MCU介导的线粒体Ca2+稳态失调参与模拟失重引起的大鼠脑动脉平滑肌细胞凋亡

目的 观察线粒体钙单向转运体（mitochondrial Ca2+ uniporter, MCU）在模拟失重引起大鼠脑动脉平滑肌细胞凋亡中的作用。 方法 采用尾吊大鼠方法建立模拟失重模型,实验大鼠分为对照（Control, CON）组和尾吊（tail suspension, SUS）组。造模成功后,分离脑动脉血管,取病理切片行TUNEL染色及细胞色素C免疫荧光染色检测平滑肌细胞凋亡水平,蛋白免疫印迹实验检测凋亡相关蛋白及MCU蛋白表达水平,最后急性分离脑动脉平滑肌细胞,分别采用Rhod-2 AM、mitoSOX染色检测细胞线粒体内Ca2+水平和活性氧簇（reactive oxygen species,ROS）水平。 结果 与对照组比较,尾吊组模拟失重大鼠基底动脉平滑肌细胞TUNEL阳性率显著增加（P < 0.05）,细胞色素C入核率显著增加（P < 0.05）,促凋亡蛋白cleaved caspas-9、cleaved caspas-3、Bax表达显著增加（P < 0.05）,抑制凋亡蛋白Bcl-2显著降低（P < 0.05）;同时,MCU蛋白表达水平下调（P < 0.05）;此外,尾吊组大鼠脑动脉平滑肌细胞线粒体内Ca2+浓度下降（P < 0.05）及ROS水平增加（P < 0.05）。 结论 模拟失重引起大鼠脑动脉平滑肌细胞凋亡,同时MCU表达降低,提示MCU可能参与了模拟失重引起的脑动脉平滑肌细胞凋亡这一病理过程。     

红景天苷可通过抑制线粒体氧化应激减轻模拟失重大鼠脑动脉的炎性反应

目的 探讨红景天苷(SAL)是否会通过抑制线粒体的氧化应激,从而恢复模拟失重大鼠脑动脉的炎性反应.方法 利用尾部悬吊方法建立大鼠模拟失重模型,将24只成年雄性Sprague-Dawley大鼠随机分为4组:对照(CON)组、对照+红景天苷(CON+SAL)组、尾部悬吊(SUS)组和尾部悬吊+红景天苷(SUS+SAL)组,...     

模拟失重大鼠胸主动脉收缩功能的变化可能与Rho激酶改变有关

目的:观察模拟失重大鼠胸主动脉收缩功能的变化及Rho相关的蛋白激酶（Rho-associated protein kinase,ROCK）表达的改变,并探讨二者之间的关系。方法: 以尾部悬吊4周建立模拟失重大鼠模型并观察模拟失重对胸主动脉的主要生理的影响。采用离体血管环功能实验检测大鼠胸主动脉的收缩反应性变化;通过蛋白印迹技术检测大鼠胸主动脉ROCK II蛋白的表达。结果: 与对照组相比,悬吊组氯化钾、苯肾上腺素诱导的大鼠胸主动脉收缩功能均明显增强（P<0.05）。用ROCK特异性抑制剂Y-27632孵育1 h后,两组胸主动脉的收缩反应均显著降低至同一水平,两组间无统计学差异。蛋白印迹结果显示,悬吊组ROCK II的表达增加。结论: ROCK表达的改变可能在模拟失重大鼠胸主动脉收缩功能增强中发挥重要作用,去除ROCK的作用可消除模拟失重大鼠与正常大鼠胸主动脉收缩功能的差异。     

间断人工重力在模拟失重所致胸主动脉炎症反应中的对抗作用

目的 观察模拟失重大鼠胸主动脉炎症反应变化以及间断人工重力对抗模拟失重所致变化的作用.方法 采用尾部悬吊方法建立模拟失重大鼠模型,将45只雄性Sprague-Dawley大鼠随机分为3组,每组15只(n=15).即对照(CON)组、4周尾部悬吊(HU)组和1 h/d间断人工重力(IAG)组.建模成功后,分离大鼠胸主动脉...     

两种木贼提取物对动脉粥样硬化早期模型大鼠平滑肌凋亡及BCl-2、Caspase-3表达的调控

目的研究木贼正丁醇提取物及提取剩余物对动脉粥样硬化(AS)早期大鼠主动脉平滑肌细胞凋亡率及Bcl-2、Caspase-3表达的影响。方法雄性SD大鼠随机分为正常对照、模型、阳性药、提取物及提取剩余物组。复制食饵性AS早期模型,用木贼提取物、提取剩余物分别预防性给药,以吉非罗齐为阳性药对照。9w后,观察主动脉壁病理学变化,流式细胞术定量检测主动脉壁平滑肌细胞凋亡率及Bcl-2、Caspase-3的表达。结果木贼正丁醇提取物及提取剩余物组的凋亡率明显高于模型组(P<0.01);Bcl-2低于模型组(P<0.01);Caspase-3高于模型组(P<0.01)。结论木贼正丁醇提取物及提取剩余物通过控制AS早期主动脉壁平滑肌细胞Bcl-2、Caspase-3表达,促进平滑肌细胞凋亡,阻止AS的进程。     

钙敏感受体在动脉粥样硬化大鼠血管内皮细胞中的表达

目的探讨钙敏感受体在动脉粥样硬化大鼠胸主动脉血管内皮细胞中的表达及其与细胞凋亡的关系。方法 Wistar大鼠144只,随机分为对照组和动脉粥样硬化组,每组72只。动脉粥样硬化早期模型复制首先每千克体重注射维生素D360万单位,然后喂养高脂饲料6周。自动生化仪检测血清甘油三酯、总胆固醇;光镜观察胸主动脉形态学变化;TUNEL染色观察胸主动脉内皮细胞凋亡情况;采用RT-PCR和免疫印迹法分别检测胸主动脉血管内皮细胞中钙敏感受体、Bax、Bcl-2及Caspase-3的mRNA和蛋白表达。结果与对照组比较,动脉粥样硬化组细胞凋亡指数以及钙敏感受体、Bax和Caspase-3的表达升高,Bcl-2的表达降低;光镜下可见胸主动脉部分内皮脱落,表面不光滑,中膜平滑肌细胞数目明显增多,排列紊乱。结论钙敏感受体可能参与了主动脉血管内皮细胞的凋亡,进而启动动脉粥样硬化的形成。     

溶血磷脂酰胆碱促进胸主动脉瘤/夹层发生发展的作用机制研究

目的探讨溶血磷脂酰胆碱(LPC)调控小鼠胸主动脉瘤/夹层(TAAD)的作用机制。方法复制小鼠胸主动脉瘤/夹层模型,随机分成两组:生理盐水腹腔注射组(对照组);LPC腹腔注射组(LPC组)。采用弹力纤维染色法检测胸主动脉弹力纤维板断裂情况;TUNEL检测血管平滑肌细胞凋亡;免疫组化染色检测巨噬细胞浸润;qRT-PCR检测巨噬细胞炎症因子白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α),趋化因子CC类趋化因子配体2(CC12)、CC类趋化因子配体5(CC15)的表达以及平滑肌细胞促凋亡相关因子Bc1-2相关X蛋白(Bax)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-9(Caspase-9)、抗凋亡相关因子B细胞淋巴瘤-2基因(Bcl-2)、B细胞淋巴瘤-x1基因(Bcl-x1)的表达。结果胸主动脉瘤/夹层模型后28天,与对照组相比,LPC组小鼠的生存率较对照组明显降低(P0.05);胸主动脉扩张程度增加,且弹力纤维板紊乱与断裂程度加重(P0.05);LPC组小鼠胸主动脉中巨噬细胞浸润较对照组增加(P0.05);与对照组相比,LPC组小鼠胸主动脉平滑肌细胞凋亡也显著增多(P0.05);经LPC刺激后,巨噬细胞中趋化因子(CC12、CC15)及炎症因子(IL-1β、IL-6、TNF-α)较对照组显著增加(P0.05)、平滑肌细胞中促凋亡基因(Bax、Caspase-9)表达较对照组增加、抗凋亡基因(Bcl-2、Bcl-x1)表达较对照组降低(P0.05)。结论 LPC可促进胸主动脉瘤/夹层发生发展,其机制是促进了血管平滑肌细胞的凋亡、巨噬细胞浸润和分泌炎症因子,进而促进血管的炎症。     

Fas Ligand基因转染对大鼠血管平滑肌细胞凋亡的影响

目的 :研究腺病毒介导FasLigand基因转染对大鼠血管平滑肌细胞凋亡的影响。 方法 :常规分子生物学技术构建重组腺病毒Ad FasL、Ad βgal。免疫组化方法检测转染Ad FasL的大鼠血管平滑肌细胞FasLigand蛋白表达。用TUNEL法检测转染腺病毒的血管平滑肌细胞是否发生凋亡。结果 :10 0moiAd FasL转染大鼠血管平滑肌细胞 ,10 0 %细胞表达FasLigand蛋白 ,并发生凋亡。结论 :大鼠对Ad FasL转染诱导的凋亡易感。因此可以推断Ad FasL转染损伤后血管壁将减少血管平滑肌细胞积累。Ad FasL转染可能是有效的再狭窄治疗策略     

血管紧张素原对动脉粥样硬化的作用及机制

目的探讨血管紧张素原(AGT)对动脉粥样硬化(AS)的作用机制。方法构建AS小鼠模型,RT-PCR检测AS小鼠斑块组织和正常小鼠主动脉血管组织中AGT的表达水平。以人巨噬细胞RAW264.7和人主动脉平滑肌细胞(HA-VSMC)为研究对象,转染siRNA AGT、siRNA control,实时荧光定量PCR(RT-PCR)检测转染后的AGT水平。MTT检测细胞转染后细胞的增殖情况,流式细胞仪检测转染后的细胞凋亡情况。Western印迹检测转染后细胞中Caspase-3、Bcl-2、Bax蛋白表达水平。结果 AS小鼠斑块组织中AGT的表达水平高于正常小鼠主动脉组织(P<0.01)。siRNA AGT可以有效抑制巨噬细胞RAW264.7和人主动脉平滑肌细胞HA-VSMC中AGT的转录表达。转染siRNA AGT后的巨噬细胞RAW264.7存活率与siRNA control组比较差异显著(P<0.01),转染siRNA AGT后的主动脉平滑肌细胞HA-VSMC存活率与siRNA control组差异显著(P<0.01),抑制AGT的表达可以抑制巨噬细胞和平滑肌细胞的增殖。转染siRNA AGT后的巨噬细胞RAW264.7凋亡率显著高于siRNA control组(P<0.01);转染siRNA AGT后的主动脉平滑肌细胞HA-VSMC凋亡率显著高于siRNA control组(P<0.01)。转染siRNA AGT后的巨噬细胞RAW264.7和主动脉平滑肌细胞HA-VSMC中Caspase-3、Bax蛋白表达量显著高于siRNA control组,Bcl-2蛋白表达量显著低于siRNA control组(均P<0.01)。结论AGT在鼠AS斑块组织中过表达,抑制AGT可以抑制AS相关细胞增殖,促进细胞凋亡,作用机制与凋亡相关蛋白Caspase-3、Bcl-2、Bax有关。     

ASM/Cer通路介导模拟失重大鼠股动脉平滑肌细胞增殖与凋亡改变及表型转换

目的 探究模拟失重（simulated weightlessness,SW）大鼠股动脉（femoral artery,FA）酸性鞘磷脂酶（acid sphingomyelinase,ASM）/神经酰胺（ceramide,Cer）通路改变及在FA平滑肌细胞增殖与凋亡改变及表型转换中的作用。方法 采用后肢不荷重尾部悬吊（hindlimb unloaded tail suspended,HU）大鼠模拟微重力状态下血流动力学变化,通过蛋白免疫印迹分析、免疫组织化学染色等检测模拟失重大鼠ASM表达量、Cer含量以及血管平滑肌细胞增殖与凋亡及表型的改变。结果 与对照（CON）组相比,HU大鼠FA血管平滑肌细胞中增殖细胞核抗原（proliferating cell nuclear antigen,PCNA）、半胱氨酸-天冬氨酸蛋白酶3(cysteinyl aspartate specific proteinase 3,Caspase3)、B淋巴细胞瘤-2(B-cell lymphoma-2,Bcl-2)和Bcl-2相关X蛋白（Bcl-2 associated X protein,Bax）的表达量,合...     

间断人工重力改善模拟失重所致血脑屏障通透性增大

目的 研究模拟失重对大鼠海马区域血脑屏障通透性的影响，以及间断人工重力的改善作用及其可能机制。 方法 八周龄雄性SD大鼠随机分为对照组（CON）、尾吊组（SUS）及间断人工重力组（IAG），采用尾吊模型模拟微重力效应，大鼠尾吊期间每日平放一小时模拟间断人工重力效应。 结果 与CON组相比，SUS组在旷场中运动距离、中央区域停留时间、中央区域移动距离均显著减少（P<0.01），新物体识别时间及辨别指数显著减少（P<0.05，P<0.01），而间断人工重力可改善模拟失重导致的大鼠认知能力减退。GLUT1与CD31免疫荧光双标染色结果显示:相比于CON组，SUS组海马区血管密度显著降低（P<0.01），血管直径显著缩小（P<0.01），同时Evans blue渗出实验结果提示:SUS组海马区域血脑屏障通透性显著增大，Western blotting结果显示SUS组海马区域Albumin含量显著升高（P<0.01），Occludin表达显著下降（P<0.05），而IAG可部分减轻上述血脑屏障损害。 结论 间断人工重力能改善模拟失重引起的海马区域血脑屏障结构及功能损伤，部分恢复大鼠认知功能障碍。     

异硫氰酸苯乙酯联合阿霉素诱导骨肉瘤细胞凋亡的作用研究

目的探讨异硫氰酸苯乙酯(PEITC)联合阿霉素(ADM)诱导骨肉瘤细胞凋亡的作用。方法选用U2-OS细胞株,根据处理方法的不同将其分为PEITC组、ADM组、PEITC+ADM组和空白对照组。采用MTT法检测不同处理组药物对U2-OS细胞增殖能力的影响。采用TUNEL法测定不同处理组U2-OS细胞的凋亡情况。采用Western blot法检测不同处理组U2-OS细胞Caspase-3、Fas、FasL蛋白的表达情况。结果PEITC和ADM浓度对U2-OS细胞的半抑制浓度(IC50)分别为4.37μM/ml和6.61μg/ml。与单独使用PEITC或ADM处理相比,联合使用两种药物对U2-OS细胞的增殖抑制率更高(P<0.05)。低剂量的PEITC联合ADM产生协同效应,而高剂量的两种药物联合产生相加效应。与单药物处理相比,PEITC联合ADM能够显著提高U2-OS细胞凋亡率(P<0.05),增加Caspase-3蛋白的活性及表达(P<0.05)。结论PEITC增强了ADM诱导骨肉瘤细胞凋亡的作用,可能与Caspase-3蛋白活性升高和表达量上调有关,这为PEITC联合ADM的临床应用提供了参考依据。     

大鼠冠状动脉微栓塞致心肌细胞凋亡与天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶活化的动态变化及关系

目的 探讨大鼠冠状动脉微栓塞致心肌细胞凋亡与天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶(Caspase)-12活化的动态变化规律及其关系.方法 选取成年雄性SD大鼠,建立冠状动脉微栓塞模型,随机分为微栓塞组、假手术组.每组存活大鼠再随机分为3 h、6 h、12 h、24 h、4周组,各时间点各组大鼠均为10只.另10只大鼠作正常对照组.缺口末端标记法检测心肌细胞凋亡,免疫印迹法检测Caspase-3及Caspase-12酶原及其活化产物,荧光酶标法检测Caspase-12活性.结果 (1)与正常对照组、假手术组相应时间点比较,微栓塞组各时间点心肌细胞凋亡率显著升高(均P<0.05),心肌细胞凋亡主要分布在微梗死区及其边缘区.微栓塞组心肌细胞凋亡率在3 h、6 h、12 h、24 h、4周分别为(1.76±0.68)%、(3.17±1.26)%、(1.34±0.12)%、(1.07±0.65)%、(0.30±0.13)%,冠状动脉微栓塞后6 h心肌细胞凋亡达高峰(均P<0.05).(2)与正常对照组、假手术组相应时间点比较,微栓塞组各时间点Caspase-3、Caspase-12的相对活化水平升高(均P<0.05),其随时间变化规律与心肌细胞凋亡的时间变化规律一致.结论 大鼠冠状动脉微栓塞致心肌细胞凋亡增加,在微栓塞后6 h达高峰,具有动态变化规律.Caspase-12可能参与了冠状动脉微栓塞致心肌细胞凋亡.     

氨溴索对大鼠胃内容物吸入性肺损伤细胞凋亡的影响

目的研究细胞凋亡在胃内容物吸入性肺损伤中的作用机制,并初步探讨氨溴索对肺损伤发生后细胞凋亡的影响。方法 30只健康Sprague-Dawley大鼠随机分为3组:对照组、损伤组、氨溴索组。采用蛋白免疫印迹法(Western blot)检测Bc12(B cell lymphoma/lewkmia-2)蛋白、Bax(Bc12 associated x protein)蛋白及Caspase-3蛋白表达;DNA原位末端标记(TUNEL)法测定肺组织细胞凋亡指数。结果与对照组比较,损伤组中Bax蛋白、Caspase-3蛋白表达增多,细胞凋亡指数增高;Bc12蛋白表达减少;差异均显著(P<0.05)。与损伤组比较,氨溴索组Bax蛋白、Caspase-3蛋白表达减少,细胞凋亡指数降低;Bc12蛋白表达增高;差异均显著(P<0.05)。结论细胞凋亡参与了胃内容物吸入后肺损伤发病过程,氨溴索在吸入性肺损伤组织中发挥抗细胞凋亡作用,可能机制在于调控死亡信号通路中Bax/Bc12蛋白表达相关。     

地塞米松对大鼠心肌缺血再灌注后细胞凋亡及金属硫蛋白表达的影响

目的观察地塞米松预处理对大鼠心肌缺血再灌注损伤的影响并探讨其作用机制。方法32只SD大鼠随机分成地塞米松组(16只)和对照组(16只),分别给予地塞米松(0.8mg/kg)和蒸馏水腹腔注射。预处理24h后,构建体外心脏缺血再灌注动物模型,动态观测缺血前期及再灌注期左心室发展压(LVDP)、左心室压力最大上升和下降速率(±dp/dtmax)、冠状动脉流出量(CF);测定冠状动脉流出液肌酸激酶同工酶(CK-MB)的漏出率;TUNEL法检测心肌细胞凋亡;Westernblot法检测金属硫蛋白(MT)、Bcl-2及Bcl-xl蛋白的表达;免疫组织化学法测定半胱天冬酶-3(caspase-3)的水平。结果与对照组比较,地塞米松组大鼠再灌注期LVDP、±dp/dtmax及CF得到改善(P<0.05);CK-MB的漏出率明显降低[(8.69±4.16)U/gvs(18.15±5.59)U/g,P<0.01];心肌细胞凋亡指数(10.18±1.99)%vs(14.66±2.97)%和caspase-3水平明显减少[(18.66±5.15)%vs(27.93±6.23)%,P<0.01],Bcl-xl(4.74±0.66)vs(1.69±0.73)和MT的表达明显增加[(3.09±1.07)vs(1.03±0.02),P<0.05],Bcl-2无明显变化(P>0.05)。结论地塞米松预处理对大鼠缺血再灌注的心肌具有保护作用,上调MT表达及抑制细胞凋亡可能是其机制之一。