问荆碱对大鼠脑囊泡膜Mg2+-ATPase,Ca2+-ATPase抑制作用的动力学研究

问荆碱对大鼠脑囊泡膜Mg²⁺-ATPase,Ca²⁺-ATPase有显著的抑制作用,对Mg²⁺-ATPase的抑制机制分别为竞争性抑制(Mg²⁺,Ki=4.93×10^-5mol/L)、非竞争性抑制(ATP,Ki=1.06×10^-4mol/L),对Ca²⁺-ATPase的抑制机制分别为混合型抑制(Ca²⁺,Ki=5.07×10^-5mol/L)、非竞争性抑制(ATP,Ki=3.27×10-4mol/L)。     

羊栖菜多糖对S180荷瘤小鼠红细胞相关生化功能影响的研究

 目的分析羊栖菜多糖对S₁₈₀荷瘤小鼠红细胞相关生化功能影响的研究。方法建立肿瘤动物模型,分高、中、低剂量腹腔给予羊栖菜多糖7 d,采集红细胞,制备红细胞悬液,运用激光共聚焦扫描技术测定荷瘤小鼠红细胞内[Ca²⁺]的变化;运用相关试剂盒测定红细胞膜表面唾液酸含量和Na⁺,K⁺-ATPase及Ca²⁺,Mg²⁺-ATPase活性的变化;用流式细胞仪分析红细胞膜电位水平的变化;采用高效毛细管电泳法测定红细胞电泳合淌度的变化。结果羊栖菜多糖能降低荷瘤小鼠红细胞内[Ca²⁺],升高膜表面唾液酸的含量,增强膜表面Na⁺,K⁺-ATPase及Ca²⁺,Mg²⁺-ATPase的活性,提高红细胞膜电位水平,提高红细胞的电泳合淌度。结论羊栖菜多糖可调节或恢复S₁₈₀荷瘤小鼠红细胞多种生理生化功能。     

归芪胶囊对家兔心肌缺血-再灌注损伤作用的实验研究

目的:探讨归芪胶囊对家兔心肌缺血-再灌注损伤(MIRI)保护作用的可能机制。方法:青紫蓝家兔45只,用随机数字表法分为5组,分别为假手术组、模型组、归芪胶囊小剂量组、归芪胶囊大剂量组和地奥心血康对照组。采用冠状动脉前降支结扎法复制MIRI损伤动物模型,实验过程中动态观察心电图(ECG),以家兔血浆内皮素(ET)、血清一氧化氮(NO),心肌钠泵(Na⁺-K⁺-ATPase)和钙泵(Ca²⁺-Mg²⁺-ATPase)为指标进行实验观察,用SPSS10.0统计软件进行数据分析。结果:归芪胶囊对MIRI损伤家兔心电图ST段抬高后的恢复性下降,血清NO的升高,血浆ET的降低,心肌Na⁺-K⁺-ATPase和Ca²⁺-Mg²⁺-ATPase的升高有显著作用(P<0.01)。结论:归芪胶囊通过对血浆ET,血清NO,心肌Na⁺-K⁺-ATPase和Ca²⁺-Mg²⁺-ATPase含量的影响,对再灌注心肌损伤有保护作用。     

参附注射液对戊巴比妥钠致心衰模型心肌细胞膜ATP酶和相关离子的影响

目的: 通过探讨参附注射液对新生大鼠心力衰竭心肌细胞Ca²⁺-ATP酶,Ca²⁺-Mg²⁺-ATP酶、Na⁺-K⁺-ATP酶活性及细胞内Na⁺,Mg²⁺,K⁺,Ca²⁺浓度的影响,揭示参附注射液强心作用的机制。 方法: 通过胰蛋白酶消化法和差速贴壁法获得心肌细胞,经0.8%戊巴比妥钠作用5min后,分别给予1.5, 3, 6 mg·L^-1(5,10,20 mL·L^-1)3个不同浓度的参附注射液,作用1 h,检测心肌细胞Ca²⁺-ATP酶,Ca²⁺-Mg²⁺-ATP酶,Na⁺-K⁺-ATP酶的活性和细胞内Na⁺,Mg²⁺,K⁺,Ca²⁺的浓度。 结果: 参附注射液能增加心衰模型心肌细胞的搏动强度,提高Ca²⁺-ATP酶和Ca²⁺-Mg²⁺-ATP酶的活性,抑制Na⁺-K⁺-ATP酶的活性,降低细胞内K⁺,Ca²⁺的浓度,升高细胞内Na⁺,Mg²⁺的浓度。 结论: 参附注射液对戊巴比妥钠致心衰细胞有明显的保护作用,且作用的发挥与调节心肌细胞Ca²⁺-ATP酶,Ca²⁺-Mg²⁺-ATP酶,Na⁺-K⁺-ATP酶的活性和细胞内Na⁺,Mg²⁺,K⁺,Ca²⁺的浓度有关。     

水飞蓟宾对成年大鼠分离的心肌细胞质膜Ca2+通道 活性的影响

 目的：观察药物水飞蓟宾对分离的成年大鼠心肌细胞钙通道阻滞效应。方法：用成年大鼠分离的心肌细胞，以放射性同位素⁴⁵Ca²⁺作示踪，通过对经细胞膜Ca²⁺流入测定，研究药物水飞蓟宾对钙通道的抑制效应，并与钙通道阻滞剂维拉帕米对照。结果：维拉帕米组Ca²⁺流入的平均抑制效应为30%左右（P<0.001),水飞蓟宾组为36.50%左右(P<0.001)。结论：药物水飞蓟宾能显著阻滞分离的成年大鼠心肌细胞胞膜钙通道。     

灵芝多糖对小鼠腹腔巨噬细胞胞浆游离Ca2+浓度的影响

 目的:探讨灵芝多糖(GLP)对免疫细胞信号转导过程的影响?方法:采用激光扫描共聚焦显微镜(LSCM)技术,动态监测GLP均一体组分GLB₇对小鼠腹腔巨噬细胞(MΦ)胞浆游离Ca²⁺浓度([Ca²⁺]i)的影响?结果:GLB₇(20μg·ml^-1)引起小鼠腹腔MΦ中[Ca²⁺]i明显升高,升高值为(248±18)%(n=6);GLB₇引起小鼠腹腔MΦ外钙内流及MΦ内IP₃敏感和IP₃非敏感钙池释放Ca²⁺,[Ca²⁺]i升高值分别为(76±10)%,(58±10)%,(41±8)%(n=6);GLB₇对MΦ[Ca²⁺]i的影响与K⁺通道及其引起的膜电位变化无关?结论:MΦ是灵芝多糖作用的靶细胞;GLB₇引起MΦ中[Ca²⁺]i快速升高,可能是灵芝多糖产生作用的重要途径?     

小檗碱对DHF大鼠血流动力学和心肌细胞内钙离子浓度的影响

目的:观察小檗碱(Ber)对舒张性心力衰竭(diastole heart failure,DHF)大鼠血流动力学和心肌细胞内钙离子浓度[Ca²⁺]_i的影响。方法:Wistar大鼠腹主动脉缩窄法建立DHF模型;术后4周,模型大鼠随机分为DHF模型组,Ber高、中、低剂量组(63,42,21mg·kg^-1.d^-1)4组(n=10),另有假手术组10只。连续给药4周后,应用十六导生理记录仪测定血流动力学指标;用激光扫描共聚焦显微镜(LSCM)扫描用Fluo-3AM负载好的心肌细胞内的荧光强度(FI)来表示[Ca²⁺]_i。结果:模型组与假手术组比,左心室收缩压(LVSP)、左室内压最大上升速率(+dp/dt_max)无显著变化,左心室舒张末期内压(LVEDP)显著升高(P<0.01),左室内压最大下降速率(-dp/dt_max)显著降低(P<0.01),左室松弛时间常数(T)数值显著延长(P<0.01);心肌细胞内[Ca²⁺]_i明显增高(P<0.05)。与模型组比较,Ber高剂量组比中剂量组低剂量组更显著降低LVEDP,显著升高-dp/dt_max(P<0.01),显著缩短T(P<0.01),显著降低心肌细胞内[Ca²⁺]_i(P<0.01)。结论:Ber高剂量组可以明显改善DHF大鼠血流动力学和降低心肌细胞内[Ca²⁺]_i。     

野西瓜正丁醇萃取物对HepG2细胞线粒体膜电位和［Ca2+］i的影响

目的 研究野西瓜正丁醇萃取物诱导人肝癌细胞 HepG2 细胞凋亡的机制,观察其对 HepG2 线粒体膜电位和细胞内 Ca²⁺ 浓度［Ca²⁺］_i 的影响。方法 经流式细胞仪观察野西瓜正丁醇萃取物对线粒体膜电位的影响;激光共聚焦显微镜检测野西瓜正丁醇萃取物作用前后,HepG2 细胞［Ca²⁺］_i 的变化。结果 野西瓜正丁醇萃取物可不同程度降低 HepG2 细胞线粒体跨膜电位,此外,中、高剂量的野西瓜正丁醇萃取物还可以显著升高［Ca²⁺］_i,造成钙稳态平衡。结论 野西瓜正丁醇萃取物降低线粒体膜电位,开放 MPTP 孔道,造成细胞内 Ca²⁺ 超载,诱导 HepG2 细胞凋亡。     

花椒油对HaCaT细胞膜流动性及膜电位的影响及其机制研究

目的：本文选择HaCaT角质形成细胞测定花椒挥发油对其细胞膜流动性和膜电位的影响及其机制,研究花椒挥发油对皮肤活性表皮的影响,探讨其促进药物透皮吸收的作用机制。方法：采用CCK-8试验测定花椒挥发油的细胞毒性,利用荧光漂白恢复技术（FRAP）考察不同浓度花椒挥发油对细胞膜流动性的影响,采用流式细胞仪测定不同浓度花椒挥发油对细胞膜电位的改变,同时考察了花椒挥发油对HaCaT细胞内Ca²⁺浓度的影响,采用超微量Ca²⁺-ATP酶试剂盒测定花椒挥发油对HaCaT细胞内Ca²⁺-ATP酶活性的影响。结果：相对于常用化学促透剂氮酮,花椒挥发油具有较低细胞毒性,花椒挥发油可增加HaCaT细胞膜流动性、降低细胞膜电位,同时可降低Ca²⁺-ATP酶活性、增加HaCaT细胞内Ca²⁺浓度而影响细胞Ca²⁺平衡。结论：花椒挥发油可能通过改变细胞内Ca²⁺平衡而影响细胞膜流动性及膜电位,增加活性表皮流动性以降低皮肤表皮屏障作用,从而利于药物的透皮吸收。     

左旋四氢帕马汀对异丙肾上腺素致大鼠急性心肌缺血损伤的保护作用

 目的研究左旋四氢帕马汀对异丙肾上腺素(ISO)致大鼠急性心肌缺血的保护作用及机制。方法采用大剂量ISO sc 诱导产生大鼠急性心肌缺血模型(ISO 30 mg·kg^-1,每日1次,连续2d),实验大鼠随机分为正常组、ISO模型组、阳性时照组、左旋四氢帕马汀(60,120mg·kg^-1)给药组,测定心脏系数和血清中乳酸脱氢酶(LDH)、磷酸肌酸激酶(CK)和丙二醛(MDA)含量。观察心肌组织谷胱甘肽过氧化物酶(CSH-Px);Na⁺-K⁺-ATPase,ca²⁺-Mg²⁺-ATPase活性。观察左旋四氢帕马汀的保护作用。结果左旋四氢帕马汀能显著降低血清中CK和LDH的释放;也能显著降低血清和心脏匀浆中MDA水平,心脏重量参数显示对心肌水肿有明显的抑制作用;保护心肌GSH-Px,Na⁺-K⁺-ATPase和Ca²⁺-Mg²⁺-ATPase活性。结论左旋四氢帕马汀对ISO所致大鼠急性心肌缺血有显著的保护作用。     

葛根素对氧糖剥夺大鼠海马神经细胞Ca2+和NO的影响

 目的研究葛根素(puerarin,Pur)对缺氧缺糖状态下海马神经细胞内Ca²⁺和NO水平的影响。方法选用新生大鼠体外培养8 d的海马神经细胞,进行3 h的氧糖剥夺(oxygen/glucose deprivation,OGD)或30 min的L-谷氨酸(0.5mmol·L^-1)处理后再正常培养24 h,Pur处理组在OGD或谷氨酸处理的同时和以后24 h给予不同剂量(40,100μmol·L^-1)Pur,Annexin V联合流式细胞仪检测细胞的凋亡率和坏死率;以Fluo-3或DAF-2为荧光标记,用激光共聚焦显微镜观测30 min的OGD过程中海马神经细胞Ca²⁺和NO的动态变化以及Pur的影响。结果OGD诱导海马神经细胞Ca²⁺和NO水平快速升高,其最高值分别达正常对照组的2.9和1.9倍;Pur明显减缓OGD期间神经细胞Ca²⁺内流和NO合成,与OGD组相比,40和100μmol·L^-1的Pur分别使细胞Ca²⁺峰值降低29.2%和37.1%(P<0.05和P<0.01),NO峰值降低23%和33%(P<0.05和P<0.01),显著抑制细胞内Ca²⁺和NO水平的升高;同时Pur可有效抑制OGD和谷氨酸引起的神经细胞死亡。结论Pur可通过抑制神经细胞谷氨酸/Ca²⁺/NO通路的活动而有效保护缺氧缺糖对神经细胞的损伤作用。     

旋覆代赭汤对RE模型大鼠食管黏膜Na+-K+-ATP酶及 Ca2+-Mg2+-ATP酶的影响

目的: 观察旋覆代赭汤对反流性食管炎(RE)模型大鼠食管黏膜组织Na⁺-K⁺-ATP酶及Ca²⁺-Mg²⁺-ATP酶活性的影响,探讨RE食管黏膜细胞能量代谢障碍与黏膜损伤的关系以及旋覆代赭汤治疗RE的作用机制。方法: 将96只雄性Wistar大鼠随机分成6组,即假手术组、模型组、旋覆代赭汤组高、中、低剂量组(24,12,6 g·kg^-1)及西药对照组(奥美拉唑10 mg·kg^-1+2 mg·kg^-1莫沙必利),每组16只。采用"食管-十二指肠端侧吻合术"制备胃及十二指肠液混合RE模型。从术后第3天开始,假手术组、模型组给予生理盐水灌胃,药物治疗组分别给予旋覆代赭汤高、中、低剂量、西药(奥美拉唑10 mg·kg^-1+莫沙必利2 mg·kg^-1)灌胃,连续7天,记录大鼠体重变化及死亡情况,于第8天处死大鼠留取标本,观察食管下段黏膜大体及病理组织学变化;化学法检测食管黏膜组织Na⁺-K⁺-ATP和Ca²⁺-Mg²⁺-ATP酶活性。结果: 与假手术组比,模型组大鼠体重明显减轻(P<0.05),食管黏膜肉眼及镜下病理改变明显,评分增高(P<0.05);食管黏膜组织Na⁺-K⁺-ATP酶及Ca²⁺-Mg²⁺-ATP酶活性显著降低(P<0.05);与模型组及西药组比,旋覆代赭汤高、中剂量组大鼠死亡率明显降低(P<0.05):与模型组比,旋覆代赭汤高、中剂量组、西药组肉眼及病理评分显著降低(P<0.05);食管黏膜组织Na⁺-K⁺-ATP酶及Ca²⁺-Mg²⁺-ATP酶活性明显提高(P<0.05)。结论: 旋覆代赭汤能明显提高RE大鼠食管黏膜细胞膜Na⁺-K⁺-ATP 酶及Ca²⁺-Mg²⁺-ATP酶活性, 从而保持食管黏膜细胞完整性,减轻黏膜损伤。     

海嘧啶体内外抗肿瘤作用研究

 目的研究海嘧啶抗胃癌作用及作用机制。方法采用MTT实验和集落形成实验观察海嘧啶的体外抗肿瘤作用;通过 海嘧啶对Fc小鼠和S₁₈₀,H₂₂荷瘤小鼠瘤重和生存时间的研究,观察海嘧啶的体内抗肿瘤作用。采用流式细胞仪测定海嘧啶对 人胃癌细胞凋亡及细胞周期的影响;采用激光扫描共聚焦技术观测海嘧啶对人胃癌细胞内[Ca²⁺]_i的影响及[Ca²⁺]_i变化时Ca²⁺的来源。结果 海嘧啶对8种人癌细胞具有一定的杀伤作用,其中以对BGC-823,Eca-109,HCT-8细胞的抑制作用最强;对 BGC-823,Eca-109,HCT-8细胞的集落形成有明显的抑制作用,并以对Eca-109细胞集落形成抑制作用最强;可明显抑制FC小鼠 和S₁₈₀小鼠瘤体的生长,明显延长H₂₂荷瘤小鼠的生存时间。海嘧啶可诱导肿瘤细胞凋亡,升高肿瘤细胞内[Ca²⁺]_i的浓度, [Ca²⁺]_i升高时Ca²⁺来源于细胞外钙内流和细胞内钙释放。结论海嘧啶有明显的抗肿瘤作用,其抗肿瘤机制为诱导肿瘤细 胞凋亡。海嘧啶通过开放细胞膜钙通道和引起细胞内钙释放两条途径升高肿瘤细胞内[Ca²⁺]_i,启动细胞凋亡机制,从而诱导 肿瘤细胞凋亡。     

双参通冠方药物血清抗缺氧复氧损伤心肌细胞Ca2+超载的机制研究

目的:探讨双参通冠方药物血清对培养心肌细胞缺氧复氧损伤Ca²⁺超载的影响及其机制。方法:培养心肌细胞,建立缺氧复氧损伤模型。运用血清药理学方法研究双参通冠方药物血清对缺氧复氧损伤心肌Ca²⁺超载的影响。荧光分光光度法测定心肌细胞胞浆[Ca²⁺]i,激光扫描共聚焦显微法观察高K+及Thapsigargin诱导的细胞内Ca²⁺变化。结果:正常心肌细胞[Ca²⁺]i值较低,缺氧复氧后显著增高,高K⁺及Thapsigargin可诱导细胞内Ca²⁺的快速增多,双参通冠方药物血清能降低缺氧复氧心肌细胞Ca²⁺升高,并能抑制高K⁺及Thapsigargin所致的细胞内Ca²⁺荧光升高。结论:缺氧复氧损伤、高K⁺及Thapsigargin均可导致心肌细胞Ca²⁺增高,双参通冠方药物血清可抗心肌细胞Ca²⁺超载,其机制可能与其抑制细胞外Ca²⁺内流和促进内Ca²⁺吸收有关。     

复方刺五加注射液对大鼠心肌缺血再灌注心律失常的影响

目的：观察复方刺五加注射液(CASI)对大鼠心肌缺血再灌注心律失常的保护作用。方法：采用在体大鼠开胸结扎冠状动脉前降支30 min后,松扎再灌注60 min造成心肌缺血再灌注模型,以心电图监测心律失常情况,并测定心肌组织超氧物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活力,丙二醛(MAD)及Ca²⁺含量变化。结果：股静脉输注CASI 25,50,100 mg·kg^-1能有效防止大鼠心肌缺血再灌注室性心律失常的发生,延迟心律失常的出现时间,缩短心律失常的持续时间,降低ST段的抬高程度,可明显提高缺血再灌注心肌组织中SOD及GSH-Px活力,降低MAD及Ca²⁺含量。结论：CASI对大鼠心肌缺血再灌注心律失常具有明显保护作用,其机制可能与提高心肌组织的抗氧化酶活性,减少自由基及Ca²⁺超负荷对心肌的氧化损伤有关。     

羊栖菜多糖SFPS-B1诱导SGC-7901细胞凋亡及对细胞［Ca2+］i和pH值的影响

目的 研究羊栖菜多糖 SFPS-B1 诱导人胃癌细胞 SGC-7901 凋亡作用及对细胞［Ca²⁺］_i 和 pH 值的影响。方法 采用 MTT 法检测 SFPS-B1 对细胞增殖的影响;采用荧光显微镜观察细胞凋亡形态;采用激光共聚焦显微镜观察 SFPS-B1 对 SGC-7901 细胞［Ca²⁺］_i 和 pH 值的影响。结果 SFPS-B1 对 SGC-7901 细胞增殖有抑制作用,可使细胞体积缩小、出现凋亡小体。药物作用后细胞［Ca²⁺］_i 明显上升,pH 值明显降低。结论 SFPS-B1 具有抑制人胃癌 SGC-7901 细胞增殖并诱导凋亡作用,对细胞［Ca²⁺］_i 和 pH 值的影响在其诱导 SGC-7901 细胞凋亡中发挥了作用。     

龙葵碱诱导HepG2细胞凋亡的线粒体通路研究

 目的观察龙葵碱诱导HepG₂细胞凋亡与线粒体通路的关系。方法MTT法测定龙葵碱对HepG₂细胞的细胞毒作用;AO/EB双染,激光共聚焦扫描显微镜观察龙葵碱对HepG₂细胞形态学的影响;TMRE和Fluo-3/AM双染,激光共聚焦扫描显微镜同时观察细胞线粒体膜电位和细胞内[Ca²⁺]_i的变化。结果龙葵碱对HepG₂细胞有细胞毒作用;龙葵碱诱导HepG₂细胞形态出现凋亡形态时TMRE和Fluo-3/AM双染观察表明,龙葵碱在降低线粒体膜电位的同时能够升高细胞内[Ca²⁺]_i浓度。结论龙葵碱降低膜电位,开放细胞膜PT通道,使细胞内Ca²⁺顺浓度梯度转运,从而升高细胞内Ca²⁺浓度启动细胞凋亡机制。     

羟苯氨酮对心肌生理特性及细胞内游离钙的影响

 目的 了解羟苯氨酮(oxyphenamone)对心肌基本生理特性的影响及正性肌力作用机制。方法 测定豚鼠离体乳头肌和心房肌张力与动作电位,Fura-2/AM法测细胞内游离钙。结果 羟苯氨酮剂量依赖性地增加心肌收缩力,延长收缩时程,减慢右房自发频率,减低心肌自律性,延长功能不应期和动作电位时程,不影响心肌兴奋性。它不增加心肌细胞内[Ca²⁺],甚至还能明显地对抗缺氧复氧所致的细胞内钙超载。结论 除增强心肌收缩性外,羟苯氨酮对心肌的其他生理特性及细胞内[Ca²⁺]的影响不同于磷酸二酯酶抑制剂(PDEI)等正性肌力药,有希望发展成为一种不易导致心律失常的、不良反应较低的新型强心药。     

龙葵碱对雄性小鼠睾丸支持细胞毒性的初步研究

目的 初步探讨龙葵碱对睾丸支持细胞的毒性。方法 原代培养睾丸支持细胞,MTT 法检测不同浓度龙葵碱对于支持细胞的毒性作用;激光共聚焦显微镜观察细胞内线粒体膜电位的变化以及［Ca²⁺］_i 的改变。结果 龙葵碱作用于睾丸支持细胞 72 h 的 IC₅₀ 为 22.29 μmol/L。随着剂量的增大,细胞内线粒体膜电位降低,［Ca²⁺］_i 升高。结论 龙葵碱通过损伤小鼠睾丸支持细胞线粒体,升高细胞 ［Ca²⁺］_i,从而对睾丸支持细胞产生毒性作用。     

半枝莲多糖对S180荷瘤小鼠红细胞功能的影响

目的: 探讨半枝莲多糖增强荷瘤小鼠红细胞膜流动性及其红细胞免疫调节机制。 方法: 健康雄性小鼠48只,按体重随机分为正常对照组、模型对照组、黄芪多糖对照组(100 mg·kg^-1)、半枝莲多糖低、中、高剂量组(50,100,200 mg·kg^-1)。用荧光分光光度计检测荷瘤小鼠红细胞膜流动性;用紫外分光光度计检测红细胞膜Ca²⁺,Mg²⁺-ATP酶活力、唾液酸(SA)含量、抗氧化酶系的活力。 结果: 与模型对照组比较,半枝莲多糖各剂量组可明显提高S180荷瘤小鼠红细胞膜流动性(P<0.01,P<0.05),可明显提高红细胞膜Ca²⁺,Mg²⁺-ATP酶活力(P<0.01,P<0.05)、及抗氧化酶系的活力(P<0.01,P<0.05);低、中剂量组可增加红细胞膜表面唾液酸含量(P<0.01)。 结论: 半枝莲多糖可能通过改善S180荷瘤小鼠红细胞膜的功能状态,提高膜的流动性,增强红细胞的免疫功能,从而发挥其抗肿瘤作用。