人参皂苷-Rg3对兔耳增生性瘢痕中Bcl-2、Bax表达的影响

目的 研究人参皂苷Rg3(GS-Rg3)对兔耳增生性瘢痕中Bcl-2、Bax的影响.方法建立兔耳增生性瘢痕模型,分成四组.于四组动物耳部增生性瘢痕组织处行局部封闭注射,实验组注射GS-Rg3(浓度6mg/2 ml),对照组注射等体积的0.9％生理盐水,每3 d一次.分别于用药后2w、4w、6 w切取瘢痕组织,经免疫组化法检测Bcl-2及Bax的水平.结果①实验组在用药后2 w Bcl-2表达量逐渐下降,6 w明显减少;而对照组有较多量的Bcl-2表达.②实验组用药后2 wBax表达量明显增加,而对照组则有少量表达.结论GS-Rg3可明显降低Bcl-2蛋白质的表达,增加Bax的表达.     

硅酮凝胶喷雾剂局部喷涂对兔耳增生性瘢痕影响的实验研究

目的通过检测硅酮凝胶喷雾剂对兔耳瘢痕动物模型瘢痕纤维组织的影响,探讨硅酮凝胶喷雾剂对增生性瘢痕的作用及其可能机制。方法将8只新西兰大耳白兔随机分为空白对照组与硅酮凝胶喷雾剂组,并在每只兔耳腹侧面制作创面建立病理性瘢痕模型。于创口制备术后第28天始在瘢痕部位喷抹硅酮凝胶药物,于术后第56天处死动物,切除耳部瘢痕,HE染色检测瘢痕组织的增生指数(HI)及成纤维细胞数密度(NA),VG染色检测瘢痕组织胶原纤维面积密度(AA),同时采用免疫组织化学法检测Smad3表达水平。结果硅酮凝胶喷雾剂组(硅酮凝胶组)的成纤维细胞胞体变小,胶原纤维较稀疏,排列有序;HI、NA和AA均明显低于空白对照组(P均0.01);免疫组织化学法检测发现硅酮凝胶组瘢痕组织中Smad3蛋白的表达水平明显低于空白对照组(P0.01)。结论硅酮制剂可抑制Smad3的表达,抑制成纤维细胞增殖及胶原形成,避免过量纤维组织形成,进而抑制瘢痕增生。     

肝内表达的外源性肝细胞生长因子抑制肝细胞凋亡的机制

目的 通过体内基因转染方法在肝细胞中建立持续、高效表达外源性肝细胞生长因子(HGF)的体系,探讨其在肝细胞凋亡中的作用.方法 通过尾部静脉快速注射大量pCMV-HGF质粒,ELISA检测外周血和肝组织中HGF表达的高峰和持续时间.实验动物分为模型组、pcDNA3空质粒保护组、pCMV-HGF质粒保护组和0.9%氯化钠溶液对照组,每组10只,Western印迹检测Caspase-3,tBid、Bax、细胞色素C的表达.所有数据组间均数比较采用单因素方差分析,均数间的两两比较用q检验.结果 在小鼠尾静脉快速大量注射pCMV-HGF 4 h后就有外源性HGF表达,外周血和肝组织中分别于12 h和8 h达高峰,于注射后第6天仍可检测到HGF表达.D-氨基半乳糖胺/脂多糖可诱导明显的细胞凋亡,并导致tBid、Bax、Caspase-3及细胞色素C的表达明显增加.与模型组和pcDNA3空质粒保护组相比,pCMV-HGF保护组tBid、Bax、Caspase-3及细胞色素C的表达明显减少.结论 外源性HGF能抑制小鼠肝细胞凋亡,通过抑制Bid的活性片段tBid的表达,减少下游凋亡蛋白的激活.     

水蛭素对增生性瘢痕基质金属蛋白酶-2、9表达作用的影响

目的 研究水蛭素对增生性瘢痕组织基质金属蛋白酶-2(MMP-2)和基质金属蛋白酶-9(MMP-9)的影响,探讨水蛭素对增生性瘢痕作用机理.方法 取烧伤后6个月内的皮肤增生性瘢痕,体外培养成纤维细胞,ELISA法测定水蛭素作用后MMP-2、MMP-9表达含量.结果 水蛭素作用后增生性瘢痕组织内MMP-2、MMP-9含量增加,分别以0.5 U/mL和1 U/mL组作用最明显,与对照组比较差异均有统计学意义(P＜0.01).结论 水蛭素能促进MMP-2、MMP-9表达,有抑制增生性瘢痕的作用.     

曲美他嗪对心力衰竭大鼠心肌细胞凋亡及半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3表达的影响

目的探讨曲美他嗪对心力衰竭大鼠心肌细胞凋亡及半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(Caspase)-3表达的影响。方法雄性Wistar大鼠随机分为对照组、模型组和实验组各15只。对照组进行模拟手术,模型组和实验组采用肾上腹主动脉缩窄法建立心力衰竭大鼠模型。实验组给予曲美他嗪10 mg·kg~(-1)·d~(-1)持续灌胃28 d。测量3组左室舒张末压力(LVEDP)、左心室压力最大上升和下降速率(±dp/dtmax);检查3组心肌细胞凋亡比例、Caspase-3及细胞色素C蛋白表达水平。结果实验组LVEDP显著高于对照组(P<0.05),而显著低于模型组(P<0.05);实验组±dp/dtmax显著高于模型组(P<0.05),而显著低于对照组(P<0.05);对照组、实验组和模型组心肌细胞凋亡指数(AI)分别为(1.87±0.32)%,(22.52±5.29)%和(39.71±12.58)%,实验组心肌细胞凋亡比例、Caspase-3、细胞色素C蛋白表达明显低于模型组(P<0.05),而显著高于对照组(P<0.05);结论曲美他嗪可通过抑制心力衰竭大鼠心肌细胞凋亡及Caspase-3、细胞色素C蛋白表达来改善心脏功能。     

三氧化二砷联合维生素C对耐药性肺腺癌裸鼠移植瘤Caspase-3、Survivin活性的影响

目的 探索三氧化二砷( AS2O3)联合维生素C( Vit C)对人耐药性肺腺癌裸鼠移植瘤抑制作用及其可能机制.方法 建立裸鼠人耐药性肺腺癌移植瘤模型,随机分为对照组,VitC组(250 mg/kg),1.5 mg/kg AS2O3,3 mg/kg AS2O3,AS2O3+ Vit C组(AS2O3 1.5 mg/kg+ Vit C250 mg/ks),腹腔注射药物2 w并观察记录各组裸鼠移植瘤的生长情况及肿瘤体积和裸鼠体重的变化,计算肿瘤生长抑制率.2w后,取瘤组织进行免疫组织化学染色检测Caspase-3、Survivin蛋白的阳性率.用逆转录聚合酶链反应(RT- PCR)及Western印迹检测移植瘤内Caspase-3、Survivin的表达情况.结果 与对照组相比,AS2 O3各组、AS2O3+ Vit C组治疗后肿瘤体积减少,瘤质量减轻,差异均有显著性(P＜0.01);与AS2 O3单独用药组比较,联合用药组肿瘤体积,瘤质量明显减少(P＜0.01),抑瘤率明显增高;而Vit C组治疗后肿瘤体积及瘤质量没有明显减少.免疫组化显示Caspase-3蛋白阳性率增加,Survivin蛋白阳性率减低.RT-PCR及Western印迹结果显示:联合组与AS2O3组、Vit C组比较Survivin表达强度显著减小,Caspase-3表达强度显著增强.结论 AS2O3+ Vit C联合用药比AS2O3单独应用抑制耐顺铂肺癌移植瘤生长的作用更强,二者具有协同抗癌作用,其机制可能与下调Survivin及上调Caspase-3的表达有关.两者联用有望成为低毒高效的化疗组合.     

血红素氧合酶-1对糖尿病大鼠视网膜神经节细胞的保护作用

目的探讨血红素氧合酶(HO)-1对糖尿病(DM)大鼠视网膜神经节细胞(RGC)保护作用及其机制。方法清洁级雄性SD大鼠24只中8只为对照组,余16只腹腔注射链脲佐菌素制作DM大鼠模型,将血糖浓度大于16.7 mmol/L的大鼠定为DM模型,随机分为DM组8只,另外8只腹腔注射HO-1特异性诱导剂正铁血红素为实验组,对照组及DM组腹腔注射等剂量生理盐水。12 w后,HE染色观察RGC密度,硫代巴比妥酸法检测丙二醛(MDA)含量,氮蓝四唑光化还原法测定超氧化物歧化酶(SOD)活性,免疫组化染色和Western印迹法检测视网膜HO-1、Caspase-3表达情况。结果与对照组相比,DM组RGC密度显著降低(P<0.01),而实验组无明显变化(P>0.05)。与对照组相比,DM组MDA含量明显升高、SOD活性明显降低(P<0.01),而实验组无明显变化(P>0.05)。HO-1在对照组仅微量表达于内核层,DM组阳性表达在节细胞层及内核层有所增加,而实验组阳性染色显著增加,特别是节细胞层。Caspase-3在对照组视网膜几乎无表达,而DM组阳性表达显著增多,主要分布于节细胞层及内核层,实验组与DM组相比阳性表达有所减弱。与对照组相比,HO-1在DM组及实验组蛋白表达量均增加(P<0.01),且实验组增加更明显(P<0.05);与对照组相比,Caspase-3在DM组蛋白表达显著增加(P<0.01),而实验组无明显变化。结论通过正铁血红素诱导HO-1在视网膜的高表达,下调了DM大鼠视网膜Caspase-3的表达,抑制了氧化应激,恢复了视网膜RGC密度;提示HO-1可能对DM大鼠RGC具有保护作用。     

青蒿琥酯对人前列腺癌PC3细胞的增殖抑制作用及机制探讨

目的探讨青蒿琥酯（Art）对人前列腺癌PC3细胞株增殖的抑制作用及机制。方法用不同浓度Art干预PC3细胞。采用MTT法检测用药后细胞增殖水平;用流式细胞术（FCM）检测细胞周期的改变和凋亡率;采用Western blot法检测不同浓度Art作用48h后PC3细胞Livin和Caspase-3蛋白的表达情况。结果与对照组比较,Art可显著抑制PC3细胞增殖（P〈0．01）。PC3细胞主要被阻滞在G0／G1期,PC3细胞凋亡率各实验组均明显高于对照组（P〈0．01）,且呈时间剂量依赖性。与对照组相比,各实验组PC3细胞survivin的表达显著下调（P〈0．01）,而Caspase-3的表达增加（P〈0．01）。结论Art可抑制PC3细胞增殖,其作用机制可能与调控细胞周期以及下调Livin的表达、上调Caspase-3而诱导PC3细胞凋亡有关。     

细粒棘球蚴原头节感染对小鼠肝细胞增殖的影响

目的探讨细粒棘球蚴(Echinococcus granulosus,E.g)感染对小鼠肝脏细胞周期相关蛋白表达的影响。方法C57BL/6J小鼠16只随机分为实验组和对照组,实验组8只以细粒棘球蚴原头节混悬液直视下注射肝脏,对照组8只以相同方法注射无菌PBS,感染180 d后处死小鼠,检测血清中转氨酶的变化,HE染色后观察肝组织病理改变,采用Western blot检测p-ERK、PCNA、cyclin A、cyclin D1和cyclin E在肝内的表达。结果与对照组相比,实验组小鼠血清中ALT和AST分别升高0.34倍和2.33倍;镜下可见肝脏病灶出现坏死、炎性细胞浸润和纤维组织形成等多种病理改变,肝内PCNA蛋白表达增加,且在两组间的表达差异有统计学意义(t=2.37,P0.05)。结论 E.g感染宿主后,肝脏损伤与感染应激条件下的代偿性增生同时存在。     

病理性瘢痕组织中SPARC的表达变化及意义

目的观察富含半胱氨酸的酸性分泌糖蛋白（SPARC）在瘢痕疙瘩和增生性瘢痕中的表达变化及其意义。方法病理性瘢痕患者52例,其中瘢痕疙瘩（瘢痕组）和增生性瘢痕组织（增生组）各26例,另取正常皮肤组织5例为对照（对照组）。采用免疫组化SP法检测三组SPARC。将三组组织中的成纤维细胞传代培养（4～6代）,采用Western blot法检测其SPARC。结果瘢痕组、增生组中SPARC表达较弱,虽比对照组高,但P〉0．05;在早期增生性瘢痕（3—6个月）中的表达与晚期（9～12个月）近似（P〉0．05）。瘢痕组、增生组成纤维细胞中SPARC表达均高于对照组（P均〈0．05）。结论病理性瘢痕组织中的SPARC均呈低表达,其成纤维细胞中的SPARC呈高表达,这可能与病理性瘢痕的发生有关。     

Caspase-3抑制剂对蛛网膜下腔出血后早期脑损伤的作用

目的 探讨Caspase-3抑制剂在蛛网膜下腔出血后早期脑损伤中的作用.方法 颈内动脉穿刺制作大鼠蛛网膜下腔出血模型.将大鼠随机分成3组:实验组(38只)模型制作后腹腔注射Caspase-3抑制剂 Z-VAD-FMK(10 μmol/L,0.3 mL);对照组(38只)注射等体积二甲基亚砜(DMSO);正常组(16只)未进行任何处理.72 h记录死亡率、神经功能评分、脑水肿、血脑屏障通透性等脑损伤指标;TUNEL染色检测神经元细胞凋亡,免疫组化、Western Blot检测Caspase-3表达.结果 Caspase-3抑制剂可降低大鼠死亡率(47.4%vs28.9%,P<0.05),减轻脑水肿,保护血脑屏障,减少Caspase-3蛋白表达及神经元细胞凋亡(P<0.05),但对神经功能评分无明显影响(P>0.05).结论 细胞凋亡在SAH后早期脑损伤中起重要作用,可减轻SAH后早期脑损伤.     

皂角皂苷对SMMC-7721细胞Caspase-3表达的影响

目的 探讨皂角皂苷对应用阿霉素后SMMC-7721细胞Caspase-3表达的影响.方法 MTT法检测单独应用阿霉素(DOX)或阿霉素与皂角皂苷联合作用的SMMC-7721细胞的生存率;RT-PCR检测Caspase-3 mRNA表达.结果 与对照组相比,单独应用阿霉素组细胞的生存率未见明显变化;而阿霉素与皂角皂苷联合作用组细胞存活率显著降低,Caspase-3 mRNA表达增高.结论 皂角皂苷可能通过上调Caspase-3水平进而诱导SMMC-7721细胞的凋亡,增加肿瘤细胞对化疗药物的敏感性.     

帕金森病小鼠黑质纹状体小胶质细胞活化表达的炎性因子与多巴胺含量的关系

目的探讨帕金森病(PD)模型小鼠中活化的小胶质细胞(MG)诱导表达肿瘤坏死因子(TNF-α)、白介素(IL)-1β、前列腺素E2(PGE2)及一氧化氮(NO)与黑质纹状体多巴胺含量的关系。方法 40只C57BL/6小鼠随机分为:模型组20只,腹腔注射百草枯;对照组20只,腹腔注射生理盐水。观察两组小鼠行为活动。分别于腹腔注药后3、6 w处死小鼠,高效液相法测定小鼠黑质纹状体多巴胺含量;免疫组织化学法检测黑质部位MG胞数、TNF-α、IL-1β、PGE2及NO表达。结果腹腔注药后3 w和6 w模型组小鼠脑内多巴胺含量均较对照组明显减少(P<0.05);6 w后模型组小鼠黑质致密部MG较对照组明显增加,TNF-α及IL-1β表达较对照组明显增加(P<0.05)。3 w和6 w后模型组与对照组PGE2及NO表达无明显变化。结论 MG增生、活化及其表达的炎症因子TNF-α和IL-1β,是导致PD发病的重要环节。     

细胞色素C释放与Caspase-3表达在脊髓损伤后神经元细胞凋亡过程中的作用

目的 探讨细胞色素C(Cyt-C)释放和Caspase-3表达在脊髓损伤(SCI)后神经元细胞凋亡过程中的作用及意义.方法 采用改良Allen's法制备大鼠SCI模型,于损伤后5个时间点取材,HE染色观察损伤脊髓组织病理变化,原位末端标记法对凋亡细胞进行标记,免疫组化法对Cyt-C释放和Caspase-3表达进行规律性观察.结果 大鼠SCI后8 h凋亡细胞开始出现,3 d达高峰,灰质和白质均有表达;Cyt-C及Caspase-3阳性细胞8 h即有表达,Cyt-C 1 d达高峰,Caspase-3 3 d达高峰,后均逐渐减少;Cyt-C、Caspase-3表达的阳性细胞与TUNEL标记阳性凋亡细胞出现的时限相似.结论 SCI后存在细胞凋亡,Cyt-C释放和Caspase-3表达参与了SCI细胞凋亡的调节.     

连翘酯苷对顺铂作用后豚鼠耳蜗Caspase-3表达的影响

目的观察连翘酯苷对顺铂作用后豚鼠耳蜗Caspase-3表达的影响。方法 30只豚鼠随机分为对照组、顺铂组和连翘酯苷组各10只。顺铂组腹腔注射顺铂8 mg/kg,1次/d,连续7 d,建立顺铂耳毒性模型;连翘酯苷组每次注射顺铂30 min前腹腔注射连翘酯苷25.0 mg/（kg·d）,对照组以生理盐水代替顺铂溶液注射,均连续7 d。实验动物被处死前,检测其畸变产物耳声发射（DPOAE）幅值变化;分别采用Western blot、RT-PCR法检测豚鼠耳蜗组织中的Caspase-3蛋白及其mRNA。结果顺铂组DPOAE幅值明显低于对照组（P〈0.01）;相比于顺铂组,连翘酯苷组DPOAE幅值明显升高（P〈0.05）。顺铂组豚鼠耳蜗Caspase-3蛋白与mRNA表达水平均显著高于对照组（P均〈0.01）;相比于顺铂组,连翘酯苷组Caspase-3蛋白与mRNA表达水平明显降低（P均〈0.05）。结论连翘酯苷能够通过降低Caspase-3的表达防护顺铂所致的耳蜗损伤。     

EPO对自身免疫性神经炎大鼠周围神经传导功能及Caspase-3表达的影响

目的观察促红细胞生成素（EPO）对实验性自身免疫性神经炎（EAN）大鼠周围神经传导功能及Caspase-3表达的影响。方法 30只SD大鼠随机分为空白组、对照组及实验组。采用SP26诱导法建立自身免疫性神经炎大鼠模型。实验组用EPO干预。造模后14 d检测运动神经传导速度（MCV）、感觉神经传导速度（SCV）,并采用免疫组化法检测尾神经Caspase-3表达变化。结果实验组和对照组MCV和SCV低于空白组,实验组MCV和SCV高于对照组;实验组和对照组Caspase-3表达高于空白组,实验组Caspase-3表达低于对照组（P均〈0.05）。结论 EPO能够改善实验性自身免疫性神经炎大鼠周围神经电传导,其机制可能与EPO抑制Caspase-3表达有关。     

婴幼儿血管瘤组织中Caspase-3和survivin的表达及其与细胞凋亡的关系

目的 探讨凋亡调控基因Caspase-3和survivin在婴幼儿血管瘤组织中的表达及与细胞凋亡的关系.方法 采用原位杂交法检测血管瘤及正常皮肤组织中Caspase-3 mRNA的表达;用免疫组化SP法检测survivin;用末端脱氧核苷酸转移酶(TdT)介导的d-UTP生物素缺口末端标记技术(TUNEL)检测凋亡细胞.结果 Caspase-3 mRNA阳性表达率在增生期和消退期分别48.4%和87.5%,两者相比,P＜0.01,增生期与正常皮肤组织表达相比,P＞0.05.survivin阳性表达率在增生期和消退期分别77.4%和45.8%,两者相比,P＜0.01,消退期与正常皮肤组织相比,P＞0.05.Caspase-3 mRNA和survivin蛋白表达呈负相关(r=-0.018,P＜0.01).婴幼儿血管瘤增生期和消退期凋亡指数(AI)分别为30.15±10.62和80.16±6.88.AI与Caspase-3 mRNA的表达呈正相关(r=0.405,P＜0.01),AI与survivin的表达呈负相关(r=-0.362,P＜0.01).结论 Caspase-3基因与凋亡抑制基因survivin参与了血管瘤中细胞凋亡的调节.     

丝裂霉素C对增生性瘢痕成纤维细胞增殖的影响

目的 探讨丝裂霉素C(MMC)对增生性瘢痕成纤维细胞(FB)增殖的影响及机制,为增生性瘢痕的治疗提供理论依据.方法 用组织块法体外培养人增生性瘢痕FB,应用MTT方法、Western blot技术结合光密度扫描分析,观察MMC对增生性瘢痕FB增殖活性的影响及Smad7蛋白的表达情况.结果 在24、48、72 h这3个时间段内,随着培养时间的增加,细胞生长抑制率呈现明显的上升趋势,并且MMC浓度为2.5～200 μg/mL时,对细胞生长有明显的抑制效应,与对照组比较存在统计学差异(P＜0,05),显示明显的时间剂量依赖关系.经2.5～200μg/mL不同浓度的MMC作用增生性瘢痕FB24 h,Smad7蛋白表达量增加.结论 MMC对增生性瘢痕FB的增殖起到抑制作用,同时诱导Smad7蛋白的表达.     

香蕉皮多糖对人乳腺癌细胞Caspase-3蛋白表达的影响

目的观察香蕉皮多糖对人乳腺癌细胞（MCF-7）增殖的抑制作用及机制。方法将MCF-7细胞分为两组,实验组加入0.51、.52、.5、3.5 mg/ml的香蕉皮多糖溶液,对照组加入等量的DMEM培养液。均于37℃孵箱中培养244、8、72 h。采用MTT法测定各组MCF-7细胞增殖抑制率,Western blot法测定Caspase-3蛋白表达变化。结果香蕉皮多糖干预后MCF-7细胞增殖抑制率增加,且呈时间和剂量依赖性;干预48 h后Caspase-3原酶出现降解,其活性成分Caspase-3表达随药物浓度增加而明显增强。结论香蕉皮多糖可诱导MCF-7细胞凋亡,其作用机制可能与激活Caspase-3有关。     

解毒通络保肾法对实验性DM大鼠肾足细胞凋亡相关因子Bax、Bcl-2、Caspase-3的影响

目的探讨解毒通络保肾法对实验性糖尿病(DM)大鼠肾足细胞保护作用机制。方法 60只Wistar大鼠,雌雄各半,给予高糖高脂饲料,适应性喂养1 w,随机分为阴性对照组(A组,n=10),其余为造模组。喂养4 w后,造模组用链脲佐菌素50 mg/kg腹腔注射造模;造模成功的大鼠随机分为模型组(B组,n=10)、中药组(C组,n=10)。C组给予解毒通络保肾散每次4 ml,日灌胃1次;A、B组大鼠给予等体积蒸馏水。灌胃8 w后,观察各组大鼠空腹血糖(FPG)、血清肌酐(Scr)、尿素氮(BUN)、尿微量白蛋白(mAlb)的变化情况,取肾脏,制备肾组织匀浆。采用酶联免疫吸附试验检测大鼠肾脏足细胞凋亡相关因子Bax、Bcl-2及半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶(Caspase)-3蛋白表达水平。结果与A组相比,B、C组Bax、Caspase-3及Bax/Bcl-2表达均显著增加,Bcl-2表达显著降低(P0.05,P0.01);与B组相比,C组Bax、Caspase-3及Bax/Bcl-2表达均显著降低,Bcl-2表达显著上升(P0.01,P0.05)。结论解毒通络保肾法能够降低实验性DM大鼠空腹血糖,保护肾功能,减少尿蛋白的产生,其机制可能是下调Bax表达,上调Bcl-2表达,致Bax/Bcl-2比例下降,从而减少细胞凋亡执行蛋白酶Caspase-3的产生,起到抑制足细胞凋亡的作用,保护肾小球滤过屏障。