17β-雌二醇和二噁英对子宫内膜间质细胞表达趋化因子IL-8及其受体CXCR1 的调控作用

解析内外环境因素对子宫内膜间质细胞表达IL-8及其自分泌作用的调控。采用免疫组化法比较子宫内膜异位症患者异位灶和在位内膜CXCRI翻译水平表达;流式细胞术分析17β-雌二醇和二嗯英单独或联合作用对子宫内膜间质细胞表面CXCRI表达的调控作用;ELISA法分析17β-雌二醇和二嗯英单独或联合作用对子宫内膜间质细胞分泌IL-8的影响。结果显示CXCRI在子宫内膜异位症患者异位灶组织高表达。17β-雌二醇和二嗯英单独作用均抑制子宫内膜间质细胞表面CX—CR1的表达以及IL-8的分泌。二者联合作用能够上调CXCR1的表达,上调幅度与雌二醇浓度呈正相关;但进一步抑制了IL-8的分泌。雌激素与二嗯英对子宫内膜间质细胞复合作用抑制其IL-8的分泌及其自分泌作用;子宫内膜异位症患者腹腔液高水平IL-8并非由内外雌激素样物质直接作用于异位灶子宫内膜间质细胞所致。     

17β-雌二醇和二噁英对子宫内膜间质细胞表达趋化因子IL-8及其受体CXCR1的调控作用

解析内外环境因素对子宫内膜间质细胞表达IL-8及其自分泌作用的调控。采用免疫组化法比较子宫内膜异位症患者异位灶和在位内膜CXCR1翻译水平表达;流式细胞术分析17β-雌二醇和二噁英单独或联合作用对子宫内膜间质细胞表面CXCR1表达的调控作用;ELISA法分析17β-雌二醇和二噁英单独或联合作用对子宫内膜间质细胞分泌IL-8的影响。结果显示CXCR1在子宫内膜异位症患者异位灶组织高表达。17β-雌二醇和二噁英单独作用均抑制子宫内膜间质细胞表面CX-CR1的表达以及IL-8的分泌。二者联合作用能够上调CXCR1的表达,上调幅度与雌二醇浓度呈正相关;但进一步抑制了IL-8的分泌。雌激素与二噁英对子宫内膜间质细胞复合作用抑制其IL-8的分泌及其自分泌作用;子宫内膜异位症患者腹腔液高水平IL-8并非由内外雌激素样物质直接作用于异位灶子宫内膜间质细胞所致。     

雷藤舒(LLDT-8)对成纤维样滑膜细胞分泌趋化因子的影响

研究(5R)-5-羟基雷公藤内酯醇(雷藤舒,LLDT-8)对TNF-α联合IL-17诱导类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)成纤维样滑膜细胞(fibroblast-like synoviocytes,FLS)分泌趋化因子GRO-α、ENA-78、MCP-1、MIP-1α和RANTES的影响。ELISA法检测FLS上清液中GRO-α、ENA-78、MCP-1、MIP-1α和RANTES的浓度;RT-PCR法检测FLS中GRO-α、ENA-78、MCP-1、MIP-1α和RANTES mRNA的表达。结果显示LLDT-8可显著抑制TNF-α联合IL-17诱导的FLS上清液中GRO-α、ENA-78、MCP-1、MIP-1α和RANTES的表达;也可有效抑制TNF-α联合IL-17诱导的FLS GRO-α、ENA-78、MCP-1、MIP-1α和RANTES mRNA的表达。该研究提示LLDT-8通过抑制FLS产生GRO-α、ENA-78、MCP-1、MIP-1α和RANTES而在RA的治疗中发挥抗炎作用。     

人IL-31基因克隆、表达及在皮肤炎症中的作用

目的 克隆人IL-31基因,构建原核表达载体,并诱导其在大肠杆菌中表达,研究hIL-31蛋白与皮肤炎症的关系.方法 采用RT-PCR克隆人IL-31基因,将其克隆到原核表达载体pET28a( ),并通过IPTG诱导目的基因在大肠杆菌中表达,用该目的蛋白刺激人表皮角质细胞HaCaT,RT-PCR检测趋化因子MIP-3β、TARC及TCA-3(I-309)mRNA的表达;小鼠皮内注射该目的蛋白,观察局部炎症表现,皮肤标本HE染色观察皮肤炎性特征,采血进行白细胞计数及分类,ELISA法检测血清IL-1βIL-6和TNF-α水平,流式细胞仪分析胸腺及脾脏T细胞亚群.结果 成功获得495bp的人IL-31基因,原核表达质粒构建正确,IPTG诱导目的基因在大肠杆菌中大量表达;该目的蛋白可刺激HaCaT表达趋化因子MIP-3β、TARC、I-309;小鼠皮肤注射部位有脱毛,HE染色可见炎性细胞浸润,外周血白细胞总数增加,中性粒细胞比例增高,血清IL-1β、IL-6和TNF-α水平增高,脾脏CD4 T细胞百分比增高,CD8 T细胞百分比减少.结论 人IL-31基因克隆及原核表达已获成功,hIL-31蛋白可刺激HaCaT细胞表达MIP-3β、TARC、I-309,诱导小鼠皮肤炎症反应.     

白芍总苷对子宫内膜异位症大鼠异位组织HIF-1α/VEGF信号通路的影响

目的 探究白芍总苷对子宫内膜异位症（EMs）大鼠缺氧诱导因子1α(HIF-1α)/血管内皮生长因子（VEGF通路的影响。方法 取SD大鼠随机分为假手术组、模型组、白芍总苷组、HIF-1α激动剂（DMOG）组、HIF-1α/VEGF信号通路阻断剂（YC-1）组、白芍总苷+DMOG组，用自体子宫内膜移植法建立EMs模型。各组大鼠持续给药4周后，比较病灶体积，取异位内膜组织，H-E法检测各组子宫内膜组织形态；免疫组化法检测HIF-1α、VEGF、CD34表达；蛋白免疫印迹法（western blot）检测促血管生成素2(Ang-2)、基质金属蛋白酶9(MMP-9)、核转录因子κB(NF-κB)、磷酸化NF-κB(p-NF-κB)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)、前列腺素E2(PGE2)、雌激素受体β(ERβ)、基质环氧酶2(COX-2)、凋亡信号调节激酶1(ASK1)表达水平。结果 与假手术组相比，模型组大鼠异位内膜病灶体积增大，异位内膜组织腺体及间质细胞增多，血管增生严重，HIF-1α介导的血管生成、雌激素分泌相关通路、炎症反应等...     

雌激素对子宫内膜异位症在位内膜间质细胞巨噬细胞移动抑制因子表达的调控作用*

 目的： 探讨雌激素对子宫内膜异位症在位内膜间质细胞巨噬细胞移动抑制因子（MIF）表达的调控作用及其意义。方法: 用免疫组化鉴定子宫内膜间质细胞,RT-PCR及蛋白免疫印迹法测定MIF mRNA及蛋白的表达。结果: 子宫内膜间质细胞经雌激素作用后分泌MIF mRNA及蛋白水平明显增高。子宫内膜异位症组MIF 上调水平明显高于正常组。结论: 子宫内膜异位症内膜间质细胞中MIF的表达对雌激素的刺激呈现超敏状态,子宫内膜间质细胞内MIF表达升高,可能促进子宫内膜异位症的发生发展。     

腹膜间皮细胞在小鼠子宫内膜细胞刺激腹腔微环境中作用

目的：探讨腹腔微环境受子宫内膜细胞刺激改变中腹膜间皮细胞的作用及其对子宫内膜异位症发病机制的意义。方法： 注射小鼠子宫内膜上皮和间质细胞入小鼠腹腔，酶联免疫吸附法（ELISA）检测注射后4、24和72 h时点腹腔冲洗液细胞因子MCP-1/JE、IL-1α和IL-6蛋白表达，同步逆转录-聚合酶链式反应技术 (Real-Time RT-PCR) 检测腹膜组织 (主要含腹膜间皮细胞) 和腹腔巨噬细胞的细胞因子MCP-1/JE、IL-1 α和IL-6 mRNA表达。结果: 子宫内膜细胞刺激腹腔细胞因子蛋白含量迅速一过性升高，4 h时点为表达高峰，腹膜细胞因子基因表达与腹腔液蛋白表达同步，腹腔巨噬细胞基因表达高峰滞后于腹腔液蛋白表达。子宫内膜上皮细胞刺激腹腔炎症反应作用强于间质细胞。结论: 子宫内膜细胞刺激腹腔发生非特异性炎症反应，腹膜间皮细胞可能是其细胞因子效应的主要来源，提示腹膜在子宫内膜异位症中除作为病灶依附体外，还可能在腹腔微环境无菌性炎症反应中起重要作用。     

HOXA10基因在子宫内膜的周期性表达及性激素、肝素结合生长因子对其表达的调节

目的通过研究HOXA10基因在正常子宫内膜腺上皮细胞和间质细胞的周期性表达规律,及雌激素、孕激素、肝素结合生长因子(HB-EGF)对HOXA10基因表达的调节,探讨HOXA10基因在胚胎种植中的意义。方法取子宫内膜40例,分离出子宫内膜腺上皮细胞及间质细胞分别培养,然后用RT-PCR检测HOXA10基因的表达规律。体外培养子宫内膜间质细胞,按实验目的分别加入雌激素、孕激素、雌孕激素联合、雌孕激素RU486联合、HB-EGF刺激48h后,采用RT-PCR测定各组细胞中HOXA10基因的表达。结果 1.HOXA10基因在子宫内膜腺上皮细胞和间质细胞中的表达规律相似,均具有周期性表达,且在分泌中期(着床期)的表达水平最高。2.雌、孕激素及HB-EGF均能促进HOXA10基因的表达。结论 HOXA10基因在分泌中期表达水平最高,且受雌、孕激素、HB-EGF等的调节。     

雌二醇通过调节上皮细胞系的旁分泌促进前列腺间质细胞增殖和分化

目的： 研究雌二醇通过调节上皮细胞的旁分泌对前列腺间质细胞增殖、分化和胞外基质蓄积的作用。方法： 雌二醇处理前列腺增生上皮细胞系BPH-1，用收集的条件培养液（CM）培养人前列腺间质细胞，MTT法检测细胞的增殖；用实时定量RT-PCR检测细胞中smoothelin、纤维黏连蛋白、Ⅳ型胶原和转化生长因子-β₁（TGF-β₁）mRNA的表达水平；用Western blotting检测细胞平滑肌肌球蛋白重链（SM-MHC）的表达；用放射性免疫法和ELISA分别检测Ⅳ型胶原、纤维黏连蛋白和TGF-β₁的蛋白水平。结果： 雌二醇能够上调BPH-1细胞中TGF-β₁的表达和分泌；经雌二醇刺激的BPH-1 CM能促进间质细胞的增殖；雌二醇刺激的BPH-1 CM对平滑肌细胞特异蛋白（smoothelin和SM-MHC）表达的促进作用较未经雌二醇刺激者更加明显；TGF-β₁中和抗体可以抑制BPH-1 CM对间质细胞中Ⅳ型胶原和SM-MHC的促表达作用。结论： BPH-1 可通过分泌TGF-β₁促进间质细胞的分化和胞外基质的蓄积；雌二醇可通过上调BPH-1 TGF-β₁的分泌进一步促进间质细胞的分化；雌二醇还可通过调节BPH-1分泌的某种活性因子促进间质细胞的增殖。     

雌激素受体不同亚型在卵巢子宫内膜异位症在位内膜与异位内膜中的表达及其意义

目的 研究雌激素受体(ER)不同亚型在子宫内膜异位症的在位和异位内膜中的表达,以寻找其在不同病灶中的分布规律,探讨子宫内膜异位症的发病机制.方法 收集解放军总医院2004年1月-2006年12月行手术治疗的卵巢子宫内膜异位症石蜡标本,包括卵巢子宫内膜异位囊肿60例及其在位内膜60例(增生期各30例、分泌期各30例)以及正常子宫内膜30例(增生期和分泌期各15例).采用免疫组织化学(EnVision)方法检测上述组织中ERα和ERβ的表达.染色结果半定量化,并分析比较各种组织间的表达差异.结果 各组中,ERα和ERβ在腺上皮的表达与它们在间质细胞中的表达呈正相关.ERα蛋白在不同部位的表达:在位内膜ERα的表达(腺上皮和间质细胞阳性率分别为73.3%和76.7%)高于卵巢子宫内膜异位囊肿(腺上皮和问质细胞阳性率分别为43.4%和46.7%)和正常内膜的表达(腺上皮和间质细胞阳性率分别为56.7%和50.0%),均P<0.05.ERβ蛋白在不同部位的表达:卵巢子宫内膜异位囊肿(腺上皮和间质细胞阳性率分别为90.0%和76.7%)高于在位子宫内膜的表达(腺上皮和间质细胞阳性率分别为68.0%和63.3%),后者又高于正常子宫内膜(腺上皮和间质细胞阳性率分别为36.7%和26.7%),P均<0.05.在位内膜的ERα和ERβ蛋白表达在增殖期均高于分泌期,P均<0.05;异位内膜增殖期和分泌期的表达差异无统计学意义.ERα和ERβ蛋白在不同部位表达的比较:在正常内膜中ERα的表达略高于ERβ,但差异无统计学意义,P>0.05;卵巢子宫内膜异位囊肿中ERβ的表达高于ERα,P<0.05;而在位内膜中两种亚型表达差异无统计学意义.结论 子宫内膜异位症患者在位子宫内膜及异位内膜均有ERα和ERβ的表达,但与正常子宫内膜相比,在卵巢子宫内膜异位囊肿中ERβ表达占优势,而ERα表达受限.ERα和ERβ在不同组织中的分布及表达水平与子宫内膜异位症的发生和发展有着密切关系.     

异位灶微环境子宫内膜间质细胞对调节性T细胞的功能影响

本研究探讨了子宫内膜异位症异位病灶中调节性T细胞(Treg细胞)的功能调节及其分子机制。采用原代分离培养子宫内膜间质细胞(ESC),密度梯度离心法及磁珠分选法分离获得健康人外周血Treg细胞,分别建立ESC,Treg细胞单独培养,及ESC-Treg细胞共培养体系;并观察外源性促炎细胞因子白介素1-β(IL-1β)或肿瘤坏死因子-α(TNF-α)对调节性T细胞功能的影响。酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测培养上清中转化生长因子-β1(TGF-β1)分泌水平;流式细胞术分析Treg细胞表面分子CTLA-4的表达以及胞内转录因子Stat3、Stat6和Foxp3的表达。结果显示:(1)ESC能够促进Treg细胞转录因子Foxp3及表面分子CTLA-4的表达。(2)ESC能够明显促进Treg细胞分泌TGF-β1;但IL-1β与TNF-α对TGF-β1的分泌没有明显的促进作用。(3)ESC明显上调Treg细胞转录因子Stat3和Stat6的表达;IL-1β和TNF-α均能够进一步增强对Stat3的表达;IL-1β还能进一步增强Stat6的表达。我们的研究提示,子宫内膜异位症异位病灶微环境中的ESC能够增强Treg细胞的免疫抑制能力,从而有利于异位内膜的种植生长。     

子宫内膜异位症患者治疗前后血清IL-6、IL-18、IL-1β检测的临床意义

目的：探讨了子宫内膜异位症患者治疗前后血清白细胞介素-6（IL-6）、白细胞介素-18（IL-18）和白细胞介素-1β水平的变化及临床意义。方法：应用放免法和酶联法对38例子宫内膜异位症患者进行了血清IL-6、IL-18和IL-1β检测,并与35名正常健康人作比较。结果：在治疗前血清IL-6、IL-18和IL-1β水平均非常显著地高于正常人组（P〈0.01）,经治疗3个月后则与正常人组比较无显著性差异（P〉0.05）。结论：检测子宫内膜异位症患者血清IL-6、IL-18和IL-1β水平的变化对探讨其发病机理、预防和指导临床用药均有重要的临床价值。     

雌激素调控子宫内膜异位症基质细胞侵袭和迁移的机制研究

目的 探讨雌激素调节长链非编码RNA-339(lncRNA-339)对子宫内膜异位症(EMs)基质细胞侵袭和迁移的作用机制。方法 观察EMs子宫内膜中lncRNA-339的表达。用雌激素受体拮抗剂ICI、白细胞介素-1β(IL-1β)抑制剂ACZ885分别处理经雌二醇(E₂)刺激的人子宫内膜基质细胞系ThESCs。另外,E₂处理条件下对ThESCs细胞进行过表达或沉默lncRNA-339,并且过表达lncRNA-339后用ACZ885处理ThESCs细胞。用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测lncRNA-339的水平。Western blot检测ThESCs中IL-1β的水平,Transwell法检测ThESCs细胞的迁移率和侵袭率。结果 lncRNA-339在EMs子宫内膜中表达增加(P<0.05)。E₂或者过表达lncRNA-339都能促进ThESCs细胞中lncRNA-339和IL-1β的表达(P<0.05),促进细胞的迁移和侵袭(P<0.05)。而当抑制E₂、沉默l...     

硫辛酸抑制脂多糖诱导的星形胶质细胞细胞因子及趋化因子的表达

目的探讨硫辛酸(LA)对脂多糖(LPS)激活的星形胶质细胞分泌TNF-α、IL-1β、IL-6和IL-10及相关趋化因子的影响。方法分离并鉴定新生C57BL/6小鼠大脑皮质星形胶质细胞,1μg/mL LPS刺激第2代星形胶质细胞,100μg/mL LA进行干预,Griess法检测NO的分泌,ELISA检测TNF-α、IL-1β、IL-6和IL-10炎性因子的含量,反转录PCR检测炎症趋化因子CC亚族趋化因子配体20(CCL20),单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)和巨噬细胞炎性蛋白1α(MIP-1α)mRNA的表达。结果与正常组比较,LPS刺激星形胶质细胞后,NO、TNF-α、IL-1β、IL-6分泌显著升高,IL-10分泌下调(P0.05);LA能抑制LPS诱导的NO、TNF-α、IL-1β、IL-6的分泌,增加IL-10的分泌,与LPS组相比差异有统计学意义(P0.05)。LA能显著下调LPS所致的CCL20、MIP-1α、MCP-1 mRNA的分泌。结论 LA能抑制LPS激活星形胶质细胞所致的炎性反应,其作用与抑制炎性因子及趋化因子的分泌有关。     

Treg与促炎因子协同作用活化子宫内膜间质细胞Smad2信号通路

本研究探讨了异位病灶调节性T细胞(Treg)与促炎细胞因子IL-1β、TNF-α协同作用对子宫内膜间质细胞Smad2信号通路的活化作用及其分子机制。采用原代分离培养子宫内膜异位症(简称内异症)患者在位及异位子宫内膜间质细胞(endometrial stromal cell,ESC);流式细胞术和ELISA法分别检测腹腔液中Treg的比例和TGF-β1的水平;免疫组织化学法分析正常、在位及异位内膜间质细胞中P-Smad2和Smad2的表达水平;细胞内Western法分析ESC Smad2信号通路的活化状况。结果显示:(1)与非内异症者相比,内异症患者盆腹腔内具有更多数量的Treg和更高水平的TGF-β1,且与疾病的进展呈正相关。(2)内异症患者在位及异位内膜具有更高的P-Smad2和Smad2水平。(3)异位病灶微环境中的Treg能够通过分泌TGF-β1与IL-1β或TNF-α发挥协同作用,可能通过激活ERK和p38信号通路活化ESC Smad2信号通路。ESC Smad2信号通路的活化可能通过多种分子机制影响ESC的生物学活性,从而导致疾病的发生和发展。     

雌二醇通过与雌激素受体β结合抑制骨关节炎滑膜细胞的NF-κB通路发挥抗炎作用

目的探讨雌二醇在骨关节炎病程中对滑膜细胞产生抗炎作用的机制。方法分离并鉴定滑膜细胞,利用免疫荧光染色观察滑膜细胞表达雌激素受体β(ERβ)的情况;而后对滑膜细胞进行分组:空白对照组,10 ng/m L白细胞介素1β(IL-1β)处理组、雌二醇处理组(用10 ng/m L IL-1β预处理同时,添加10-7mol/L的雌二醇培养)、雌二醇联合雌激素受体阻断剂四氢大麻酚(THC)处理组(用10 ng/m L IL-1β预处理同时,添加10-7mol/L雌二醇和10-5mol/L THC),各组处理36 h。实时定量PCR检测滑膜细胞中核因子κB抑制蛋白α(IκBα)和IL-6的mRNA水平,Western blot法检测滑膜细胞中IκBα和IL-6的蛋白水平。结果骨关节炎滑膜细胞中有ERβ表达;IL-1β组IL-6的mRNA和蛋白水平表达均增高;IκBα蛋白水平降低,而mRNA水平升高,同时磷酸化IκBα蛋白水平升高;与IL-1β组相比,IL-1β联合雌二醇组,IL-6、IκBα、p-IκBα蛋白及mRNA水平下降。用IL-1β、雌二醇、雌激素受体阻断剂三者联合组,则可见IL-6、IκBα、p-IκBα蛋白及mRNA水平较IL-1β处理组无明显变化。结论雌二醇通过结合ERβ抑制NF-κB通路激活从而发挥抗炎作用。     

补肾健脾活血中药干预膝骨关节炎模型大鼠软骨细胞IL-1β/ERRα/SOX9/Col2α1信号通路的变化

文题释义：膝骨关节炎：是一种以膝关节软骨退变、破坏和骨质增生为主要特征的慢性关节病，多患于中老年人群，主要表现为膝关节疼痛，上下楼梯时疼痛加重，休息后缓解，局部肿胀，活动受限，晚期膝关节畸形，严重影响患者的生活质量。 雌激素：主要由卵巢分泌，分泌的雌激素进入血液循环发挥生物学效应，妇女绝经后卵巢功能衰退，雌激素分泌减少从而诱发膝骨关节炎。 背景：膝骨关节炎是最常见的退行性关节疾病，其发病率和致残率高，已严重影响患者的生活质量。研究发现，补肾健脾活血中药能够改善膝骨关节炎临床症状，但其具体机制仍未阐明。 目的：通过膝骨关节炎去势大鼠模型研究补肾健脾活血中药调节IL-1β/ERRα/SOX9/Col2α1信号通路治疗大鼠膝骨关节炎的作用机制。方法：6月龄SD雌性大鼠，随机分为空白对照组、模型组、实验组和阳性对照组，模型组、实验组和阳性对照组摘除卵巢及切除交叉韧带和内侧半月板制作去势大鼠膝骨关节炎模型，术后2周实验组采用补肾健脾活血中药灌胃，阳性对照组采用塞来昔布胶囊灌胃，空白对照组和模型组以生理盐水灌胃。连续灌胃6周后取血清及膝关节软骨组织，采用ELISA检测血清雌二醇含量，分别采用荧光定量PCR和Western blot检测关节软骨组织中IL-1β/ERRα/SOX9/Col2α1信号通路表达水平。结果与结论：与空白对照组比较，模型组白细胞介素1β表达量明显升高，雌二醇、雌激素受体相关受体α、SRY相关蛋白9、Ⅱ型胶原的α1链表达量明显降低(P < 0.05)；与模型组比较，实验组白细胞介素1β表达量明显降低(P < 0.05)，雌二醇、雌激素受体相关受体α、SRY相关蛋白9、Ⅱ型胶原的α1链表达量明显升高(P < 0.05)；与阳性对照组比较，实验组白细胞介素1β、雌激素受体相关受体α及Ⅱ型胶原的α1链表达量明显升高(P < 0.05)，SRY相关蛋白9表达量明显降低(P < 0.05)。实验结果表明，IL-1β/ERRα/SOX9/Col2α1信号通路参与膝骨关节炎软骨病变，补肾健脾活血中药可通过该机制发挥治疗作用。 ORCID: 0000-0002-5449-3942(霍少川) 中国组织工程研究杂志出版内容重点：组织构建；骨细胞；软骨细胞；细胞培养；成纤维细胞；血管内皮细胞；骨质疏松；组织工程     

HBV X蛋白即时高表达上调巨噬细胞分泌TNF-α和IL-1β

目的：将乙型肝炎病毒（HBV）X蛋白真核表达载体pcDNA3.1（＋）-HBx转染巨噬细胞,观察X蛋白即时高表达对巨噬细胞分泌细胞因子TNF-α、IL-1β的影响,为进一步研究HBVX蛋白的致病机制奠定实验基础。方法：将真核表达载体pcDNA3.1（＋）-HBx通过SuperFectTM脂转染试剂转染巨噬细胞24小时后,用LPS刺激巨噬细胞,利用Westernblot鉴定X蛋白在巨噬细胞中的表达,并用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测pcDNA3.1（＋）-HBx转染的巨噬细胞不同时间（12、24、48小时）培养上清液中细胞因子TNF-α、IL-1β的含量,统计软件SPSS13.0分析所得数据。结果：将真核表达载体pcDNA3.1（＋）-HBx转染巨噬细胞,Westernblot结果显示pcDNA3.1（＋）-HBx能在巨噬细胞中表达约17kD的目的蛋白,即X蛋白;ELISA法测定细胞上清液中TNF-α、IL-1β的含量,LPS刺激组及pcDNA3.1（＋）组与空白对照组有显著性差异（P〈0.01）,pcDNA3.1（＋）-HBx组与LPS刺激组及pcDNA3.1（＋）组有显著性差异（P〈0.01）,而LPS刺激组与pcDNA3.1（＋）组无显著性差异（P〉0.05）,即LPS可活化巨噬细胞分泌细胞因子,且X蛋白即时高表达可引起LPS诱导的巨噬细胞分泌TNF-α和IL-1β明显增加。结论：乙型肝炎病毒X蛋白即时高表达上调LPS刺激的巨噬细胞分泌TNF-α和IL-1β。     

腹腔巨噬细胞功能平衡对小鼠异位子宫内膜细胞清除的影响

目的探讨腹腔巨噬细胞功能平衡对小鼠腹腔微环境和腹腔异位子宫内膜细胞清除的影响。方法给小鼠、裸鼠腹腔注射子宫内膜上皮和间质细胞,不同时间观察腹腔募集巨噬细胞数,D iI-Ac-LDL鉴定分化巨噬细胞吞噬功能的清道夫受体(SR-A1)。同步反转录-聚合酶链技术(Real-Tim e RT-PCR)检测巨噬细胞的MCP-1/JE和IL-1αmRNA表达。结果腹腔注射子宫内膜细胞后的小鼠、裸鼠募集巨噬细胞增多,上皮细胞的刺激作用强于间质细胞。24 h点为腹腔巨噬细胞募集高峰、MCP-1/JE和IL-1α的基因表达高峰,免疫正常小鼠表达反应吞噬功能的巨噬细胞清道夫受体(SR-A1)强于免疫缺陷裸鼠。结论子宫内膜细胞募集腹腔巨噬细胞为一独立免疫防御反应,募集巨噬细胞的清道夫功能和细胞因子分泌功能的平衡可能对维持正常腹腔微环境和有效清除异位子宫内膜细胞起重要作用,这在内异症的发病机制中具有重要意义。     

抗瓜氨酸化肽特异性免疫复合物对类风湿关节滑膜细胞功能影响的研究

目的:研究类风湿关节炎(RA)患者血清抗瓜氨酸化肽特异性免疫复合物(ACPA-IC)对RA患者关节成纤维样滑膜细胞(FLS)增殖和分泌细胞因子功能的影响。方法:用PEG沉淀法提取RA患者血清免疫复合物(IC),ELISA法检测IC中ACPA-IC水平。用G蛋白免疫亲和层析法从6份ACPA-IC(+)RA血清、4份ACPA-IC(-)RA血清及10份正常人血清中提取IC。体外培养RA关节FLS;分别用RA ACPA-IC(+)提取物、ACPA-IC(-)提取物及健康人血清IC(C-IC)刺激FLS,用CCK-8(Cell Counting Kit-8)试剂检测FLS增殖情况,液态芯片技术检测不同来源IC刺激对FLS分泌IL-1β、IL-2、IL-6、IL-8、IL-10、IL-15、IL-17、TNF-α、GM-CSF、EGF、VEGF等11种细胞因子水平的影响。结果:RA患者ACPA-IC(+)提取物能够显著促进FLS增殖,与对照组IC比较,在培养24小时时间里,四种浓度(25、50、75和100μg/ml)的ACPA-IC都能显著促进FLS增殖。RA患者血清ACPA-IC(+)和ACPA-IC(-)提取物刺激FLS 24小时后,可诱导细胞分泌大量IL-6、IL-8和GM-CSF;其中ACPA-IC(+)组刺激FLS分泌GM-CSF和IL-8量均显著高于ACPA-IC(-)组和C-IC组,ACPA-IC(+)组刺激FLS分泌IL-6水平显著高于C-IC组,但与ACPA-IC(-)组无显著性差异。三组间刺激分泌IL-1β、IL-2、IL-10、IL-15、IL-17、TNF-α、EGF、VEGF等其他8种细胞因子含量均无显著性差异。结论:RA患者血清ACPA-IC可促进FLS增殖,并诱导其分泌IL-6、IL-8和GM-CSF等炎性细胞因子,进而进一步诱发滑膜炎症反应及骨质破坏。