普罗布考对大鼠心脏微血管内皮细胞RAGE表达的影响

目的 观察普罗布考对大鼠心脏微血管内皮细胞糖基化终末产物（AGEs）受体（RAGE）表达的影响.方法 体外原代培养心脏微血管内皮细胞.空白组加无血清培养液培养,AGEs组加AGEs（100 mg/L）孵育,普罗布考（5、10 μmol/L）组用普罗布考（5、10 μmol/L）分别作用细胞30 min后,加入AGEs（100 mg/L）再孵育24 h.各组分别作用于心脏微血管内皮细胞24h,免疫组化法和Western blot法检测RAGE蛋白表达.结果 AGEs组与空白组RAGE蛋白表达比较,P＜0.05;普罗布考10μmol/L组与AGEs组比较,P＜0.05.结论 普罗布考能够抑制AGEs诱发的心脏微血管内皮细胞RAGE的表达,从而抑制氧化应激的发生.     

v糖基化终末产物对大鼠肾脏微血管内皮细胞的损伤及普罗布考的保护作用

目的探讨糖基化终末产物对大鼠肾脏微血管内皮细胞功能的损伤以及抗氧化剂普罗布考的保护作用及分子机制。方法体外分离培养大鼠肾脏微血管内皮细胞,将其分为正常对照组、糖基化终末产物损伤组和普罗布考干预组;应用TBA法、硝酸还原酶法检测各组细胞丙二醛和一氧化氮浓度;采用逆转录聚合酶链反应法及Western-blot检测细胞内皮型一氧化氮合酶mRNA水平和NADPH氧化酶蛋白表达;应用荧光显微镜观察核因子κB活化。结果与正常对照组相比,损伤组内皮细胞丙二醛浓度上升、内皮型一氧化氮合酶mRNA水平降低、细胞质NADPH氧化酶蛋白表达减少(P<0.05)。糖基化终末产物作用时间在30min和6h时培养基中一氧化氮浓度升高(P<0.05或P<0.01),而12h后一氧化氮浓度随着糖基化终末产物作用时间延长而降低(P<0.05或P<0.01)。普罗布考在10、20、50、100μmol/L范围内降低细胞丙二醛水平,抑制NADPH氧化酶蛋白活化,上调一氧化氮和内皮型一氧化氮合酶mRNA水平(P<0.05或P<0.01)。糖基化终末产物刺激微血管内皮细胞后核因子κB表达部位由细胞质移到核内,作用30min时核内表达达高峰,而后持续高表达。结论糖基化终末产物导致的大鼠肾脏微血管内皮细胞损伤和功能下降的机制可能包括:①引发脂质过氧化;②活化NADPH氧化酶,增加活性氧的生成;③内皮型一氧化氮合酶mRNA水平异常,影响一氧化氮生成;④激活核因子κB。普罗布考的作用机制可能是通过拮抗糖基化终末产物导致的脂质过氧化,核因子κB、NADPH氧化酶活化和内皮型一氧化氮合酶mRNA表达异常来保护肾脏微血管内皮细胞功能。     

糖基化终末产物对体外诱导大鼠视网膜微血管内皮细胞血管形成的影响

目的 应用Matrigel建立大鼠视网膜微血管内皮细胞血管形成的体外培养体系,研究糖基化终末产物对诱导视网膜微血管内皮细胞血管形成的影响,从而探讨糖基化终末产物在糖尿病微血管病血管新生中的作用.方法 体外培养视网膜微血管内皮细胞,制备糖基化白蛋白.在Matrigel上建立血管形成的体外培养体系,实验分浓度效应组和时间效应组,并进行CD34免疫细胞化学染色.采用光镜下计数管腔数及计算机图像分析对结果进行测定和分析.结果 经分离培养的视网膜微血管内皮细胞在Matrigel上培养形成管腔样结构.糖基化白蛋白(糖基化终末产物)作用于培养的视网膜微血管内皮细胞后,可见管腔形成数目增加,且在一定范围内呈时间和剂量依赖效应(P<0.01).结论 糖基化终末产物可以促进Matrigel体外诱导视网膜微血管内皮细胞的血管形成.     

糖基化终末产物上调大鼠心脏微血管内皮细胞NF-kB和COX-2表达

目的研究糖基化终末产物（AGEs）对大鼠心脏微血管内皮细胞因子kB（NF-kB）和环氧合酶2（COX-2）表达的影响,探讨AGEs与糖尿病血管病变间的关系。方法体外培养大鼠心脏微血管内皮细胞至亚融和状态时,以不同浓度糖基化白蛋白BSA-AGEs与之作用不同时间后,检测内皮细胞NF-kB及COX-2蛋白的表达。结果25、50、100、200mg／LBSA-AGEs作用后,NF-kB和COX-2蛋白表达呈剂量依赖性增多,100mg／LAGEs作用6、12、24、48h,NF-kB和COX-2蛋白表达呈时间依赖性增多。结论BSA-AGEs可促进体外培养微血管内皮细胞NF-kB和COX-2的表达,其作用可能与NF-kB的活化有关。     

糖基化终末产物上调大鼠心脏微血管内皮细胞NF-κB和COX-2表达

目的 研究糖基化终末产物(AGEs)对大鼠心脏微血管内皮细胞因子κB(NF-κB)和环氧合酶2(COX-2)表达的影响,探讨AGEs与糖尿病血管病变间的关系. 方法 体外培养大鼠心脏微血管内皮细胞至亚融和状态时,以不同浓度糖基化白蛋白BSA-AGEs与之作用不同时间后,检测内皮细胞NF-κB及COX-2蛋白的表达. 结果 25、50、100、200mg/L BSA-AGEs作用后,NF-κB和COX-2蛋白表达呈剂量依赖性增多,100mg/L AGEs作用6、12、24、48h,NF-κB和COX-2蛋白表达呈时间依赖性增多. 结论 BSA- AGEs可促进体外培养微血管内皮细胞NF-κB和COX-2的表达,其作用可能与NF-κB的活化有关.     

前纤维蛋白1在糖基化终末产物介导内皮损伤中的作用

目的通过体外培养的人脐静脉内皮细胞,探讨糖基化终末产物对内皮细胞的损伤及与前纤维蛋白1的关系。方法在体外培养的内皮细胞,分别用不同浓度(100、200、400 mg/L)糖基化终末产物孵育不同时间(6、12、24、48 h),采用Western blot检测细胞前纤维蛋白1的表达,免疫荧光染色检测前纤维蛋白1的表达和F肌动蛋白形态及分布,同时检测细胞上清液非对称性二甲基精氨酸、一氧化氮、细胞间黏附分子水平和细胞内活性氧的水平。结果糖基化终末产物呈时间依赖性上调内皮细胞前纤维蛋白1的表达,以200 mg/L糖基化终末产物作用最为明显;对照组F肌动蛋白分布在细胞周边,分布均匀,细胞间连接紧密;200 mg/L糖基化终末产物处理24 h后,细胞内F肌动蛋白形态和分布发生明显改变,同时伴有胞浆中前纤维蛋白1的表达增高;200 mg/L糖基化终末产物孵育内皮细胞24 h可显著降低一氧化氮水平,升高非对称性二甲基精氨酸、细胞间黏附分子、活性氧水平,诱导内皮细胞损伤;用siRNA干扰前纤维蛋白1表达可显著抑制糖基化终末产物诱导的内皮损伤,表现为降低细胞前纤维蛋白1的表达,明显改善F肌动蛋白的结构和分布,增加一氧化氮的生成,降低非对称性二甲基精氨酸和细胞间黏附分子的水平。结论糖基化终末产物通过上调前纤维蛋白1的表达诱导血管内皮细胞损伤。     

糖基化终末产物对视网膜微血管内皮细胞核因子κB活化的影响及辛伐他汀的保护作用

目的探讨糖基化终末产物对大鼠视网膜微血管内皮细胞核因子κB活化的影响及辛伐他汀的保护作用。方法体外培养大鼠视网膜微血管内皮细胞,制备糖基化终末产物—糖基化白蛋白。应用荧光显微镜观察核因子κB的活化。并观察给予辛伐他汀后视网膜微血管内皮细胞M atrigel上管腔形成的变化及单核细胞趋化蛋白1的表达。结果视网膜微血管内皮细胞无糖基化白蛋白刺激时,核因子κB主要表达在细胞浆;糖基化白蛋白刺激后核因子κB主要表达在核内,作用30 min时达高峰。糖基化白蛋白作用下管腔形成明显增多,单核细胞趋化蛋白1的表达明显增加,加入辛伐他汀后管腔形成明显减少,单核细胞趋化蛋白1的表达明显下降。结论糖尿病视网膜病变中糖基化终末产物发挥重要作用,核因子κB的活化是其关键环节;辛伐他汀可以减少糖基化白蛋白诱导的管腔形成及单核细胞趋化蛋白1的表达。     

雌激素减弱晚期糖基化终末产物对内皮型一氧化氮合酶的抑制作用

目的 研究晚期糖基化终末产物对内皮型一氧化氮合酶的作用,以及雌激素对该作用的影响和具体机制.方法 培养人脐静脉内皮细胞,用不同浓度的晚期糖基化终末产物和雌激素进行干预,用Western blotting方法检测细胞中内皮型一氧化氮合酶与Akt蛋白质水平的变化.结果 晚期糖基化终末产物以不同浓度(50、100和200 mg/L)单独作用于内皮细胞4 h后,内皮型一氧化氮合酶与Akt蛋白质水平明显降低.雌激素以不同浓度(10~(-9)、10~(-8)和10~(-7)mol/L)单独作用于内皮细胞24h后,内皮型一氧化氮合酶与Akt蛋白质水平均明显增加,而雌激素在10~(-8)mol/L的条件下,晚期糖基化终末产物100 mg/L对内皮型一氧化氮合酶抑制作用明显减弱,且Akt蛋白质水平受到抑制的程度也明显减弱.结论 晚期糖基化终末产物对内皮型一氧化氮合酶有显著的抑制作用,雌激素能有效减弱晚期糖基化终末产物的这种作用,这种对内皮型一氧化氮合酶的保护作用可能是通过调节其上游信号分子Akt的蛋白水平而实现的.     

糖基化终末产物上调人胰岛微血管内皮细胞黏附分子的表达和白细胞黏附

目的 研究糖基化终末产物（AGEs）对人胰岛微血管内皮细胞（HIMVEC）黏附分子表达和白细胞黏附的影响.方法 HIMVEC细胞在200 mg/L的AGEs刺激后,用细胞基础的酶联免疫吸附法（ELISA）和Western blotting法检测细胞表面黏附分子的表达;并与BCECF标记的白细胞共培养检测与白细胞的黏附能力.采用实时荧光定量聚合酶链反应（RT-PCR）和Western blotting分别检测HIMVEC细胞上AGEs受体（RAGE）、蛋白激酶Cβ（PKC β）和蛋白激酶A（PKA）的mRNA表达情况.随后给予PKC β抑制剂LY333531或PKA激活剂8-Br-cAMP,观察对HIMVEC黏附分子表达的影响及和白细胞黏附的影响.两组间比较采用t检验进行分析.结果 与对照组相比,AGEs处理后HIMVEC表达P选择素、E选择素和血管细胞黏附分子1（VCAM-1）均上调（分别为1.10 ±0.13比0.64±0.14,0.83 ±0.06比0.47 ±0.05,0.87 ±0.09比0.43±0.07,t =4.93、9.40、7.61,均P＜0.05）,并且与白细胞的黏附较对照组明显增加（54 ±4比23 ±3,t=12.69,P＜0.05）.与AGEs组比较,RAGE抗体组P选择素、E选择素和VCAM-1的表达明显降低,组间差异具有统计学意义（t=5.69、6.89、5.43,均P＜0.05）.RAGE抗体组白细胞黏附明显少于AGEs组（54±4比31 ±4,t=8.22,P＜0.05）.与对照组相比,AGEs处理HIMVEC 4 h和18h,在mRNA水平和蛋白质水平均检测到RAGE和PKCβ的表达上调,但PKA的表达下调（t=10.94、7.76、21.82、5.85、10.96、11.47,均P＜0.05）.与AGEs组相比,在AGEs处理时给予PKCβ抑制剂LY333531或PKA激活剂8-Br-cAMP,均可降低HIMVEC上P选择素、E选择素和VCAM-1的表达水平（=7.60、6.60、6.25、11.58、4.08、3.47,均P＜0.05）,并减少白细胞的黏附（t=7.67、8.89,均P＜0.05）.结论 AGEs通过RAGE受体上调PKCβ和下调PKA增加HIMVEC上黏附分子的表达,促进白细胞的黏附,可能是糖尿病状态下胰岛中白细胞浸润的机制之一.     

糖基化终末产物诱导大鼠视网膜微血管内皮细胞表型和功能改变

目的 研究糖基化终末产物(AGEs)诱导大鼠视网膜微血管内皮细胞表型和功能的变化及相关机制.方法 SPF级雄性Wistar大鼠20只,7～8周龄,体重260～280 g,分离培养大鼠视网膜内皮细胞,采用免疫荧光染色、流式细胞术和体外形成毛细血管样网络结构的方法进行鉴定.视网膜内皮细胞在AGEs刺激后,用噻唑蓝(MTT)法分析细胞的增殖能力;用膜连蛋白V/碘化丙啶(Annexin V/PI)双染法检测细胞凋亡;采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和流式细胞术检测细胞AGEs受体、人蛋白激酶C(PKC)、细胞间黏附分子1(ICAM-1)和诱导型一氧化氮合酶(iNOS)的表达变化.采用t检验进行统计学分析.结果 分离纯化的大鼠视网膜内皮细胞表达血管性血友病因子(vWF)并在人工基膜上形成毛细血管网络结构.AGEs以时间和剂量依赖的方式抑制大鼠视网膜内皮细胞增殖能力,在200 mg/L的AGEs组培养至第5天时细胞增殖能力低于对照组(t=8.9,P＜0.05),7 d和9 d时抑制作用更明显(t值分别为15.7和46.1,均P＜0.01).400 mg/L AGEs组在第3天开始出现细胞增殖减慢(t=12.5,P＜0.05),从第5天开始增殖速度明显低于对照组(t值分别为22.4、41.5和77.7,均P＜0.01).并且AGEs诱导视网膜内皮细胞凋亡.进一步分析发现AGEs上调了大鼠视网膜内皮细胞AGEs受体、PKC、ICAM-1和iNOS的mRNA表达(t值分别为91.8、9.22、16和42,均P＜0.01)和蛋白水平的表达(t值分别为20.2、12.3、7.7和13.9,均P＜0.01).结论 AGEs可能通过上调AGEs受体诱导大鼠视网膜微血管内皮细胞表型和功能的改变.     

AGEs对心肌微血管内皮细胞血管新生和管腔形成的影响

目的: 观察糖基化终产物（advanced glycation end products,AGEs）对心肌微血管内皮细胞(cardiac microvascular endothelial cells,CMECs)增殖能力、迁移能力,以及血管新生和管腔形成的作用和影响。方法: 以不同浓度（100、200和400 mg/L）的AGEs作用于CMECs 48 h,分别采用MTT比色法检测细胞的增殖能力;用Transwell法检测细胞的迁移能力;用毛细血管管腔结构形成试验检测AGEs对血管新生的影响。结果: CMECs在以不同浓度（100、200及400 mg/L）的AGEs作用48 h后,MTT比色法检测显示,吸光值（分别为0.1195±0.0049、0.1422±0.0058及0.1783±0.0220）明显高于对照组（0.0955±0.0161,P<0.05,P<0.01）;Transwell法检测细胞数［分别为(24.89±6.234)、(32.89±6.990)及(55.56±10.27)个］均高于对照组［（13.89±4.622）个,P<0.05,P<0.01］;管样结构的长度［分别为(3.261±0.7016)、(4.737±1.129)及(6.687±1.308)mm/mm2］均高于对照组［(2.089±0.6723)mm/mm2,P<0.05,P<0.01］。结论: AGEs可以促进CMECs血管新生和管腔结构的形成,且与其浓度呈正相关。     

辛伐他汀抑制糖基化终产物诱导心肌微血管内皮细胞炎性反应及机制探讨

目的观察羟甲基戊二酰辅酶A还原酶抑制荆辛伐他汀对糖基化终产物(AGEs)诱导心肌微血管内皮细胞(CMECs)表达单核细胞趋化因子1(MCP-1)、细胞间黏附分子1(ICAM-1)的抑制作用,探讨辛伐他汀在早期糖尿病心肌微血管炎性病变中的保护机制。方法将培养的CMECs用辛伐他汀预孵育6 h,加入400mg/L的外源性糖基化牛血清白蛋白共培养72 h,分为AGEs组和BSA对照组,分别采用ELISA法测定McP-1的表达;流式细胞仪测定ICAM-1的表达;RT-PCR法测定糖基化终产物特异性受体mRNA的表达;Western blot法检测内皮细胞表面特异性受体(RAGE)蛋白表达。结果与BSA对照组比较,AGEs组MCP-1、ICAM-1、RAGE mRNA及其蛋白表达明显增强,差异有统计学意义(P<0.05)。辛伐他汀预孵则显著抑制AGEs诱导的MCP-1、ICAM-1的表达,并在mRNA及蛋白水平下调RAGE蛋白的表达。结论辛伐他汀可能通过抑制AGEs-RAGE信号途径来发挥对糖尿病心肌微血管病变的保护作用。     

晚期糖基化终产物对心肌微血管内皮细胞管样结构形成和崩解的影响及机制

目的研究晚期糖基化终产物(AGEs)对大鼠心肌微血管内皮细胞(CMECs)管样结构形成和崩解的影响及其初步机制。方法分离、培养SD大鼠CMECs,将AGEs-BSA与大鼠CMECs共同孵育,实验分为对照组(只加DMEM培养液)、BSA组(100 μg/ml BSA)、AGEs-BSA组(100μg/ml AGEs-BSA)。分别在孵育第1、3天时,用管样结构形成实验观察CMECs管样结构的长度;流式细胞仪检测CMECs的凋亡;ELISA法测定CMECs半胱天冬酶3(caspase-3)的活性。孵育1天采用Western blot法检测CMECs血管内皮细胞生长因子(VEGF)蛋白的表达。结果第1天时,与对照组和BSA组比较,AGEs-BSA组CMECs管样结构的长度明显增加,VEGF蛋白表达显著增加,差异均有统计学意义(P<0.01);而CMECs早期凋亡率及caspase-3的活性,差异无统计学意义(P>0.05)。第3天时,与对照组和BSA组比较,AGEs-BSA组CMECs的管样结构长度明显降低,CMECs早期凋亡率及caspase-3的活性显著增加,差异有统计学意义(P<0.01)。结论 AGEs-BSA在早期可能通过自分泌VEGF促进CMECs管样结构的形成,晚期可能通过促进CMECs的凋亡,加速管样结构的崩解。     

晚期糖基化终产物对缺氧条件下内皮细胞血管生成能力的影响

目的明确晚期糖基化终产物(AGE)对缺氧条件下内皮细胞血管生成能力的影响,并探讨其可能机制。方法将酶消化法分离、培养的大鼠心肌微血管内皮细胞随机分为5组,对照组、AGE组、缺氧组、AGE+缺氧组、抑制剂组。MTT法测定细胞增殖能力;Transwell法检测细胞迁移;管样结构形成实验观察血管生成能力;Westernblot检测细胞外信号调节激酶(ERK)5磷酸化水平;ELISA检测血管内皮细胞生长因子(VEGF)分泌。结果与对照组比较,缺氧组内皮细胞的增殖、迁移、管样结构形成能力和VEGF分泌水平显著提高。与AGE+缺氧组比较,抑制剂组内皮细胞的增殖、迁移、管样结构形成能力增强,ERK5磷酸化水平明显降低,VEGF分泌水平增加。结论 AGE可抑制缺氧条件下内皮细胞的血管生成能力,其机制可能与ERK5的磷酸化抑制VEGF的表达有关。     

糖基化终产物对人脐静脉内皮细胞血管内皮生长因子mRNA及蛋白表达的影响

目的研究糖基化终产物（AGEs）对人脐静脉山皮细胞血管内皮生长凼子（VEGF）mRNA及蛋白表达的影响，探讨AGEs在糖尿病动脉粥样硬化中的作用。方法将人脐静脉内皮细胞株ECV304用BSA及小同浓度的AGEs孵育24h及400mg／L的AGEs孵育0、12、24及36h，采用原位杂交及Westem blot方法检测VEGFmRNA及蛋白的表达。结果人脐静脉内皮细胞在100、200及400mg／LAGEs孵育24h后，VEGFmRNA及蛋白表达均显著高于BSA对照组（P〈0．05），在用400mg／LAGEs分别孵育12．24及36h后，各组内皮细胞VEGF mRNA及蛋白表达量也明显高于0h对照组（P〈O．05）。结论AGEs可增加人脐静脉内皮细胞VEGF mRNA及蛋白的表达，且与浓度和时间呈正相关。     

晚期糖基化终产物刺激下人脐静脉内皮细胞中 F-actin的形态和分布变化

目的观察晚期糖基化终产物(AGE)对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)的增殖活力和细胞内纤维状肌动蛋白(F-actin)形态学的影响,探讨AGE导致毛细血管通透性升高的病理生理学基础.方法采用四唑盐(MTT)比色法,分别检测并绘制正常组和AGE处理组的HUVEC活力曲线;并分别于培龄第1～12天进行F-actin的荧光染色.结果AGE组HUVEC的活力曲线与正常组相比显著下移.荧光染色发现:正常组HUVEC的F-actin纤维主要富集于毗邻细胞膜的周边,形成典型的鹅卵石样形态,细胞质中未见密集的F-actin纤维;AGE组细胞内的F-actin纤维形态和分布发生明显的改变,出现应力纤维、丝状伪足和板状伪足三种异常形态,至刺激后期,大部分细胞周边的F-actin纤维消失,胞质中出现密集的应力纤维.结论AGE对内皮细胞的活力有明显的抑制作用.同时,AGE促使内皮细胞F-actin从位于细胞膜周边的状态转为弥散于整个细胞质的状态,内皮细胞收缩,胞间裂隙形成,可能引起毛细血管通透性升高.     

非酶糖化蛋白对体外培养血管内皮细胞生长的影响

目的 观察糖代蛋白终末产物（ＡＧＥｓ）及高糖对体外培养人血管内皮细胞增殖的影响。方法 采用＾３Ｈ标记的腺嘧啶（＾３－ＴｄＲ）掺入法测定细胞增殖情况。结果 在含ＡＧＥｓ的培养液（５μｇ／ｍｌ）中增培养的新生儿脐带静脉内皮细胞,其２小时＾３Ｈ－ＴｄＲ掺入对照组的２．９５倍（Ｐ〈０．０１）,而在含３０ｍｍｏｌ／Ｌ葡萄糖的２液中培养的人胚胎脐带静脉内皮细胞,其２小时＾３Ｈ－ＴｄＲ掺入对照组（１１ｍｍｏｌ／     

胰岛素抵抗和晚期糖基化终末产物水平与脑白质病变的相关性探讨

目的探讨胰岛素抵抗（IR）及晚期糖基化终末产物（AGEs）在脑白质病变发生、发展中的作用。方法 92例老年病及神经内科住院患者均行颅脑MR I检查,按Fazekas Scale脑白质定性方法将患者分为脑白质病变阳性组和阴性组各46例。检测两组胰岛素抵抗指数（HOMA-IR）及血清AGEs水平,分析其与脑白质病变的相关性。结果阳性组HOMA-IR及水平AGEs数值均显著高于对照组,且与脑白质病变存在相关性（P均〈0.05）。结论 IR与AGEs水平升高是脑白质病变的重要危险因素。临床应采取相关干预措施。     

晚期糖基化终产物对心肌细胞p57、p27、p21及hhLIM蛋白表达的影响

目的　探讨晚期糖基化终产物 (advancedglycationendproducts ,AGEs)对体外培养乳鼠心肌细胞p5 7、p2 7、p2 1及hhLIM蛋白表达的影响。方法　采用酶消化法体外培养乳鼠心肌细胞 ,实验前换用含 1%胎牛血清的DMEM培养液饥饿培养 2 4h。应用Western蛋白印迹法检测不同浓度AGEs(5 0mg L、10 0mg L)对心肌细胞刺激 12、2 4、4 8h后细胞中p5 7、p2 7、p2 1及hhLIM蛋白表达情况。结果　不同浓度的AGEs刺激心肌细胞 12h均可使p2 7蛋白表达增加 ,以 5 0mg L浓度作用更为明显 ,刺激 2 4、4 8h无影响。AGEs对p5 7蛋白的表达呈动态变化 :刺激 12h时表达下降 ,2 4、4 8h呈增加趋势。p2 1蛋白在心肌细胞表达较弱 ,AGEs对其表达无显著影响。AGEs增加hhLIM蛋白的表达 ,以 5 0mg L浓度作用 12h最为显著。结论　AGEs通过增加心肌细胞细胞周期素依赖性激酶抑制因子p5 7和p2 7蛋白及hhLIM蛋白的表达 ,参与心室重塑的发生和发展。     

内吗啡肽对糖基化终末产物致人脐静脉内皮细胞表达一氧化氮、一氧化氮合酶、内皮素1的影响

目的探讨内吗啡肽（EMs）对糖基化终末产物（AGEs）培养条件下人脐静脉内皮细胞（HUVEC）合成分泌一氧化氮（NO）、内皮型一氧化氮合酶（eNOS）、内皮素1（ET-1）的影响。方法体外制备AGEs修饰的牛血清白蛋白（AGEs—BSA）;分别用AGEs—BSA、EMs（1×10-5、1×10-6、1×10-7、1×10-8mol／LEM1或EM2）＋AGEs—BSA及EMs（1×10-5mol／LEMl或EM2）＋纳洛酮＋AGEs．BSA共同干预HUVEC,同时以只加BSA的HUVEC作为阴性对照。噻唑蓝（MTT）法检测各组HUVEC存活率;放射免疫法检测各组NO、eNOS水平;酶联免疫吸附实验（ELISA）法测定各组ET-1表达量;实时荧光定量聚合酶链反应（RT—PCR）法检测各组eNOS、ET-1mRNA的表达。采用单因素方差分析及t检验进行数据统计。结果与AGEs—BSA组相比,1×10-5mol／LEM1干预组HUVEC存活率增加,NO分泌量减少[分别为0．89±0．05VS0．67±0．02和（14．8±1．4）VS（23．0±0．7）μmol／L,t值分别为9．86、13．18,均P〈0．05],ET-1产生及其mRNA表达降低[分别为（0．85±0．01）VS（0．99±0．01）μg/L和10．6±0．7VS25．6±1．6,t值分别为31．36、50．18,均P〈0．05],eNOS活性及其mRNA表达增加[分别为（2．53±0．20）VS（0．61±0．09）U／ml和0．35±0．00VS0．05±0．00,t值分别为21．50、16．80,均P〈0．05],EM1其他浓度组和EM2各浓度组上述各指标与AGEs—BSA组比较结果相似,差异亦均有统计学意义（t值为2．24～102．4,均P〈0．05）;纳洛酮组上述指标与AGEs—BSA组差异无统计学意义（t值为0．56—2．05,均P〉0．05）,而与各浓度EM1或EM2干预组差异有统计学意义（t值为2．24～64．96,均P〈0．05）。结论EMs可提高AGEs—BSA条件下HUVEC的存活率,降低NO、ET-1浓度,提高eNOS浓度;纳洛酮可阻断EMs的上述作用,提示EMs是通过μ阿片受体发挥作用的。