白皮杉醇对过氧化氢诱导的血管平滑肌细胞凋亡的影响与机制

目的:研究白皮杉醇(PCT)对过氧化氢(H2O2)诱导的血管平滑肌细胞(VSMCs)凋亡的影响以及所涉及的相关分子机制。方法:组织贴块法培养SD大鼠VSMCs并进行不同分组与处理;MTT法检测各组VSMCs的存活率;LDH、超氧化物歧化酶(SOD)试剂盒测定各组VSMCs中LDH与SOD活力;Annexin V-PI染色检测各组VSMCs凋亡情况,Hoechst 33258染色观察各组VSMCs细胞核形态变化;Western blot检测各组VSMCs中凋亡相关蛋白(Bcl-2、Bax、caspase-3)及PI3K/AKT/eNOS通路蛋白表达水平。结果:不同浓度与时间过氧化氢(H2O2)处理VSMCs后使其存活率降低,而不同浓度PCT预处理可提高细胞存活率,差异有统计学意义(P<0.05、P<0.01或P<0.001)。与对照组相比,H2O2组VSMCs中LDH活力升高而SOD活力下降,细胞凋亡率增加,细胞中Bax、caspase-3蛋白表达升高而Bcl-2蛋白表达下降,p-PI3K、p-Akt、p-eNOS蛋白表达下降,且均呈剂量依赖关系;与H2O2组相比,PCT预处理组VSMCs LDH活力下降而SOD活力升高,细胞凋亡率降低,细胞中Bax、caspase-3下降,Bcl-2蛋白表达升高,p-PI3K、p-Akt、p-eNOS的蛋白表达升高,且均呈剂量依赖关系,差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。结论:PCT对H2O2引起的VSMCs损伤有保护作用,其机制可能是抑制LDH活力、增强SOD活力以及增强PI3K/AKT/eNOS信号通路进而阻碍VSMCs凋亡的发生。     

香芹芥酚诱导人白血病K562细胞凋亡的研究

目的探讨香芹芥酚对人白血病K562细胞凋亡作用的影响。方法采用不同浓度的香芹芥酚处理体外培养的K562细胞,MTT比色法观察细胞存活率;Hoechst染色法观察细胞凋亡形态学变化,Annexin-V/PI双染色流式细胞术检测细胞凋亡率;Western-blot法检测凋亡相关基因Bcl-2、Bax表达水平的改变。结果人白血病K562细胞存活率随着香芹芥酚作用时间延长和浓度增高而降低（P〈0.05）。香芹芥酚处理K562细胞48 h后出现较典型的细胞凋亡特征形态学改变,Annexin-V/PI双染法显示随着香芹芥酚作用浓度增大,凋亡细胞比例增大。West-ern-blot结果表明,香芹芥酚可以浓度依赖性降低凋亡相关基因Bcl-2的表达和增加Bax基因的表达。结论香芹芥酚具有诱导人白血病K562细胞凋亡的作用,其分子机制可能通过调控Bcl-2、Bax的基因及蛋白水平而诱导凋亡。     

微小RNA-760在H9c2细胞中的表达及对凋亡的影响

目的探讨微小RNA-760(miR-760)在缺血再灌注(H/R)后H9c2细胞中的表达及对凋亡的影响。方法采用H9c2细胞制备H/R模型,通过转染调控H9c2细胞的miR-760表达,并通过系统随机化法分为对照组、模型组(H/R组)、阴性对照组(H/R+miR NC组)和H/R+miR-760 mimics组,以RT-PCR检测H9c2细胞中miR-760的表达,CCK-8检测miR-760对H9c2细胞活力的影响,流式细胞术检测miR-760对H9c2细胞凋亡的影响,Western blot检测miR-760对心肌细胞凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax和cleaved caspase-3表达的影响。结果 miR-760在H/R组H9c2细胞中的相对表达量较对照组显著降低(P<0.001),而H/R+miR-760 mimics组H9c2细胞的miR-760表达量较H/R组明显上调(P<0.01)。与对照组比较,H/R组H9c2细胞活力显著降低(P<0.001);与H/R组比较,H/R+miR-760 mimics组H9c2细胞的活力显著增加(P<0.01)。与对照组比较,H/R组H9c2细胞的凋亡率显著增加(P<0.001);与H/R组比较,H/R+miR-760 mimics组H9c2细胞的凋亡率显著降低(P<0.01)。与对照组比较,H/R组H9c2细胞的Bcl-2表达量显著下调,Bax和cleaved caspase-3表达量显著上调(均为P<0.001);与H/R组比较,H/R+miR-760 mimics组的Bcl-2表达量显著上调,Bax和cleaved caspase-3表达量显著下调(均为P<0.001)。结论 miR-760在H/R后H9c2细胞中表达下调,上调miR-760的表达能够抑制H9c2细胞凋亡,其机制可能与上调Bcl-2、下调Bax和cleaved caspase-3的表达有关。     

二苯乙烯苷对血管内皮细胞凋亡及Bcl-2、Bax表达的影响

目的观察二苯乙烯苷干预过氧化氢致人脐静脉内皮细胞凋亡及对凋亡调控蛋白Bcl-2和Bax表达的影响。方法体外培养人脐静脉内皮细胞,实验分为对照组、300μmol/L过氧化氢组及二苯乙烯苷预处理组,采用MTT法、形态学观察、流式细胞仪检测内皮细胞凋亡情况,Western blot检测二苯乙烯苷对Bcl-2和Bax表达的影响。结果内皮细胞经过氧化氢处理后,其增殖明显受到抑制,凋亡率显著升高,Bcl-2蛋白表达减少,Bax蛋白表达显著增加,Bcl-2/Bax比值降低,差异均有显著性(P<0.01);经二苯乙烯苷预处理后,细胞增殖率显著提高,凋亡率显著降低;Bcl-2蛋白表达增加,Bax蛋白表达减少,Bcl-2/Bax比值明显提高,差异均有显著性(P<0.01)。结论二苯乙烯苷可通过调节Bcl-2/Bax表达而抑制过氧化氢诱导的人脐静脉内皮细胞凋亡,减少内皮细胞损伤。     

氧化苦参碱诱导人结肠癌SW480细胞凋亡的机制

目的探讨氧化苦参碱诱导人结肠癌SW480细胞凋亡的作用及机制。方法以不同剂量的氧化苦参碱作用于人结肠癌细胞株SW480,四甲基偶氮唑蓝法(MTT)检测细胞的增殖能力,Hoechst 33258染色法观测细胞凋亡。免疫印迹法测定B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)的表达,荧光法测定半胱氨酸蛋白酶(caspase)-3的活性。结果氧化苦参碱可剂量依赖性地抑制细胞的增殖,促进细胞凋亡。Western印迹方法显示氧化苦参碱可抑制抗凋亡蛋白Bcl-2的表达,提高促凋亡蛋白Bax的表达,同时激活凋亡效应分子caspase-3。结论氧化苦参碱能够抑制结肠癌SW480细胞的增殖,通过提高Bax的表达、抑制Bcl-2的表达、激活caspase-3发挥其诱导细胞凋亡的作用。     

左西孟旦对缺氧复氧诱导的H9c2细胞凋亡、PTEN和PI3K/Akt信号通路的影响

[目的]研究左西孟旦对缺氧复氧(H/R)条件下H9c2细胞凋亡的影响及相关机制。[方法]体外培养H9c2细胞,将细胞分为空白对照组、H/R组、左西孟旦低剂量组、左西孟旦中剂量组、左西孟旦高剂量组。采用四甲基偶氮噻唑蓝法检测H9c2细胞增殖;流式细胞仪检测H9c2细胞凋亡;超氧化物歧化酶(SOD)试剂盒、丙二醛(MDA)试剂盒分别检测SOD活性及MDA含量;荧光探针法检测活性氧(ROS)水平;Western blot检测增殖细胞核抗原(PCNA)、B淋巴细胞瘤2蛋白(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、磷酸酶及张力蛋白同源物(PTEN)及磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)/丝氨酸苏氨酸蛋白激酶(Akt)信号通路蛋白表达。[结果]与空白对照组比较,H/R组H9c2细胞增殖抑制率、凋亡率、MDA含量、ROS水平、PTEN蛋白表达均显著升高(P<0.05),PCNA、Bcl-2、p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt均显著降低,Bax显著升高(P<0.05)。与H/R组比较,左西孟旦低剂量组、左西孟旦中剂量组、左西孟旦高剂量组H9c2细胞增殖抑制率、凋亡率、MDA含量、RO...     

HPS-1对人肺腺癌A549细胞凋亡诱导作用的机制研究

目的 评价HPS-1对人肺腺癌A549细胞凋亡蛋白Caspase 3、8、9以及Bax、Bcl-2mRNA表达的影响,探究HPS-1抗肺肿瘤可能机制.方法 人肺腺癌A549细胞经低、中、高剂量HPS-1处理不同时间后,噻唑蓝(MTT)法检测各组细胞的增殖情况,流式细胞术(FCM)法检测各组细胞凋亡率及细胞周期比例,比色法检测各组细胞凋亡蛋白Caspase-3、8、9的表达,RT-PCR法检测各组细胞Bax、Bcl-2 mRNA的表达.结果 MTT结果显示,低、中、高剂量HPS-1对人肺腺癌A549细胞的增殖具有明显抑制作用,且具有时间、剂量依赖性;FCM法检测发现,低、中、高剂量HPS-1对人肺腺癌A549细胞的凋亡具有促进作用,且与剂量呈正相关;比色法检测各组细胞发现,HPS-1促进凋亡蛋白Caspase-3、8、9的上调,且HPS-1高剂量组凋亡蛋白上调更明显.结论 HPS-1具有抑制人肺腺癌A549细胞增殖、诱导其凋亡作用,且该作用可能与HPS-1阻滞细胞周期G1期,上调凋亡蛋白Caspase-3、8、9及Bax mRNA表达,下调Bcl-2 mRNA表达有关.     

下调CopineⅠ抑制缺氧/复氧诱导的H9c2细胞凋亡

目的 研究Copine Ⅰ（CPNE1）对缺氧/复氧（Hypoxia/Reoxygenation,H/R）诱导H9c2细胞凋亡的作用及可能的机制。 方法 以H9c2心肌细胞为研究对象,建立H/R模型,细胞被随机分为对照组（CON）、H/R组、阴性对照（NC）+H/R和CPNE1 siRNA+H/R组,阻断实验用NF-κB的阻断剂PDTC（10 μmol/L）预处理细胞30 min。RT-PCR和Western blot方法用于检测CPNE1表达水平。细胞乳酸脱氢酶（LDH）活性采用ELISA方法检测。细胞经Annexin-V/PI染色后用流式细胞仪检测凋亡率,Western blot方法检测claved-caspase3（c-caspase3）、Bcl-2和Bax的蛋白表达水平。细胞中NF-κB活性采用ELISA方法检测。 结果 与CON组相比,H/R组CPNE1表达水平上调、LDH活性升高、凋亡率上升、c-caspase3和Bax蛋白表达升高、Bcl-2蛋白表达水平下降。与NC+H/R组相比,CPNE1 siRNA+H/R组细胞的LDH活性下降、凋亡率降低、c-caspase3和Bax蛋白表达减少、Bcl-2表达增多。此外,沉默CPNE1细胞核中NF-κB活性增强且蛋白表达上升,PDTC可逆转CPNE1 siRNA对细胞凋亡的抑制作用。 结论 下调CPNE1的表达能够抑制H/R诱导的H9c2细胞凋亡,其可能机制是通过增强NF-κB活性发挥心肌保护作用。     

大鼠肢体缺血/再灌注后心肌细胞凋亡及氧化应激的调节作用

目的观察大鼠肢体缺血/再灌注(I/R)后心肌细胞凋亡及Bcl-2/Bax表达的变化和氧化应激的调节作用。方法健康雄性Wistar大鼠30只,随机分成对照组、肢体I/R 2 h组(I/R 2 h组)和4 h组(I/R 4 h组)。免疫组化法检测心肌组织Bcl-2/Bax蛋白表达;原位末端脱氧核糖核苷酸转移酶标记(TUNEL)技术检测心肌凋亡细胞;生化法检测血浆心肌酶含量;比色法测定心肌组织活性氧(ROS)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)含量的变化。结果肢体I/R后与对照组比较,血浆心肌酶含量升高;心肌组织ROS和MDA含量增加,SOD活性降低(P0.05);心肌凋亡细胞明显增加(P0.01);心肌组织Bcl-2与Bax表达增强,但Bax表达较Bcl-2明显上调,Bcl-2/Bax比值降低(P0.01);相关分析显示,ROS含量与Bax蛋白表达平均吸光度值和凋亡指数(AI)之间呈显著正相关(P0.01)。结论大鼠肢体I/R后可致心肌细胞凋亡;心肌细胞凋亡与Bcl-2/Bax蛋白表达比值降低和心肌氧化应激增强有关。     

热疗联合旋毛虫肌幼虫排泄分泌蛋白对小细胞肺癌H446凋亡及S期阻滞的影响北大核心CSCD

目的观察热疗联合旋毛虫肌幼虫排泄分泌蛋白对小细胞肺癌H446凋亡及周期阻滞的影响。方法将对数生长期的H446细胞随机分为4组。对照组:H446细胞培养过程中不作任何处理;热处理组:将细胞消化后放置离心管中42℃水浴加热2 h;ESPs处理组:将提取的旋毛虫肌幼虫ESPs(0.30 mg/ml)与H446细胞共培养;热处理联合ESPs组:先经水浴处理后加入ESPs(0.30 mg/ml)与H446细胞共培养。采用流式细胞术(FCM)检测各组细胞凋亡率,分析细胞周期变化情况;采用Western blot法检测各组细胞凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2、周期蛋白Cyclin D1、p27的表达情况。结果流式细胞术(FCM)检测显示,对照组细胞总凋亡率为11.39%,ESPs处理组细胞总凋亡率为15.94%,热处理组细胞总凋亡率为22.35%,热疗联合ESPs组细胞总凋亡率为29.32%。组间细胞凋亡率差异有统计学意义(P<0.01)。对照组S期细胞所占比例为27.01%, ESPs处理组S期细胞占39.83%,热处理组S期细胞占51.54%,热疗联合ESPs组S期细胞占51.83%。ESPs处理组、热处理组、热疗联合ESPs组S期细胞所占比例与对照组比较差异均有统计学意义(P<0.01)。Western blot检测热处理联合ESPs组与对照组比较Bax、Cyclin D1、p27蛋白表达上调,Bcl-2蛋白表达下调。结论热疗联合旋毛虫肌幼虫排泄分泌蛋白可诱导小细胞肺癌H446凋亡,存在S期细胞阻滞,可能与Bax、Cyclin D1、p27蛋白表达上调,Bcl-2蛋白表达下调有关。     

重组腺病毒AdCat对血管平滑肌细胞

目的探讨腺病毒载体介导的过氧化氢酶基因转染对体外培养的人血管平滑肌细胞增殖与凋亡的影响.方法用含过氧化氢酶基因的重组腺病毒(AdCat)转染人血管平滑肌细胞,采用Western blot 方法检测血管平滑肌细胞过氧化氢酶的表达,应用细胞计数方法观察血管平滑肌细胞的增殖活性,应用流式细胞术和Hoechst 33258 染色等方法对血管平滑肌细胞的凋亡进行研究.结果Western blot显示AdCat转染后血管平滑肌细胞过氧化氢酶表达明显增多;细胞计数显示AdCat组明显抑制细胞增殖,与阴性对照组、空白对照组相比差异有统计学意义(P<0.01);流式细胞术显示AdCat组与阴性对照组、空白对照组比较凋亡率明显增加(P<0.01).经Hoechst 33258染色后,AdCat组凋亡细胞明显多于空白对照组.结论重组腺病毒AdCat转染导致血管平滑肌细胞过氧化氢酶过度表达,抑制血管平滑肌细胞的增殖,促进血管平滑肌细胞的凋亡.     

木犀草素对胶质瘤细胞的抗增殖作用及其机制研究

目的 研究木犀草素对人胶质瘤U251细胞增殖的抑制作用及其机制.方法 将体外培养的胶质瘤U251细胞分为对照组、木犀草素组(依木犀草素浓度不同分为3个亚组),CCK-8法测定细胞增殖率,流式细胞仪测定细胞凋亡率,Hoechst PI核染色法观察细胞核凋亡,Western blot法检测胶质瘤U251细胞内B淋巴细胞瘤-...     

JAK2/STAT3信号通路在阿托伐他汀抗大鼠血管平滑肌细胞增殖凋亡中的作用研究

目的探讨阿托伐他汀对大鼠血管平滑肌细胞(VSMCs)非调脂作用机制与转录信号传导子和激活子3(Stat3)信号传导通路的关系,明确其细胞内信号传导机制。方法分别将阿托伐他汀、酪氨酸激酶抑制剂AG490及二者联合作用于大鼠VSMCs,应用MTT法检测细胞增殖状态;流式细胞仪观察药物对细胞凋亡的影响,进一步用蛋白免疫印迹法(Western blot)检测药物作用前后 Stat3通路相关蛋白JAK2、STAT3、Cyclin D1、Bcl-2的表达及磷酸化活性。结果阿托伐他汀及AG490 都呈浓度依赖性方式抑制大鼠VSMCs增殖水平,促进其凋亡,二者联合应用则具协同作用。阿托伐他汀及AG490处理VSMCs后p-JAK2、p-Stat3、Cyclin D1、Bcl-2蛋白表达水平随作用时间延长而下降 (P<0．05),并且联合组蛋白表达水平较单独处理组相比有显著性差异(P<0．01)。结论阿托伐他汀对大鼠VSMCs非调脂作用机制与癌基因Star3信号通路高度相关,与酪氨酸激酶抑制剂AG490联合应用则具协同作用,可能通过作用于JAK2／Stat3下游靶基因Cyclin D1、Bcl-2影响其增殖及凋亡。     

27nt-miRNA通过靶向哺乳动物雷帕霉素靶蛋白调控血管平滑肌细胞凋亡及其分子机制研究

目的:探讨来源于一氧化氮合酶基因第四内含子的27碱基重复序列微小RNA(27nt-miRNA)对哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)介导的主动脉血管平滑肌细胞(VSMC)凋亡调控作用及潜在分子机制。方法:将大鼠主动脉VSMC分为空白对照组、雷帕霉素组、27nt-miRNA组、27nt-miRNA反义序列(anti-27ntmiRNA)组、阴性对照组。27nt-miRNA组:转染27nt-miRNA正义链慢病毒载体;anti-27nt-miRNA组:转染27ntmiRNA反义链慢病毒载体;阴性对照组:转染随机阴性序列慢病毒载体。除空白对照组外,雷帕霉素组与各转染组细胞给予100 ng/ml雷帕霉素诱导培养2 h诱导凋亡。荧光定量逆转录PCR(qRT-PCR)验证27nt-miRNA慢病毒稳转细胞株构建情况;CCK-8法、流式细胞术、qRT-PCR法与蛋白免疫印迹(Western blot)法分别检测各组细胞增殖能力、细胞凋亡率与周期分布以及mTOR、磷酸化-mTOR(p-mTOR)、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(caspase-3)的信使RNA(mRNA)和(或)蛋白表达水平。结果:慢病毒转染VSMC后,27nt-miRNA稳转细胞株构建成功,雷帕霉素可抑制VSMC的mTOR mRNA与p-mTOR蛋白表达水平。与阴性对照组相比,27nt-miRNA组细胞的活力与增殖能力显著增强,且细胞凋亡率显著降低(P均<0.05),细胞周期G1期向S期分裂进程阻滞减弱(P<0.05);Bax和caspase-3蛋白表达量显著减少,Bcl-2蛋白表达量显著增加(P均<0.05);mTOR基因转录水平与p-mTOR蛋白表达水平均下降(P<0.05)。结论:27nt-miRNA通过负调控m TOR基因转录水平与蛋白磷酸化水平抑制VSMC凋亡,其机制可能与上调Bcl-2蛋白表达,下调Bax和caspase-3蛋白表达有关。     

缺氧后处理与氧自由基清除剂预处理对心肌细胞膜和线粒体Bcl-2和Bax表达的影响

目的观察缺氧后处理与氧自由基清除剂超氧化物歧化酶(SOD)联合过氧化氢酶(CAT)预处理,对心肌细胞膜和线粒体Bcl-2、Bax蛋白表达的影响,探讨两者调控心肌细胞凋亡的机制。方法建立乳鼠心肌细胞缺氧/复氧损伤模型,分对照组、缺氧/复氧组、缺氧后处理组及缺氧/复氧+SOD+CAT组。应用荧光探针测定心肌细胞线粒体活性氧水平,Hoechst染色及流式细胞仪检测心肌细胞凋亡,Wesiern blot法检测心肌细胞膜和线粒体Bcl-2、Bax蛋白表达。结果与对照组比较,缺氧/复氧组、缺氧后处理组、缺氧/复氧+SOD+CAT组细胞线粒体活性氧及细胞凋亡率明显升高(P<0.01);与缺氧/复氧组比较,缺氧后处理组、缺氧/复氧+SOD+CAT组细胞线粒体活性氧及细胞凋亡率明显降低(P<0.01);缺氧后处理组及缺氧/复氧+SOD+CAT组细胞膜和线粒体Bcl-2蛋白明显上调,Bax蛋白明显下调。结论缺氧后处理及氧自由基清除剂预处理抑制线粒体活性氧爆发,减轻缺氧/复氧再灌注心肌细胞凋亡,其抗凋亡可能机制与细胞膜和线粒体Bcl-2蛋白表达上调及Bax蛋白表达下调有关。     

沙利度胺对人胰腺癌细胞株SW1990体外增殖及凋亡的影响

目的 观察沙利度胺(THD)体外抑制人胰腺癌细胞株SW1990增殖及诱导其凋亡的作用.方法 应用不同浓度的THD(3.125、6.25、12.5、25、50、100、200、400μg/ml)处理胰腺癌SW1990细胞24、48、72 h,用MTT法测定细胞的生长抑制率,流式细胞仪分析细胞周期,Annexin V/PI检测细胞凋亡率,蛋白质印迹法检测细胞Bcl-2、Bax蛋白的表达.结果 THD呈浓度和时间依赖性抑制胰腺癌细胞SW1990的生长.200μg/ml的THD干预使SW1990细胞G0/G1期比例从(41.15±2.23)％上升到(58.83 ±2.33)％;细胞凋亡率从2.6％增加到28.0％;细胞Bax蛋白表达量从0.17±0.03上调到0.33±0.04,Bcl-2蛋白表达量从0.35±0.02下调到0.17±0.01,Bcl-2/Bax比值从2.17±0.44下降到0.52±0.07.结论 THD可以抑制SW1990细胞增殖,其机制可能与上调Bax蛋白表达、下调Bcl-2蛋白表达,促进细胞凋亡,将细胞周期阻滞于G0/G1期有关.     

基于自噬与凋亡平衡探讨补肾活血汤对衰老耳蜗毛细胞株HEI-OC1的保护作用

目的 探讨补肾活血汤对衰老耳蜗毛细胞株HEI-OC1自噬和凋亡的影响.方法 应用D-半乳糖构建衰老HEI-OC1细胞的体外模型后,将细胞分为对照组、衰老组、含药血清低、中及高剂量组(5％、10％、20％),采用噻唑蓝(MTT)比色法检测耳蜗HEI-OC1细胞的增殖能力;β-半乳糖苷酶染色检测细胞衰老状态;膜联蛋白V/碘...     

银杏叶提取物对培养中的胎儿血管平滑肌细胞Bcl-2蛋白表达量的影响

目的观察银杏叶提取物(Egb)对培养中的胎儿血管平滑肌细胞(VSMC)凋亡相关蛋白Bcl-2的影响。方法采用酶消化法结合组织贴块法培养VSMC。加不同浓度Egb干预不同时间段,形态学观察凋亡现象,利用Annexin-V结合PI,流式细胞仪技术检测细胞凋亡率,检测Bcl-2蛋白的表达量变化。结果与对照组相比,随着时间的延长,Egb浓度的增加,细胞凋亡率增加,细胞Bcl-2蛋白表达率明显减少。结论Egb可以诱导培养中的胎儿VSMC凋亡,并可以抑制VSMC凋亡相关蛋白Bcl-2的表达,并且这两种作用呈时间及浓度依赖性。     

调控自噬对H9c2心肌细胞缺氧／复氧损伤的影响

目的探讨调控自噬水平对H9c2心肌细胞缺氧／复氧（H／R）损伤的影响及意义。方法将H9c2心肌细胞缺氧2h／复氧4h,建立H／R损伤模型。以3-甲基腺嘌呤（3-MA）为自噬特异抑制剂和雷帕霉素为自噬增强剂,试验随机分为四组：正常对照组（C组）、H／R组、H／R＋100mol／L3-MA组（M＋H／R组）、H／R＋100nmol／L雷帕霉素（R＋H／R组）,应用MTT法检测细胞活力,透射电镜检测心肌细胞自噬小体,流式细胞技术检测细胞凋亡比例,Westernblot法检测自噬相关蛋白LC3、Beclin1,凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax及下游活性片段Caspase-9、Caspase-3蛋白表达。结果H／R组明显诱导H9c2心肌细胞自噬发生、细胞活力下降、凋亡增加（P〈O．01）．Westernblot检测发现,Bax、Caspase-9、Caspase-3活性片段蛋白表达明显增加,Bcl-2表达明显抑制,Bax／Bcl-2比值、活化蛋白Caspase-3、Caspase-9表达增加（P〈O．01）;M＋H／R组H／R损伤作用明显减弱,线粒体凋亡通路及下游蛋白表达抑制（P〈O．01）;而R＋H／R组线粒体凋亡通路进一步激活,促进细胞凋亡发生（P〈O．01）。结论自噬在H9c2心肌细胞H／R损伤中起到致命性作用,抑制自噬可保护心肌细胞H,R氧化应激损伤,其机制与抑制线粒体凋亡通路有关。