HBV感染者血清中HBVcccDNA、HBeAg及HBV DNA的关系

探讨HBV感染者血清HBVcccDNA与血清HBV DNA及HBeAg的关系。分别以PER分子信标技术和ELISA方法对非HBV相关肝炎、HBV健康携带者、急性乙型肝炎（AHB）、慢性乙型肝炎（CHB）、乙肝肝硬化、乙肝患者血清中HBVcccDNA HBV DNA含量及HBeAg进行了检测。HBVcccDNA仅见于HBV DNA阳性血清中；HBeAg阳性组的HBVcccDNA阳性率显著高于HBeAg阴性组（P〈0．05）；145例HBV DNA阳性患者中，HBVcccDNA阳性组HBVD—NA水平显著高于HBVcccDNA阴性组（P〈0．01）。血清HBVcccDNA可能是乙肝病毒在患者体内大量复制的血清标志。     

肝移植术后肝组织中HBV cccDNA的表达及临床意义

目的探讨肝移植术后患者肝组织内乙型肝炎病毒共价闭合环状DNA(HBV cccDNA)的表达及其临床意义。方法应用原位聚合酶链反应及免疫组织化学法检测2004年4月至2007年4月在北京地坛医院肝移植术后出现HBV再感染的25例患者及10例肝移植术后未出现HBV再感染者肝组织中HBV cccDNA及乙型肝炎表面抗原(HBsAg)、乙型肝炎核心抗原(HBcAg)、前-S1的表达。结果在35例标本中检测到cccDNA阳性的有22例(62.9%),阳性信号为紫蓝色呈块状或颗粒状,定位于细胞核。25例术后出现HBV再感染的患者其HBV cccDNA阳性率显著高于未出现HBV再感染者(84%对10%,P<0.01)。HBV cccDNA和HBcAg均为阳性的有20例,有2例患者肝组织中HBcAg阴性,但HBV cccDNA检测为阳性。肝组织中HBV cccDNA的表达阳性率与HBcAg具有高度一致性(Kappa=0.755,P<0.01)。结论肝移植患者肝组织中HBV cccDNA阳性表达可能与乙型肝炎再感染具有密切关系。     

HBV cccDNA检测方法及其研究意义

HBV cccDNA是HBV mRNA和前基因组RNA的合成模板,是HBV持续感染的关键因素,检测HBV cccDNA对进一步认识HBV生活周期及指导抗病毒治疗等有重要意义.最近,利用PCR方法检测HBV cccDNA受到越来越多的重视.现就检测HBV cccDNA的各种PCR方法及其研究意义进行综述.     

慢性乙肝患者ALT、HBV DNA、ccc DNA及肝组织免疫组化的相关性

目的探讨慢性乙肝(CHB)患者丙氨酸氨基转移酶(ALT)、HBV DNA、ccc DNA及肝组织免疫组化的相关性。方法随机选取该院治疗的CHB患者60例,根据有无接受正规抗病毒治疗分为未治疗组(n=42)和治疗组(n=18)。研究未治疗组患者肝细胞HBV DNA、ccc DNA及肝组织免疫组化的相关性及治疗组患者肝细胞HBV ccc DNA变化。结果未治疗组患者肝细胞中HBV DNA和ccc DNA水平均与肝组织纤维化程度呈负相关,其中ccc DNA呈强相关性(r=-0.523,P=0.004)。肝细胞HBV DNA和ccc DNA之间未显示相关性(r=0.064,P=0.642)。从未治疗组中选取一般资料与治疗组差异不显著的20例患者为对照组,治疗组患者肝细胞HBV ccc DNA较对照组显著下降(P<0.05)。结论肝组织纤维程度与肝细胞HBV ccc DNA呈负相关,HBV DNA水平与肝内病毒复制情况不存在相关性。     

改良聚合酶链反应检测HBV共价闭合环状DNA

目的:建立一种基于聚合酶链反应(PCR)的简便快速、具有较高敏感性和特异性的检测乙型肝炎病毒(HBV)共价闭合环状DNA(cccDNA)的方法.方法:分别提取HepG2.2.15细胞内的cccDNA及培养上清中的松驰环DNA(rcDNA)样品,试剂盒纯化;设计2对特异性引物,其扩增区域跨越rcDNA单链区;设计2对非特异性引物,扩增区域位于rcDNA双链区.经单链特异性绿豆芽核酸酶(MBN)分别消化cccDNA及rcDNA样品;以特异性引物和非特异性引物对消化前后的两种样品分别进行PCR扩增,并改变PCR扩增参数如底物数量、循环次数等,观察特异性引物能否顺利扩增消化后的cccDNA,同时又不扩增消化后的rcDNA.HBV基因组质粒样品作为对照.此外还采用实际乙型肝炎患者体内病毒样本检验此策略的实用性.结果:分别以非特异性引物和特异性引物扩增不同模板数的HBVrcDNA样品,2对非特异性引物可扩增出模板数在102以上的HBVrcDNA样品,2对cccDNA特异性引物也可以扩增出模板数在104以上的样品.特异性引物在PCR反应模板数较多时将不能区分消化前的rcDNA和cccDNA.不同数量HBVcccDNA和rcDNA模板在MBN消化前后,分别应用非特异性引物和特异性引物进行PCR扩增,发现不同数量的cccDNA模板分子经过MBN消化后,仍可用特异性引物和非特异性引物扩增出相应条带;rcDNA样品经过MBN消化后,非特异性引物可扩增出产物条带,而特异性引物无法扩增出条带.采用此种策略,我们发现慢性乙肝患者血清HBV核酸样品主要成份为rcDNA,并带有少量cccDNA,而肝细胞内HBV核酸样品富含cccDNA,与实际情况一致.结论:联合应用MBN选择性消化和cccDNA特异性引物的PCR检测法简便快速,敏感性和特异性均较满意.     

HBV相关性肝脏疾病患者血清乙型肝炎核心相关抗原检测的临床应用研究进展

乙型肝炎核心相关抗原(HBcrAg)主要构成部分为HBcAg、HBeAg和p22crAg.血清HBcrAg可预测HBV相关性肝脏疾病患者肝组织中HBV cccDNA水平、HBV相关性肝脏疾病患者HBeAg血清学转换,判断HBV相关性肝脏疾病临床治愈的终点,选择抗HBV治疗停药时机,预测HBV是否复发,预测HBV相关性肝...     

聚合酶链反应检测乙型肝炎患者心肌组织中HBV DNA

应用巢式聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术检测了１８例乙型肝炎（乙肝）患者石蜡包埋心、肝组织中的ＨＢＶ ＤＮＡ，并与其免疫组化及原位杂交结果作了比较。二组引物检测的结果表明：在肝组织中均有ＨＢＶ感染，其中５例有ＨＢＶ复制。心肌组织中ＨＢＶ ＤＮＡ的检出率为５５．６％，不存在ＨＢＶ的复制。心脏病理检查可见一些非特异性改变，如脂变、水肿和纤维素样坏死等。病理变化与心电图、临床症状、体征及ＰＣＲ检测结果无相关性     

原位杂交技术在检测HBV核酸和cccDNA中的应用

原位杂交技术(ISH)是分子生物学、组织化学及细胞学相结合而产生的一门新兴技术,能够在细胞和染色体水平上对特定核酸进行定量与定位,广泛应用于病毒学研究。ISH对于HBV中的核酸(RNA、复制中间体DNA),以及共价闭合环状DNA的检测有着重要意义,就这一技术的发展以及在HBV研究中的应用作梳理与总结。     

HBV cccDNA定量检测方法的研究进展

从慢性HBV感染的肝细胞中清除HBV cccDNA被认为是根除HBV的关键。在抗病毒治疗之前、期间和之后监测HBV cccDNA对于慢性乙型肝炎患者的疗效评估极为重要;随着靶向HBV cccDNA的抗HBV新药研发的不断推进,也迫切需要准确而灵敏的HBV cccDNA检测方法,以评价其疗效。近年来,为了提高HBV cccDNA定量检测的特异度,在传统的PCR定量检测方法的基础上进行了改进。同时,为了提高敏感度,还推出了HBV cccDNA的数字PCR定量检测方法等。本文综述了引入酶切的qPCR法、磁珠捕获杂交法、滚环扩增结合原位PCR法、数字PCR法和单细胞内数字PCR法等方法在HBV cccDNA定量检测方面的应用进展。     

靶向共价闭合环状DNA抗HBV治疗的研究进展

HBV引起尚未治愈的慢性感染,是世界范围内的主要健康负担。共价闭合环状DNA作为稳定的微染色体存在于受感染细胞的细胞核中,当新型治疗手段实现灭活或消除感染肝细胞中持久存在的共价闭合环状DNA,慢性感染自然过程和长期抗病毒治疗将不复存在。介绍了通过基因编辑、表观遗传修饰等方法靶向共价闭合环状DNA,以期完全性治愈HBV感染。     

乙型肝炎患者检测肝组织HBV-DNA的意义

为了探讨提高乙型肝炎病毒微量检出率的有效途径。采用PCR分别检测血清及肝穿刺组织HBVD-NA，血清检出总阳性率为41.7%，肝组织检出总阳性率为72.9%。在血清HBsAg阴性的病例中PCR血清检出阳性率为26.7%。肝组织检出阳性率为66.7%。早此可见PCR检测灵敏。准确、特别对血清HBVM难以检测的微量HBVDNA更有价值。两种标本来源相比肝组织较血清为优。     

Detection of HbsAg and HBV DNA in serum and saliva of HBV carriers

Serum and saliva samples from 23 patients known to be HBsAg-positive HBV carriers and 17 healthy control subjects were analyzed for hepatitis B virus (HBV) by enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) and polymerase chain reaction (PCR). All serum samples of the HBV carriers were positive for HBsAg, with 21 also positive for HBV DNA. In comparison, 22 saliva samples of HBV carriers were positive for HBsAg whereas only 11 of the 23 tested were positive for HBV DNA. Based on these results we have arrived at the conclusion that the saliva of HBV carriers might be potentially infectious and also that saliva testing could serve as an alternative technique for identifying HBV carriers.     

慢性乙型肝炎患者外周血单个核细胞内HBV RNA、HBV DNA的检测及其与血清HBV DNA的关系

目的:探讨慢性乙型肝炎(慢乙肝)患者外周血单个核细胞(PBMC)中HBV感染情况及复制状态,以及与血清HBV DNA的关系.方法:应用PCR技术特异性,选择地检测慢乙肝患者PBMC中HBV RNA、HBV DNA,并与血清HBV DNA进行比较.结果:在慢乙肝患者PBMC中能检测出HBV RNA及HBV DNA,阳性率分别为38.78%及77.55%,且两者的检出率有一致性.当PBMC中HBV RNA阳性时,HBV DNA均为阳性(100%),而当HBV DNA阳性时,部分病例可表现为HBV RNA阴性,两者阳性符合率为50%.血清中HBV DNA阳性率为71.42%.PBMC中HBV RNA的阳性率与血清中HBV DNA的阳性符合率为63.33%,血清中HBV DNA与PBMC中HBV DNA阳性符合率为76.32%.结果提示:HBV能感染PBMC,在部分患者存在着活动性复制,这种复制表现为不同于肝细胞内的低水平复制.此外,HBV感染PBMC后也存在着非复制状态,表现为PBMC中HBV DNA阳性,但HBV RNA阴性.另外,当血中HBV DNA阴性时,少数病例PBMC仍可表现为HBV RNA及HBV DNA阳性.结论:HBV能够感染PBMC并存在活动性复制,可能是造成患者免疫功能紊乱、肝脏损害慢性化的重要原因之一.     

PCR检测HBV感染患者血清HBV DNA的临床意义

目的探讨急、慢性乙型肝炎及与ＨＢＶ感染相关的肝硬变和肝癌患者血清ＨＢＶＤＮＡ的临床意义．方法应用ＰＣＲ技术检测不同ＨＢＶ感染２０５例，患者血清ＨＢＶＤＮＡ，并与正常人２０例作比较．结果ＨＢＶ感染患者２０５例血清ＨＢＶＤＮＡ阳性率为６９３％，慢性乙肝、乙肝后肝硬变和肝癌患者的阳性率分别为７６４％，７１９％和７００％，显著高于急性乙肝患者２１７％的阳性率（Ｐ＜００１）；ＨＢｅＡｇ（＋）患者血清ＨＢＶＤＮＡ阳性率为９３６％，显著高于ＨＢｅＡｇ（－）抗ＨＢｅ（＋）／（－）和ＨＢｓＡｇ（－）患者的阳性率（４５６％，２５０％和１２５％，Ｐ＜００１）；血清ＨＢＶＤＮＡ阳性和阴性两组患者的血清ＡＬＴ水平无明显差异（Ｐ＞００５）．结论血清中ＨＢＶＤＮＡ持续存在可能与乙型肝炎的慢性化有关，而与ＨＢＶ感染患者的肝损伤无明显关系     

IgA肾病患者肾组织中HBV DNA表达状况的研究

为了探讨乙型肝炎病毒(HBV)感染在IgA肾病发病中的作用，采用免疫组化技术检测12例IgA肾病患者肾组织中HBV抗原，同时应用Southern印迹杂交和原位分子杂交技术检测肾组织中HBV DNA的存在状态及定位情况。结果表明12例IgA肾病患者血清HBV感染标志至少一项阳性；肾组织中HBV抗原均阳性，其中HBcAg在肾小管和肾小球中阳性分别为8例和5例，HBsAg阳性分别为4例和6例；10例中有8例用Southern印迹杂交技术证实存在整合型HBV DNA；原位杂交技术证实12例患者肾组织HBV DNA均阳性，定位于肾小管上皮细胞核内，其中9例在肾小球系膜细胞核、上皮细胞核和基质中同时阳性。提示除了HBV抗原抗体复合物所致体液免疫损伤机制外，亦应考虑肾组织感染HBV导致的细胞免疫机制参与了IgA肾病的发病。     

不同HBV标志物模式的乙型肝炎患者HBV表面大蛋白的检测及与HBVDNA水平的相关性

目的通过检测乙型肝炎病毒标志物（HBVM：HBsAg／抗-HBs、HBeAg／抗一HBe、抗一HBc）不同模式的乙型肝炎患者血清中乙型肝炎病毒外膜大蛋白（HBV—LP）、乙型肝炎病毒前s1抗原（HBVpreSl）、HBVDNA,探讨HBV—LP与HBVDNA及HBVM模式间的关系,研究HBV—LP用于乙型肝炎患者临床诊治的意义。方法采用酶联免疫吸附试验（ELISA）对HBV—LP、HBVpreS1和HBVM进行检测;采用荧光定量PCR方法对HBVDNA进行检测。结果乙型肝炎患者大蛋白检测结果与HBVDNA检测结果差异无统计学意义（X^2=1．97,P〉0．05）。HBV—LPA值随HBVDNA拷贝数的增加呈上升趋势,二者之间存在良好的相关性（r=0．565,P〈0．01）,在不同HBVDNA拷贝数组别间,HBV—LPA值差异有统计学意义（F=9．23,P〈0．01）。结论HBV—LP是反应HBV感染者体内病毒复制程度的良好的血清免疫学指标,血清中的HBV—LP与HBVDNA具有较好的相关性,特别是可作为HBeAg阴性患者体内监测病毒复制及预后判断的良好的血清学指标。