重组CPTα的亲和纯化及其单克隆抗体的制备

目的 :制备抗A型产气荚膜梭菌毒素α(CPTα)单克隆抗体 (mAb)并鉴定其生物学特性。方法 :利用工程菌株E .coliM15 /pQE30 CPTα表达的重组A型CPTα带有 6个组氨酸 (6×his)标签的特性 ,经Ni NTA螯合亲和层析方法纯化后 ,用纯化的重组CPTα免疫BALB/c鼠 ,以常规杂交瘤细胞融合技术、HAT选择性培养和间接ELISA进行筛选 ,并分析其亚类及中和保护作用。结果 :获得一株能稳定分泌抗CPTα的mAb杂交瘤细胞株 4E2 ,其分泌抗体亚类为IgG1。该mAb与重组CPTα和天然CPTα均可发生特异性反应 ,并可保护小鼠抵抗 2倍最小致死剂量CPTα的攻击 ,属中和性抗体。结论 :应用纯化的重组CPTα成功地获得了特异性的中和抗体mAb 4E2 ,为A型CPTα诊断抗体和治疗性抗体的研制奠定了基础。     

抗河豚毒素单克隆抗体的制备及其抗毒效应

目的 :为制备高毒性的小分子生物毒素河豚毒素 (TTX)的单克隆抗体 (mAb) ,探讨TTX中毒免疫抗毒的可能性。方法 :以TTX为半抗原 ,与中国鲎血蓝蛋白 (TTH)化学偶联制备人工抗原 (TTX_TTH) ;并以其免疫BALB c小鼠。用杂交瘤技术制备抗TTX的mAb ,用竞争抑制酶免疫分析法测定mAb对TTX结合活性 ,以mAb与检测抗原的结合被抑制 5 0 %时的TTX浓度 (IC50 )表示mAb的结合反应性。对小鼠预防注射抗体 ,测试抗体对抗TTX中毒的效果。结果 :建立了 2株对TTX_BSA阳性反应的mAb(1E4和 3C11) ,均属IgG1 亚类 ;具有TTX结合活性 ,其IC50 值分别为 3.2× 10 _6 mol L和 9.9× 10 _7mol L ;亲和力常数 (Kaff)分别为 3.0× 10 6 L mol和 2 .8× 10 6 L mol。小鼠预防给予mAbs ,可对抗 1×LD的TTX攻毒 ,动物存活率 71% ;抗 1.5×LD时 ,1 3存活 ;抗毒效果好于小鼠抗血清对照。结论 :用新的TTX人工抗原成功地制备了抗TTX的mAb ,具有一定的体内预防抗毒效价。     

产毒大肠杆菌不耐热肠毒素单克隆抗体杂交瘤细胞系的建立及初步应用

用亲和层析纯化的产毒大肠杆菌(ETEC)不耐热肠毒素(LT)免疫BALB/C小鼠,将小鼠脾细胞与SP_(2/0)骨髓瘤细胞(1:8)在PEG(MW1000)作用下融合,采用ELISA筛选抗-LT抗体阳性孔,细胞融合率为50％,抗体阳性率为4.5％,经3～5次克隆后筛选出2株分泌抗-LT杂交瘤细胞株(2D_、2E_5),用ELISA测定杂交瘤细胞培养上清及腹水的效价,后者约为前者的100倍,高达90万～110万。通过平板免疫溶血试验和ELISA双抗夹心法分别对2株杂交瘤分泌的抗LT单克隆抗体(McAb)的特异性进行了试验,结果表     

肿瘤细胞表面抗原的单克隆抗体-免疫沉淀筛选法

目的 筛选新的肿瘤特异性抗原,为探索新的肿瘤诊断标志物和肿瘤疫苗奠定基础.方法 将人宫颈癌细胞系Hela细胞免疫BAKLB/c小鼠,制备杂交瘤,应用杂交瘤培养上清对人结肠癌细胞系Golo205、人Burkitt淋巴瘤细胞系Raji等细胞进行红细胞花环形成实验以筛选阳性杂交瘤.应用Golp205、Raji、人肺癌细胞系PLA801、人胃癌细胞系7901、人T细胞白血病细胞系Jurkat、小鼠骨髓瘤细胞系SP2/0等肿瘤细胞系、胚胎细胞系人胚肾上皮细胞系293T、人脐静脉内皮细胞系ECV304和健康人外周血单个核细胞(PBMC)等对所筛选的单克隆抗体进行活细胞免疫荧光染色和流式细胞仪鉴定单克隆抗体对多种细胞系膜表面天然抗原的识别情况,同时应用免疫沉淀法和Western blotting检测所筛单克隆抗体对细胞膜抗原的识别.结果 采用红细胞花环形成实验从制备的抗体中成功筛选出3株单克隆抗体,流式分析显示其可同时识别Hela、293T、ECV304、Raji和Colo205细胞,但却不能识别Jut-kat、PLA801、7901、SP2/0细胞以及静止或活化的人PBMC.Western blotting证实这3株抗体可识别表达于Heh、Raji细胞膜的分子量约为47kD的膜蛋白.结论 成功地制备了3株可识别肿瘤抗原候选分子的mAb,为筛选和鉴定肿瘤特异性抗原提供了有力手段.     

赭曲霉毒素A单克隆抗体的制备及直接竞争酶联免疫吸附法的建立

目的 建立快速且灵敏的赭曲霉毒素A(OTA)直接竞争酶联免疫吸附检测(cdELISA)方法.方法 采用OTA与卵清蛋白(OVA)偶联作为抗原免疫BALB/c小鼠,取小鼠脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞SP2/0进行细胞融合、克隆筛选,获得鼠抗OTA的杂交瘤细胞株;以ELISA方法测定抗体效价并鉴定抗体的IgG及亚类;用辣根过氧化物酶(HRP)标记OTA,建立cdELISA方法.结果 获得了3株稳定分泌高效价抗OTA单克隆抗体的杂交瘤细胞株(S-17-8、S-212-7和S-225-11),3株重链均为IgG1亚型,轻链为κ亚型;建立了cdELISA检测方法,检测下限为0.5ng/ml.结论 以抗OTA单克隆抗体和OTA-HRP为基础,建立了灵敏且省时的检测OTA的cdELISA方法,为进一步OTA快速筛查提供了条件.     

抗伏马菌素B1单克隆抗体的制备和特性

目的建立敏感、特异和快速的针对伏马菌素B1(fumonisin B1, FB1)的酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunosorbent assay ,ELISA)检测方法,形成具有我国自主知识产权的快速检测试剂盒.方法利用B细胞杂交瘤技术,建立能分泌抗伏马菌素B1单克隆抗体的杂交瘤细胞株.结果用伏马菌素B1-牛血清白蛋白(FB1-BSA)偶联物免疫8～10周龄雌性BALB/c小鼠后,取脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞系Sp2/0融合,经过3～4次亚克隆建立了1个稳定分泌抗伏马菌素B1毒素抗体的杂交瘤细胞株,命名为5A9.将杂交瘤细胞打入BALB/c小鼠腹腔,获得含抗伏马菌素B1毒素单克隆抗体的腹水,并将腹水用饱和硫酸铵法进行纯化,得到单克隆抗体.该单克隆抗体的Ig亚类为IgG1,腹水中抗体的滴度分别为2.56×106,参考工作浓度为3.2×105.纯化后抗体的IgG含量为10.4 g/L,亲和常数为8.3×10-8 mol/L.该抗体与其他结构类似物无交叉反应,具有较高的特异性.结论制备了具有高特异性和亲和力的抗伏马菌素B1单克隆抗体,初步形成了针对伏马菌素B1的ELISA检测试剂盒.     

基孔肯亚病毒中和单克隆抗体的筛选与鉴定

目的 :建立抗基孔肯亚病毒单克隆抗体细胞株 ,筛选具有中和活性的特异性单克隆抗体。方法 :利用细胞融合技术建立抗基孔肯亚病毒单克隆抗体杂交瘤细胞株 ,用细胞培养中和试验初筛具有中和活性的单克隆抗体 ,用固定单克隆抗体稀释病毒方法进行乳鼠中和试验 ,进一步验证单克隆抗体的保护作用 ;用中和交叉试验鉴定中和单克隆抗体反应的特异性。结果 :用免疫荧光法检测建立了 9株能稳定分泌抗基孔肯亚病毒单克隆抗体的杂交瘤细胞株 ,初筛出 4株具有中和活性的单克隆抗体 ,其中 1F1单克隆抗体稀释 2 0 0倍时可保护 50 %细胞不产生细胞病变 ;乳鼠中和试验1F1单克隆抗体中和指数为 10 3.3,对试验小鼠有较强的保护作用。中和交叉试验表明 ,1F1单克隆抗体只中和基孔肯亚病毒 ,与其他病毒无交叉反应 ,特异性较高。结论 :制备了 9株抗基孔肯亚病毒单克隆抗体杂交瘤细胞株 ,筛选得到了 1F1具有较强中和活性的特异性单克隆抗体 ,可望为基孔肯亚病毒病的诊断、紧急预防与治疗提供良好试剂     

非洲猪瘟病毒CD2v胞外区蛋白的真核表达及其单克隆抗体的制备与功能分析

目的 利用真核表达系统制备非洲猪瘟病毒（ASFV）CD2v分子N端胞外区融合蛋白,并作为抗原免疫和筛选特异性识别CD2v单克隆抗体。方法 以pcDNA3.1-CD2v-HA质粒（含ASFV-BA71v株EP402R基因全长编码序列和HA标签）为模板,扩增CD2v蛋白胞外区碱基序列,构建真核表达载体pcDNA3.1-N-CD2v-His,通过Expi-293表达系统获得重组N-CD2v-His蛋白。将纯化后的蛋白免疫小鼠,利用杂交瘤细胞技术制备特异识别CD2v分子单克隆抗体,对获得的抗体经酶联免疫吸附实验（ELISA）、Western印迹以及间接免疫荧光等方法进行鉴定。结果N-CD2v-His融合蛋白基因被成功构建到真核表达载体上,转染Expi-293F细胞收获重组蛋白,纯蛋白经SDS-PAGE分析发现,N-CD2v-His融合蛋白条带呈高度糖基化修饰的梯状分布。用该融合蛋白免疫小鼠,经杂交瘤细胞筛选,获得2株高亲合活性单克隆抗体,2株抗体经间接ELISA、Western印迹及免疫荧光实验等检测均能特异识别糖基化修饰的CD2v全长蛋白。结论 成功制备了抗CD2v特异性单克隆抗体,为进一步...     

抗HBsAg单克隆抗体杂交瘤的建立与临床应用

目的 制备分泌抗HBsAg单克隆抗体杂交瘤细胞株,为建立快速诊断HBsAg的方法奠定了基础。方法 通过细胞融合建立了能稳定分泌抗HBsAg单抗的杂交瘤细胞株,利用ELISA测定单抗的特异性,并用此单抗对临床标本进行初步检测。结果 细胞株分泌的单抗可与HBsAg特异性结合,与乙肝病毒E抗原和核心抗原无交叉反应,经免疫扩散试验分析为IgG1型,将此单抗用辣根过氧化物标记后可与HBsAg阳性的病人血清反应。结论 筛选出了一株适合临床应用的单抗杂交瘤细胞株。     

抗莱氏无胆甾原体单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立

本文采用浓缩提纯的莱氏无胆甾原体做为抗原,多途径免疫 BALB/C 小鼠,取脾细胞与 SP_2/O-Ag~(14)小鼠骨髓瘤细胞融合,建立了4株分泌抗莱氏无胆甾原体单克隆抗体杂交瘤细胞。分析了杂交瘤细胞的染色体,平均数为103条;制备了腹水抗体,经 APAAP 法(碱性磷酸酶—抗碱性磷酸酶桥联酶标显色技术)和 IFA 法检测,抗体效价在80～320之间;对免疫球蛋白亚类进行了鉴定,其抗体均为 IgM。上述细胞经3～4个月稳定传代后,冻存于液氮中。该单克隆抗体的制备对细胞培养中支原体污染的检出可能有重要意义。     

Study of age of fusion of hyoid bone

The present study was conducted to determine the age of fusion of greater cornua with the body of hyoid bone. Age of fusion of hyoid bone can help in determining the age of an individual, especially of unknown dead bodies where only skeletal remains are available. A victim of compression of neck will more likely have fracture of hyoid bone if his hyoid bone is fused. Indian authors have reported that the fusion of hyoid bone occurs after 40 years of age. Studies done by foreign workers observed that hyoid bone fused at an earlier age (30-40 years). A total of 170 excised hyoid bones from dead bodies belonging to the age group of 20-65 years were studied. Fusion occurred earlier in females as compared to males by about 5 years. The mean age of unilateral and bilateral fusion in males was 38.25 and 53.16 years, respectively. The mean age of unilateral and bilateral fusion in females was 38.00 and 48.50 years, respectively. All the hyoid bones were fused after the age of 60 years. No significant differences were found between the fusion on right and left side.     

湿润烧伤膏治疗婴儿湿疹的临床疗效观察

目的观察、探讨湿润烧伤膏(MEBO)治疗婴儿湿疹的临床疗效。方法将84例婴儿湿疹患儿随机分为治疗组(44例)和对照组(40例),治疗组外涂湿润烧伤膏治疗,对照组外涂湿疹膏治疗,连续治疗1周后,观察两组疗效。结果治疗组有效率为97.73%,对照组有效率为82.50%;两组疗效经秩和检验,差异具有统计学意义(P0.05);随访1个月,治疗组未见复发,对照组有2例患儿复发。结论湿润烧伤膏治疗婴儿湿疹疗效好,无毒副作用,安全可靠。     

延迟性脾破裂误漏诊原因分析

目的探讨延迟性脾破裂误漏诊原因和预防措施.方法回顾性分析总结12例延迟性脾破裂中的诊断和误漏诊的经验与教训.结果本组延迟性脾破裂的误漏诊5例(41.66%).对多发伤与脾破裂并存可能认识不足,外伤史轻微或伤员隐瞒外伤史,缺乏腹痛-缓解-突然再腹痛的典型病史,缺乏“对冲性脾破裂”力学分析和整体化诊断思路等为其误漏诊的主要原因.结论详细的外伤史和全面系统检查,重视腹以外多发伤掩盖腹内脏器伤及延迟性脾破裂可能.确立外伤-腹内脏器伤-脾破裂整体化诊断思路.不间断地辅以B超检查脾形态学变化和腹内有无积液,腹腔穿刺确定有无血腹、X线胸腹部检查观察左侧胸肋角和膈肌运动情况、必要时CT检查以尽早发现脾包膜下血肿,降低延迟性脾破裂误漏诊率.     

Analysis of the results of the international comparison of activity measurements of a solution of Fe

The results of an international comparison of activity measurements of a solution of ⁵⁵Fe organized by the BIPM in 2005 are reported and analysed. This exercise, which follows the procedures of the CIPM mutual recognition arrangement to update older comparisons, is a renewal of the comparison organized by the BIPM that took place in 1978. A EUROMET comparison was organized in 1996 specifically to compare activity measurements of a ⁵⁵Fe solution by means of liquid-scintillation techniques. Results of these three comparisons are presented and discussed in this paper.

The radionuclide solution was provided by the NPL, which also distributed the samples to the participants. The activity of the ampoules was measured by 16 laboratories using 12 methods producing 25 results. Some general considerations on uncertainty assessments pertaining to the different techniques used are drawn. The outcome of four different estimators is compared from which the presence of at least one outlier can be confirmed. Further measurements should be made to try to reduce the discrepancy between the results. To date the outcome of the present comparison does not show an improvement to that of the 1996 comparison.     

海马头部浅沟消失对海马硬化诊断价值的探讨

目的　探讨海马头部浅沟消失对海马硬化的诊断价值。方法　对 18例经组织学检查证实的海马硬化患者的MRI检查资料和 18例年龄相匹配的对照组进行回顾性分析 ,观察海马头部浅沟的显示情况、海马头部大小和信号改变。结果　 18例海马硬化患者中 ,16例硬化侧海马头部浅沟消失 ,1例硬化侧海马头部浅沟明显变浅 ,几乎消失 ,1例硬化侧海马头部浅沟存在。硬化侧海马头部均有萎缩 ,并在T2 WI和液体衰减恢复 (FLAIR)成像呈高信号。海马头部浅沟消失对海马硬化诊断的敏感性为 88.9% ,特异性为 10 0 %。结论　海马头部浅沟消失是诊断海马硬化的一个可靠征象 ,结合患侧海马有萎缩性改变和T2 加权成像信号增高 ,可肯定诊断海马硬化。     

The value of information of duration of pregnancy in establishment of paternity

Summary In order to get an idea of the value of the information on the duration of pregnancy in establishment of paternity, 511 records from 17 lower courts in Sweden were studied.It was found that when a blood group investigation has been performed, only a small number of cases remain where the paternity claim should be rejected by a court of law for the reason that the period of pregnancy has been extremely long or short.It was shown that only very extreme probability values (percentages) should give reason for rejection of paternity claims if a larger risk of error is to be avoided. The risk is somewhat smaller with long pregnancies than with short ones.The results of this study emphasize the difficulties involved in probability assessment in paternity suits.This report was presented at the Seventh International Medical-Legal Seminar, Stockholm 1971.     

济源市人民医院烧伤科患者病原菌分布特点及抗菌药物使用情况分析

目的研究济源市人民医院烧伤科患者的病原菌分布特点,分析其抗菌药物使用情况。方法将2013-2015年济源市人民医院烧伤科收治的375例烧伤患者作为研究对象,每周收集1次创面分泌物进行细菌培养,对其中检出的部分细菌做抗菌药物敏感性检测,并对部分抗菌药物的使用情况予以分析。结果 2013-2015年病原菌阳性检出率呈逐年下降趋势;铜绿假单胞菌对阿米卡星、氨曲南、庆大霉素、亚胺培南、左氧氟沙星、美罗培南及妥布霉素等抗菌药物的敏感性呈逐年增高趋势,对头孢替坦、头孢曲松及头孢唑啉则呈现出较高的耐药性;鲍曼不动杆菌对一、二代头孢菌素及环丙沙星等抗菌药物的耐药性较高,对亚胺培南、阿米卡星、美罗培南等抗菌药物的敏感性较高;金黄色葡萄球菌与表皮葡萄球菌对克林霉素和红霉素的耐药性较高,对其他抗菌药物的敏感性较高;环丙沙星、头孢吡肟、头孢他啶、庆大霉素及四环素的使用强度呈逐年下降趋势,而左氧氟沙星与利奈唑胺的使用强度则呈逐年升高趋势。结论医生在治疗过程叶中,应遵循早期、联合、足量的用药原则,根据药物敏感试验结果进行抗感染治疗;医院应高度重视感染的控制工作,定期开展感染隐患排查,结合病原菌分布特点,及时阔整抗菌药物使用强度,以减少和避免耐药菌的产生。     

应用结肠支架治疗左半结肠肿瘤性梗阻

目的　探讨结肠支架在左半结肠肿瘤性梗阻中的应用价值。方法　结合文献 ,分析了 3例经手术病理证实的左半结肠肿瘤的临床资料。结果　结肠支架植入技术成功率高 ,近期疗效理想 ,多数可在 2 4h内解除梗阻。结论　结肠支架植入是治疗左半结肠肿瘤性梗阻的理想方法 ,为临床进一步治疗准备了条件     

消妇炎胶囊辅料的合理性实验研究

目的确定消妇炎胶囊的辅料及用量。方法以浸膏粉的吸湿率和流动性为考察指标,对加入淀粉、糊精及微晶纤维素3种不同辅料后制得的颗粒进行考察,优选出最佳辅料后,再对最佳辅料的不同用量进行考察。结果加入辅料后,颗粒的抗吸湿能力和流动性都明显改善,其中加入淀粉后,分别在6、12、24、48、60 h测得的吸湿率为2.01%、4.03%、5.98%、6.66%、7.31%,休止角为34.61°,均小于糊精与微晶纤维素,表明加入淀粉颗粒质量最好;每80 g浸膏粉中分别加入30、45、60 g淀粉,综合判定45 g较好。结论每80 g浸膏粉加入淀粉45 g为辅料用量参数,制得颗粒的抗吸湿能力和流动性均好,可节约成本。     

靶控吸入七氟烷与传统吸入七氟烷模式麻醉效果比较

目的比较靶控吸入模式与新鲜气体控制吸入模式两种七氟烷吸入模式下手术患者脑电双频指数（BIS）波动、血流动力学稳定性、辅助药物应用、七氟烷消耗量、苏醒情况与术中知晓等方面的差异。方法选择80例拟行脊柱手术的患者,随机分为靶控吸入组（T组）和新鲜气体控制吸入组（F组）,每组40例。两组麻醉诱导相同,顺序静注咪达唑仑0.05 mg/kg和芬太尼4μg/kg后,吸入8%的七氟烷,然后静注维库溴胺0.1 mg/kg,3 min后气管插管。术中麻醉,T组靶控呼出七氟烷浓度为2.3%,F组持续吸入2.3%七氟烷（氧流量1.5 L/min）,两组舒芬太尼按0.15 ng/ml目标血浆浓度靶控输注（TCI）,按需追加维库溴胺。记录并比较两组患者的脑电双频指数（BIS）值、血压、心率、辅助药物剂量、七氟烷消耗量、苏醒时间、苏醒期躁动和术中知晓等情况。结果两组患者均顺利完成手术,T组在术中和结束时的BIS值高于F组（P〈0.05）,T组术中平均动脉压（MAP）高于F组（P〈0.05）,去氧肾上腺素和七氟烷用量明显低于F组（P〈0.05或P〈0.01）,苏醒时间明显短于F组（P〈0.01）,其余指标两组间无显著性差异。结论七氟烷靶控吸入麻醉模式麻醉深度确实可靠,术中血流动力学稳定,七氟烷消耗量低,术后苏醒迅速完全,值得推广应用。