常组织和不同鼻咽癌细胞株(CNE1、TW03、NP69)中的表达情况,分析miR-98与乳腺癌易感基因相互作用蛋白1(BACH1)的关系,观察miR-98对鼻咽癌细胞侵袭能力的影响,记录miR-98对鼻咽癌细胞裸鼠体内成瘤能力的影响。结果癌旁正常组织、鼻咽癌组织miR-98的表达量分别为2.05±0.28、3.98±0.56,比较差异有统计学意义(P0.05);鼻咽癌细胞株CNE1、TW03、NP69的miR-98表达量分别为5.21±0.43、2.29±0.21、0.56±0.10,比较差异有统计学意义(P0.05)。miR-98可明显抑制BACH1-3'UTR野生型双荧光素酶的活性。NC组、miR-98-inhibitor组细胞侵袭数分别为191.36±23.98、41.09±8.75,裸鼠成瘤体积分别为(4.32±0.34)cm~3、(1.02±0.09)cm~3,重量分别为(4.16±0.29)g、(0.96±0.06)g,比较差异均有统计学意义(P0.05)。miR-98-inhibitor组裸鼠肿瘤组织BACH1蛋白的阳性表达率明显低于NC组,差异有统计学意义(P0.05)。结论 miR-98可靶向调节BACH1的表达以影响鼻咽癌细胞的生物学行为。     

小干扰RNA对鼻咽癌CNE-2细胞Bcl-2基因的放射增敏研究

目的:探讨Bcl-2基因的特异性小干扰RNA(siRNA)对鼻咽癌细胞的辐射增敏作用.方法:构建Bcl-2基因的特异性siRNA的真核表达载体,并借助脂质体将其转入鼻咽癌CNE-2细胞.荧光显微镜观察转染效率;流式细胞仪检测Bcl-2蛋白在鼻咽癌细胞的表达,并检测CNE-2细胞的凋亡率;流式细胞仪检测Bcl-2基因的特异性siRNA真核表达载体联合X射线照射后CNE-2细胞的凋亡率.结果:流式细胞仪检测结果显示:转染组明显降低了Bcl-2蛋白在CNE-2细胞的表达,且转染组的细胞凋亡率明显增加.转染联合X射线照射后细胞凋亡率也明显增加,且明显高于阴性对照+X射线组和单纯X线照射组.结论:siRNA可以有效干扰鼻咽癌CNE-2细胞内Bcl-2基因的表达,可明显增强鼻咽癌CNE-2细胞的放射敏感性.     

整合素连接激酶对鼻咽癌细胞系迁移及上皮-间充质转化的影响

目的:探讨整合素连接激酶(integrin-linked kinase,ILK)对鼻咽癌细胞迁移及上皮-间充质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)转化的影响及其作用机制。方法:通过脂质体介导将ILK SiRNA转染CNE2鼻咽癌细胞系,细胞分为siILK组、siGAPDH阳性对照组及siControl阴性对照组。RT-PCR和Western印迹检测鼻咽癌细胞系CNE2中ILK的RNA水平和蛋白水平表达的变化。Transwell实验和划痕试验观察ILK SiRNA对细胞迁移能力及侵袭能力的影响,RT-PCR法检测了与EMT过程中的相关基因mRNA的表达水平。结果:转染ILK SiRNA后,CNE2细胞中ILK mRNA和蛋白表达水平均明显下降;ILK SiRNA可明显抑制CNE2细胞的迁移及侵袭能力;上调E-cadherin的表达,下调OCLN,Vimentin,Twist1,FN1的表达,抑制EMT过程的发生。结论:ILK在鼻咽癌细胞系CNE2中高表达,降低ILK表达可诱导鼻咽癌细胞间充质-上皮细胞转型的发生,并因此而显著降低其侵袭和转移潜力。     

小干扰RNA沉默HIF-1α基因表达对对人鼻咽癌细胞系CNE1 凋亡的影响

目的 探讨CNE1对人鼻咽癌细胞系CNE1凋亡的影响。方法 利用阳离子脂质体LipofectamineTM2000将HIF-1αsiRNA转染入CNE13 细胞中。WB法测定CNE1 细胞内HIF-1α的表达。流式细胞仪及Hochest 荧光染色测定细胞凋亡率的变化。WB法测定CNE1细胞内BCL-2的表达。结果 干扰HIF-1α能有效地促进CNE1细胞的凋亡,同时可下调BCL-2的表达。结论 体外实验初步证明HIF-1α基因在人鼻咽癌细胞系CNE1凋亡方面扮演重要角色,可通过下调BCL-2的表达来诱导凋亡。      

胰岛素样生长因子结合蛋白相关蛋白1表达对鼻咽癌细胞系CNE1发生发展的研究

目的探讨胰岛素样生长因子结合蛋白相关蛋白1(IGFBP-rP1)对鼻咽癌细胞系CNE1细胞的增殖、侵袭、迁移能力的影响。方法构建2条特异性针对IGFBP-rP1基因的小干扰RNA(siRNA32、siRNA34)及其阴性对照siRNA,将CNE1细胞分为4个转染组:siRNA32组(siRNA32转染)、siRNA34组(siRNA34转染)、阴性对照组(阴性对照siRNA转染)、空白组(不做任何处理),分别培养24h或48h后检测相关指标。结果siRNA32组和siRNA34组IGFBP-rP1mRNA及蛋白表达水平显著低于阴性对照组和空白组(P0.05);siRNA32组和siRNA34组CNE1细胞迁移数、穿过PVP-F膜的CNE1细胞数显著低于阴性对照组和空白组(P0.05);培养24、48h后,siRNA32组和siRNA34组CNE1细胞增殖OD值显著低于阴性对照组和空白组(P0.05);培养48h后,siRNA32组和siRNA34组G0/G1期、G2/M期细胞所占比例显著高于阴性对照组和空白组(P0.05);siRNA32组和siRNA34组S期细胞所占比例显著低于阴性对照组和空白组(P0.05)。结论抑制IGFBP-rP1表达能降低鼻咽癌CNE1细胞的增殖、侵袭、迁移能力,为临床治疗鼻咽癌提供一种新的思路。     

RNA干扰沉默survivin基因对食管癌Eca-109细胞放射敏感性的影响

目的探讨RNA干扰沉默survivin基因对食管癌Eca-109细胞放射敏感性的影响。方法构建靶向survivin基因特定序列的小干扰RNA(small interfering,siRNA)真核表达干扰质粒pRNAT-siRNA-survivin转染食管癌Eca-109细胞为干扰组,构建阴性对照质粒pRNAT-siRNA-control转染Eca-109细胞为阴性对照组,未转染的Eca-109细胞为空白对照组,3组采用Western blot检测survivin蛋白表达水平。取对数生长期干扰组Eca-109/si-survivin细胞和空白对照组Eca-109细胞,在直线加速器下分别给予6Gy的X线照射,分别为干扰+X线照射组和单纯X线照射组(X线照射组),采用流式细胞术检测各组细胞凋亡指数,采用MTT法分析细胞存活分数。结果干扰组细胞survivin蛋白表达水平(18.75±3.12)较阴性对照组(44.17±3.15)和空白对照组(46.20±2.62)明显下调(P0.05);干扰+X线照射组细胞凋亡指数[(29.56±0.74)%]明显高于空白对照组[(4.35±0.15)%]、阴性对照组[(4.32±0.32)%]、干扰组[(9.24±0.35)%]和X线照射组[(22.17±0.75)%],差异均有统计学意义(P0.05),干扰组和X线照射组明显高于空白对照组和阴性对照组(P0.05);干扰+X线照射组细胞存活分数[(19.54±1.12)%]明显低于空白对照组[(95.35±1.40)%]、阴性对照组[(93.45±1.38)%]、干扰组[(70.96±0.85)%]和X线照射组[(35.84±0.52)%](P0.05),干扰组和X线照射组明显低于空白对照组和阴性对照组(P0.05)。结论靶向survivin的siRNA能特异性沉默survivin基因表达,诱导细胞凋亡,抑制细胞增殖,进而增强人食管癌Eca-109细胞的放射敏感性。     

沉默p21活化激酶1表达对人黑素瘤A375细胞凋亡及侵袭能力的影响

目的探讨shRNA沉默p21活化激酶1(p21-activated kinase 1, PAK1)基因表达对人黑素瘤A375细胞凋亡、迁移及侵袭能力的影响。方法对数生长期人黑素瘤A375细胞随机分为转染组(转染PAK1特异性shRNA)、阴性对照组(转染NC-shRNA)、空白对照组(不进行转染)。转染后培养72 h,采用实时荧光定量PCR法检测A375细胞PAK1 mRNA相对表达量,采用Western blot法检测A375细胞PAK1及p-PAK1蛋白相对表达量,采用流式细胞术检测细胞凋亡率,采用Transwell小室实验检测细胞迁移、侵袭能力。结果转染后培养72 h,转染组PAK1 mRNA相对表达量(0.45±0.07)、PAK1蛋白相对表达量(0.53±0.01)、p-PAK1蛋白相对表达量(0.21±0.03)均低于阴性对照组(0.98±0.04、0.65±0.02、0.38±0.04)、空白对照组(1.00±0.08、0.67±0.51、0.36±0.02)(P0.05),细胞凋亡率[(11.20±0.21)%]高于阴性对照组[(5.86±0.51)%]、空白对照组[(5.43±0.03)%](P0.05),迁移细胞数[(47.00±2.23)个]、侵袭细胞数[(30.00±4.44)个]较阴性对照组[(76.00±4.85)、(54.00±3.67)个]、空白对照组[(77.90±4.97)、(56.00±4.12)个]少(P0.05),阴性对照组上述各指标与空白对照组比较差异均无统计学意义(P0.05)。结论沉默PAK1基因表达可促进人黑素瘤A375细胞凋亡,降低其迁移及侵袭能力。     

OCT4A基因对K562细胞生物学活性的影响

目的:探讨OCT4A基因体外对K562细胞生物学行为的影响及与凋亡相关的分子机制。方法:克隆人OCT4A基因,构建靶向上调及下调OCT4A基因与绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)的重组慢病毒表达载体p LVX-OCT4A-Zs Green1、PLB-OCT4A sh RNA,三质粒包装系统包装病毒,并测定滴度。实验分为空白对照、p LVX空质粒、p LVX-OCT4A-Zs Green1、PLB-OCT4A sh RNA和非特异sh RNA共5组。Western-blot检测各组OCT4A蛋白表达。CCK-8法绘制各组细胞增殖曲线。采用Annexin V/7-AAD标记流式细胞术检测细胞凋亡,流式细胞术检测细胞分化抗原CD11b和CD15表达;实时定量PCR检测caspase3、BIM、BCL-x L和BAX m RNA表达变化。结果:成功克隆人OCT4A基因,并成功构建重组慢病毒载体p LVX-OCT4A-Zs Green1和PLB-OCT4A sh RNA。Western blot证实2种病毒感染后可分别有效上调及下调OCT4A蛋白的表达。CCK-8法检测显示,p LVX-OCT4A-Zs Green1组K562细胞体外增殖活性明显升高,而p LVX-OCT4A sh RNA组K562细胞增殖活性显著降低(P0.05)。感染后p LVX-OCT4A-Zs Green1和PLB-OCT4A sh RNA 2组K562细胞凋亡率分别为(3.48±0.52)%和(7.25±0.57)%(P0.05),而OCT4A过表达及抑制后细胞表面分化抗原CD15、CD11b的表达无明显变化。OCT4A上调后Caspase-3、BIM、BAX较对照组均下调,但差异无统计学意义(P0.05),而BCL-x L基因表达则明显升高(P0.01)。结论:成功构建重组慢病毒载体p LVX-OCT4A-Zs Green1及PLB-OCT4A sh RNA,它们可分别有效地上调及下调OCT4A蛋白表达。OCT4A基因可促进K562细胞的增殖、抑制凋亡,其抑制凋亡机制可能与BCL-x L基因上调有关。     

曲古抑菌素A对鼻咽癌CNE2细胞凋亡的影响及机制研究

目的探讨曲古抑菌素A(TSA)对鼻咽癌CNE2细胞凋亡的影响及作用机制。方法以不同浓度(300、400、500 nmol/L)TSA作用鼻咽癌CNE2细胞株,采用流式细胞术测定TSA作用前后鼻咽癌细胞凋亡情况;逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)分析TSA作用后鼻咽癌细胞中细胞周期素依赖性蛋白激酶抑制因子1A(P21)表达的变化。结果以300、400、500 nmol/L TSA分别诱导CNE2细胞凋亡,作用24 h后凋亡率分别为12.52%±1.57%、19.69%±3.00%、19.63%±2.68%;48 h后凋亡率为24.50%±4.45%、36.24%±3.92%、34.82%±6.45%;与对照组(0 nmol/L TSA)比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。RT-PCR检测发现,TSA可诱导CNE2细胞内p21基因表达明显增加(P<0.01)。结论 TSA能明显诱导CNE2细胞凋亡,其作用机制可能与p21基因的异常表达有关。     

下调ALDH1A1基因表达对体外培养的鼻咽癌细胞系迁移能力的影响

目的探讨siRNA干扰ALDH1A1基因表达对鼻咽癌5-8F和CNE2细胞迁移侵袭能力的影响。方法将鼻咽癌5-8F和CNE2细胞分为5-8F干扰组、5-8F空载组、CNE2干扰组、CNE2空载组,利用已构建的慢病毒pMagic 4.1-ALDH1A1siRNA载体和pMagic 4.1-shRNA空载体分别感染5-8F和CNE2细胞,建立稳定干扰ALDH1A1表达的鼻咽癌5-8F、CNE2细胞株和空载的5-8F和CNE2细胞株。4组采用Western blot法检测细胞ALDH1A1、血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)、基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinase,MMP)-2、MMP-9蛋白表达,采用Transwell小室实验检测各组迁移细胞数,采用Boyden小室实验检测各组侵袭细胞数。结果 5-8F干扰组ALDH1A1蛋白表达(0.34±0.01)低于5-8F空载组(0.75±0.03),CNE2干扰组ALDH1A1蛋白表达(0.24±0.03)低于CNE2空载组(0.71±0.03);5-8F干扰组鼻咽癌细胞迁移细胞数(35.0±2.6)、侵袭细胞数(32.7±2.1)均低于5-8F空载组(117.6±3.2,105.6±4.0),CNE2干扰组鼻咽癌细胞迁移细胞数(34.0±3.0)、侵袭细胞数(32.3±1.5)均低于CNE2空载组(121.0±4.0,108.0±1.7)(P0.01);5-8F干扰组VEGF(0.49±0.03)、MMP-2(0.36±0.04)、MMP-9(0.31±0.04)蛋白表达低于5-8F空载组(0.73±0.02、0.50±0.02、0.89±0.01)(P0.01),CNE2干扰组VEGF(0.48±0.02)、MMP-2(0.37±0.02)、MMP-9(0.41±0.02)蛋白表达低于CNE2空载组(0.78±0.05、0.67±0.05、0.76±0.04)(P0.01)。结论下调ALDH1A1基因表达可抑制鼻咽癌细胞迁移侵袭。     

醋酸棉酚对人鼻咽癌细胞凋亡的影响及其作用机制探讨

目的:研究醋酸棉酚(gossypol acetic acid,GAA)对人鼻咽癌细胞系CNE2体外增殖的影响,初步探讨其作用机制。方法:采用MTT法检测GAA对CNE2细胞的增殖抑制作用,Hoechst 33342/PI荧光染色观察细胞核的形态变化,流式细胞仪分析细胞周期的分布、凋亡率以及凋亡相关基因蛋白的表达情况。结果:GAA对CNE2细胞具有显著的增殖抑制作用并且呈剂量、时间依赖性,Hoechst 33342/PI荧光染色可观察到明显核固缩、染色质凝集等细胞凋亡现象;流式细胞仪检测发现细胞被阻滞于G0/G1期,G2/M期和S期细胞相对减少并出现典型的"亚二倍体峰",凋亡相关基因Bcl-2表达下调,而Bax表达则相对上调。结论:GAA能够抑制人鼻咽癌细胞系CNE2的增殖,促进其凋亡,其作用机制可能是通过调节凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax而实现的。     

Apo-2L对放射线诱导鼻咽癌CNE细胞凋亡作用

目的了解凋亡素2配体（Apo-2L）与放射治疗协同对体外培养鼻咽癌CNE细胞增殖周期及凋亡率的影响。方法 MTT法检测不同浓度Apo-2L对鼻咽癌CNE细胞的影响,确定Apo-2L与细胞作用时间及浓度。将细胞随机分为对照组、Apo-2L组、Apo-2L＋放射组及单纯放射组,分别给予相应的处理后制成细胞悬液,流式细胞仪分析细胞凋亡率和细胞周期变化。结果鼻咽癌CNE细胞的抑制率与Apo-2L的浓度呈正相关（r=0.91,P〈0.05）,当用浓度为100μg/L的Apo-2L处理CNE细胞24h,Apo-2L＋放射组凋亡率较其他各组明显升高,差异有显著性（F=8.64,P〈0.05）。Apo-2L＋放射组G2-M期比率较其他各组显著降低（F=7.74,P〈0.05）。结论Apo-2L对体外培养鼻咽癌CNE细胞有抑制增殖和促进凋亡作用;Apo-2L联合放射线治疗可以使细胞周期同步化,并明显提高CNE细胞的凋亡率。     

shRNA-FAM-38A基因对宫颈癌CS1213细胞增殖和迁移的影响

目的探讨shRNA-FAM-38A基因在宫颈癌CS1213细胞增殖和迁移中的作用。方法宫颈癌CS1213细胞分为空白对照组、阴性对照组和实验组。空白对照组细胞不转染慢病毒载体,阴性对照组细胞转染无序序列慢病毒载体,实验组细胞转染沉默shRNA FAM-38A慢病毒载体。采用实时荧光定量PCR法检测3组细胞FAM-38A、caspase-3和caspase-9 mRNA相对表达量,采用Transwell小室实验检测3组CS1213细胞迁移细胞数,采用CCK-8实验检测3组细胞增殖率。结果实验组细胞FAM-38A mRNA相对表达量(0.32±0.07)、迁移细胞数[(44.38±5.32)个]、细胞增殖率[(47.54±7.63)%]低于空白对照组[0.95±0.13、(99.72±19.63)个、(144.63±21.75)%]和阴性对照组[1.14±0.23、(119.63±21.87)个、(145.62±11.97)%](P0.05),caspase-3、caspase-9 mRNA相对表达量(5.11±1.21、12.64±2.87)高于空白对照组(0.84±0.09、0.22±0.03)和阴性对照组(0.89±0.12、0.21±0.04)(P0.05),空白对照组FAM-38A、caspase-3、caspase-9 mRNA相对表达量及迁移细胞数、细胞增殖率与阴性对照组比较差异均无统计学意义(P0.05)。结论 shRNA-FAM-38A基因可抑制宫颈癌细胞的增殖和迁移能力,可作为宫颈癌的潜在治疗靶点。