新型熊果酸衍生物与查耳酮缀合物的合成及其抗肿瘤活性初步评价

以天然产物熊果酸为先导化合物,将查耳酮通过酯化反应拼接到熊果酸衍生物得到10个熊果酸衍生物-查耳酮缀合物,其结构均通过¹H NMR,¹³C NMR和HRMS加以确认。初步的生物活性结果表明,这些缀合物对CNE2、KB、MCF-7、A549和HepG2细胞均有抑制活性。特别是对MCF-7细胞的抑制活性强于熊果酸和临床上应用的药物他莫昔芬,其中化合物11e(IC₅₀=4.7 μmol/L)的抗乳腺癌活性最强,是他莫昔芬(IC₅₀=15.2 μmol/L)的近3倍;同时,这些缀合物对正常的MCF-10A和VERO细胞没有毒性,安全性较他莫昔芬高。     

α-芳基-3，5-二甲氧基苯丙烯酰胺的合成及抗炎活性

目的： 寻找高效低毒的非甾体抗炎药。方法： 将具有抗炎活性的2-(2,4-二氯苯基)-3-(3,5-二甲氧基苯基)丙烯酸（I）转化为酰胺衍生物,应用二甲苯致小鼠耳肿胀模型评价其抗炎活性。结果： 合成了12个新化合物（Ⅱ_1-12）,其结构经IR、¹H NMR和高分辨MS确证。其中化合物Ⅱ₃与阴性对照CMC-Na相比呈现显著的抗炎活性(P<0.01),与阳性对照阿司匹林相比有较强的抗炎活性(P<0.05)。结论： 化合物Ⅱ₃值得进一步研究。     

新型二硫代二丙酰胺类衍生物的设计合成及其血管内皮细胞保护活性

目的 以卡托普利为先导化合物,设计合成一类新型二硫代二丙酰胺类衍生物,并考察其血管内皮细胞保护活性。方法 保留先导物卡托普利结构上的巯基丙酰胺骨架和侧链甲基,对脯氨酸片段进行结构改造并进行二聚化,设计合成了5个二硫代二丙酰胺类衍生物。以人脐静脉内皮细胞为实验细胞株,利用400 μmol/L过氧化氢溶液刺激3 h建立氧化诱导损伤细胞模型,以卡托普利为阳性对照药测试目标化合物对血管内皮细胞的保护活性。结果 所有目标化合物结构均通过核磁共振波谱（¹HNMR、¹³CNMR）和电喷雾电离质谱法（ESI-MS）确证。初步的血管内皮细胞保护活性测试结果表明,除化合物4c外4个目标化合物均具有不同程度的血管内皮细胞保护活性,其中化合物4e即3,3’-二硫（N-（［1,1’-联苯］-3-基甲基）-2-甲基丙酰胺）活性最优。结论 将卡托普利分子结构上的脯氨酸替换为4-甲基苄胺及4-叔丁基苄胺等相对较大的疏水性片段并进行二聚化,能显著改善其血管内皮细胞保护活性。     

阿魏酸酯类衍生物的合成及抗血小板聚集活性

目的： 研究阿魏酸酯类衍生物的合成及其抗血小板聚集活性,为研制新型抗血栓药物奠定基础。方法： 采用前药设计原理,将阿魏酸与醇反应形成单酯,再通过拼合原理,将阿魏酸单酯与阿司匹林反应形成双酯;通过体外抗血小板聚集试验对目标化合物进行抗血小板聚集活性评价。结果： 合成了16个目标化合物和8个副产物,其中新化合物15个,其结构经IR、MS和¹H NMR确证。活性评价结果表明,部分化合物在体外显示出较好的抗血小板聚集活性。结论： 碳链碳数为4～5的阿魏酸单酯与阿司匹林合成的双酯抗血小板聚集活性较好,可作为先导物进一步研究。     

新型PEG化GLP-1受体激动剂的合成及其降血糖活性

为了得到持续稳定控制血糖的胰高血糖素样肽-1(glucagon-like peptide-1,GLP-1)类似物,将平均相对分子质量为350、550和750的单甲氧基聚乙二醇(mPEG)分别缀合到GLP-1肽链上,设计并合成了12个衍生物。初步药理活性表明,所得化合物均保留GLP-1受体激动活性,其中化合物I-12降糖活性维持时间与艾塞那肽(Ex-4)和利拉鲁肽(Liraglutide)相当,具备成为新型长效化GLP-1受体激动剂的潜力。     

一种新型双联苄衍生物的合成及抗肿瘤活性

以3,4-二甲氧基-6-溴苯甲醛、3-羟基-4-甲氧基苯甲醛、2-羟基-3-甲氧基苯甲醛和4-溴苯甲酸甲酯为原料,通过Ullmann反应、醛基还原、磷盐生成、Wittig反应、分子内Wittig反应、酚羟基与醛基的保护和脱保护以及烯烃的催化氢化反应等方法完成了一种未见报道的新型双联苄衍生物(17)的全合成。所得化合物的结构通过MS、¹H NMR进行确证。MTT法测试目标化合物17对U20S细胞和YFP细胞体外抗肿瘤活性,结果显示,目标化合物17的活性强于地钱素C。     

麻疯树种子中抗氧化活性成分的研究

目的 研究麻疯树Jatropha curcas种子中具有抗氧化活性的有效成分。方法 使用DPPH活性测试方法进行抗氧化活性的筛选和追踪,采用活性追踪性分离方法,使用硅胶、ODS和凝胶柱色谱等现代分离手段分离得到麻疯树种子中具有抗氧化活性的有效成分。综合应用多种光谱学方法(UV、IR、ESI-MS、HR-ESI-MS、¹H-NMR、¹³C-NMR、2D-NMR)对所得化合物进行解析并鉴定其结构。最后使用DPPH法测定并评价单体化合物的抗氧化活性。结果 麻疯树种子提取物的正丁醇萃取层具有显著的抗氧化活性,通过对该萃取部分的成分研究共分离得到6个化合物,经结构解析,分离得到的6个化合物分别鉴定为麻疯果素A(3,4,4′5′-四羟基-3′-甲氧基-双环氧木脂素,3,4,4′,5′-tetrahydroxyl-3′-methoxylbisepoxylignan,1)、(±)-3,3′-bisdemethylpinoresinol(2)、7-表-芝麻素-二儿茶酚(3)、异巴西油大戟素(isoprincepin,4)、β-谷甾醇(5)与β-胡萝卜苷(6)。结论 活性测定结果表明,化合物3、4具有较强活性,化合物1、2具有中等强度活性。化合物1为新化合物,命名为麻疯果素A(jatrophasin A);化合物2、3、4为首次从麻疯树属中分离得到。     

新型CDDO衍生物的合成及抗肿瘤活性

对2-氰基-3,12-二氧代齐墩果烷-1,9(11)-二烯-28-羧酸(CDDO)进行结构修饰,通过不同连接臂将几种含氮杂环分别引入C-17位羧基,设计并合成了12个未见文献报道的新化合物(9a~9l),其结构经ESI-MS、IR和¹H NMR确认。采用MTT法评价了化合物对HCT-116、A549及HepG2肿瘤细胞的抑制活性。实验结果表明,部分化合物对肿瘤细胞具有较强的抑制活性,其中化合物9c的活性最强,高于CDDO咪唑啉酮衍生物(CDDO-Im)。血浆稳定性实验表明,化合物9c的血浆稳定性较高,显著高于CDDO-Im。     

硝酸酯类NO供体型齐墩果酸衍生物的合成及抗肿瘤活性

以齐墩果酸为先导物,将其3位OH通过各种类型的连接基团与硝酸酯类NO供体偶联,合成了10个目标化合物（2,4,8a～8c,10,12,15a～15c）。结构均经IR,MS及¹H NMR确证,并采用MTT法测定了偶联物的细胞毒性。结果显示,化合物8c对人肺癌细胞A549、人结肠癌细胞HT-29及人肝癌细胞SMMC-7721均具有较强的抗肿瘤活性,值得进一步研究。     

普拉格雷类似物的合成及抗血小板聚集活性

采用前药设计原理,以普拉格雷代谢物为先导化合物,设计并合成了一系列2-羟基四氢噻吩并吡啶烷氧羰基酯类衍生物（1~8）,结构均经IR、¹H NMR、¹³C NMR、MS和HRMS确证。对目标化合物进行了抗血小板聚集的药理活性评价,活性测试结果显示除化合物5外,其余大部分化合物都显示出较好的抗血小板聚集活性,部分化合物显示了与普拉格雷相当的抗血小板聚集活性。     

以血栓和骨质疏松为靶的伪肽研究进展

细胞黏附可导致一系列重大疾病。在这些重大疾病中,血栓形成和骨质疏松症涉及了最广大的人群。血栓形成和骨质疏松发病中的细胞黏附步骤的共同受体是整合素,共同配基是RGD肽。发展寡肽类抗血栓形成和抗骨质疏松药物是目前的研究热点之一。本文综述了相关的伪肽研究进展。     

The role of osteoactivin-derived peptides in osteoblast differentiation.

BACKGROUND: In our previous studies, we found that osteoactivin (OA) plays an important role in the regulation of osteoblast differentiation in vitro. Our studies also suggested that the region of OA protein that contains an RGD motif might play a vital role in the function of OA in osteoblast differentiation. In this study, we examined the functional role of OA-derived peptide containing the RGD motif (OA-D) in osteoblast differentiation. MATERIAL/METHODS: For this purpose, we designed another peptide, termed OA-E, that has sequence similar to OA-D but with glutamic acid (E) instead of aspartic acid (D). The effect of OA-E peptide on osteoblast differentiation was examined. Interestingly, OA-E peptide induced osteoblast differentiation in a manner similar to OA-D peptide. These data suggested that the effect of OA-derived peptides is RGD independent and it could be dependent on other features in the amino acid sequence of these peptides. RESULTS: OA-D peptide treatment markedly induced osteoblast differentiation markers in vitro compared to cultures treated with negative control peptide (NCP). Interestingly, OA-E peptide induced osteoblast differentiation in a manner similar to OA-D peptide. These data suggested that the effect of OA-derived peptides is RGD independent and it could be dependent on other features in the amino acid sequence of these peptides. Since phosphorylation of amino acid residues in proteins and peptides plays a major role in biological systems, the phosphorylation pattern of amino acid sequences of OA-derived peptides and OA protein family members were examined using bioinformatic analysis tools. We found that OA-derived peptides and OA protein family members have serine residue, close to c-terminus and might be phosphorylated with casein kinase II. Casein kinase II is known to phosphorylate many osteoblast-related proteins that regulate osteoblast development and differentiation such as osteopontin and vitronectin. CONCLUSIONS: Collectively, these data showed that both OA-D and OA-E peptides significantly induced osteoblast differentiation in vitro and that effect is RGD independent.     

精甘天三肽对肾小球系膜细胞FAK及HA表达的影响

目的 观察精-甘-天(RGD)三肽对肾小球系膜细胞(GMC)增殖、粘着斑激酶(FAK)和透明质酸(HA)表达的影响。方法 采用RGD体外诱导培养大鼠GMC,采用MTT法测定细胞增殖、免疫组织化学方法测定FAK表达、放射免疫法测定HA含量。结果 RGD处理后,细胞由梭形变为圆形或卵圆形,并出现脱壁、悬浮。与正常对照组相比,RGD能降低系膜细胞的增殖;RGD 1mmol／L作用24h分别导致FAK表达平均灰度值降低3．10％,HA含量下降5．64％;4mmol／L作用8h及24h分别导致FAK表达平均灰度值降低6．50％和15．95％,HA含量下降6．37％和18．43％。RSD对细胞增殖、FAK及HA表达无影响。结论 RGD肽可使细胞粘附降低,导致增殖力下降,ECM成分分泌减少。     

RGD肽固定对胶原黏附细胞性能的影响

目的将促黏附分子RGD肽（精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸）固定于胶原材料，检测其对细胞黏附性的影响。方法实验分4组（n=12）：耦联组采用化学交联剂Sulfo-LC—SPDP，使含RGD肽的GRGDSPC肽与胶原支架结合；混合组将GRGDSPC肽与胶原直接混合后涂层；以及单纯胶原涂层组和未涂层孔板组。采用X射线光电子能谱法（XPS）对材料作表面分析。MTT试验检测种植于材料表面的大鼠肌成纤维细胞的细胞黏附效率。结果耦联组的XPS谱图检测到硫元素，证明已将RGD肽化学结合于胶原材料表面。MTT法检测显示，耦联组RGD肽固定胶原后细胞黏附效率明显高于其它各组，且呈时间和肽浓度依赖性。结论RGD肽对胶原的表面修饰，可提高生物源性支架的细胞黏附性，促进组织工程心脏瓣膜构建。     

RGD多肽纳米纤维凝胶的自组装及其与脂肪干细胞生物相容性

目的 研究精氨酸-丙氨酸-天门冬氨酸(RGD)多肽纳米纤维凝胶在体外的自组装及其与脂肪干细胞的生物相容性.方法 固相法合成含RGD序列的多肽,加入含0.5 mol/L Ca2+的DMEM诱导其自组装,透射电镜观察自组装效果.将其与体外分离培养的大鼠脂肪干细胞复合培养,倒置显微镜下观察细胞的生长情况,Calcein-AM...     

放射性标记RGD肽行肿瘤αvβ3受体显像研究的进展

恶性肿瘤的持续生长、侵袭转移与肿瘤血管生成密切相关,在这个过程中整合素αvβ3起着重要的作用。αvβ3主要通过和细胞外基质(ECM)中的一些含RGD的三肽序列配体结合发挥作用,文献报道其在新生血管内皮细胞有强烈表达,而在正常细胞表达极少或缺乏,因此,放射性标记RGD肽作为高特异性的标记物对恶性肿瘤进行核医学显像,能够达到早期诊断和治疗目的。本文就近年来国内外RGD肽的标记方法和αvβ3受体显像研究进行了综述。     

RGD肽保护大鼠胰岛活性和功能的实验研究

目的探讨RGD肽对分离纯化后的胰岛活性和功能的影响。方法将实验大鼠分成两组：1640组和RGD组。采用Ficoll不连续密度梯度离心纯化胰岛,浓度分别为：27％、25％、23％、20．5％和11％。1周后,用丫啶橙／溴乙啶（AO／EB）荧光染色观察RGD肽对胰岛活性的影响。胰岛素分泌功能检测：采用放免法检测培养液中胰岛素含量,计算胰岛素释放指数（SI）。流式细胞仪检测：caspase-9和磷酸化Akt阳性细胞比例,观察RGD肽对caspase-9及Akt的影响。结果采用改良梯度离心法,平均每只大鼠可获约600IEQ～700IEQ胰岛,YO／EB荧光染色,结果显示刚分离后胰岛活率〉95％。1640组培养1周后胰岛分泌指数为1．64±0．28,RGD组胰岛分泌指数为2．28±0．16,较1640组明显增加,差异具有统计学意义（P〈0．05）。流式细胞仪检测结果表明胰岛1640组培养1周后,激活的caspase-9为（22．66±3．56）％,RGD组激活的caspase-9为（10．54±1．96）％,较1640组明显降低13％,且其差异具有统计学意义（P〈0．05）;检测RGD对Akt磷酸化的影响,胰岛1640组培养1周后,Akt磷酸化占（31．47±4．08）％,RGD组磷酸化Akt占（61．054±6．03）％,较1640组明显升高,其差异具有统计学意义（P〈0．05）。结论RGD可通过Akt／PKB的磷酸化抑制细胞凋亡。     

RGD多肽仿生修饰微种植体支抗骨界面结合强度的实验研究

目的:探讨即刻负载条件下,RGD多肽涂层对微型支抗种植体-骨界面结合强度的影响。方法:选择28只新西兰大白兔,左侧胫骨平行植入2枚附着RGD多肽涂层微支抗种植体,右侧为2枚未经RGD多肽涂层附着处理的对照组。根据种植体即刻负载力值的不同,分为200 g、400 g。种植后1周、2周、4周、8周分别处死两组实验对象,通过推出实验测试种植体与骨界面的结合强度。结果:在200 g、400 g力加载中RGD多肽仿生修饰组与对照组进行比较,术后第4、8周时,RGD多肽仿生修饰组骨的力学结合强度高于对照组的结合强度,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:RGD多肽仿生修饰微支抗种植体能够加强微种植体与骨组织的结合强度。     

精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸多肽表面修饰多孔钽对软骨细胞黏附、增殖和分泌功能的促进作用

目的:研究精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸(RGD)多肽表面修饰多孔钽(Ta)对软骨细胞黏附、增殖和分泌功能等生物学行为的影响,探讨RGD/软骨细胞/多孔钽复合物作为软骨组织工程支架材料修复软骨缺损、促进软骨再生的可行性。方法:通过物理吸附的方法将不同浓度RGD肽及Ⅱ型胶原(ColⅡ)吸附于多孔钽表面,分为Ta-RGD组、Ta-ColⅡ组、Ta-RGD/ColⅡ0.2 g·L^-1组、Ta-RGD/ColⅡ1.0 g·L^-1组、Ta-RGD/ColⅡ5.0 g·L^-1组、Ta-RGD/ColⅡ10.0 g·L^-1组及纯Ta组。分离培养新西兰幼兔关节软骨细胞,取第2代细胞种植于修饰前后多孔钽使其成为RGD/软骨细胞/多孔钽复合物;扫描电镜观察RGD/软骨细胞/多孔钽复合物形貌特征以及软骨细胞生长状态,沉淀法检测多孔钽修饰前后软骨细胞黏附率,MTT法检测多孔钽修饰前后软骨细胞的增殖水平,羟脯氨酸法测定软骨细胞分泌功能。结果:多孔钽经RGD修饰后各组软骨细胞黏附率均高于修饰前(P<0.05),其中黏附效果最好的是4 h的Ta-RGD/ColⅡ5.0 g·L^-1组,同时各组间黏附率比较差异有统计学意义(P<0.05)。扫描电镜下各组软骨细胞在修饰后的多孔钽表面生长状态良好,细胞在多孔钽表面及孔隙内生长,分泌细胞外基质覆盖于多孔钽表面;MTT检测,多孔钽经RGD修饰后各组软骨细胞增殖水平均高于修饰前(P<0.05),其中增殖效果最好的是13 d的Ta-RGD/ColⅡ1.0 g·L^-1组;羟脯氨酸检测,Ta-RGD/ColⅡ1.0 g·L^-1组羟脯氨酸水平高于其他各组(P<0.05)。结论:RGD多肽可有效加强软骨细胞在多孔钽表面及孔隙内的黏附及增殖,对软骨细胞的分泌有促进作用。     

精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸多肽表面修饰对羟基磷灰石-磷酸三钙生物陶瓷异位成骨的影响

目的了解精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸(RGD)多肽表面修饰对羟基磷灰石-磷酸三钙(HA-TCP)异位成骨的影响。方法以骨髓基质干细胞(MSCs)复合RGD多肽表面修饰的HA-TCP或单纯材料培养制备组织工程骨,将材料植入新西兰白兔脊柱旁肌肉内,实验根据植入不同材料分为A、B、C和D组,A组:植入MSCs复合RGD多肽表面修饰的HA-TCP培养制备的组织工程骨;B组:植入MSCs复合HA-TCP培养制备的组织工程骨;C组:植入RGD多肽表面修饰的HA-TCP;D组:植入HA-TCP。术后4、8周取材,行组织学观察和计算机图像分析。结果术后4、8周,各组异位成骨组织学评估,A>B(P<0.001,P<0.05),C和D组无异位成骨。结论RGD多肽表面修饰对以HA-TCP为支架材料组织工程骨的异位成骨有明显优化作用。