铜绿假单胞菌对喹诺酮类药物耐药的分子机制研究

目的:研究铜绿假单胞菌对喹诺酮类药物耐药的分子机制,为临床抗感染治疗提供依据。方法:用PCR法检测染色体介导的喹诺酮类耐药基因gyrA、gyrB、parC、parE和质粒介导的喹诺酮类耐药基因qn-rA、qnrB、qnrC、qnrD、qnrS、qepA、aac(6’)-Ib-cr、oqxA和oqxB,并对gyrA和parC阳性结果进行测序分析。结果:98株耐环丙沙星的铜绿假单胞菌中未检出parE、qnrC和qnrS基因。gyrA、gyrB和parC的阳性率分别为96.9%、87.8%和75.5%。测序证实84株菌(85.7%)发生gyrA或parC基因突变。90株菌(91.8%)携带质粒介导的耐药基因,qnrA、qnrB、qnrD、qepA、aac(6’)-Ib-cr、oqxA和oqxB的阳性率分别为31.6%、86.7%、15.3%、11.2%、53.1%、8.2%和26.5%,其中qnrB和aac(6’)-Ib-cr具有高携带率。结论:染色体介导的喹诺酮类耐药基因突变以及质粒携带qnr、qepA、aac(6’)-Ib-cr和oqxAB耐药基因是铜绿假单胞菌耐喹诺酮类药物的主要机制。首次在铜绿假单胞菌中发现qnrB基因和qnrD基因。     

绍兴地区肠道外气单胞菌对喹诺酮类抗菌药物的耐药机制

目的了解浙江绍兴市人民医院肠道外分离气单胞菌对喹诺酮类抗菌药物的耐药现状,及其主要耐药机制。方法对临床分离的50株肠道外气单胞菌菌株进行喹诺酮类药物敏感性测试,用PCR扩增喹诺酮类耐药基因gyrA、parC、qnrA、qnrB、qnrS、qepA和aac(6')-Ib-cr,基因序列比对分析该地区gyrA和parC基因的突变情况,分析肠道外气单胞菌对喹诺酮类抗菌药物的耐药表型和耐药基因的关联性。结果绍兴地区肠道外气单胞菌对萘啶酸(NA)的耐药率已高达82.0%(41/50),对环丙沙星(CIP)和左氧氟沙星(LVX)的耐药率都在50.0%左右。27株(54.0%)菌株对两种以上喹诺酮类药物耐药。qnrS和aac(6')-Ib-cr的阳性率分别为52.0%和18.0%。qnrS基因阳性菌株对NA、CIP、LXV耐药率均显著高于阴性菌株(P<0.05);aac(6′)-Ib-cr基因阳性菌株对CIP和LVX的耐药率显著高于阴性菌株(P<0.05),但对萘啶酸耐药性无明显差异。未检测出qnrA、qnrB和qepA基因。gyrA中主要存在Ser83→Ile,parC中主要存在Ser80→Ile变异。结论绍兴地区分离的肠道外气单胞菌对喹诺酮类药物表现高耐药性,染色体介导的靶位基因突变为其主要耐药机制,目前突变较单一。     

志贺菌对喹诺酮类抗菌药物耐药性及耐药机制研究

目的检测志贺菌对喹诺酮类抗菌药物的耐药情况,探讨染色体介导DNA旋转酶和拓扑异构酶Ⅳ基因突变存在与志贺菌喹诺酮类药物耐药性的相关性。方法用琼脂稀释法对60株志贺菌进行耐药性检测;PCR法检测喹诺酮耐药决定区(QRDR)相关基因gyrA、gyrB、parC、parE,并对其中20株PCR扩增所得的阳性产物进行测序分析;分析志贺菌gyrA、gyrB、parC基因突变与喹诺酮类药物耐药性的关系。结果 60株志贺菌对萘啶酸、诺氟沙星、环丙沙星、左氧氟沙星的耐药率分别为90.0%、35.0%、28.3%和15.0%;测序结果显示gyrA、gyrB、parC基因突变率分别为85%、30%和100%,parE基因未发现突变。结论志贺菌对喹诺酮类耐药严重;靶基因突变是喹诺酮类药物耐药的主要机制之一,以DNA旋转酶GyrA基因突变为主,DNA拓扑异构酶IVparC基因突变次之。     

2018—2021年北京市沙门菌血清型及喹诺酮类耐药表型和基因型分析

目的 分析2018—2021年北京市肠道门诊哨点医院分离到的沙门菌血清型及喹诺酮类药物耐药表型和耐药基因的流行情况。方法 采用玻片凝集法鉴定血清型;微量肉汤稀释法测定药物敏感性;全基因组测序数据通过与MLST和ResFinder数据库比对,查询ST型别和耐药基因。结果 228株沙门菌共检出42种血清型,51种ST型。其中肯塔基沙门菌、肠炎沙门菌和黄金海岸沙门菌等9种血清型比较常见。77株沙门菌（33.8%）对萘啶酸耐药;40株（17.5%）对环丙沙星和左氧氟沙星耐药;38株（16.7%）对吉米沙星耐药。不同血清型对喹诺酮类药物的耐药性不同。228株沙门菌共筛选出5种喹诺酮耐药基因:qnrS（23.7%）、aac(6’)-Ib-cr（8.3%）、qnrB（6.6%）、OqxAB（1.3%）和qepA（0.4%）;喹诺酮耐药决定区存在gyrA和parC的7种氨基酸突变:以parC:T57S（70.2%）最常见,其次是gyrA:D87N（14.9%）、parC:S80I（14.5%）、gyrA:S83F（14.5%）、gyrA:D87Y（7.9%）、gyrA:D87G（5.3%）和gyrA:S83Y（1.8%）。在组合突变中,以parC:S80I-gyrA:D87N-gyrA:S83F三突变,并伴随parC:T57S最多。耐药基因和突变位点在9种常见血清型中的检出率存在差异。结论 北京市沙门菌血清型及ST型种类繁多,携带喹诺酮耐药基因以qnrS、aac(6’)-Ib-cr和 qnrB为主,存在gyrA和parC多个位点突变并协同作用。应持续监测血清型和耐药性,以指导临床有针对性合理用药。     

鼠伤寒沙门菌耐药株拓扑异构酶基因突变分析

目的　探讨鼠伤寒沙门菌对氟喹诺酮类药物的耐药性与拓扑异构酶基因突变之间的关系。方法　三株鼠伤寒沙门菌分离株X2 ,X7,X11对氟喹诺酮类药物环丙沙星的MIC分别为 32、0 38和 0 0 2 3μg ml,X2为耐药株。利用聚合酶链反应 (PCR)对其拓扑异构酶四个耐药基因gyrA ,gyrB ,parC ,和parE进行扩增和序列分析。结果　发现分离株X2的gyrA基因同时在 2 4 8、2 5 9位点发生点突变 (Ser83→Phe ,Asp87→Asn)。分离株X7gyrA基因在 2 4 8位点发生点突变 (Ser83→Tyr)。分离株X11的gyrA基因没有发生突变。X2parC基因QRDR在 2 38位点发生点突变 (Ser80→Arg)。而分离株X7、X11的parC基因没有发生突变。三株鼠伤寒沙门菌分离株的gyrB和parE基因都没有发现突变。结论　gyrA和parC上同时发生突变会导致鼠伤寒沙门菌对环丙沙星的高耐药性     

Prevalence and mechanisms of quinolone resistance among selected nontyphoid Salmonella isolated from food animals and humans in Korea

The aim of this study was to investigate the prevalence and mechanism of quinolone resistance among selected nontyphoid Salmonella (NTS) isolates. A total of 1279 NTS isolated from food animals (n=692) and humans (n=587) between 1995 and 2009 were investigated by serotyping, antimicrobial susceptibility testing, screening for plasmid-mediated quinolone resistance (PMQR) genes qnr, aac(6')-Ib-cr, and qepA and mutations in the quinolone resistance-determining region (QRDR) of gyrA and parC by PCR, and DNA sequencing. Three hundred thirty (47.7%) of 692 animal isolates and 177 (30.2%) of 587 human isolates were resistant to nalidixic acid. Most animal (94.8%, 313/330) and human (99.4%, 176/177) NTS exhibited decreased ciprofloxacin susceptibility (minimum inhibitory concentration [MIC]: 0.125-2?mg/L). None of them carried qnr or qepA gene. However, aac(6')-Ib was identified in six animal isolates, of which four carried aac(6')-Ib-cr gene. Based on antimicrobial resistance profile, year of isolation, MIC for quinolones and fluoroquinolones, and isolation frequency of serotype, 114 animal and 83 human isolates were tested for QRDR mutations. All contained a single mutation within the QRDR of gyrA at either codon 87 or 83, and 41 of them contained an additional mutation in parC. The most prevalent mutation was Asp87-Tyr (n=107), followed by Asp87-Gly (n=28), Asp87-Asn (n=26), Ser83-Tyr (n=22), and Ser83-Phe (n=14). Point mutations in parC were observed outside the QRDR, which included 40 isolates with Thr57-Ser substitution and 1 Salmonella Typhimurium with a novel Glu51-Lys substitution. In conclusion, a point mutation within the QRDR of gyrA was primarily responsible for quinolone resistance and reduced susceptibility to fluoroquinolones in NTS in Korea. To our knowledge, this is the first report of occurrence of aac(6')-Ib-cr gene among NTS in Korea. The spread of NTS carrying aac(6')-Ib-cr is of serious concern and should be carefully monitored.     

环丙沙星体外诱导肺炎链球菌耐药机制研究

目的探讨环丙沙星体外诱导肺炎链球菌耐药的分子机制。方法10株临床分离的肺炎链球菌体外用不同浓度梯度环丙沙星逐级诱导成为耐药株,检测诱导前后菌株对环丙沙星的MICs,PCR扩增诱导前后菌株parC/parE和gyrA/gyrB基因喹诺酮耐药决定区(QRDR)、测序并与GenBank公布序列比对。结果8株临床菌株成功诱导为耐药株,诱导后MICs是诱导前16倍以上,诱导后2株只发现parC/parE基因的QRDR有突变其耐药水平较低MICs分别为8μg/ml和16μg/ml,6株parC/parE和gyrA/gyrB基因的QRDR同时存在点突变耐药水平较高,MICs分别为64μg/ml和128μg/ml。结论逐步增加药物浓度可以诱导肺炎链球菌parC/parE和/或gyrA/gyrB基因的QRDR点突变导致对环丙沙星耐药。     

鼠伤寒沙门菌临床分离株对喹诺酮类药物耐药机制的研究

目的 研究引起儿童腹泻鼠伤寒沙门菌对喹诺酮类抗菌药物的耐药机制.方法 采用K-B法测定62株鼠伤寒沙门菌对常用抗菌药物的敏感性;应用PCR法和DNA测序法检测喹诺酮耐药决定区(QRDRs)和质粒介导的喹诺酮耐药基因;采用接合试验测定耐药基因的转移性;PFGE法测定耐药菌株的同源性.结果 62株肠伤寒沙门菌中有40株对环丙沙星耐药(MIC≥0.5 μg/ml),其中28株为低水平耐药,12株为高水平耐药,且所有对环丙沙星耐药菌株同时对其他多种抗菌药物耐药;40株环丙沙星耐药菌株分属于4种PFGE型,分别是A型7株、B型4株、E型1株、D型28株;两株对环丙沙星高水平耐药菌株同时存在gyrA和parC两个位点的突变,其余环丙沙星耐药菌株仅发现gyrA 1个位点的突变,未检测到qnr和qepA基因;62株鼠伤寒沙门菌中有23株为aac-(6′)-Ib-cr阳性,其中19株PFGE分型为D型.结论 腹泻患儿分离的肠伤寒沙门菌对环丙沙星耐药率高,喹诺耐耐药决定区gyrA基因的点突变和携带aac-(6′) -Ib-cr基因是导致鼠伤寒沙门菌对环丙沙星耐药的主要原因.     

Molecular analysis of high-level ciprofloxacin resistance in Salmonella enterica serovar Typhi and S. Paratyphi A: need to expand the QRDR region?

Fourteen strains of S. Typhi (n=13) and S. Paratyphi A (n=1) resistant to ciprofloxacin were compared with 30 ciprofloxacin decreased-susceptibility strains on the basis of qnr plasmid analysis, and nucleotide substitutions at gyrA, gyrB, parC and parE. In ciprofloxacin-resistant strains, five S. Typhi and a single S. Paratyphi A showed triple mutations in gyrA (Ser83-->Phe, Asp87-->Asn, Glu133-->Gly) and a novel mutation outside the quinolone resistance determining region (QRDR) (Met52-->Leu). Novel mutations were also discovered in an isolate (minimum inhibitory concentration 8 microg/ml) in gyrA gene Asp76-->Asn and outside the QRDR Leu44-->Ile. Out of 30 isolates with reduced susceptibility, single mutation was found in 12 strains only. Genes encoding qnr plasmid (qnr A, qnr B, AAC1-F) were not detected in ciprofloxacin-resistant or decreased-susceptibility strains. Antimicrobial surveillance coupled with molecular analysis of fluoroquinolone resistance is warranted for reconfirming novel and established molecular patterns of resistance, which is quintessential for reappraisal of enteric fever therapeutics.     

肺炎克雷伯菌染色体及质粒介导的喹诺酮类药物耐药机制研究

目的了解肺炎克雷伯菌染色体、质粒介导喹诺酮类耐药基因gyrA、qnrA、qnrB、qnrS、aac(6′)-Ⅰb-Cr和qepA基因的流行情况。方法采用PCR法对20株肺炎克雷伯菌进行gyrA、qnrA、qnrB、qnrS、aac(6′)-Ⅰb-Cr和qepA基因检测,稀释法检测20种抗菌药物的体外抗菌活性,PCR扩增产物经纯化后测序并进行序列分析。结果20株肺炎克雷伯菌均存在突变,aac(6′)-Ⅰb和qnrS基因各检出1株,经比对分别为aac(6′)-Ⅰb-Cr和qnrS1。结论老年患者产超广谱β-内酰胺酶肺炎克雷伯菌对环丙沙星耐药主要为gyrA基因突变所致,但也有aac(6′)-Ⅰb-Cr和qnrS的因素。     

志贺菌对喹诺酮类药物耐药分子机制的研究

目的 研究志贺菌对喹诺酮类药物耐药性及其耐药基因gyrA和parC的变异。方法对73株临床分离的志贺菌及标准株51573进行吡哌酸(PI)、氧氟沙星(OFL)、诺氟沙星(NOR)、环丙沙星(CIP)4种药物的药敏试验,对其DNA旋转酶gyrA基因、拓扑异构酶ⅣparC基因N末端编码区分别进行聚合酶链反应(PCR)扩增后,对grA基因进行限制性片段长度多态性(RFLP)分析,对parC基因进行RFLP及单链构象多态性(SSCP)分析。结果 标准株51573对4种喹诺酮类药物均敏感;73株临床分离的志贺菌属细菌对PI、CIP、NOR、OFL的耐药率分别为79.5％、60.3％、41.1％和36.9％;67株(91.8％)菌株对喹诺酮类药物敏感性降低,其中gyrA基因突变率为91％,parC基因突变率为7.5％,6株临床敏感株及标准株51573均未检测出以上两基因突变。结论 志贺菌对喹诺酮类药物耐药严重;靶基因突变是其耐喹诺酮类药物的主要机制之一,以DNA旋转酶gyrA基因突变为主,拓扑异构酶ⅣparC基因突变次之。     

Relative fitness of fluoroquinolone-resistant Streptococcus pneumoniae

Fluoroquinolone resistance in Streptococcus pneumoniae is primarily mediated by point mutations in the quinolone resistance-determining regions of gyrA and parC. Antimicrobial resistance mutations in housekeeping genes often decrease fitness of microorganisms. To investigate the fitness of quinolone-resistant S. pneumoniae (QRSP), the relative growth efficiencies of 2 isogenic QRSP double mutants were compared with that of their fluoroquinolone-susceptible parent, EF3030, by using murine nasopharyngeal colonization and pneumonia models. Strains containing the GyrA: Ser81Phe, ParC: Ser79Phe double mutations, which are frequently seen in clinical QRSP, competed poorly with EF3030 in competitive colonization or competitive lung infections. However, they efficiently produced lung infection even in the absence of EF3030. The strain containing the GyrA: Ser81Phe, ParC: Ser79Tyr double mutations, which is seen more frequently in laboratory-derived QRSP than in clinical QRSP, demonstrated reduced nasal colonization in competitive or noncompetitive lung infections. However, the strain was equally able to cause competitive or noncompetitive lung infections as well as EF3030.     

Detection of type III secretion system virulence and mutations in gyrA and parC genes among quinolone-resistant strains of Pseudomonas aeruginosa isolated from imported shrimp

Twenty Pseudomonas aeruginosa isolates were recovered from imported frozen raw shrimp sold in the United States. Isolates were tested for antimicrobial susceptibility to quinolones and analyzed for mutations in quinolone resistance-determining regions, presence of type III secretion system genes, and genetic relatedness using pulsed-field gel electrophoresis. All isolates were resistant to nalidixic acid. Polymerase chain reaction assays detected exoS, exoT, exoU, and exoY among isolates. Eight unique pulsed-field gel electrophoresis clusters were generated. Mutations were found in gyrA at codon 83 (Ile to Thr) and in parC at codon 87 (Leu to Ser). Together, these findings reveal that imported shrimp may harbor virulent and quinolone-resistant strains of P. aeruginosa.     

铜绿假单胞菌耐药性及质粒介导的耐环丙沙星分子机制研究

目的 研究临床分离铜绿假单胞菌的耐药性和质粒介导铜绿假单胞菌对环丙沙星耐药的分子机制.方法 采用VITEK-2型全自动微生物检测系统鉴定细菌,用K-B法测定铜绿假单胞菌对24种常用抗菌药物的药敏率,用聚合酶链反应检测喹诺酮类耐药基因,包括qnrA、qnrB、qnrC、qnrD、qnrS、qepA和aac (6') -Ib-cr.结果 423株铜绿假单胞菌对环丙沙星和左氧氟沙星的耐药率均为23.2％,对第一、三代头孢菌素类药物的耐药率＞49.2％(除头孢他啶为22.7％),对氨基糖苷类药物庆大霉素、妥布霉素、阿米卡星的耐药率分别为17.5％、17.5％和13.0％,对青霉素类药物的耐药率＞40.4％(除哌拉西林为26.2％),对含β-内酰胺酶抑制剂复合物的耐药率差异较大,哌拉西林/他唑巴坦为17.0％,而氨苄西林/舒巴坦为98.6％;对碳青霉烯类药物亚胺培南和美罗培南的耐药率分别为24.6％和26.0％;127株耐环丙沙星铜绿假单胞菌的耐药性明显升高,对左氧氟沙星的耐药率为86.6％,对第三代头孢菌素的耐药率上升至＞61.4％,对第四代头孢菌素头孢吡肟的耐药率由20.3％上升至62.2％,对含p内酰胺酶抑制剂复合物的耐药率从17.0％上升至＞49.6％,对氨基糖苷类药物庆大霉素、妥布霉素的耐药率上升至＞64.6％,对阿米卡星的耐药率由13.0％上升至48.8％;耐环丙沙星铜绿假单胞菌中未检出qnrS基因和qnrC基因,qnrA、qnrB、qnrD、qepA和aac( 6')-Ib-cr的阳性率分别为31.2％、87.5％、15.6％、10.9％、39.1％.结论 临床分离的耐环丙沙星铜绿假单胞菌携带qnrA、qnrB、qnrD、qepA和aac(6')-Ib-cr基因,未检出qnrS、qnrC基因;qnr、qepA和aac (6') -Ib-cr基因是质粒介导的铜绿假单胞菌耐环丙沙星的主要机制.     

铜绿假单胞菌的耐药性及其耐氟喹诺酮机制的研究

目的：了解铜绿假单胞菌的耐药性及其耐氟喹诺酮的机制。方法：用纸片扩散法测定626株铜绿假单胞菌对11种抗生素的耐药性。琼脂稀释法测定40株耐环丙沙星的铜绿假单胞菌对环丙沙星和左氧氟沙星的最低抑菌浓度（MIC），聚合酶链反应－限制性长度多态性分析检测耐环沙星的铜绿假单胞菌的gyrA基因和parC基因突变，结果：626株铜绿假单胞菌中耐环丙沙星的180株（28．8％），耐左氧氟沙星的219株（35．0％），40株耐环丙沙星的铜绿假单胞菌有30株（75％）发生gyrA基因83位点突变，26株（65％）发生parC基因87位点突变，两种突变同时发生的25株（62．5％），结论：铜绿假单胞菌的耐药性日趋严重，临床分离的铜绿假单胞菌耐氟喹诺酮的机制大多为药物作用靶位gyrA和parC的基因突变。     

大肠埃希菌对氟喹诺酮类的耐药性及其机制研究

目的 探讨大肠埃希菌(ECO)对氟喹诺酮类药物的耐药率及耐药机制.方法 K-B法测定100株ECO对5种氟喹诺酮抗菌药物的耐药性,试管稀释法测定耐环丙沙星和左氧氟沙星的最低抑菌浓度(MIC);错配PCR技术检测耐环丙沙星ECO gyrA基因和parC基因的突变.结果 100株ECO中耐环丙沙星有65株;环丙沙星MIC50、MIC90分别是32、128 μg/ml,左氧氟沙星MIC50、MIC90是16、64 μg/ml;基因位点结果显示,耐环丙沙星的65株中,有60株发生gyrA、parC一个或多个基因位点的突变,有5株未发生突变.结论 gyrA、parC基因突变是该地区ECO,对氟喹诺酮类药物耐药的重要机制,且基因突变位点越多其耐药程度越高.     

耐环丙沙星鲍曼不动杆菌gyrA和parC突变模式分析

目的对临床耐环丙沙星的鲍曼不动杆菌进行gyrA和parC基因突变模式的分子流行病学调查。方法采用E-test法测定环丙沙星对94株临床分离鲍曼不动杆菌的最低抑菌浓度（MIC）；对鲍曼不动杆菌的gyrA和parC基因进行聚合酶链反应（PCR）-限制性内切酶片段长度多态性（RFLP）分析及DNA测序。结果在94株鲍曼不动杆菌中，只有38株（40．43％）对环丙沙星敏感（MIC≤1mg／L），而对环丙沙星的耐药率接近60％；PCR-RFLP分析结果表明，对环丙沙星耐药的56株菌都发生了gyrA和parC基因突变，且parC基因的突变率（87．50％）略高于gyrA基因（82．14％）。结论鲍曼不动杆菌对环丙沙星的耐药与gyrA和parC基因突变相关，其中parC基因突变的明显增长值得重视。     

2017-2018年包头地区耐喹诺酮大肠埃希菌临床分离株的耐药特征与机制分析

目的了解内蒙古包头地区临床分离的耐喹诺酮大肠埃希菌的耐药特征以及机制。方法收集2017-2018年内蒙古包头地区11所参与全国细菌耐药监测网医院的大肠埃希菌临床分离株,采用纸片扩散法或自动化仪器法按统一技术方案进行药敏试验,采用酶抑制剂增强试验测定超广谱β-内酰胺酶(ESBLs),分析病原菌耐药性。并且随机从大肠埃希菌喹诺酮类耐药(环丙沙星或/和左氧氟沙星耐药)组中筛选60株作为试验菌株,采用微量肉汤稀释法测定环丙沙星最低抑菌浓度(MIC)值,采用聚合酶链反应检测GyrA、GyrB、ParC、ParE、qnrA、qnrB、qnrS、aac(6′)-Ib以及qepA基因,限制性酶切反应确定aac(6′)-Ib-cr基因型。结果共收集上述医院非重复大肠埃希菌临床分离株4 262株。耐喹诺酮大肠埃希菌分离率居前3位的医院分别为包头市肿瘤医院(79.37%)、内蒙古包钢医院(74.45%)和包头市第八医院(72.52%);前3位科室分别为泌尿科(90.74%)、呼吸内科(87.58%)和肿瘤科(77.87%);前3位标本分别为尿液(73.77%)、痰液等呼吸道标本(65.63%)和引流液(63.27%)。4 262株大肠埃希菌中喹诺酮类耐药组和喹诺酮类非耐药组占比分别为66.31%和33.69%,喹诺酮类耐药组对绝大部分所测抗菌药物的耐药率和产ESBLs的检出率均高于喹诺酮类非耐药组(P<0.05)。60株试验菌株:GyrA、GyrB、ParC和ParE基因的阳性率均为100.00%;GyrA、ParC和ParE亚基突变发生率均为100.00%,GyrB亚基突变发生率为16.67%;发生最多的氨基酸取代种类是Ser83→Leu(100.00%),其次依次为Ser80→Ile(96.67%)和Asp87→Asn(91.67%);质粒介导的喹诺酮类耐药(PMQR)基因阳性率为18.33%,其中检出率由高到低分别为aac(6′)-Ib-cr基因(15.00%)、qnrS基因(6.67%)和qepA基因(3.33%)。在GyrA亚基双突变的基础上,发生ParC亚基单位点(Ser80或Glu84)突变的菌株对环丙沙星的MIC值多在32~64μg/ml范围内;发生ParC亚基双位点(Ser80和Glu84)突变的菌株对环丙沙星的MIC值多为128μg/ml。在所有发生ParE亚基Ser458→Ala突变的菌株中均检测到含有GyrA和ParC亚基突变,与无ParE亚基Ser458→Ala突变的菌株相比,含有ParE亚基Ser458→Ala突变的菌株对环丙沙星的MIC值更高。结论内蒙古包头地区为耐喹诺酮大肠埃希菌高流行地区,且耐药水平高,常呈多药耐药。编码DNA促旋酶和拓扑异构酶Ⅳ这两种药物作用靶蛋白的基因上喹诺酮类耐药决定区(QRDRs)存在多个位点突变是引起本地区大肠埃希菌对喹诺酮类抗菌药物产生高水平耐药的主要原因。     

氟喹诺酮耐药肠球菌gyrA和parC基因突变特征及其与环丙沙星耐药相关性分析

目的 探讨氟喹诺酮耐药肠球菌的gyrA和parC基因突变特征与环丙沙星耐药程度的相关性。方法 收集2016 - 2018年临床分离59株粪肠球菌和62株屎肠球菌,使用PCR方法特异性扩增gyrA和parC基因,并进行基因测序检测分析。结果 粪肠球菌和屎肠球菌对环丙沙星耐药率分别为59.32%和80.65%。粪肠球菌gyrA基因Ser83突变（χ2 = 51.252, P＜0.001）和parC基因Ser80突变（χ2 = 55.115, P＜0.001）与粪肠球菌对环丙沙星高水平耐药（MIC≥16μg/ml）的相关性差异具有统计学意义;屎肠球菌gyrA基因Ser83突变（χ2 = 42.014, P＜0.01）和parC基因Ser80突变（χ2 = 62.000, P＜0.01）与屎肠球菌对环丙沙星高水平耐药（MIC≥16 μg/ml）的相关性差异具有统计学意义。结论 gyrA基因Ser83突变和parC基因Ser80突变与肠球菌对环丙沙星高水平耐药（MIC≥16 μg/ml）可能相关。     

健康人群肠道大肠埃希菌对氟喹诺酮药物的耐药性及耐药机制研究

目的研究健康人群(2周内未使用过抗菌药物)肠道分离的110株大肠埃希菌对4种氟喹诺酮类抗菌药物的耐药性及耐药机制。方法用琼脂稀释法测定4种氟喹诺酮类抗菌药物对110株大肠埃希菌的最低抑菌浓度(MIC)。用聚合酶链反应扩增gyrA、parc基因,序列分析明确其突变情况,并与28株2周内使用过抗菌药物病人肠道分离的菌株进行比较。结果大肠埃希菌对4种氟喹诺酮类抗菌药物的耐药率未用药组为12.7%~15.5%,用药组为20.8%~25.0%。测序发现60号敏感菌株没有任何氨基酸突变。11株耐药菌中,gyrA基因编码的氨基酸均存在83位突变,即Ser83→Leu;其中8株存在双突变,即同时Asp87→Asn;6株存在3个突变,还包括Clu214→Gly。parC基因编码的氨基酸中,有8株存在Ser80→Ile突变,另有2株存在Glu84→Gly突变。结论健康人群肠道大肠埃希菌对4种氟喹诺酮类抗菌药物的耐药率为12.7%~15.5%,主要由gyrA基因和parC基因位点突变造成,以gyrA基因为主。