骨形成蛋白2及骨形成蛋白4在牙胚发育中的时空表达及意义

牙齿发育初期和后期起调节作用的一些信号分子中,骨形成蛋白是与骨和牙齿形成相关的生长因子,作为形态生成信号在牙齿发育不同时期调控上皮与间充质间相互作用。牙胚发育过程中,BMP-2、BMP-4在牙胚发育各个时期的表达提示其在牙胚发育中的作用。研究表明,BMP-2、BMP-4作为上皮-间充质相互作用的继发调节信号参与牙齿发育,BMP-2参与调控牙乳头细胞分化形成成牙本质细胞;BMP-4与多种细胞因子相互作用参与调控牙型的形成。     

CD44在小鼠磨牙牙胚发育中的时空表达

目的：观察CD44在小鼠磨牙牙胚发育表达的时空顺序及分布,探讨CD44对牙齿发育的形态发生和细胞分化的作用及意义．方法：采用免疫组织化学方法,观察CD44在牙胚发育的蕾状期、帽状期、钟状形态发生期、分化期、分泌期、成熟期的表达．结果：在牙胚发育的蕾状期、帽状期,CD44在口腔上皮、牙板上皮、成釉器、牙乳头、牙囊呈弱阳性表达或无表达．在钟状期CD44在口腔上皮、牙板上皮强阳性表达;外釉上皮、星网状层、成牙本质细胞弱阳性表达;分泌期的成釉细胞和牙囊阳性表达．钟状分化期、分泌期、成熟期,中间层细胞CD44强阳性表达．结论：CD44参与牙齿形态发生及细胞分化,推测其在釉质矿化以及牙根和牙周组织的形成中起重要作用．     

经典瞬时受体电位通道1在大鼠牙胚发育过程中的表达

目的研究经典瞬时受体电位通道1(TRPC1)在大鼠牙胚发育过程中的表达并探讨其意义。方法 制备大鼠牙胚发育各阶段(蕾状期E14.5、帽状期E16.5、钟状期E18.5、钟状晚期P1及牙根形成期P7)标本,进行TRPC1的免疫组化研究。结果 TRPC1在牙胚发育过程中呈动态时空表达。在蕾状期增厚的牙板上皮,帽状期和钟状早期的内釉上皮和外釉上皮,钟状晚期的成釉细胞和前成牙本质细胞及牙根形成期的成牙本质细胞和成釉细胞均可见阳性信号表达,且呈增强趋势。结论 TRPC1可能是一种新的参与调控牙胚细胞的增殖分化和牙齿发育矿化的跨膜信号转导分子。     

转化生长因子β1和E-钙黏附分子在人牙胚发育过程中的表达及意义

目的：观察转化生长因子β1（TGF-β1）和E-钙黏附分子（E-cadherin）在人牙胚发育过程中的表达,探讨其对牙齿发育的作用及意义。方法：胎龄8~34周胎儿尸体36例,取连牙胚的下颌骨,制成4 μm厚的连续石蜡切片。采用SABC免疫组化方法,观察TGF-β1 和E-cadherin在人牙胚中的分布。结果：TGF-β1和E-cadherin在人牙胚发育的不同时期均有表达。TGF-β1在蕾状期和帽状期的牙蕾上皮、牙板、内釉细胞和外釉细胞均呈阳性表达,钟状期在内釉细胞、釉结、中间层、牙板、成釉细胞、成牙本质细胞呈强阳性表达,靠近成牙本质细胞的牙乳头细胞和牙囊呈阳性表达。E-cadherin在蕾状期和帽状期的牙蕾上皮、牙板上皮、钟状早期的成釉细胞、外釉细胞中呈阳性表达,在钟状中期成釉细胞、成牙本质细胞中呈强阳性表达,外釉上皮和靠近成牙本质细胞的牙乳头细胞中呈阳性表达,在钟状晚期接近硬组织处的成釉细胞、成牙本质细胞、上皮根鞘呈强阳性表达。结论：TGF-β1是参与牙胚细胞分化及形态发生的重要调节因子,E-cadherin与牙釉质和牙本质的发育、分泌及矿化密切相关。     

小鼠钟状期牙胚中Frizzled蛋白的表达

目的 观察牙胚发育钟状期时Frizzled蛋白的表达情况,探讨Wnt/Frizzled信号分子的作用及机制.方法 取胚胎17 d和19 d的胎鼠,另取生后2 d的幼鼠,分别制作下颌第1磨牙的切片,运用免疫荧光技术显示Frizzled蛋白的阳性分布部位,并在荧光显微镜下观察.结果 胚胎17 d时Frizzled蛋白在成釉器的内、外釉上皮有弱阳性分布,胚胎19 d时在前成釉细胞和前成牙本质细胞的顶端有Frizzled蛋白的阳性表达,生后2 d的标本上成釉细胞和成牙本质细胞的顶端Frizzled蛋白呈强阳性表达.结论 Wnt/Frizzled信号分子参与了成釉细胞和成牙本质细胞的分化过程的调节.     

转化生长因子β3 mRNA在小鼠磨牙牙胚发育过程中的表达

目的:探讨转化生长因子β3(TGFβ3)mRNA在小鼠磨牙牙胚发育过程中的表达及其意义。方法:制备小鼠磨牙各发育阶段标本,用原位杂交分析TGFβ3mRNA在牙胚中的表达与分布。结果:TGFβ3mRNA在小鼠磨牙牙胚不同发育阶段呈时间-空间特异性模式表达。TGFβ3mRNA在蕾状期和帽状期的上皮强表达,在牙胚发育晚期的成牙本质细胞和成釉细胞的表达随细胞分化程度而增强。结论:TGFβ3mRNA在牙形态发生过程中可能通过自分泌和旁分泌机制协同调控上皮-间充质相互作用及成牙本质细胞和成釉细胞的分化。     

BMP4mRNA在大鼠牙胚发育中的表达

目的 研究BMP4mRNA在胚胎SD大鼠牙胚中的表达,探讨BMP4mRNA在牙胚发育中的调控作用和意义.方法 建立和制备sD大鼠胚胎时期13～19 d等多时间点的牙胚发育模型,用HE染色对牙胚发育的时空变化进行组织学观察以确定牙胚发育的时期,再用原位分子杂交检测BMP4 mRNA在牙胚发育中的表达.结果 BMP4 mRNA阳性细胞在SD大鼠牙胚发育的不同时期均有表达,而且规律性地出现在牙上皮和牙乳头的外胚间充质细胞中.结论 BMP4在牙胚发育中的表达特点表明,BMP4可能参与诱导外胚间充质细胞聚集,诱导细胞增殖、分化,诱导成牙本质细胞分泌基质.     

鼠切牙牙胚发育晚期Shh及其受体的基因表达

目的 :观察信号分子Shh及其受体Ptc1、Ptc2在小鼠下颌切牙牙胚形态发育晚期的基因表达 ,以探讨Shh信号路径在细胞分化中的作用。方法 :制备昆明小鼠下颌切牙形态发育晚期标本 (E18.5～P 1.5 ) ,常规HE染色观察组织形态。以Shh、Ptc1、Ptc2cDNA为模板体外转录合成地高辛标记的cRNA探针 ,原位杂交法分析Shh、Ptc1、Ptc2mRNA在牙胚中的表达与分布。结果 :Shh与Ptc2mRNA表达方式相近 ,在钟状期切牙唇侧的前成釉细胞和中间层细胞呈阳性表达。Ptc1mRNA在钟状期切牙唇侧的前成釉细胞、中间层细胞及成牙本质细胞均呈阳性表达。结论 :在切牙牙胚形态发育晚期 ,Shh可能通过自分泌途径和旁分泌途径 ,参与了唇侧成釉细胞和成牙本质细胞分化。     

大鼠牙胚发育过程中釉原蛋白含量在空间和时间上的变化

目的:研究随着大鼠牙胚的发育，釉原蛋白(Am)在空间和时间上的变化。方法：以重组、纯化的大鼠釉原蛋白为抗原。混入完全/不完全弗氏佐剂，免疫新西兰大白兔；用双向免疫扩散法到抗体效价，将获得的多克隆抗血清经硫酸胺初步纯化后，用Western blot和免疫组化检测大鼠牙胚Am的组织表达特异性。结果：Western blot显示：在大鼠牙胚组织总蛋白中有特异性表达，而在肝、脑、肾组织中没有表达。免疫组化检测，在成釉细胞和发育早期的釉基质中有Am的表达，而在成牙本质细胞和成熟牙釉质、牙本质中无表达。结论：釉原蛋白的表达具有严格的空间和时间依赖性，在牙胚发育早期高表达而在发育后期和已矿化期表达低或无表达。     

大鼠切牙生长发育的组织学和免疫组织化学研究

目的：探讨釉质发育中釉器细胞的形态分化与其功能分化的关系,研究成熟期成釉细胞的SA部与RA部的形态在功能上的意义。方法：采用大鼠进行心脏灌流固定、Epon、GMA树脂包埋,半薄切片技术,后进行甲苯氨蓝和组织化学染色,观察大鼠切牙发育组织形态学变化以及牙釉质蛋白的分布规律。结果：大鼠的牙胚发育分为增殖期、分化期、成熟期。在成熟期成釉细胞呈特异的周期性变化,即SA部和RA部交替出现。组织化学研究结果显示在釉质形成期,釉质蛋白大部分留在釉基质层,也有一部分向牙本质内扩散到牙本质、牙本质小管以及造牙本质细胞层内。结论：①大鼠切牙釉器发育的增殖期、分化期、成熟期分别与人牙的蕾状期、帽状期、钟状期相似。成熟期成釉细胞的RA部与无机质的注入有关系,SA部与水和蛋白质的脱去有关系。②关于牙釉质蛋白向牙本质侧的扩散,可能是起到促进成牙本质细胞的分化和诱导牙本质的钙化的作用。     

细胞极性相关蛋白CDC42和PAR3在小鼠牙胚发育过程中的表达

目的：研究细胞极性相关蛋白CDC42和PAR3在小鼠牙胚发育过程中的表达,探讨其在牙胚发育中的可能作用。方法：取13.5、14.5、16.5和18.5d（E13.5、E14.5、E16.5和E18.5）的小鼠胚胎以及出生后1和5d（PN1和PN5）的小鼠,分离头部,固定、脱钙、脱水、石蜡包埋、切片,HE染色观察牙胚的组织形态表现,采用免疫组织化学染色方法观察CDC42及PAR3在牙胚发育过程中的表达。结果：HE染色观察,E13.5~E18.5分别为小鼠牙胚发育的蕾状期、帽状期、钟状早期和钟状晚期,PN1小鼠的牙胚中可见分化成熟的成牙本质细胞和成釉细胞,PN5小鼠牙胚可见牙冠部发育完成。免疫组织化学染色,CDC42在E13.5、E14.5和E16.5小鼠牙胚中有广泛表达,在E18.5小鼠牙胚中表达较E13.5、E14.5和E16.5减少,在PN1和PN5小鼠牙胚中主要表达于成牙本质细胞和成釉细胞的分泌端;PAR3弱表达于E13.5和E14.5小鼠牙胚,在E16.5和E18.5小鼠牙胚上皮处表达明显增强,在PN1和PN5小鼠牙胚中表达较E18.5减弱。结论：CDC42和PAR3参与小鼠牙发育的过程,在牙胚发育早期可能参与小鼠牙胚的增殖及迁移,在牙胚发育晚期可能参与了成牙本质细胞和成釉细胞的分化,尤其在成牙本质细胞和成釉细胞极性的形成与维持中可能具有重要作用。     

ICR小鼠下颌第一磨牙牙胚发育的动态组织学观察

目的了解ICR小鼠下颌第一磨牙牙胚的发育时序特点,为使用小鼠研究牙齿发育机制和相关影响因素提供实验基础。方法分别取E(胚胎)11.5、E12.5、E13.5、E14.5、E15.5、E16.5、E17.5和E18.5 d的胎鼠和PN(出生后)2 d的新生小鼠的头部或下颌骨,固定脱钙包埋后行连续切片,进行HE染色,在显微照相系统下进行观察记录,分析ICR小鼠磨牙牙胚发育的动态变化规律。结果 E11.5 d为牙胚发育始动,E12.5 d牙胚向蕾状期过渡,E13.5 d进入蕾状期,帽状期为E14.5~E15.5 d,钟状期开始于E16.5 d,出生后2 d牙体硬组织开始逐渐形成。结论 ICR小鼠胚胎11 d至出生后第2天是研究下颌第一磨牙牙胚发育机制的最佳时机。     

小鼠磨牙牙胚发育过程中Versican之多糖链的时空变化

目的检测versican之多糖链在小鼠磨牙牙胚发育过程中的时空变化。方法取胎龄分别为E11.5,E12.0,E13.5,E15.0,E16.5和E18.5 d的ICR胎鼠头部,常规组织学处理,制备5μm厚矢状或冠状切片,用免疫组织化学方法检测versican核心蛋白与其硫酸软骨素多糖链在下颌第一磨牙牙胚组织中的时空表达。结果从小鼠下颌第一磨牙牙胚开始发生到钟状晚期,versican核心蛋白与4-硫酸软骨素在牙源性上皮及其衍生组织共表达。在牙乳头间充质细胞中versican核心蛋白开始与6-硫酸软骨素共表达,从钟状早期4-硫酸软骨素开始在内釉细胞深层的牙乳头间充质细胞间表达,且其与6-硫酸软骨素呈互补表达模式。结论 versican之硫酸软骨素多糖链在牙胚发生过程中硫酸化模式呈现时间-空间特异性改变,这种特异性改变可能与小鼠磨牙牙胚的形态发生以及细胞增殖与分化密切相关。     

转化生长因子β3在小鼠牙胚钟状晚期以后发育中的表达和分布

目的:观察转化生长因子β3(transforming growth factor β3,TGF-β3)在小鼠牙胚钟状晚期以后发育中的表达分布,探讨其在小鼠牙胚钟状晚期以后发育中的作用.方法:取近交系BALB/C小鼠出生后4 d (4 days postnatal,4dpn)、11 d (11dpn)及18 d (18d...     

小鼠成牙关键调控基因的筛选与功能验证实验研究

  目的  筛选小鼠成牙关键基因,并验证关键基因对羊膜上皮细胞（WISH）成牙诱导分化的能力。  方法  通过免疫组化染色、实时荧光定量PCR（RT-qPCR）检测骨形成蛋白4（BMP4）、成纤维细胞生长因子8（FGF8）、音猬因子（SHH）、淋巴增强因子（LEF1）4种分子蛋白和基因在小鼠早期牙胚发育过程〔小鼠胚胎发育第10.5天(E10.5)、E11.5、E14.5〕中的时空差异化表达,筛选可能的成牙关键基因;非牙源性上皮WISH成骨诱导培养3周,采用茜素红（ALZ）染色与RT-qPCR检测碱性磷酸酶（ALP）观察骨向分化能力;通过胚层重组实验进行组织重组,将BMP4蛋白加入重组组织块,并移植于小鼠肾被膜下,观察验证关键基因的蛋白能否诱导非牙源性上皮成牙分化。  结果  免疫组化染色和RT-qPCR结果证实E10.5胎鼠BMP4蛋白和基因在第一、第二腮弓上皮存在差异性表达,且从E10.5~E14.5其表达与成牙能力从上皮向间充质的转移一致;FGF8蛋白和基因虽在第一、第二腮弓上皮存在差异性表达,但其表达与成牙能力的转移不一致;LEF1、SHH蛋白和基因在第一、二腮弓上皮不存在差异表达,且与成牙能力的转移不一致,因此,筛选出BMP4基因为可能的成牙关键基因。WISH成骨诱导3周,ALZ染色阳性,并形成钙结节,RT-qPCR检测ALP mRNA表达升高;胚层重组实验结果显示,加入外源性的BMP4蛋白可使第二腮弓间充质分别与第二腮弓上皮及WISH均有牙齿样结构形成。  结论  BMP4、FGF8、SHH、LEF1的蛋白和基因在小鼠牙胚早期发育过程中呈时空特异性表达;BMP4的蛋白和基因在第一、二腮弓上皮差异表达,且其蛋白可使与第二腮弓间充质重组的非牙源性上皮获得成牙能力。BMP4为可能的成牙关键基因。     

机械应力相关调控蛋白在小鼠磨牙发育中的时空表达

  目的  通过检测机械应力相关调控蛋白〔肌动蛋白纤维（F-actin）、非肌肉肌球蛋白ⅡB（non-muscle myosin ⅡB,NMⅡB）和细胞黏着斑蛋白Vinculin〕在牙发育过程的时空性表达,探究机械应力与牙早期发育之间可能的联系。  方法  以小鼠磨牙为研究模型,通过免疫荧光染色,检测构成化学机械系统的重要分子F-actin、NMⅡB和Vinculin在牙发育蕾状期、帽状期、钟状早期和钟状末期的表达。  结果  染色结果显示F-actin、NMⅡB和Vinculin均在牙发育各阶段广泛或局限性表达于牙上皮,其中F-actin亦稳定表达于间充质细胞中。荧光表达强度定量分析显示,F-actin和NMⅡB的表达均在牙发育早期阶段有明显上升,但分别于钟状早期和钟状末期回落,相邻发育阶段间的表达变化差异均有统计学意义（P<0.05）,而Vinculin的表达相对稳定,仅钟状末期较钟状早期有所升高（P<0.05）。  结论  机械应力参与牙早期发育过程。其中,F-actin可能在分散和传导机械应力的方面发挥重要作用,NMⅡB作用于牙发育中的牙上皮内陷及牙尖形成,Vinculin可响应力学刺激并与细胞黏附分子相互作用影响牙发育过程,而由肌动蛋白与肌球蛋白结合形成的肌动球蛋白复合体和细胞黏附分子在牙发育中的联系及具体作用机制依然有待进一步探究。