红曲E-70及洛伐他汀对乳腺癌细胞MCF-7的增殖影响

目的探讨红曲乙醇提取物（红曲E-70）及洛伐他汀对人乳腺癌细胞MCF-7增殖的影响。方法制备红曲E-70,利用高效液相检测其洛伐他汀的含量,应用MTT法检测不同浓度红曲E-70和其对应洛伐他汀的含量对人乳腺癌细胞MCF-7增殖情况的影响。结果红曲E-70在1~150μg/mL浓度范围抑制MCF-7增殖,而洛伐他汀只在0.15μg/ml浓度抑制MCF-7增殖（P〈0.05）。结论红曲E-70抑制MCF-7增殖,其抑制MCF-7增殖的作用比洛伐他汀更强。     

洛伐他汀对BRCA1高表达MCF-7乳腺癌细胞周期调控蛋白的影响

目的探讨胆固醇合成抑制剂洛伐他汀(lovastatin, LOV)对BRCA1基因高表达MCF-7乳腺癌细胞株细胞周期调控蛋白表达的影响.方法将BRCA1基因进行扩增、鉴定后,运用脂质体转染MCF-7乳腺癌细胞,通过MTT比色法检测细胞增殖功能,RT-PCR方法检测细胞周期调控蛋白cyclinD1、cyclinD3、CDK2、CDK4的mRNA以及Western blot检测cyclinD1、CDK4蛋白表达水平.结果 LOV处理后,细胞的增殖能力减弱,cyclinD1、 cyclinD3、CDK2、CDK4 mRNA表达及cyclinD1、CDK4蛋白表达均降低,其中,以BRCA1基因高表达MCF-7乳腺癌细胞株经LOV处理后变化更为显著.结论 BRCA1基因在LOV诱导的细胞周期蛋白抑制中可能起重要作用,其高表达增强了MCF-7乳腺癌细胞对LOV的敏感性和LOV对乳腺癌细胞的增殖抑制作用.     

槲皮素对乳腺癌细胞MCF-7增殖及凋亡的影响

槲皮素具有广泛的生理及药理活性 [1] ,因其扩张冠脉、调血脂、降低血管通透性被作为心血管药物而在临床广泛应用。已有文献报道槲皮素在体外对肿瘤的化学预防和治疗作用及其机制[2 ,3 ] 。此前 ,已对槲皮素抑制 DMBA (二甲基苯并蒽 )诱导的 SD大鼠乳腺癌的发生及增殖进行了研究并探讨机制 [4,5]。本实验采用 ER(雌激素受体 )阳性的乳腺癌细胞株 MCF- 7,初步观察槲皮素在体外对该细胞增殖、凋亡及细胞周期的影响 ,为进一步探讨其作用机制及其应用于临床治疗乳腺癌提供部分依据。1　材料与方法1 .1　药物与细胞系 :Quercetin (槲皮素 ,…     

龙葵碱对乳腺癌MCF-7细胞微管系统的影响

目的 研究龙葵碱对乳腺癌MCF-7细胞微管系统的影响。方法 MTT法检测龙葵碱对人乳腺癌MCF-7细胞增殖的抑制作用,流式细胞仪分析龙葵碱对MCF-7细胞周期的影响以及细胞内α-微管蛋白及微管相关蛋白（MAP-2）的变化。结果 龙葵碱对MCF-7细胞的IC₅₀为22.08 μg/mL,能够将MCF-7细胞阻滞于S期;能够增加MCF-7细胞内α-微管蛋白和MAP-2的量。结论 龙葵碱通过升高MCF-7细胞内的微管蛋白及MAP-2的表达,将MCF-7细胞阻滞于S期,从而抑制乳腺癌MCF-7细胞的生长。     

洛伐他汀对BRCA1基因高表达MCF-7乳腺癌细胞p21的影响

目的探讨胆固醇合成抑制剂洛伐他汀(LOV)对高表达BRCA1基因MCF-7乳腺癌细胞周期素依赖性蛋白激酶抑制剂p21的影响.方法应用基因转染技术获得BRCA1高表达的MCF-7乳腺癌细胞(MCF-7BRCA1).8 μmol/L LOV处理细胞1、2、3 d后,通过MTT、Western-blot等方法检测MCF-7及MCF-7BRCA1两种细胞的增殖功能以及周期素依赖性蛋白激酶抑制剂p21表达的改变.结果 LOV处理后,细胞生长减慢,细胞的增殖能力降低,而p21的蛋白表达增加,其中,以BRCA1基因转染的细胞经LOV处理后变化更为显著.结论 BRCA1基因能增强LOV对MCF-7乳腺癌细胞的增殖抑制作用,诱导周期素依赖性蛋白激酶抑制剂p21活性增加,推测这可能是LOV抑制BRCA1基因高表达MCF-7乳腺癌细胞增殖的重要分子机制之一.     

敲低膜联蛋白A7对乳腺癌MCF-7细胞凋亡的影响

目的：：观察靶向敲低人乳腺癌MCF-7细胞膜联蛋白A7(AXNA7)的表达对MCF-7细胞凋亡的影响。方法：实验分为3组,以靶向ANXA7的siRNA转染MCF-7细胞为siRNA干扰组,另设阴性对照组、空白对照组,采用RT-PCR法和Western blot法检测转染后MCF-7细胞ANXA7的表达情况,应用流式细胞术检测ANXA7低表达对MCF-7细胞凋亡的影响。结果：转染后,siRNA干扰组细胞ANXA7的表达明显低于阴性对照组和空白对照组(P＜0.05);敲低ANXA7后,MCF-7细胞凋亡明显增加(P＜0.05)。结论：ANXA7低表达可促进乳腺癌细胞MCF-7凋亡。     

DHRS7对人乳腺癌细胞MCF-7细胞周期的影响及其在乳腺癌组织中的表达

［摘 要］目的：探究 DHRS7基因过表达和DHRS7特异性短发夹RNA(shRNA)重组质粒对人乳腺癌细胞MCF-7细胞周期的影响及DHRS7与乳腺癌浸润癌的关系,阐明DHRS7在乳腺癌发生、发展中的作用。方法：利用RT-PCR技术将DHRS7基因全长克隆入真核表达载体pcDNA3.1( + )质粒中,构建pcDNA3.1-DHRS7重组真核表达质粒。实验分为pcDNA3.1-DHRS7组、阴性对照组(pcDNA3.1组)、空白对照组和DHRS7-shRNA-pGenesil组,用Fugene HD转染试剂将各种质粒转染MCF-7细胞,采用RT-PCR和Western blotting法检测各组MCF-7细胞中DHRS7的表达情况,流式细胞术分析细胞周期变化,免疫组织化学SP法检测乳腺原位癌和乳腺浸润癌组织中DHRS7蛋白的表达情况。结果：成功构建pcDNA3.1-DHRS7重组表达质粒。PCR和Western blotting结果显示,pcRNA-DHRS7组蛋白的表达量高于空白对照组（P<0.05）,DHRS7-shRNA-pGenesil组蛋白的表达量低于空白对照组,差异均有统计学意义（P<0.05）。流式细胞术显示,DHRS7表达上调使MCF-7细胞S期细胞增多（P<0.05）,DHRS7的表达下调使处于G2期的细胞增多（P<0.05）。免疫组织化学染色显示,DHRS7蛋白在原位癌中高表达,阳性表达率为100%（37/37）;在乳腺浸润癌的表达明显降低,阳性率为18.9%（7/37）,两者比较差异有统计学意义（P<0.01）。结论：DHRS7基因参与了MCF-7细胞细胞周期的调控过程,可以抑制细胞增殖,DHRS7蛋白的表达丢失可能促进乳腺癌浸润。     

RNAi干扰HMGB1基因对乳腺癌细胞MCF-7增殖的影响

目的 探讨高迁移率族蛋白1 (high mobility group box 1,HMGB1 )siRNA干扰后对乳腺癌细胞MCF-7增殖的影响.方法 构建靶向HMGB1 mRNA的质粒载体pRI-GFP-1、pRI-GFP-2以及阴性对照载体pRI-GFP-Neg,分别转染乳腺癌细胞MCF-7,48 h、72 h后免疫印迹法(Western blot)检测HMGB1基因蛋白表达,噻唑蓝(MTT)比色法检测体外增殖活性.结果 转染后,与空质粒组pRI-GFP-Neg相比,pRI-GFP-1组、pRI-GFP-2组MCF-7细胞HMGB1蛋白表达下降,MTT显示干扰组细胞增殖速率与质粒对照及空白对照组相比显著降低.结论 应用RNAi技术可以显著干扰HMGB1蛋白的表达,进而有效抑制MCF-7细胞的增殖活性.     

藻红蛋白诱导乳腺癌MCF-7细胞凋亡与细胞周期的关系

目的 研究藻红蛋白 (PE) 对人乳腺癌 MCF-7 细胞的增殖抑制效果和诱导凋亡作用。方法 采用 MTT 法和 SRB 法检测 PE 对人乳腺癌 MCF-7 细胞增殖的抑制作用。采用倒置显微镜、荧光显微镜 Hoechst 33258 染色观察 MCF-7 细胞凋亡细胞形态。Annexin V-FITC/PI 双荧光染色观察细胞凋亡过程中特异的磷脂酰丝氨酸 (PS) 外翻情况确定凋亡的出现。流式细胞仪观察 PE 对 MCF-7 细胞周期的影响。结果 PE 对 MCF-7 细胞有较强的生长抑制作用,并且呈一定的剂量依赖性,其 72 h 的 IC₅₀ 值为 147.82 μg/mL,GI₅₀ 值为 109.76 μg/mL。倒置显微镜下与基本贴壁的饱满、边沿清晰的对照组细胞比较,给药组细胞有明显的细胞变粗糙,贴壁细胞减少的现象,而且浓度越高,作用时间越长,悬浮细胞越多。荧光显微镜下可见各给药组 MCF-7 细胞出现不同程度深染亮点的细胞核质,染色质浓集固缩并伴有凋亡小体形成。激光共聚焦显微镜下可见给药组细胞膜被染成绿色,细胞核被染成红色。流式细胞仪显示 PE 可阻滞 MCF-7 细胞从 S 期进入 G₂/M 期,促使细胞凋亡。结论 PE 对 MCF-7 细胞有较强的抑制作用,可使其凋亡,其作用机制与周期阻滞有关。     

蛇床子素对乳腺癌MCF-7细胞增殖的影响

【目的】观察蛇床子素对体外培养乳腺癌细胞MCF-7增殖的影响。【方法】雌激素依赖性MCF-7细胞在DMEM培养液中采用开放式单层贴壁培养，用3种不同浓度蛇床子素进行药物干预，采用活细胞计数法和MTT法测定乳腺癌细胞的增殖情况。【结果】MCF-7细胞经蛇床子素1×10^-8mol／L和雌酚酮处理后1、2d和3d，与空白对照组相比，增殖速度均加快（P〈0．05），3d差异最为显著。【结论】1×10^-8mol／L蛇床子素对MCF-7细胞有明显促增殖作用。     

洛伐他汀对乳腺癌细胞Rho GTPases活性及细胞骨架形成的影响

目的 探讨胆固醇合成抑制剂洛伐他汀对MCF-7乳腺癌细胞Rho GTPases活性及细胞骨架形成的影响。方法 采用逆转录-PCR检测Rho、Rac2和RhoGDI mRNA的表达水平,放射自显影方法分析Rho GTPases活性,激光共聚焦和透射电镜观察微丝和中间丝的形成。结果 4-16μmol／L的LOV处理MCF-7细胞48—72h后,RhoA mRNA表达均无明显变化,而Rac2 mRNA和RhoGDI mRNA随洛伐他汀的处理,各剂量组mRNA表达均呈增加趋势;放射自显影结果发现,LOV处理细胞72h后,各处理组Rho GTPases结合的GTP量明显低于对照组;此外,LOV能明显促进MCF-7细胞微丝和中间丝的形成,该作用有一定剂量．效应和时间依赖关系。结论 洛伐他汀处理MCF-7乳腺癌细胞,因妨碍Rho GTPases蛋白转录后的香叶酯焦磷酸活化修饰而导致Rho GTPases活性降低,但它却能明显促进MCF-7细胞骨架的形成。     

姜黄素对人乳腺癌MCF-7细胞抗增殖作用的研究

目的 研究姜黄素对人乳腺癌MCF-7细胞增殖、细胞周期分布及基因表达情况的影响.方法 MTT法测定姜黄素生物活性及姜黄素抗增殖效应、FCM分析细胞周期分布,RT-PCR技术测定bcl-2、bax、PCNA mRNA表达.结果 姜黄素对MCF-7细胞的IC50值为18.5 μmol/L.各实验组的姜黄素对MCF-7细胞的生长均有抑制作用,这种抑制作用呈时间-剂量依赖方式.FCM检测结果:姜黄素20 μmol/L及40μmol/L作用于MCF-7细胞24 h,可阻滞细胞周期于G0/G1期,并诱导部分细胞凋亡.RT-PCR测定结果:姜黄素0～80 μmol/L作用MCF-7细胞24 h,bcl-2、PCNA mRNA表达水平降低、bax mRNA表达水平增加.结论 姜黄素可抑制MCF-7细胞生长、阻滞细胞周期于G0/G1期,对MCF-7细胞有抗增殖作用,并能诱导部分细胞凋亡,其机制可能与姜黄素抑制bcl-2、PCNA mRNA表达,促进bax mRNA表达有关.     

影响MCF-7细胞增殖试验相关因素的初步研究

目的 了解影响MCF-7细胞增殖试验相关因素，为MCF-7细胞增殖试验检测环境雌激素方法的标准化提供试验依据。方法 对不同来源的MCF-7细胞雌激素敏感性进行检测，对筛选出的敏感细胞在不同培养条件、去激素培养基中培养不同时间进行细胞增殖试验。结果 不同来源MCF-7细胞对雌激素敏感不同；培养基中酚红、血清中内源性雌激素对MCF-7细胞有刺激增殖作用；MCF-7细胞在去激素培养基中培养时间越长，对雌激素越敏感。结论 进行MCF-7细胞增殖试验前应进行雌激素敏感试验，选用敏感细胞；应在去激素培养基中培养适当时间后进行试验。     

Smad蛋白在乳腺癌和正常乳腺上皮细胞中的表达及意义

目的：检测TGFβ₁、TGFβ受体Ⅱ及其下游Smad调节因子等基因在乳腺癌和正常乳腺上皮细胞中的表达,探讨TGFβ在乳腺癌发展过程中发挥作用的分子机制。方法：分离纯化人正常乳腺上皮细胞,应用RT-PCR检测乳腺癌细胞系MCF7及正常乳腺上皮细胞中TGFβ₁、TGFβ受体Ⅱ、Smad4、Smad6、Smad7的表达。结果：TGFβ₁、TGFβ受体Ⅱ、Smad6、Smad7与内参照GAPDH比值在正常乳腺上皮细胞中（0.721±0.214、1.001±0.312、0.689±0.12和0.221±0.124）与MCF7细胞（0.698±0.324、0.998±0.217、0.718±0.257;0.246±0.138）比较表达水平差异无显著性,Smad4在乳腺癌细胞中的表达水平（0.498±0.221）低于正常乳腺上皮细胞（1.132±0.314）（P<0.05）。结论：Smad4在乳腺癌细胞中的低表达可能与TGFβ对乳腺癌的促癌作用有关联。     

人乳腺癌MCF-7细胞系中肿瘤干细胞的富集与鉴定

采用无血清培养液(SFM)悬浮细胞聚球法体外培养人乳腺癌MCF-7细胞系,第5、10、15天拍照,观察干细胞球的生成。悬浮培养第5天可以开始观察到悬浮细胞球形成,细胞球形成效率为(0.6±0.5)%,第10天时细胞球形成效率为(2.4±1.2)%,比第5天时明显增多,培养第15天时细胞球形成效率达到(3.8±1.8)%,MCF-7悬浮成球细胞中侧群细胞(SP)细胞含量为(3.9±1.4)%,高于常规培养的MCF-7贴壁细胞(1.1±0.5)%(P<0.05),采用无血清悬浮细胞聚球培养法可以从MCF-7细胞系中简便、高效地富集乳腺癌干细胞。     

对-壬基酚对MCF-7人类乳腺癌细胞雌激素受体表达的影响

目的　观察对 -壬基酚 (p- NP)对 MCF- 7人类乳腺癌细胞株雌激素受体 (ER)及 ERαm RNA表达的影响 ,探讨其雌激素样活性。方法　以 RPMI 16 4 0培养液 (含 10 %小牛血清 )对 MCF- 7细胞进行半开放式贴壁培养 ,试验前以 DMEM(不含酚红 )培养液洗涤细胞 ,以含 3% C/D胎牛血清的 DMEM(不含酚红 )培养液继续培养 3d。试验设溶剂对照、阳性对照和 p- NP 5个浓度组 ,采用免疫组织化学法和定量 RT- PCR法分别对 MCF- 7细胞 ER蛋白和 ERαm RNA表达情况进行分析。结果　 1× 10 - 5m ol/L p- NP作用于 MCF- 7细胞 2 4 h下调 ER蛋白表达 ;1× 10 - 6 mol/L～ 1× 10 - 5m ol/L p- NP作用于 MCF- 7细胞 2 h和 2 4 h下调 ERαm RNA表达。p- NP各浓度组均表现出 ER蛋白和 ERαm RNA表达随 p- NP作用于 MCF- 7细胞时间的延长而进一步下降的趋势。结论　 p- NP可模拟雌激素下调 MCF- 7细胞 ER蛋白和 ERαm RNA表达 ,具有雌激素样活性