唾液抗PAc抗体对变形链球菌和茸链球粘附的抑制作用

作者采用同位素标记液闪技术研究唾液抗变形链球菌表面蛋白（ＡＰｃ）抗体对变形链球菌和茸毛链球菌在全唾液包被的羟基磷灰石（ＳＨＡ）上粘附的抑制作用。结果显示，含有高效价的特异性护ＰＡｃ抗体的兔唾液使变形链球菌Ｉｉｇｂｒｉｔｔ在ＳＨＡ土的粘附数明显减少，而对茸毛链球菌６７１５的粘附无影响。提示抗ＰＡｃ抗体能抑制变形链球球在唾液获得性膜上的粘附，这可能是特异性抗体龋作用的机制之一。     

乳清抗体对变形链球菌粘附能力的影响

采用ＥＬＩＳＡ法检测重组乳链球菌ＨＬ１０７免疫后孕兔乳清特异性抗体水平，用＾３Ｈ－胸腺嘧啶同位素标记技术观察特异性抗体变形链球菌粘附能力的影响，结果表明，免疫后孕兔乳清中有高水平的特异性抗体产生，并且明显减少了变形链菌对唾液色被的羟基磷灰石的粘附，提示携带有变形链球菌表面蛋白抗原基因的重组乳链球菌ＨＬ１０７具有良好的免疫原性，乳清抗表面蛋白抗体降低了变形链球菌的粘附能力。     

基因重组乳链球菌防龋疫苗免疫定菌鼠的实验研究

目的为了阐明基因重组乳链球菌防龋疫苗的免疫效能。方法采用携带有变形链球菌表面蛋白（PAc）结构基因pac的重组乳链球菌防龋疫苗HL107通过灌胃、皮下注射、粘膜下注射三种途径对50只定菌Sprague－Dawley大鼠进行免疫，并以酶联免疫吸附试验进行鼠血清和唾液中抗PAc－IgG、IgA测定。结果通过灌胃进行免疫接种HL107的大白鼠血清中抗PAc－IgG、IgA抗体滴度和唾液中抗PAc－IgA抗体滴度明显高于乳链球菌LM0230免疫组和空白免疫组（P＜0.01）。结论基因重组乳链球菌具有变形链球菌表面蛋白的免疫原性，能够刺激定菌鼠产生特异性免疫反应和免疫表达产物。     

变形链球菌葡聚糖结合蛋白D(gbpD)基因失活菌株体外黏附能力的实验研究

目的:体外观察gbpD基因失活菌株在羟基磷灰石表面的黏附能力,为明确GbpD在变形链球菌黏附过程中的作用提供实验依据。方法:荧光标记gbpD失活菌和野生菌,与唾液包被的羟基磷灰石粉末共同孵育后,测定羟基磷灰石沉淀的荧光值,比较粘附率的差异。结果:发现gbpD失活菌的黏附率(19.7%±0.91)低于野生菌(29.5%±2.9),差异有显著性(P<0.05);当加入抗GbpD抗体后,变形链球菌UA159的黏附率低于未加抗体组(P<0.05)。结论:GbpD的缺失严重影响了变形链球菌与唾液包被羟基磷灰石的粘附,抗GbpD抗体对这种粘附有一定的抑制作用,表明GbpD与变形链球菌的粘附能力有关。     

不同浓度的葡萄糖对变形链球菌初始粘附能力的影响

目的 研究不同浓度的葡萄糖对变形链球菌初始粘附能力的影响,同时观察高龋组、无龋组变形链球菌初始粘附能力的差别。方法 选取高龋组、无龋组变形链球菌（血清 c型）临床分离株各10株及1株参考株UA159,用唾液包被的羟基磷灰石（SHA）模拟口腔中牙面情况。各菌株分别在含3H的0.2%、1.0%、5.0%葡萄糖的液体培养基中培养,配成菌悬液。菌液与SHA作用90 min,清洗、吸干,液体闪烁计数测量各样本中粘附于SHA的细菌的量。各变形链球菌菌株在不同浓度葡萄糖条件下对SHA的粘附能力以粘附量CPM值表示。结果 变形链球菌高龋组分离株初始粘附能力明显高于无龋组分离株（P<0.05）;同时变形链球菌在不同浓度的葡萄糖营养条件下其初始
粘附能力也有统计学上的差别（P<0.05）,5.0%葡萄糖组粘附力最强,0.2%葡萄糖组粘附力最低,1.0%葡萄糖组粘附力界于两者之间。结论 ①变形链球菌的初始粘附能力可能与龋病的发生有关;②葡萄糖可能与变形链球菌的初始粘附相关,在一定范围内,葡萄糖可能会促进变形链球菌的 初始粘附。     

含特异性抗变形链球菌IgY抗体喷雾剂对口腔菌斑中变形链球菌作用的临床研究

目的:评价含特异性抗变形链球菌IgY抗体喷雾剂对口腔菌斑中变形链球菌的抑制作用。方法:本试验遵照随机、双盲、对照的原则。将40名年龄在20~24岁的受试者随机分成试验组(使用含特异性抗变形链球菌IgY抗体喷雾剂)和安慰剂对照组(使用不含特异性抗变形链球菌IgY抗体喷雾剂),每天用喷雾剂喷牙面2次,连续使用3周。分别在试验前、试验后1周、3周、停止使用喷雾剂1周后取右下第1恒磨牙菌斑进行微生物学分析。结果:试验组使用特异性抗变形链球菌IgY抗体喷雾剂3周后变形链球菌计数和变形链球菌占总厌氧菌百分率与基线相比明显下降(P<0.001)。对照组所有数据在统计学上无显著差异(P>0.05)。结论:本研究提示含特异性抗变形链球菌IgY抗体喷雾剂对人群口腔菌斑中变形链球菌有明显的抑制作用。     

变形链球菌对唾液成份的选择性结合

本文研究了吸附于羟基磷灰石表面的唾液成份促进变形链球菌粘附的能力。结果表明:下颌唾液明显地促进了 S.mutans,S.cricetus 和 S.rattus 菌株的粘附,而对 S.sobrinus 菌株的粘附无影响。实验菌株对层析分离的各唾液组分的粘附也展示了明显的差异。本实验结果说明变形链球菌与唾液成分相互作用的特异性,不同唾液成份促进了不同变链菌株的粘附,提示不同的变链菌株具有不同的粘结素,它们粘附到实验性唾液膜的不同受体上。     

单克隆抗体对茸毛链球菌粘附及龋病发生的影响

目的 研究局部运用抗茸毛链球菌主要表面蛋白抗原的单克隆抗体对定菌大白鼠茸毛链球菌粘附及龋病发生的影响。方法 将３０只大白鼠随机分组，分别用单抗，非特异性腹水及ＰＢＳ免疫６次，在第３次免疫后，接种耐链霉素的茸毛球菌并给予到处到处致龋饲料。实验结束后检测茸毛链球菌的粘附水平，并根据Ｋｅｙｅｓ评分方法作龋齿计分。     

酸性环境对变形链球菌黏附力的影响

目的 研究酸性环境对变形链球菌黏附能力的影响.方法 课题组前期获得的变形链球菌(血清C型)临床分离株20株及参考株UA159.用唾液包被的羟磷灰石(saliva coated hydroxyapatite,SHA)模拟口腔中牙面情况.各菌株分别在含3H并且初始pH分别为5.5和7.0的1%葡萄糖TPY液体培养基中培养,然后配成细菌悬液.菌悬液与SHA作用90 min,清洗、吸干,液体闪烁计数法检测各样本中黏附于SHA的细菌量.黏附量以每分钟闪烁计数值(CPM)表示.结果 pH 5.5与pH 7.0组变形链球菌对SHA的黏附量分别为469.433 3±272.640 8和3 447.343±2 837.814 9,P＜0.05.结论 酸性环境抑制变形链球菌的黏附力.     

变形链球菌表面蛋白多肽片段在转基因番茄中的表达

目的在获得含编码变形链球菌表面蛋白唾液粘附区片段基因的转基因番茄原代种子的基础上,应用分子生物学的方法检测外源基因在转基因植株中的表达。方法用CTAB法提取子代番茄总DNA,PCR筛选含变形链球菌PAc基因唾液粘附区片段的转基因番茄子代植株;用Trizol提取番茄总RNA,RT- PCR检测外源基因的转录情况;提取番茄果实总蛋白,用Bradford法测定番茄果实总蛋白含量;通过Western blot检测外源蛋白的表达情况,并用ELISA法对外源蛋白含量进行定量测定。结果获得植物细胞染色体上整合有外源基因并发生表达的转基因番茄子代植株;Western blot和ELISA分析表明含编码变形链球菌表面蛋白唾液粘附区片段基因的转基因番茄子代植株能有效表达外源蛋白,该蛋白含量占番茄可溶性总蛋白的1.2%。结论含编码变形链球菌表面蛋白唾液粘附区片段基因的转基因番茄子代植株能有效表达外源蛋白。     

变形链球菌表面蛋白PAc不同表达株的蔗糖粘附实验(英)

目的研究变形链球菌表面蛋白PAc不同表达株在含蔗糖培养基中，及加氟至lppm或洗必太至0．005％的含蔗糖培养基中对玻壁表面粘附能力的差异。方法在厌氧培养条件下培养各株变形链球菌，用OD值测量法计算粘附量。结果在普通及加入氟至IPPm的含蔗糖培养基中，变链菌表面蛋白PAc不同表达株对玻壁的粘附无差异；而在含0．005％洗必太的培养基中，变形链球菌各菌株的粘附量显著下降。结论在变形链球菌大量合成葡聚糖的条件下，表面蛋白PAc在变形链球菌对玻壁粘附过程中未起决定作用。洗必太可能具有抑制葡聚糖合成的作用，而氟则没有。     

变形链球菌GbpB融合蛋白免疫SD大鼠实验研究

目的 研究变形链球菌GbpB融合蛋白免疫别大鼠时，其所诱导的血清和唾液的特异性免疫反应。方法 用纯化的变形链球菌GbpB融合蛋白皮下免疫别大鼠，免疫后间隔一定时间收集大鼠的血清及唾液，间接ELISA检测血清及唾液中特异性抗GbpB抗体。结果 GbpB融合蛋白免疫大鼠，可引起血清中IgG及唾液中IgA的显著提高。另外，GbpB融合蛋白免疫大鼠，38天采血，血清中抗GbpB抗体效价最高，以后逐渐降低。结论 变形链球菌GbpB融合蛋白具有免疫原性，可供研制防龋疫苗。     

基因重组乳链球菌防龋疫苗主动免疫防龋研究：II.皮下注射 …

目的：了解基因重组乳链球菌防龋疫苗皮下注射免疫孕兔的抗龋效果。方法：通过酶联免疫吸附检测法分析孕兔免疫前后血清，唾液和乳清中抗变形链球菌表面蛋白抗原的抗体水平。结果：腮腺和乳腺周围区域皮下注射免疫１周～２周后血清ＩｇＧ型特异性抗体，唾液和乳清ＩｇＡ型特异性抗体均有明显升高，结论：基因重组乳链球菌ＨＬ１０７具有变形链球菌表面蛋白抗原的免疫原性。     

唾液对变形链球菌Mutans和变形链球菌Sobrinus粘附的影响

用＾３Ｈ标记变形链球菌遗传分型Ⅰ型Ｓ．ｍｕｔａｎｓＪＢＰ和ⅢＳ．ｓｏｂｒｉｎｕｓ６７１５，观察细菌在经兔唾液包被的羟磷灰石微珠表面的粘附量，以研究唾液对两种菌粘附的影响。结果表明，Ｓ．ｍｕｔａｎｓＪＢＰ和Ｓ．ｓｏｂｒｉｎｕｓ６７１５对经唾液包被的ＨＡ上的粘附量有明显差异，Ｉ型ＪＢＰ的粘附量显著多于Ⅲ型６７１５，在无唾液包被的ＨＡ上，两者粘附量无明显差异。结果说明变形链球菌Ｉ型Ｓ．ｍｕｔａｎｓ粘附的     

变形链球菌表面粘结素与唾液受体结合特异性的初步研究

目的 研究变形链球菌表面粘结素与唾液受体间的对应结合关系。方法 采用＾３Ｈ标记的变形链球菌（简称变链）竞争性粘附抑制实验及自行设计的间接酶联免疫受体结合实验，检测纯化唾液受体与纯化变链表面粘结素间的结合特异性及其强度。结果 唾液ＩｇＡ降解片段和相对分子质量为１３０００的酸性蛋白仅促进变链粘附，唾液淀粉酶具有促进粘附及抗粘附双重作用。相对分子质量为１２７０００的变链表面粘结素及ＧＴＦ组分分别可竞争抑     

猛性龋儿童变链菌分离株的初始粘附能力

目的 :探讨猛性龋儿童变链菌和远缘链球菌临床分离株的初始粘附能力。方法 :采用唾液包被羟磷灰石 (SHA)及同位素标记方法 ,检测猛性龋、非猛性龋、无龋儿童变链菌 (各 6株 )和远缘链球菌 (猛性龋儿童6株 ,非猛性龋和无龋儿童各 3株 )临床株对SHA的粘附情况。结果 :各组变链菌分离株之间及各组远缘链球菌分离株之间对SHA的粘附率无显著差异 ;在无蔗糖条件下 ,各组远缘链球菌分离株对SHA的粘附百分率均低于各组变链菌 ,差异有显著性 (P <0 .0 5 )。结论 :变链菌的初始粘附能力强于远缘链球菌 ;猛性龋儿童变链菌和远缘链球菌临床株对SHA的初始粘附能力与非猛性龋及无龋儿童无差别。     

基因重组乳链球菌防龋疫苗主动免疫防龋研究 Ⅱ 皮下注射免疫孕兔的实验研究

目的：了解基因重组乳链球菌防龋疫苗皮下注射免疫孕兔的抗龋效果。方法：通过酶联免疫吸附检测法分析孕兔免疫前后血清、唾液和乳清中抗变形链球菌表面蛋白抗原的抗体水平。结果：腮腺和乳腺周围区域皮下注射免疫１周～２周后血清ＩｇＧ型特异性抗体、唾液和乳清ＩｇＡ型特异性抗体均有明显升高。结论：基因重组乳链球菌ＨＬ１０７具有变形链球菌表面蛋白抗原的免疫原性。     

单克隆抗体对唾液凝集素介导的茸毛链球菌(S.sobrinus)聚集的影响

目的;用制备的抗茸毛链球菌主要表面蛋白的单克隆抗体作用于茸毛链球菌,体外观察单克隆抗体对唾液凝集素介导的细菌聚集的影响。方法;于紫外分光光度计上通过光密度值检测１ｈ内的细胞凝集情况。结果：单克隆抗体对唾液凝集素介导的茸毛链球菌之间的聚集有一定程度的影响,但作用不明显。     

应用单克隆抗体快速定量检测唾液中变形链球菌

本文介绍了一种新的半定量检测系统（salivacheck）用于检测唾液中的变形链球菌。采用特异性的抗变形链球菌抗体30min就可快速检测出此菌，与传统的培养方法相比，具有明显的优越性。     

特异性卵黄IgY对变形链球菌的抗黏附效应

目的:研究变形链球菌特异性卵黄IgY抗体对变形链球菌体外黏附的抑制效应.方法:采用试管凝集实验测定卵黄IgY抗体活性.采用试管贴壁实验测定卵黄IgY抗体对变形链球菌黏附的抑制效应.结果:变形链球菌特异性卵黄IgY抗体最小凝集浓度为62.5 μg/ml.当特异性卵黄IgY抗体浓度为67 μg/ml和670 μg/ml时,对变形链球菌在玻璃表面黏附的抑制率分别为30.03%和84.89%,与对照IgY抗体比较,有极显著性差异(P＜0.001).结论:变形链球菌特异性卵黄IgY抗体对变形链球菌具有抗黏附作用.