高血压中医分型与内皮素、一氧化氮的关系探讨

目的 探讨原发性高血压中医分型与血浆内皮素／血清一氧化氮的变化规律。方法 102例原发性高血压患者按中医辨证分型为阴阳两虚型（30例）、痰湿壅盛型（23例）、阴虚阳亢型（31例）、肝火亢盛型（18例）和正常血压对照组（23）例。分别检测血浆内皮素（ET）、血清一氧化氮（NO）浓度，并分析之间的关系。结果 除肝火亢盛外，高血压中医各证型较正常对照组ET明显增高，NO明显降低。ET值：阴阳两虚型＞痰湿壅盛型＞阴虚阳亢型＞肝火亢盛型。NO值：阴阳两虚型＜痰湿壅盛型＜阴虚阳亢型＜肝火亢盛型。结论 ET／NO可作为高血压中医证型严重度的判断指标。     

KCNJ11启动子区甲基化在2型糖尿病患者中的初步研究

目的探讨2型糖尿病(T2DM)与患者KCNJ11启动子区部分Cp G位点的甲基化的相关性。方法选取15例新发单纯性2型糖尿病患者和15例健康正常对照者,用亚硫酸盐法测定KCNJ11基因启动子5’端300bp中的46个Cp G位点DNA甲基化水平,用半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)测定KCNJ11基因转录表达。结果在KCNJ11启动子区的实验区域存在多个甲基化水平增高的位点,两组比较,总甲基化比率及其m RNA表达无明显差异(t=1.0323;P>0.05),每个研究对象KCNJ11启动子区的Cp G+62、Cp G+66、Cp G+351位点甲基化比率均有升高,两组间比较无明显差异(t=0.2582,0.7821,1.1859;P>0.05),但Cp G+78、Cp G+96、Cp G+100、Cp G+104、Cp G+108、Cp G+111、Cp G+21、Cp G+129、Cp G+132、Cp G+136、Cp G+141、Cp G+168、Cp G+174、Cp G+178、Cp G+201、Cp G+210、Cp G+215、Cp G+219、Cp G+223、Cp G+233、Cp G+248、Cp G+268、Cp G+270、Cp G+272、Cp G+288、Cp G+324等26个位点的甲基化比率在2型糖尿病组的个别患者中有所升高,而在健康正常对照组却未出现甲基化。结论 2型糖尿病患者KCNJ11启动子区甲基化呈现异常,可能参与2型糖尿病的发病。     

高血压共患焦虑抑郁的中医证型特点分析及ET-1、hs-CRP、PP的证型分布规律探索

目的 探讨高血压（HT）共患焦虑抑郁患者的证型分布特点,分析ET-1、hs-CRP、PP的证型分布规律。方法 收集332例患者中有227例符合纳入标准,其中肝火亢盛型58例、阴虚阳亢型61例、痰湿壅盛型57例、肝郁脾虚型51例,采用焦虑自评量表（SAS）、抑郁自评量表（SDS）分别予以评分,评估焦虑、抑郁状况,对其结果进行统计分析。结果 肝火亢盛型、阴虚阳亢型、肝郁脾虚型与焦虑状态呈负相关,痰湿壅盛型与抑郁状态呈负相关。SAS评分关联证型排序为肝火亢盛型>阴虚阳亢型>肝郁脾虚型>痰湿壅盛型;SDS评分关联证型排序为痰湿壅盛型>肝郁脾虚型>肝火亢盛型>阴虚阳亢型。肝火亢盛型、痰湿壅盛型的ET-1水平明显增高,P <0.05;阴虚阳亢型、痰湿壅盛型的hs-CRP水平增高,P <0.05;阴虚阳亢型的PP水平显著增大,P <0.05。结论 HT共患焦虑抑郁患者各证型具有各自的临床分布特征,ET-1、hs-CRP、PP水平呈现出相应的证型分布趋归性。     

老年高血压中医证型特征与心血管预后危险因素的关系分析

目的 深入研究老年高血压中医证型特征与心血管预后危险因素是否存在一定的联系。方法 100例老年高血压患者作为研究对象,分析其中医证型特征分布情况,选择放射免疫法和循环酶法检测患者血肌酐、血糖、血脂等指标,并采集其年龄、性别、体质量指数、血压等一般资料,分析不同中医证型与心血管预后危险因素的关系。结果 100例患者经过中医辨证论治,其中阴阳两虚证25例,阴虚阳亢证15例,瘀血阻络证23例,肝火亢盛证16例,痰湿壅盛证21例。痰湿壅盛证体质量指数均高于阴虚阳亢证、阴阳两虚证,肝火亢盛证体质量指数高于阴虚阳亢证,差异具有统计学意义(P<0.05)。瘀血阻络证、痰湿壅盛证和阴虚阳亢证脉压差、收缩压均高于阴阳两虚证和肝火亢盛证患者,但差异无统计学意义(P>0.05)。阴阳两虚证舒张压高于痰湿壅盛证,差异有统计学意义(P<0.05)。痰湿壅盛证空腹血糖高于阴阳两虚证,瘀血阻络证、痰湿壅盛证患者的糖化血红蛋白高于肝火亢盛证患者,痰湿壅盛证、阴阳两虚证患者的血肌酐高于阴虚阳亢证患者,差异具有统计学意义(P<0.05)。痰湿壅盛证患者的总胆固醇高于阴虚阳亢证、瘀血阻络证患者,痰湿壅盛证、瘀血阻络证患者的甘油三酯和低密度脂蛋白胆固醇高于阴阳两虚证患者,阴虚阳亢证高密度脂蛋白胆固醇高于肝火亢盛证,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论 相较于其余证型而言,诱发老年高血压与心血管预后危险的主要有瘀血阻络证和痰湿壅盛证,这两者关系相对紧密。     

高血压早期肾损害实验室指标与中医辨证分型的相关性

目的：检测高血压患者早期肾损害的实验室指标,并探讨其与中医证候特点的相关性。方法：我们选择凡符合高血压病诊断标准的患者,高血压病限于Ⅰ、Ⅱ期（轻、中度）的患者,以Ⅱ期高血压患者为主要观察对象,年龄在18～80岁之间的住院及部分门诊病例列为观察对象。对其根据临床症状、体征进行辨证分型,并观察其早期肾损害的实验室指标。结果：尿β2-MG指标中4组指标均有明显差异（P〈0.05）,尿MAlb指标中肝火亢盛组与阴虚阳亢组、阴阳两虚组有明显差异（P〈0.05）,痰热壅盛组与阴虚阳亢组、阴阳两虚组有明显差异（P〈0.05）,肝火亢盛组与痰热壅盛组无明显差异（P〉0.05）,阴虚阳亢组与阴阳两虚组无明显差异（P〉0.05）,尿NAG指标中肝火亢盛组与阴虚阳亢组、阴阳两虚组有明显差异（P〈0.05）,痰热壅盛组与阴虚阳亢组、阴阳两虚组有明显差异（P〈0.05）,肝火亢盛组与痰热壅盛组无明显差异（P〉0.05）,阴虚阳亢组与阴阳两虚组无明显差异（P〉0.05）。结论：高血压早期肾损害各证型的病人尿MAlb、尿β2-MG、尿NAG指标有不同程度的异常,中医不同证型之间存在着客观化指标的区别,早期肾功能检查对高血压并发早期肾损害的病症发现有重要意义。     

原发性高血压病危险因素与中医证型的相关性研究

目的研究原发性高血压病危险因素与中医证型的相关性,从而为防治原发性高血压的发生和发展提供相关临床依据。方法以200例原发性高血压病患者为研究对象,辨证分为4型：肝火亢盛型、痰湿壅盛型、阴虚阳亢型、阴阳两虚型。运用统计学方法,分析患者的基本情况（性别、年龄）、体重指数、生活方式、膳食习惯等危险因素的异同,比较其和血压与中医证型的关系。结果高血压病患者的中医证型分布与性别相关性不明显（P〉0.05）;各型高血压病患者的年龄比较差异有统计学意义（P〈0.01）,体重指数与高血压之间具有显著的相关性（P〈0.05）;不良的生活习惯（如高盐、高脂、吸烟及大量饮酒等）、精神紧张等危险因素与中医辨型的各种类型之间无显著的相关性（P〉0.05）。结论原发性高血压病发病的相关危险因素中,年龄、体重指数（BMI）、家族史阳性与中医证型具有显著的相关性,不良的生活习惯与中医辨型的各种类型之间无显著的相关性。通过现代医学的科学干预和中医学的辨证调体、辨证论治,能够在一定程度上控制原发性高血压病的发生、发展。     

高血压中医证型与血脂、血尿酸关系研究

目的探讨高血压中医证型与血脂、血尿酸关系。方法收集高血压患者118例,进行中医辨证分型。另选同期健康体检者20例作对照组。检测两组总胆固醇（TC）、低密度脂蛋白胆固醇（LDL—C）、高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）、甘油三酯（TG）、血尿酸（SUA）。比较高血压各证型组及对照组血脂、血尿酸水平及异常率。结果高血压阴虚阳亢证和高血压痰湿壅盛证血脂、SUA异常者均高于对照组（P〈0．05）且SUA异常者低于高血压阴阳两虚证（P〈0．05）。阴虚阳亢证、痰湿壅盛证、肝火亢盛证TC高于对照组（P〈0．01）;痰湿壅盛证型的TG高于阴虚阳亢证型（P〈0．05）;高血压阴阳两虚证型的HDL．C低于对照组及高血压其他各证型（P〈0．05或〈0．01）,高血压阴阳两虚证型SUA高于对照组其他组及高血压其他各证型对照组（P〈0．01）。结论高血压患者TG升高与痰湿壅盛证有关,可作为高血压痰湿壅盛证的参考指标。HDL—C下降、SUA升高与阴阳两虚有关,可作为阴阳两虚证的参考指标。．     

LMX1A基因启动子在胃癌中的异常甲基化研究

目的研究LMX1A基因启动子在胃癌细胞中的甲基化状态。方法运用甲基化特异聚合酶链反应(MSP)法检测30例原发胃癌和癌旁组织中LMX1A基因的甲基化水平。甲基化修饰后亚硫酸盐测序聚合酶链反应(BSP)分析胃癌细胞MKN45细胞LMX1A基因启动子CpG岛甲基化状态。提取细胞RNA,通过实时定量聚合酶链反应(PCR)检测LMX1A基因mRNA在不同浓度的DNA甲基化酶抑制剂5′-杂氮-2′-脱氧胞嘧啶(5-aza-dC)处理MKN45细胞后,LMX1A基因mRNA的改变情况。结果原发性胃癌的甲基化异常检出率是33%(10/30)。LMX1A基因在MKN45细胞中存在高甲基化状态,MKN45细胞经5-aza-dC处理后LMX1A基因mRNA表达明显上调。结论 LMX1A基因在原发性胃癌中存在甲基化异常,说明LMX1A基因甲基化异常可能参与胃癌的发生。     

血清脂联素水平与高血压病中医证型关系的临床研究

目的探讨血清脂联素水平与高血压病中医证型相关性。方法本次观察组共选择100例高血压患者,均为我院2012年9月至2013年9月收治,依据中医辨证分型标准,按阴阳两虚、肝火亢盛、痰湿壅盛、阴虚亢盛四组各20例划分。就血清脂联素水平与同期收集的对照组20例非高血压资料进行对比。结果 A经统计示空腹血糖值明显高于其他各组,差异有统计学意义(P<0.05)。观察组各组脂联素浓度均低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。对照组TG与其他各组比较,有统计学差异(P>0.05)。TC、HDL-C、LDL-C组间比较无明显差异(P>0.05)。结论高血压中医辨证分型与心血管病保护因素从中西医结合角度探讨,结合目前研究,脂联素与血压有密切相关性,可作用新的保护高血压的因素。     

针对阳亢型高血压采用浴足微粉进行治疗的非劣性研究

目的研究浴足方微粉制剂治疗阳亢型高血压与普通饮片疗效比较具有非劣性。方法采用随机、对照试验设计，研究对象为肝火亢盛、阴虚阳亢证原发性高血压患者；比较治疗组（浴足方微粉）与对照组（浴足方普通饮片）证候疗效、血压疗效，疗程均为10d，并进行安全性评价。结果治疗组证候疗效有效率92．85％、血压疗效有效率89．29％，对照组证候疗效有效率96．29％、血压疗效有效率92．59％，采用单侧u检验进行非劣性检验，P〈0．05，治疗组与对照组比较具有非劣性。研究中两组患者不良反应少，依从性好。结论浴足微粉对于肝火亢盛、阴虚阳亢高血压患者具有显著降低血压、改善头晕头痛等症状的良好作用，疗效同普通饮片相比具有非劣性。     

TIP30基因启动子甲基化与大肠癌细胞奥沙利铂化疗敏感性关系的研究

目的探讨TIP30启动子CpG岛甲基化状态与大肠癌细胞对奥沙利铂敏感性的关系。方法采用MTT法检测HCT116和HT29大肠癌细胞株对L-OHP的敏感性。通过甲基化特异性PCR,检测对奥沙利铂敏感性有差异的2个大肠癌细胞株中TIP30基因启动子CpG岛甲基化状态,并用RT-PCR法检测其mRNA表达。结果 HCT116及HT29细胞中TIP30基因甲基化状态存在差异,其表达水平与启动子CpG岛甲基化状态有关,并且二者对奥沙利铂的敏感性不同。结论 TIP30基因启动子甲基化状态可能影响大肠癌细胞对化疗药物的敏感性,为大肠癌患者的个体化治疗提供了依据。     

己烯雌酚对HOSE细胞中HOXA10基因表达及DNA甲基化的影响

目的研究己烯雌酚对人正常卵巢上皮细胞株HOSE中HOXA10基因表达及基因启动子区CpG岛甲基化的影响。方法用不同浓度的己烯雌酚(5×10-6、5×10-7、5×10-8 mol/L)作用于体外培养的人正常卵巢上皮细胞株HOSE。培养5d后收集细胞,应用实时荧光定量PCR和Western blot检测HOXA10基因mRNA和蛋白的表达;运用甲基化特异性PCR检测HOXA10基因启动子区CpG岛的甲基化状态。结果己烯雌酚作用后,HOSE细胞中HOXA10基因mRNA和蛋白表达上调(P<0.05),并且HOXA10基因启动子区发生去甲基化改变。结论己烯雌酚可以上调人正常卵巢上皮细胞株HOSE中HOXA10基因的表达,与其对HOXA10基因启动子区CpG岛甲基化的影响有关。     

真武汤合五苓散治疗阳虚阴盛型高血压的临床效果观察

目的:观察真武汤合五苓散治疗阳虚阴盛型高血压的临床效果。方法:选择2017年4月—2019年9月我院收治的阳虚阴盛型高血压患者80例,以随机数表法分为治疗组和参照组,观察两组血压及中医症候积分。结果:治疗后两组SBP与DBP与治疗前相比均有所降低(P>0.05),治疗组的SBP与DBP均明显比参照组更低(P<0.05),治疗前及第1疗程结束后,两组中医症候积分差异不明显,第2疗程及第3疗程结束后,治疗组的中医症候积分明显比参照组低(P<0.05),治疗组生活质量评分显著高于参照组,两组比较差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:真武汤合五苓散可显著降低阳虚阴盛型高血压患者血压水平,改善中医证候症状,治疗效果显著。     

Changes in gene expression and assessment of DNA methylation in primary human hepatocytes and HepG2 cells exposed to the environmental contaminants—Hexabromocyclododecane and 17-β oestradiol

We evaluated the effects of two putative non-genotoxic hepatic carcinogens, hexabromocyclododecane (HBCD) and 17-β oestradiol (E₂) on global and CpG promoter DNA methylation in both primary human hepatocytes and hepatocellular carcinoma (HepG2) cells. The mRNA gene expression levels of genes involved particularly in cell cycle were also evaluated and potential correlation with DNA methylation status examined. HBCD at 0.03 and 0.3 ng/mL did not produce statistically significant differences in global genomic methylation. However, E₂ (0.1 ng/mL) significantly lowered global DNA methylation levels in HepG2 cells by approximately 65% (P < 0.01). In primary hepatocytes, the promoter regions of N-cym and ERα were methylated in both control and treated groups, signifying lack of promoter demethylation by both HBCD and E₂. Furthermore, CpG promoter methylation of RB1 was observed in HepG2 cells but this was unaffected by treatments. The remaining genes (p16, C-myc, H-ras, THRα, histone H3, TBK1 and TNFRα) were unmethylated in their CpG promoter regions in both test systems. Quantitative RT-PCR showed that HBCD at 0.03 ng/mL up-regulated the expression of N-cym whereas E₂ up-regulated the expression of ERα and THRα genes in primary hepatocytes. In HepG2 cells, the mRNA gene expression levels of p16, RB1 and N-cym were significantly down regulated by HBCD (0.03 ng/mL) and E₂ (0.1 ng/mL) while HBCD at 0.3 ng/mL, significantly down regulated the expression levels of N-cym, ERα and ERβ genes. Thus, while both HBCD and E₂ may alter the expression of certain genes involved in proliferation, the mechanisms appear unrelated to DNA methylation.     

ITP中IFN-γ和IL-4 mRNA表达与其甲基化水平的相关性研究

目的:检测免疫性血小板减少症(ITP)患者的干扰素(IFN)-γ和白细胞介素(IL)-4的mRNA表达水平及其各自基因启动子区DNA甲基化的水平.方法:取36例ITP患者(ITP组)和36例正常对照(对照组)外周血,采用实时定量PCR方法检测IFN-γ和IL-4的mRNA水平;随机抽取2组中的各10例,采用DNA甲基化修饰后测序的方法检测IFN-γ和IL-4基因启动子区的甲基化水平,并计算IFN-γ和IL-4基因的mRNA水平与其基因启动子区DNA甲基化水平的相关性.结果:与对照组相比,ITP组IFN-γ的mRNA水平增高(1.86±0.29 vs 0.83±0.14,P＜0.05),而IL-4的mRNA水平降低(0.78±0.22 vs 1.45±0.40,P＜0.05),Th1/Th2(IFN-γ/IL-4)比值升高(7.11±0.60vs 3.12±1.88,P＜0.01).2组IFN-γ和IL-4基因CpG岛的位点甲基化水平和整体甲基化水平差异均无统计学意义(P＞0.05).ITP组中IFN-γ和IL-4的mRNA表达水平与基因启动子区甲基化水平不存在相关性(均P＞0.05).结论:ITP患者处于Th1极化状态,IFN-γ和IL-4的基因启动子区的甲基化水平对各自基因mRNA水平的表达不起调控作用.     

5-氮-2’脱氧胞苷诱导肺癌细胞系CDH13基因去甲基化及其表达

目的 观察去甲基化制剂5-氮-2’脱氧胞苷(5-aza-2’-deoxycytidine,5-Aza-dC)对人肺癌细胞系A549和LTEP-a2中CDH13基因启动子区甲基化状态及表达的影响,探讨肺癌细胞CDH13基因失活的机制及去甲基化制剂对CDH13基因表达的调控作用. 方法 5-Aza-dC处理体外培养的肺癌细胞A549、LTEP-a2及正常肺细胞系HFL1后,用甲基化特异性 PCR( MSP) 法检测处理前后细胞中CDH13基因的甲基化状态,半定量逆转录 聚合酶链反应(RT PCR)法检测用药前后细胞中CDH13 mRNA表达的变化. 结果 正常肺细胞中未见CDH13启动子甲基化,肺癌细胞A549、LTEP a2均发现CDH13启动子甲基化现象;应用 5-Aza-dC能使 CDH13基因启动子区 CpG 岛发生去甲基化. 肺癌细胞A549、LTEP-a2均可见CDH13 mRNA表达,但与正常肺细胞比较表达较弱,经药物处理癌细胞后其CDH13 mRNA的表达较前明显增强. 结论 启动子区异常甲基化是肺癌细胞CDH13基因失活的主要原因之一,去甲基化制剂5-Aza-dC能完全逆转CDH13基因甲基化状态,从而调控CDH13基因表达.     

CpG methylation of the mouse CYP1A2 promoter

Cytochrome P450 1A2 (CYP1A2) is a xenobiotic metabolizing enzyme that is tissue-specifically regulated in the mammalian liver by arylhydrocarbon receptor (AhR)-dependent and -independent pathways. In this study, CpG methylation of the CYP1A2 promoter was analyzed in mouse tissues and liver-derived cells. Compared to lung and kidney, the CYP1A2 promoter is undermethylated in the liver in a promoter domain-specific manner. The CYP1A2 promoter showed a similar methylation pattern in wild-type and AhR-null liver. At birth, the promoter was hypermethylated and CYP1A2 was negligibly expressed in the liver. However, CYP1A2 expression increased following birth, coincident with the demethylation of the promoter. In hepatoma Hepa1c1c7 cells not expressing CYP1A2, the promoter was hypermethylated at specific CpG sites. In isolated hepatocytes, CYP1A2 expression declined over time and the degree of CYP1A2 methylation increased, albeit only after a delay. Exposure to 5-aza-2'-deoxycytidine did not induce CYP1A2 in Hepa1c1c7 cells and hepatocytes. Taken together, our findings suggest that CpG methylation is involved in the tissue-specific and developmental regulation of CYP1A2, but the de novo methylation of the CYP1A2 promoter is induced by the silent state of the gene rather than causing it.     

Different involvement of DNA methylation and histone deacetylation in the expression of solute-carrier transporters in 4 colon cancer cell lines

The purpose of this study on the involvement of epigenetic control of the expression of solute carrier (SLC) transporters by DNA methylation and histone deacetylation in 4 colon cancer cells is to find the epigenetic control mechanisms of drug transporters in colon cancers. Human colon cancer cell lines (HCT116, HT29, SW48, SW480) were treated with 5-aza-2'-deoxycytidine (DAC), as a DNA methyltransferase inhibitor, followed by trichostatin A (TSA), as a histone deacetylase inhibitor. The mRNA expression and DNA methylation of several SLC transporters were analyzed by real-time polymerase chain reaction (PCR) and methylation-specific PCR, respectively. Among 12 SLC transporters possessing cytosine-phosphate-guanine (CpG) islands, thiamine transporter 2 (THTR2) (SLC19A3) gene showed a correlation between its mRNA expression level and DNA methylation status. TSA treatment increased histone H3 acetylation of THTR2 promoter region in all 4 colon cancer cell lines examined. HCT116 and SW48 cells showed a lack of THTR2 mRNA expression and methylation of its promoter, and DAC treatment induced its re-expression. In addition, the co-treatment with DAC and TSA increased THTR2 mRNA expression more markedly than DAC treatment in HCT116 and SW48 cells. In HT29 and SW480 cells that showed little methylation of THTR2 promoter, TSA treatment induced THTR2 mRNA expression markedly, but DAC treatment did not. In the 4 colon cancer cells examined, THTR2 mRNA expression is down-regulated by DNA methylation and/or histone deacetylation.     

子宫内膜癌与正常子宫内膜组织中PR基因启动子区CpG岛甲基化的对比研究

目的研究子宫内膜癌中孕激素受体亚型PRA、PRB表达与其启动子区甲基化状态的关系,探讨子宫内膜癌组织、细胞分子变化特征及孕激素受体亚型表达下调的机制。方法①应用免疫组化SP法检测子宫内膜癌组织中PRA、PRB蛋白的表达。②应用甲基化特异性PCR检测子宫内膜癌组织及经5-杂氮脱氧胞苷(ADC)处理前后子宫内膜癌Hec-1-B细胞系中PRA、PRB的甲基化状态。③应用免疫印迹法检测ADC处理Hec-1-B细胞系前后PRA、PRB蛋白的表达。结果①与正常子宫内膜组织比较:PRA蛋白在高、中低分化子宫内膜癌组织中表达差异无统计学意义;PRB蛋白在高分化子宫内膜癌组织中表达无明显降低,差异无统计学意义,在中低分化子宫内膜癌组织中表达明显降低,差异有统计学意义。②与正常子宫内膜组织比较,子宫内膜癌组织中,PRA启动子区CpG岛甲基化率较低,差异无统计学意义,PRB启动子区CpG岛甲基化率较高,差异有统计学意义,与组织分化程度有关,与病理类型及有无淋巴结转移和有无肌层浸润无关。结论子宫内膜癌组织以及Hec-1-B细胞系中,存在PR基因异常甲基化,ADC可通过去甲基化作用使PRB恢复表达,可能提高子宫内膜癌的临床内分泌治疗效果。