大鼠肝脏缺血再灌注时肝细胞凋亡与Bcl-2蛋白表达的关系

目的 探讨肝脏缺血再灌注时肝细胞凋亡与Bcl—2蛋白表达的关系。方法 建立大鼠局部肝脏缺血再灌注模型，将72只健康雄性Wistar大鼠随机分为正常组、假手术组和缺血再灌注组，采用免疫组织化学法测定再灌注后不同时相中肝组织Bcl—2蛋白含量，用末端脱氧核苷酸转移酶介导的三磷酸脱氧尿苷(dUTP)缺口末端标记(TUNEL)法和透射电镜观察肝细胞凋亡状态。结果 再灌注后1、3、6、24h肝组织Bcl—2蛋白含量明显低于正常组及假手术组，并于3～6h达到其最低值；再灌注后1、3、6、24h肝细胞凋亡指数(HAI)则明显高于正常组和假手术组，并于3～6h达到高峰。再灌注后各时相中Bcl—2蛋白水平与HAI呈明显负相关。结论 在肝脏缺血再灌注时，Bcl—2蛋白表达水平异常下调，其抑制细胞凋亡的效能减弱，促使肝实质细胞凋亡增加，加重肝脏缺血再灌注损伤。     

大鼠肝脏缺血再灌注损伤对脂质过氧化和Bcl-2/Bax表达的影响

肝脏缺血再灌注损伤(hepatic ischemia-reperfusion iniury,HIRI)是肝部分切除及肝移植的主要制约因素之一[1],是导致患者死亡的主要原因.HIRI是指各种原因导致肝血流中断或不足使肝脏缺血,当恢复血供再灌注后,肝细胞功能代谢障碍及结构破坏反而加重.资料显示,HIRI与内皮素/一氧化氮的失衡,核因子-kB(NF-kB)的激活,前炎性因子和粘附因子的释放,氧源性自由基的产生和中性粒细胞的聚集,肝细胞凋亡等因素密切相关[2,3].     

中药复方冠心康对大鼠缺血再灌注损伤心肌细胞Bcl-2、Bax表达的影响

目的观察中药复方冠心康对大鼠缺血再灌注损伤(MIRI)心肌细胞相关凋亡因子Bcl-2、Bax表达的影响。方法 40只SD雄性大鼠随机分为假手术组、MIRI模型组、冠心康组、盐酸地尔硫卓组。采用结扎左冠状动脉前降支30min,再灌注2h复制大鼠MIRI模型,分别以HE染色、TUNEL法及免疫组织化学法检测心肌组织病理学、心肌细胞凋亡指数、心肌细胞Bcl-2、Bax的阳性表达。结果 MIRI组与假手术组比较心肌细胞凋亡指数值显著升高(P<0.01),而冠心康组明显降低(P<0.01);抑凋亡因子Bcl-2在MIRI后表达明显降低,而促凋亡因子Bax表达则明显升高,冠心康可明显升高Bcl-2的表达,同时降低Bax的表达(P<0.01)。结论中药复方冠心康对大鼠MIRI心肌细胞具有明显的保护作用,其作用机制与调控心肌细胞的凋亡因子Bcl-2、Bax的表达有关。     

PAR-2对心肌缺血再灌注损伤大鼠Bax和Bcl-2 mRNA表达的影响

目的探讨蛋白酶激活受体2(PAR-2)对缺血再灌注(IR)大鼠心肌Bax和Bcl-2 mRNA表达的影响。方法 40只雄性SD大鼠随机分为假手术组、I/R组和SLIGRL-NH2(0.5,1,3 mg)组。结扎左冠状动脉前降支30 min,再灌注120 min制作心肌I/R模型;采用实时荧光定量PCR法检测大鼠心肌组织Bcl-2和Bax mRNA的表达水平。结果与假手术组比较,模型组Bcl-2和Bax显著升高,差异具有统计学意义(P<0.05);与IR组比较,SLIGRL-NH2(1、3 mg)组的Bcl-2显著升高、而Bax显著降低(P<0.05～0.01)。结论 I/R可诱导大鼠心肌组织Bcl-2、Bax mRNA表达上调,而PAR-2活化可通过抑制心肌组织Bax mRNA的表达和促进Bcl-2 mRNA的表达,起到抑制心肌细胞凋亡的作用。     

刺五加方剂对家兔缺血再灌注心肌Bcl-2和Bax表达的影响

目的观察刺五加方剂对家兔缺血再灌注心肌Bcl-2和Bax表达的影响。方法选择健康家兔24只,随机分为假手术组（A组）、模型组（B组）、刺五加方剂组（C组）,各8只。给药4周后,制作心肌缺血再灌注模型。取缺血心肌组织,检测其Bcl-2和Bax的表达变化。结果A、B、C组Bcl-2的灰度值分别为95．78±6．55、56．91±4．51、99．12±5．05,Bax的灰度值分别为99．88±20．56、165．31±9．05、115．21±18．16,C组Bcl-2高于、Bax低于B组（P均〈0．05）。结论刺五加方剂可以促进心肌组织Bcl-2表达,抑制Bax表达。     

丙泊酚对大鼠离体缺血/再灌注心肌细胞凋亡和Bcl-2/Bax蛋白表达的影响

目的研究丙泊酚对大鼠离体缺血/再灌注心肌细胞凋亡的影响及其机制。方法 SD大鼠30只,随机分为丙泊酚组与对照组,制备大鼠离体心肌缺血/再灌注(MI/R)模型,在再灌注开始时分别给以丙泊酚(25μmol/L,以950 mL/L乙醇为溶剂)或950 ml/L乙醇(3μL/h)。再灌注结束后,将缺血区剪下,制备石蜡切片,采用TUNEL技术检测心肌凋亡,免疫组化技术检测心肌组织的Bcl-2和Bax水平。结果丙泊酚组与对照组相比,心肌细胞凋亡明显增多,分别为(3 5.2±6.7)%(、5.2±0.8)%(t=28.1,P<0.01);Bcl-2表达降低,分别为5.7±1.3、1.8±0.8(t=11.9,P<0.01);Bax增高,分别为9.1±1.3、5.9±1.3,(t=11.9,P<0.01)。结论大剂量丙泊酚促进大鼠离体缺血/再灌注心肌细胞凋亡,提高Bax蛋白表达,降低Bcl-2蛋白表达。丙泊酚对Bcl-2/bax的调节可能是其促凋亡的主要机制之一。     

缺血后处理对高血脂大鼠缺血再灌注心肌Bcl-2及Bax蛋白表达的影响

目的 观察缺血后处理对高血脂大鼠缺血再灌注心肌Bcl-2及Bax蛋白表达的影响.方法 选择高血脂SD大鼠36只,随机分为3组:假手术组、缺血再灌注组、缺血后处理组,每组12只.制备大鼠心肌缺血再灌注模型.缺血再灌注组:收紧结扎线缺血40 min,放松结扎线再灌注240 min;缺血后处理组:缺血40 min后,再灌注10 s,缺血10 s,连续3个循环,然后再灌注240 min;假手术组:开胸后穿线做套环,但不收紧结扎线.再灌注结束后自右颈动脉采血测定血清肌酸激酶(CK)活性,用TUNEL法检测再灌注心肌凋亡程度,采用免疫组织化学方法检测Bcl-2及Bax蛋白的表达情况.结果 ①血清中CK活性的测定:再灌注结束后缺血后处理组和缺血再灌注组CK活性明显高于假手术组[分别为(789.68±67.34),(932.86±84.17),(252.48±19.78)U/L,P<0.05],缺血后处理组明显低于缺血再灌注组(P<0.05).②心肌凋亡细胞计数:再灌注结束后假手术组未见明显细胞凋亡(<5%),缺血后处理组心肌细胞凋亡率明显低于缺血再灌注组[分别为(11.9±2.7)%,(21.2±3.5)%,P<0.05].③与缺血再灌注组相比,缺血后处理组Bcl-2蛋白表达增加(P<0.05),Bax蛋白表达减低(P<0.05).结论 缺血后处理可以增加高血脂大鼠缺血再灌注心肌Bcl-2蛋白表达、降低Bax蛋白表达,进而抑制凋亡.     

谷胱甘肽和缺血预处理对大鼠肝脏缺血再灌注损伤的影响

目的 探讨肝脏缺血预处理（IPC）和还原型谷胱甘肽（r-GSH,阿拓莫兰Atomolan）预处理的作用机理,通过观察二者单独或联合应用时对肝脏缺血再灌注（I/R）损伤的影响,以便能够找到一种防治肝脏I/R损伤更好的预处理方式.方法 50只健康的Wistar大鼠,在肝脏I/R前,按加和不加Atomolan;IPC前,按加和不加Atomolan及空白对照随机分成5组,作配对试验,分别检测血清谷丙转氨酶（ALT）、血清丙二醛（MDA）的数值及热休克蛋白（HSP）70免疫组化染色的结果.结果 r-GSH预处理和IPC单独应用时均对肝脏I/R损伤有保护作用,并且r-GSH预处理的效果好于IPC,但二者联合应用时,将相互拮抗.结论 r-GSH预处理通过抑制氧自由基（OFR）爆发和中性粒细胞炎症,起到保护肝脏I/R损伤的作用,但同时也抑制了IPC产生HSP70的能力.     

黄芪对大鼠肝缺血再灌注损伤的影响

目的 探讨黄芪对大鼠肝缺血再灌注损伤的影响,以及与缺血预处理(IP)作用效果的比较.方法 清洁级健康雄性SD大鼠96只,随机分为假手术组、缺血再灌注组(IR组)、缺血预处理组(IP组)、黄芪组,每组又按再灌注时间(1、3、6、24 h)分为4个时相,每组各时相为6只.制作70%肝缺血再灌注模型,测血清谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、乳酸脱氢酶(LDH)水平;测肝组织髓过氧化物酶(MPO)含量;用免疫组化法检测IL-10、TNF-α表达;以及光镜及电镜观察大鼠肝形态学变化.结果 IR、IP、黄芪组ALT、AST、LDH和MPO含量均明显高于假手术组(P<0.01).与IR组相比,IP、黄芪组各个时相点的值均下降(P<0.05).与IP组比较,黄芪组各个时相点的值均降低(P<0.05).IR、IP、黄芪组肝组织TNF-α、IL-10的阳性细胞表达率均比假手术组高(P<0.05);与IR组比较,IP、黄芪组TNF-α的表达减少,而IL-10的表达增强(P<0.05);与IP组比较,黄芪组TNF-α的表达减少,IL-10表达增强(P<0.05).在光镜及电镜下观察肝形态学变化,可见IR组损伤甚为明显,IP及黄芪组损伤程度较IR组轻,黄芪组更轻,而假手术组肝形态正常.结论 IP和黄芪都可减轻缺血再灌注对肝脏的损伤,且后者较前者效果好.     

预处理对肝脏再灌注损伤大鼠肝组织、血液中NO和ET的影响及意义

目的　探讨预处理对肝脏缺血再灌注损伤大鼠肝组织和血液中一氧化氮 (NO)和内皮素 (ET)含量的影响及意义。方法　建立肝脏 70 %缺血再灌注损伤大鼠模型 ,分为对照组、缺血组、缺血预处理组、L -精氨酸组(L - arg)、Nω-硝基 - N -精氨酸甲酯 (L - NAME)组 ,观察各组肝功能变化 ,检测肝组织和血清中 NO和 ET及透明质酸 (HA)水平。结果　预处理可减轻 NO水平的下降和血浆 ET的升高 ,防止肝功酶的升高 (P<0 .0 5 )。结论　预处理可诱导缺血再灌注损伤大鼠 NO产生增加、ET产生减少 ,进而改善其微循环 ,减少再灌注损伤。     

异丙酚预处理对大鼠缺血再灌注脑皮质Bax和Bcl-2表达的影响

目的 探讨异丙酚预处理对大鼠缺血再灌注(L/R)后脑组织保护作用的机制.方法 制备脑I/R损伤模型,将30只大鼠随机分成对照组和异丙酚预处理组.实验完毕后,取出脑皮质提取总RNA,进行RT-PCR,测定两组Bcl-2和Bax mRNA的相对表达量;TUNEL法检测细胞凋亡.结果 异丙酚预处理组大鼠脑皮质Bcl-2和Bax mRNA的相对表达量分别明显高于和低于对照组(均P＜0.05).TuNEL结果 显示,异丙酚预处理组TUNEL阳性细胞率明显低于对照组(P＜0.05).结论 异丙酚对L/R脑皮质具有重要的保护作用.     

丙酮酸乙酯对大鼠缺血再灌注心肌Bcl-2、Bax和caspase-3表达的影响

目的 探讨丙酮酸乙酯（EP）对缺血再灌注（I／R）心肌细胞凋亡的可能机制。方法 将24只雄性SD大鼠随机分为对照组、I／R组和EP组各8只，均建立Langendorff离体心脏模型，对照组K-H液持续灌流180min；I／R组平衡灌流30min，全心停灌30min，再灌120min；EP组试验程序与I／R组相同，平衡15min后和再灌注期间使用含2mmol／L EP的K-H液。分别以缺口末端标记法及免疫组化法检测各组心肌细胞凋亡指数（AI）及Bcl-2、Bax和caspase-3蛋白表达。结果 I／R组AI和Bcl-2、Bax、caspase-3表达水平均明显高于对照组；与I／R组相比，EP组AI和Bax、caspase-3表达水平明显降低，而Bcl-2表达水平明显升高。结论 EP可抑制离体大鼠I／R损伤过程中的心肌细胞凋亡，其机制可能为下调Bax、caspase-3表达，上调Bcl-2表达。     

Alanyl-glutamine dipeptide inhibits hepatic ischemia-reperfusion injury in rats

AIM: To investigate the protective effect and mechanism of alanyl-glutamine dipeptide (Ala-Gln) against hepatic ischemia-reperfusion injury in rats. METHODS: Rats were divided into group C as normal control Group (n=16) and group G as alanyl-glutamine pretreatment (n=16). Rats were intravenously infused with 0.9% saline solution in group C and Ala-Gln -enriched (2% glutamine) 0.9% saline solution in group G via central venous catheter for three days. Then all rats underwent hepatic warm ischemia for 30 min followed by different periods of reperfusion. Changes in biochemical parameters, the content of glutathione (GSH) and the activity of superoxide dismutase (SOD) in liver tissue, Bcl-2 and Bax protein expression and morphological changes of liver tissue were compared between both groups. RESULTS: One hour after reperfusion, the levels of liver enzymes in group G were significantly lower than those in group C (P<0.05). Twenty-four hours after reperfusion, the levels of liver enzymes in both groups were markedly recovered and the levels of liver enzyme in group G were also significantly lower than those in group C (P<0.01). One and 24 h after reperfusion, GSH content in group G was significantly higher than that in group C (P <0.05). There was no statistical difference in activities of SOD between the two groups. One and 24 h after reperfusion, the positive expression rate of Bcl-2 protein was higher in group G than in group C (p<0.05) and the positive expression rate of Bax protein was lower in group G than in group C (P<0.05). Histological and ultrastructural changes of liver tissue were inhibited in group C compared to group G. CONCLUSION: Our results suggest that Ala-Gln pre-treatment provides the rat liver with significant tolerance to warm ischemia-reperfusion injury, which may be mediated partially by enhancing GSH content and regulating the expression of Bcl-2 and Bax proteins in the liver tissue.     

吡那地尔对大鼠脑缺血再灌注后Bcl-2和Bax蛋白表达的影响

目的 探讨吡那地尔对大鼠局灶性脑缺血再灌注后Bcl-2和Bax蛋白表达的影响.方法 20只Wistar雄性大鼠随机分为假手术组、对照组、KATP开放剂组及KATP开放剂+阻断剂组,每组5只.应用线栓法制备大鼠大脑中动脉缺血模型,应用TUNEL法检测神经元凋亡,应用免疫组化方法检测Bcl-2及Bax蛋白表达,同时观察神经功能缺损评分.结果 KATP开放剂组与对照组及KATP开放剂+阻断剂组相比,神经功能缺损程度显著减轻(P＜0.05),神经元凋亡数显著减少(P＜0.01),Bcl-2蛋白表达显著增多,Bax蛋白表达显著减少(P＜0.01),对照组与与KATP开放剂+阻断剂组之间无显著性差异.结论 KATP通道开放剂能显著增加脑缺血再灌注后Bcl-2蛋白表达,减少Bax蛋白表达,抑制神经元凋亡,改善神经功能缺损程度,对脑缺血再灌注损伤发挥保护作用.     

荔枝核总黄酮对肝纤维化大鼠肝细胞Bcl-2/Bax表达的影响

目的:研究荔枝核总黄酮(total flavone from Litchi Chinensis Sonn,TFL)对二甲基亚硝胺(dimethylnitrosamine,DMN)肝纤维化大鼠肝细胞凋亡的影响及作用机制.腔注射制备大鼠肝纤维化模型,造模的同时,TFL干预组分别以高、低剂量的TFL灌胃6wk进行干预治疗,空白对照组、秋水仙碱组分别以生理盐水、秋水仙碱灌胃作为阴阳性对照.HE及Masson染色观察肝纤维化程度;免疫组织化学二步法检测Bcl-2、Bax的表达;测定血清ALT、AST的水平.结果:模型组大鼠肝组织中Bcl-2、Bax的表达较正常组显著升高(P=0.000),TFL高、低剂量给药组及秋水仙碱组Bcl-2的表达较模型组升高(P=0.000,0.047,0.021),Bax的表达较模型组降低(P=0.000,0.014,0.007),TFL高剂量组与低剂量组比较Bcl-2的表达升高(P=0.018),Bax的表达显著降低(P=0.002).Bcl-2、Bax在秋水仙碱组与TFL低剂量组中的表达无显著性差异(P=0.726,0.767).肝纤维化严重程度与Bax的表达显著正相关(P=0.000);与Bcl-2的表达负相关(P=0.000).空白对照组、TFL高低剂量给药组及秋水仙碱组血清ALT、AST均明显低于模型组,具有显著性差异(P=0.000).低剂量组与秋水仙碱组无显著性差异(P=0.597,0.669).结论:TFL具有较好的抗肝纤维化和改善肝功能的作用,并推测这种作用可能与上调Bcl-2、下调Bax的表达,抑制肝细胞的凋亡有关.     

Differential expression of Bcl-2 and Bax during gastric ischemia-reperfusion of rats

AIM: To investigate expression of Bcl-2 and Bax in gastric ischemia-reperfusion (GI-R) and involvement of extracellular signal-regulated kinase (ERK) 1/2 activation. METHODS: The GI-R model was established by ligature of the celiac artery for 30 min and reperfusion in SpragueDawley rats. Rats were assigned to groups in accordance with their evaluation period: control, 0, 0.5, 1, 3, 6, 24, 48, and 72 h. Expression and distribution of Bcl-2 and Bax proteins were analyzed by immunohistochemistry and western bl...     

茶多酚对大鼠肝脏缺血-再灌注损伤的保护作用

目的探讨茶多酚对大鼠肝脏缺血再灌注损伤的保护作用及其机制。方法健康雄性SD大鼠30只，随机均分为4组：假手术正常对照组6只；肝脏缺血再灌注损伤模型组8只；茶多酚低浓度于预组8只（75mg／kg）；茶多酚高浓度于预组8只（150mg／kg）．缺血30min再灌注60min检测肝组织MDA含量、GSH-PX活性及血浆ALT含量。光镜下比较各组肝组织损伤情况。结果肝缺血再灌注模型组ALT、MDA含量明显高于假手术正常对照组（P〈0．01），GSH-PX活力则降低（P〈0．01）；茶多酚低浓度及高浓度组ALT，MDA含量均明显低于肝缺血再灌注模型组（P〈0．01），而GSH-Px活力均高于肝缺血再灌注模型组（P〈0．01）；光镜观察茶多酚低浓度及高浓度预处理组肝细胞损伤明显小于肝缺血再灌注模型组。结论茶多酚对大鼠肝脏缺血再灌注损伤具有显著的保护作用。     

刺五加对脑出血大鼠细胞凋亡的影响

目的 观察刺五加(AS)对脑出血(ICH)大鼠脑细胞凋亡及其对凋亡调控蛋白Bcl-2、Bax的影响及对ICH脑组织的保护作用.方法 雄性Wistar大鼠随机分为正常组、假手术组、模型组与治疗组.治疗组又分为AS大剂量组和小剂量组.用胶原酶注入大鼠尾状核建立ICH模型.治疗组给予AS干预,在不同时间点处死大鼠,测定血肿周围组织细胞凋亡、Bcl-2和Bax水平.结果 AS治疗组分别于12 h、1、3、7 d凋亡细胞低于模型组(P<0.01,P<0.05).AS治疗组Bcl-2水平分别于12 h、1、3、7 d表达高于模型组(P＜0.01,P＜0.05).Bax于12 h、1、3、7 d时AS治疗组表达低于模型组(P＜0.01,P＜0.05).结论 AS能明显减少ICH后神经细胞凋亡,升高Bcl-2表达水平,降低Bax表达,保护ICH后神经细胞.     

吡格列酮对成骨细胞Bax、Bcl-2蛋白表达的影响

目的 研究吡格列酮对成骨细胞增殖及凋亡的影响,并进一步了解其凋亡发生机制.方法 以MC3T3-E1成骨细胞株为实验对象,分别用0、5、10、20、30、40 μmol/L吡格列酮干预,观察细胞活性、细胞周期及凋亡率的变化,同时检测细胞Bcl-2,Bax蛋白表达.结果 随着浓度增加,成骨细胞的活性逐渐降低;与对照组相比,G0/G1,G2/M期细胞增多,S期细胞明显减少;凋亡率在5、10 μmol/L时低于对照组,30、40 μmol/L较对照组显著增高;Bax表达在10 μmol/L时明显减弱,20 μmol/L时回复到正常,30、40μmol/L较对照组显著增强;Bcl-2表达在浓度≤20 μmol/L时显著增强;对于Bax/Bcl-2相对表达强度与细胞凋亡率做相关性分析,两者呈显著性正相关(n=15,r=0.796,P＜0.01).结论 吡格列酮在低浓度抑制成骨细胞凋亡,对细胞起保护作用,较高浓度则促进细胞凋亡,Bax/Bcl-2参与其凋亡机制,并可能起关键调控作用.吡格列酮抑制成骨细胞DNA合成,抑制细胞增殖,导致细胞活性下降.

Abstract：

Objective To investigate the effects of pioglitazone on osteoblast proliferation and apoptosis.Methods MC3T3-E1 mouse osteoblastic cells were treated with 0, 5, 10, 20, 30, and 40 μmol/L pioglitazone for 24 h. Cell viability was measured by MTT, cell cycle and apoptosis were inspected with flow cytometry, the expressions of Bcl-2 and Bax proteins were examined via immuno-chemical staining. Results Survival of osteoblasts decreased in a dose-dependent manner. Compared with the control group, the cells in the G0/G1 and G2/M stages increased, while the cells in S stage decreased significantly. The percentage of apoptosis at 5 and 10 μmol/L were lower than that of the control group(P ＜ 0.05), While it was increased significantly at 30 and 40 μmol/L(P ＜0.01). Bax expression was attenuated at 10 μmol/L(P＜0. 01), returned to normal by 20 μmol/L, and was increased by 30 and 40 μmol/L(P ＜ 0. 01). Bcl-2 expression was enhanced at the dose ≤ 20 μmol/L(P ＜0.01). Positive correlation was found between the death rate and the expression intensity of Bax/Bcl-2(n = 15, r=0.796, P＜0.01). Conclusions Pioglitazone inhibits apoptosis of osteoblasts at low concentrations and protects the cells, but promotes their apoptosis at higher concentration, Bax/Bcl-2 may play an important role in mediating the piglitazone-induced apoptosis of osteoblasts. It inhibits DNA synthesis and cell proliferation.