RGD多肽修饰同种异体骨表面密度的放射性示踪研究

 目的 探讨应用¹²⁵I标记RGD多肽的放射性示踪方法测定RGD多肽在同种异体骨片表面的枝接密度的可行性。探寻RGD多肽反应浓度对表面密度的影响,获得RGD表面密度与反应浓度的关系曲线。方法 用放射性¹²⁵I对人工合成的含RGD八肽(EPRGDNYR)进行标记反应,并测算比放射性。将标记后的¹²⁵I－RGD作为放射性探针加入设计浓度分别为0.01 mg/ml、0.10 mg/ml、0.50 mg/ml、1.00 mg/ml、2.00 mg/ml、4.00 mg/ml的RGD反应液。以1-乙基-3-(3-二甲基氨丙基)碳二亚胺为交联剂,将预制的同种异体骨片置于不同设计浓度的RGD反应液中进行枝接反应。通过测定反应后的异体骨片的放射性和表面积,计算异体骨片表面RGD多肽的枝接密度,评价RGD多肽反应浓度对表面密度的影响并绘制二者的关系曲线。结果 通过放射密度γ－计数器的测定发现,125I能够成功标记于RGD多肽。以含有¹²⁵I－RGD的不同设计浓度的RGD反应液与预制的同种异体骨片进行枝接反应后,发现同种异体骨片具有放射性,说明RGD多肽已经成功枝接于异体骨片。经分析发现RGD多肽的表面密度随反应浓度的增加而增加。结论 RGD多肽的表面密度与其反应浓度间定量相关,随反应浓度的增长,表面密度逐渐趋于饱和值。     

转化生长因子-β基因转染骨髓基质干细胞在多肽修饰的聚乳酸-羟基乙酸上生长情况的研究

目的 探讨转转化生长因子-β(TGF-β)基因的骨髓基质干细胞(BMSCs)在RGD多肽表面修饰的聚乳酸-羟基乙酸(PLGA)材料上的增殖、黏附、分化情况,以研究TGF-β基因和RGD多肽在调控种子细胞生物学行为方面的作用. 方法将GRGDSPC多肽共价结合到改性PLGA支架材料上,把TGF-β基因转入BMSCs,以单纯PLGA支架材料、单纯BMSCs作为对照,分别将单纯BMSCs和转TGF-β基因BMSCs两组细胞种植于两种材料上,培养1、2、3 d后,计数细胞密度以反映细胞增殖情况:接种后4、12 h,沉淀法定量检测黏附的细胞数;培养24 h后用FITC连接的鬼笔环肽对细胞骨架染色,观察细胞骨架的组织情况;用成骨性培养基培养7、14、21 d,检测细胞中碱性磷酸酶(ALP)活性来了解BMSCs分化情况. 结果转TGF-β基因细胞密度显著增大,且在各时间点有较高的ALP活性.RGD多肽修饰的PLGA材料上细胞黏附率高,并有较高的荧光素密度及较粗大的细胞骨架,且在第14天时表现出高的ALP活性.结论 TGF-β基因和RGD多肽同时应用有利于BMSCs黏附到支架材料上,并能促进其增殖和向成骨细胞方向分化.     

人结肠癌相关成纤维细胞对结肠癌Lovo细胞生物学行为的影响

目的探讨人结肠癌相关成纤维细胞（CAF）对结肠癌Lovo细胞增殖、黏附、迁移和侵袭等生物学行为的影响。方法收集人结肠CAF及正常成纤维细胞（NF）条件培养基,建立结肠CAF、NF与Lovo细胞间的共培养模型,以无血清培养基处理的Lovo细胞作为空白组．进行细胞增殖、黏附、迁移及Transwell侵袭能力检测。结果Lovo细胞与结肠CAF共培养后。增殖48和72h反映细胞增殖的吸光度（A）值分别为（0．667±0．059）和（0．709±0．030）,明显高于空白组[（0．574±0．031）和（0．593±0．031）]和NF组[（0．597±0．036）和（0．652±0．029）],差异均有统计学意义（P〈0．01）;黏附细胞的A值为（0．588±0．067）,也明显高于空白组（0．226±0．039）和NF组（O．375±0．059）,差异也均有统计学意义（P〈O．01）;12h和24h细胞迁移率分别为（35．2±8．7）％和（64．6±7．1）％,明显高于空白组[（14．7±3．6）％和（26．3±10．3）％]和NF组[（14．1±7．3）％和（35．2±9．8）％]（P〈O．01）;透膜细胞数为（56．2±4．8）个,多于空白组的（14．6±2．2）个和NF组的（22．9~4．5）个（P〈O．01）。结论人结肠CAF具有增强结肠癌Lovo细胞增殖、黏附、迁移和侵袭的能力。     

骨形态发生蛋白-2活性多肽修饰的重组胶原矿化骨对骨髓基质干细胞生物学行为的影响

目的 探讨骨形态发生蛋白-2(BMP-2)活件多肽修饰的重组胶原矿化骨复合材料对骨髓基质干细胞(BMSCs)增殖、黏附及分化等生物学行为的影响. 方法制备重组胶原矿化骨支架材料,将BMP-2活性多肽通过交联剂共价结合到材料上,扫描电镜观察支架材料表面微观形貌;取第3代BMSCs接种到材料上,以未结合多肽的重组胶原矿化骨作为对照,采用MTT法检测BMSCs在材料表面的增殖;沉淀法检测BMSCs在材料表面的黏附率;扣描电镜观察比较BMSCs在材料表面的生长形态;通过检测细胞中的碱性磷酸酶活性及钙含量,观察BMSCs在材料表面的分化情况. 结果扫描电镜结果显示:支架材料旱多孔状;X射线光电子能谱法证实BMP-2活性多肽成功共价结合到材料表面;BMP-2活性多肽修饰的重组胶原矿化骨复合材料表面BMSCs的黏附和向成骨细胞方向分化能力均高于对照组,差异有统计学意义(P＜0.05),而BMSCs的增殖能力与对照组相比,差异无统计学意义(P＞0.05). 结论BMP-2活性多肽可以显著改善重组胶原矿化骨复合材料的细胞相容性和生物活性,经BMP-2活性多肽修饰的重组胶原矿化骨复合材料是一种理想的骨组织工程支架材料.     

成骨细胞特异性钙黏蛋白涂布脱钙骨基质材料对BMSCs黏附及成骨分化能力的影响

目的 探讨成骨细胞特异性钙黏蛋白(cadhefin ectodomain Ⅱ,Cad-Ⅱ)涂布于同种异体脱钙骨基质材料(freeze-dried demineralized bone matrix,FDBM)对兔BMSCs黏附、增殖及成骨分化能力的影响.方法 取4周龄日本大耳白兔10只,体重0.61～0.88 kg,雌雄不限,常规分离培养BMSCs.取第2代BMSCs(细胞密度1×106个/mL)分别与经Cad-Ⅱ修饰的FDBM(实验组)和未经Cad-Ⅱ修饰的FDBM(对照组)复合,行MTT检测细胞增殖能力,细胞黏附实验检测细胞上架率和上架数,倒置相差显微镜、扫描电镜及HE染色观察细胞生长情况.另取第2代BMSCs(细胞密度5×105个/mL)分别与经Cad-Ⅱ修饰的FDBM(实验组)和未经Cad-Ⅱ修饰的FDBM(对照组)复合培养,行ALP活性检测和骨钙素免疫组织化学染色观察细胞成骨分化情况.结果 MTT检测发现BMSCs在经Cad-Ⅱ修饰的支架材料上能正常增殖,但与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05).实验组细胞上架率为87.41%±5.19%,明显高于对照组35.56%±0.75%(P<0.01);对照组每片材料细胞上架数平均为2.6×104个,实验组平均高达5.0×105个,明显多于对照组(P<0.05).倒置相差显微镜、扫描电镜及HE染色观察均显示实验组支架上黏附细胞数量明显多于对照组.成骨诱导培养7 d,实验组和对照组细胞均可表达骨钙素,具有成骨细胞表型;培养14 d,实验组和对照组ALP活性分别为29.33±1.53和18.31±1.32,骨钙素免疫组织化学染色阳性率分别为83%±7%和56%±7%,两组比较差异均有统计学意义(P<0.01);与同组7、21 d比较差异有统计学意义(P<0.01),7 d与21 d组间及组内比较差异均无统计学意义(P>0.05).结论 Cad-Ⅱ修饰的FDBM对BMSCs增殖无明显促进作用,但能提高细胞黏附性,并促进BMSCs向成骨细胞分化.     

含SrCaP涂层镁合金ZK60对小鼠前成骨细胞功能的影响

目的探讨含锶钙磷（SrCaP）涂层镁合金ZK60对小鼠前成骨细胞黏附、增殖和成骨分化等功能的影响。方法制备含SrCaP涂层的镁合金ZK60材料,以不含SrCaP涂层的ZK60和钛合金材料作为对照,扫描电镜观察材料表面的超微结构;以小鼠MC3T3-E1细胞为对象,扫描电镜、荧光显微镜、MTT法、p-NPP法等观察上述材料对细胞黏附、增殖和成骨分化的影响。结果扫描电镜可见含SrCaP涂层镁合金ZK60表面的粗糙多孔结构。与ZK60组相比,前成骨细胞在该材料上铺展面积更大,黏附更好;死活细胞染色显示培养24 h时SrCaP-ZK60组活细胞数最多;浸提液培养5 d时SrCaP涂层镁合金组细胞增殖显著高于钛合金组（P＜0.05）;培养7 d后,SrCaP涂层镁合金表面成骨细胞碱性磷酸酶表达显著高于ZK60组及钛合金组（P＜0.05）。结论含SrCaP涂层镁合金ZK60具有良好的促成骨细胞黏附、增殖和成骨分化作用。     

氟离子植入猪骨源羟基磷灰石对 MC3T3-E1 细胞黏附、增殖与成骨分化的影响

目的 检测氟离子植入猪骨来源羟基磷灰石（PHA）对小鼠前成骨细胞（MC3T3-E1）黏附、 增殖及成骨分化的影响。方法 取猪骨松质用高温烧结的方法制备PHA，使用氟化钠浸泡结合二次高温 烧结进行氟离子植入，制备获得氟化猪骨源羟基磷灰石（FPHA）骨块，进行研磨获得颗粒材料后制备 压片，采用PHA颗粒制备的压片为对照组，采用FPHA颗粒制备的压片为实验组。在压片材料表面接种 小鼠MC3T3-E1前成骨细胞株，通过扫描电镜SEM观察不同时间细胞黏附形态，CCK-8法检测细胞增 殖情况，RT-PCR法检测细胞成骨相关基因碱性磷酸酶ALP、骨钙素BGLAP、骨桥蛋白OPN mRNA 的表达情况。结果 扫描电镜SEM观察可见，PHA与FPHA组细胞黏附生长良好；两组细胞接种1、7d 后OD值比较，差异无统计学意义（P＞0.05）；FPHA组接种3、5 d后OD值高于PHA组，差异有统计学 意义（P＜0.05）；RT-PCR结果显示，FPHA组细胞接种3、7 d后ALP、BGLAP mRNA表达水平均高于 PHA组，且两组细胞接种7 d后材料表面细胞ALP与BGLAP mRNA表达水平均高于细胞接种3 d后，差异 有统计学意义（P＜0.05）。结论 PHA与FPHA材料均具有良好的细胞相容性，氟离子植入猪骨羟基磷灰 石可促进小鼠前成骨细胞早期增殖与成骨分化。     

miRNA-155／PU.1信号通路阻滞对大鼠骨髓来源树突状细胞成熟及移植免疫的影响

目的探讨miRNA-155／PU-1信号通路阻滞对骨髓来源树突状细胞（DCs）成熟及其对应用于大鼠小肠移植中的免疫功能的影响。方法利用贴壁法培养诱导DCs,针对miRNA-155／PU-1信号通路中关键转录因子PU．1基因设计并合成3对PU．1siRNA（Pu．1沉默组、阴性对照组及对照组）,用脂质体法转染细胞,并筛选一对高沉默效率PU．1siRNA。流式细胞术分析PU．1沉默组、阴性对照组及对照组细胞表面CD80、CD86及主要组织相容性复合体（MHC）-II的表达;ELISA法检测上清液中IL．10及IL．12p70的水平;混合淋巴细胞反应检测对同种异体T淋巴细胞的增殖作用;在大鼠小肠移植前7d经受体尾静脉等量注射3组细胞,移植后观察各组受体存活情况及移植物病理情况。结果①DCs表面分子CD80、CD86和MHC一1I表达率在PU．1沉默组分别为（27．0±5．6）％、（23．6＋4．8）％及（36．8±6．8）％,阴性对照组分别为（74．0±9．4）％、（76．5±8．7）％及（87．8±11．3）％,PU．1沉默组均分别明显低于阴性对照组（尸〈0．05）。②PU．1沉默组IL．10水平较阴性对照组明显升高（尸〈0．05）,IL-12p70则明显降低（尸〈0．05）。③PU．1沉默组DCs刺激同种异体T淋巴细胞增殖也较阴性对照组明显降低（尸〈0．05）。④将PU．1沉默组DCs术前注入受体行大鼠小肠移植后,受体平均存活时间为（14．3±3．3）d,明显长于阴性对照组的（7．8±1．5）d（尸〈0．05）和对照组的（8．0＋2．5）d（P〈0．05）,且术后5d时移植物病理显示移植肠组织轻度淋巴细胞浸润和绒毛水肿。结论体内外实验表明,miRNA-155／PU．1信号通路阻滞的DCs成熟度明显受到抑制,并能稳定发挥诱导受体特异性免疫耐受的作用。     

多肽修饰的聚己内酯-左旋聚乳酸与犬骨髓基质干细胞生物相容性的研究

目的 探讨精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸(RGD)修饰的聚己内酯-左旋聚乳酸共聚物(PCL-b-PLLA)与犬骨髓基质干细胞(BMSCs)的生物相容性.方法 应用密度梯度离心法及贴壁筛选法分离培养犬BMSCs,观察细胞形态及超微结构,流式细胞仪鉴定其表面标记物.将第3代犬BMSCs接种于RGD纳米胶束修饰的PCL-b-PLLA膜L培养,作为实验组,对照组为BMSCs与未修饰的PCL-b-PLLA膜复合培养,3 d后Hoechst 33342荧光染色、倒置显微镜及扣描电镜观察细胞形态,MTT法检测细胞毒性.分别于2、4、6 h细胞计数仪计数检测黏附的细胞数,计算黏附率.结果 原代及传代培养的BMSCs呈梭形外观,具有较强的增殖能力.BMSCs超微结构显示其胞体较小,细胞核/浆比例大,胞浆少,染色质较疏松.细胞表而扰原CD29、CD44表达阳性,CD34表达阴性.Hoechst 33342荧光染色示实验组细胞核形态正常,核质均染,细胞数较对照组明显增多,未见明显凋亡及坏死细胞.扫描电镜示实验组较对照组细胞数量多,延展好,伪足相互接触紧密.两组材料对细胞均无毒性作用.随时间延长两组材料上细胞黏附率逐渐增高,各时间段实验组细胞黏附率显著高于对照组(P＜0.01).结论 RGD修饰的PCL-b-PLLA不仅与犬BMSCs具有良好的生物相容性,而且可显著促进BMSCs黏附、生长,是一种较为理想的组织工程支架材料.     

大量同种异体颗粒骨打压植骨结合多孔非骨水泥臼杯翻修髋臼大面积骨缺损的中期疗效

目的探讨同种异体颗粒骨打压植骨结合多孔非骨水泥臼杯髋臼翻修大面积髋臼骨缺损的技术要点,并随访其中期临床和影像学疗效。方法随访2004年9月-2009年8月之间连续收治的采用同种异体颗粒骨打压植骨联合非骨水泥多孔髋臼杯翻修髋臼骨缺损面积大于整个髋臼关节面50％的27例（27髋）患者。按AAOS分类标准均为AAOSⅢ型骨缺损。按Paprosky分类标准,PaproskyⅡ型19例（19髋）,PaproskyⅢ型8例（8髋）。髋臼假体与宿主自体骨接触面积均小于50％;其中有19例患者的髋臼杯全完与异体骨接触。评价术前、术后的Harris评分,肢体长度。在X线片上评价髋关节旋转中心、髋臼侧透亮线、以及植骨融合情况,并判断髋臼有无松动和移位。用Kaplan-Meier生存分析评价髋臼假体的6年生存率。结果患者均完成随访,平均随访时间（6．4±1．4）年（4～9年）。术前Harris评分为（14．9±4．4）分（6-34分）,最后随访时的Harris评分为（85．6±8．1）分（67～98分）,差异具有统计学意义意义（t=22．181,P〈0．01）。术前肢体短缩（14．7±5．1）mm（6～24mm）,术后肢体短缩（0．2±3．4）mm（-9～12mm）,差异具有统计学意义（t=19．223,P〈0．01）。术后髋关节旋转中心均在Renawat三角内。所有病例术后1～1．5年植入的异体骨均与宿主骨融合。无髋臼假体松动或失败。髋臼假体的6年生存率为100％（95％可信区间为0．95～1．0）。结论髋臼AAOSⅢ型、PaproskyⅡ型甚至部分Ⅲ骨缺损,只要髋臼顶及前、后柱3个方向均存在大部分的骨皮质及一定的支撑作用,即便骨缺损面积大于髋臼关节面的50％,仍可采用同种异体骨颗粒骨打压植骨结合多孔非骨水泥臼杯髋臼重建术进行修复,并可取的满意的中期疗效。     

RGD peptides immobilized on a mechanically deformable surface promote osteoblast differentiation.

The major objective of this work was to attach bone cells to a deformable surface for the effective transmission of force. We functionalized a silastic membrane and treated it with 3-aminopropyltriethoxysilane (APTS). A minimal RGD peptide was then covalently linked to the aminated surface. MC3T3-E1 osteoblast-like cells were cultured on the arginine-glycine-aspartic acid (RGD)-treated membrane for 3-15 days and cell attachment and proliferation was evaluated. We observed that cells were immediately bound to the membrane and proliferated. After 8 days on the material surface, osteoblasts exhibited high levels of ALP staining, indicating that the cells were undergoing maturation. Alizarin red staining and Fourier transform infrared (FTIR) analysis showed that the mineral formed by the cells was a biological apatite. The second objective was to apply a mechanical force to cells cultured on the modified silicone membrane. Dynamic equibiaxial strain, 2% magnitude, and a 0.25-Hz frequency were applied to bone cells for 2 h. Osteoblasts elicited increased phalloidin fluorescence, suggesting that there was reorganization of the cytoskeleton. Furthermore, the applied strain elicited increased expression of the alpha(v)beta3 integrin receptor. We concluded that the covalent binding of RGD peptides to a silicone membrane provides a compatible surface for the attachment and subsequent differentiation of osteoblasts. Moreover, the engineered surface transduces applied mechanical forces directly to the adherent cells via integrin receptors.     

绿茶提取物对人卵巢癌SKOV3细胞生长抑制作用及作用途径的探讨

目的 探讨绿茶提取物（green tea extract,GTE）对人卵巢癌SKOV3细胞生长抑制作用及其作用途径.方法 SKOV3细胞的培养液内添加GTE,培养后,应用甲基噻唑基四唑（methyl thiazolyl tetrazolium,MTT）比色法检测SKOV3细胞的生长曲线;免疫细胞化学法检测细胞抗凋亡蛋白酶（Bcl-xl）、细胞凋亡蛋白酶（Caspase-3）等凋亡相关蛋白的表达;蛋白免疫印迹法（Western blotting）检测雌激素受体α（ERα）、雌激素受体β（ERβ）、芳香化酶（aromatase）等蛋白的表达水平.结果 MTT法显示,培养液内添加不同浓度GTE均能明显抑制SKOV3细胞生长（P〈0.05）,且呈明显的浓度依赖性;免疫细胞化学法显示,培养液内添加GTE 80 μg/L作用24 h后,SKOV3细胞中Bcl-xl蛋白的平均吸光度（A）值为（0.228±0.032）,与对照组（0.303±0.014）相比显著下调（P〈0.01）,Caspase-3蛋白平均A值为（0.193±0.043）,与对照组（0.135±0.030）相比明显上调（P〈0.05）;Western blotting法显示,经GTE（40、80 μg/L）作用24 h后,SKOV3细胞中ERα、aromatase的蛋白表达明显下调,ERα与内参β-肌动蛋白（β-actin）的比值分别为（0.665±0.042）、（0.208±0.020）,与对照组（0.846±0.046）相比均显著降低（P〈0.01）,aromatase与β-actin的比值分别为（0.251±0.030）、（0.129±0.054）,与对照组（0.728±0.026）相比亦均显著降低（P〈0.01）;ERβ蛋白的表达明显上调,其与β-actin的比值为（0.322±0.081）、（0.735±0 032）,与对照组（0.098±0.039）相比显著升高（P〈0.01）.结论 GTE在体外能有效抑制SKOV3细胞的生长与增值,其作用机制可能与诱导SKOV3细胞凋亡,并可下调ERα、aromatase蛋白的表达水平,上调ERβ蛋白的表达水平有关.     

改良超滤对体外循环后血浆可溶性细胞间黏附分子与肿瘤坏死因子α浓度变化的影响

目的探讨改良超滤在减轻体外循环（CPB）后炎症反应及内皮细胞损伤中的作用。方法将40例在CPB下行心脏直视手术的患者随机分为两组，超滤组（n=20）：在CPB后行改良超滤；对照组（n=20）：不进行改良超滤。两组患者分别于术前、CPB结束、术后4h和术后24h取静脉血，用酶联免疫吸附法测定血浆可溶性细胞间黏附分子-1（sICAM-1）和放射免疫法测定肿瘤坏死因子α（TNF—α）浓度，并进行比较。结果对照组患者术后4h和24h血浆sICAM-1浓度明显高于术前（P〈0．01）。术前和CPB结束时超滤组sICAM-1与对照组比较差异无统计学意义，术后4h和24h则明显低于对照组（269．6±33．8／μg／Lvs．409．6±37．3／μg／L，245．9±32．2／μg／Lvs．379．3±35．7μg／L；P〈0．01）。CPB结束时和术后4h超滤组TNF—α浓度明显高于术前（P〈0．01），但术后24h基本恢复至术前水平（0．177±0．024μg／Lvs．0．172±0．030μg／L；P〉0．05）。对照组CPB结束时TNF—α浓度明显高于术前（P〈0．01），术后4h和24h浓度有所下降，但仍较术前高（0．264±0．045μg／Lvs．0．174±0．033μg／L，0．218±0．028μg／Lvs．0．174±0．033μg／L；P〈0．05）。结论CPB可诱导炎症反应致内皮细胞损伤或激活，而改良超滤可明显减轻这些不良反应，有利于患者术后的恢复。     

不同植骨材料对跟骨骨折切口愈合的影响

目的研究两种不同植骨材料（白体髂骨、同种异体骨）对跟骨骨折术后切口愈合的影响。方法回顾性研究安徽医科大学第一附属医院自2009年1月至2012年12月采用切开复位AO钢板内固定加植骨术治疗的76例单侧跟骨骨折患者,其中男53例,女23例,平均年龄39．5岁。自体髂骨植骨40例（A组）,同种异体骨植骨36例（B组）。应用统计学方法对患者年龄、伤后至手术时间、切口干燥时间、切口愈合时间、术后24h切口引流量等进行评价。结果A组平均年龄（39．43±11．71）岁,伤后至手术平均时间（10．27±2．54）d,切口平均干燥时间（6．02±1．37）d,切口平均愈合时间（14．08±1．27）d,术后24h平均引流量（78．58±13．92）mL;B组平均年龄（39．53±110．52）岁,伤后至手术平均时间（9．14±3．19）d,切口平均干燥时间（8．08±1．02）d,切口平均愈合时间（16．14±1．84）d,术后24h平均负压引流量（96．69±13．57）mL。A组与B组的切口干燥时间、愈合时间、术后24h引流量的比较差异有统计学意义（P〈0．05）。结论自体髂骨植骨较同种异体骨植骨会缩短跟骨骨折切口的愈合时间。     

煅烧骨与诱导的MSCs复合的实验研究

目的：观察大鼠骨髓基质干细胞（MSCs）与经胶原涂层处理的煅烧骨（CCB）复合行体外培养时贴附、增殖能力的变化,探讨构建组织工程骨体外培养的最适时间。方法：制备鼠尾胶原（I型胶原）,无菌条件下,将煅烧骨置于胶原液中,2h后取出骨块,置滤网中将孔内外的胶原溶液沥干。体外培养的大鼠MSCs经矿化液诱导向成骨细胞分化。将分化后的成骨细胞滴加到涂胶原的煅烧骨块上,同时以未涂胶原的煅烧骨块为对照组。3天,7天时取材,扫描电镜下观察实验组与对照组成骨细胞在煅烧骨表面的贴附数量及形态,用细胞计数法测定细胞在两组材料的生长曲线,组织化学方法检测成骨细胞的ALP活性。结果：扫描电镜发现实验组成骨细胞的贴附数量显著高于对照组（P〈0．01）。细胞计数认为实验组细胞在材料上粘附数量多,增殖速度快。实验组ALP活性明显高于对照组（P〈0．01）。结论：胶原修饰的煅烧骨具有良好的组织相容性,能明显提高成骨细胞的贴附,并且促进成骨细胞活性维持,体外培养7～8天时,材料上的细胞数达到最大,应尽快植入体内。     

SLP-2对前列腺癌PC-3细胞增殖和早期凋亡的影响

目的探讨SLP-2（stomatin-like protein2）基因对人前列腺癌PC-3细胞增殖和凋亡的影响。方法合成和构建SLP-2沉默和过表达载体,用Lipofectamine TM2000分别转染5组人前列腺癌PC-3细胞：pcDNA3．1-SLP-2组,空质粒pcDNA3-1组,siRNA—SLP-2组,siRNA阴性对照组以及空白对照组。采用Q-PCR和Western-Blot分别检测PC-3细胞中SLP-2的mRNA和蛋白表达量;用细胞计数试剂盒（CCK-8）检测PC-3细胞增殖;采用细胞线粒体膜电位JC-1试剂盒检测PC-3细胞的早期凋亡情况。结果转染pcDNA3．1-SLP-2质粒和siRNA-SLP-2后PC-3细胞SLP．2基因mRNA表达水平分别为（324．884±16．508）和（0．195±0．016）,蛋白表达水平分别为（5．013±0．284）和（0．296±0．011）,与空白对照组相比差异均有统计学意义（P〈0．05）;转染pcDNA3-1-SLP-2基因48h、72h、96h后Pc。3细胞增殖吸光度值（OD值）分别为（0．714±0．007）、（1．103±0．018）、（1．348±0．018）,均显著高于空白对照组（P〈0．05）。采用siRNA沉默SLP．2基因48h、72h、96h后PC-3细胞增殖率分别为（0．571±0．004）、（0．875±0．010）、（1．044±0．008）,均显著低于空白对照组（P〈0．05）;细胞凋亡结果显示,转染pcDNA3．1-SLP．2和siRNA-SLP-2的PC-3细胞早期凋亡率分别为（2．433±0．577）和（9．197±0．602）,与空白对照组（4．993±0．710）相比差异均有统计学意义（P〈0．05）。结论SLP-2可促进人前列腺癌PC-3细胞的增殖,并抑制细胞的早期凋亡。     

P-15作为新型生物材料在治疗椎体压缩骨折中的应用的实验研究

P-15是15种普通氨基酸肽合成的，属于类似人I型胶原蛋白a链的细胞粘附领域材料。这是目前一个组织正在生产并使用作为表层无机骨的材料（ABM／P15），在这种形式实验该材料具有增强细胞黏附能力，促进细胞分化、迁移和细胞生存。我们打算在体外培养进一步研究新的细胞迁移试验和试管定量实验。我们还打算在小鼠模型体内研究探讨P15对于血管生成，软骨内成骨和骨形成的影响机制。结论P15可以增强骨细胞粘附，促进细胞分化、迁移及提高细胞存活率，重要的是可以促进骨再生。