PCR-SSCP银染法在检测错配修复基因突变中的应用

目的建立稳定、有效地检测错配修复（Mismatch Repair，MMR）基因突变的方法。方法对30例肠癌及癌旁正常组织标本分别提取DNA，设计错配修复基因hMSH1引物，应用聚合酶链式反应进行PCR扩增，10％聚丙稀酰胺凝胶电泳PCR产物，银染等技术检测分析错配修复基因hMSHI突变；hMSH1抗体为一抗，免疫组化法检测30例肠癌及例癌旁正常组织石蜡切片中hMSH1蛋白的表达。结果30例肠癌组织中发生错配修复基因hMSH1突变4例（发生率13．3％），10例癌旁正常组织中无一例发生错配修复基因hMSH1突变；免疫组化检测到30例肠癌组织中有6例hMSH1蛋白表达阴性，其中hMSH1基因突变的组织hMSH1蛋白均未表达，正常组织中hMSH1蛋白表达正常。结论PCR-SSCP银染法是检测错配修复基因突变的简捷、稳定、有效的方法之一。可成为早期诊断肿瘤发生的分子手段。在肿瘤的早期治疗中具有重要作用。     

运用高灵敏度COLD-PCR法检测胰腺癌和结直肠癌患者KRAS基因突变

目的 评价COLD-PCR法检测胰腺癌和结直肠癌患者KRAS基因突变的价值.方法 采用COLD-PCR/Sanger测序法与普通PCR/Sanger测序法检测KRAS基因野生型结直肠癌细胞系SW116中混有的KRAS基因突变型和结直肠癌细胞系SW480中的KR4S基因突变,确定两种方法 的灵敏度,并采用两种方法 分别检测20例胰腺癌和39例结直肠癌患者石蜡包埋组织的KRAS基因突变,并评价两种方法 的符合率.结果 细胞系检测结果 显示,普通PCR/Sanger测序法和COLD-PCR/Sanger测序法检测KRAS基因突变的灵敏度分别为1∶20和1∶100(突变型:野生型).COLD-PCR/Sanger法检测20例胰腺癌患者KRAS基因突变率[75%(15/20)]高于普通PCR/Sanger测序法[40%(8/20),x2=5.013,P<0.05];COLD-PCR/Sanger测序法检测39例结直肠癌患者的KRAS基因突变率[44%(17/39)]高于普通PCR/Sanger测序法[31%(12/39),x2=1. 372,P=0.174)].两种方法 检测胰腺癌标本的符合率为65%,但一致性较差(Kappa=0.364,P<0.05);而两种方法 检测结直肠癌标本的符合率为87%,且一致性较好(Kappa=0.730,P<0.05).结论 COLD-PCR/Sanger测序法是一种高灵敏性检测胰腺癌和结直肠癌患者KRAS基因突变的方法 .     

原位荧光杂交检测在骨髓活检切片中的方法建立及优化

目的建立及优化骨髓活检石蜡切片原位荧光杂交(FISH)检测流程。方法建立和优化骨髓活检石蜡切片FISH检测步骤和实验条件,在20例骨髓活检组织,其中5例诊断为套细胞淋巴瘤(MCL),应用FISH检测IGH/CCND1探针。结果建立骨髓活检石蜡切片的FISH检测步骤和实验条件,5例确诊MCL骨髓活检石蜡切片可检测到IGH/CCND1融合信号。证明本方法的可行性。结论骨髓活检石蜡切片FISH检测可以获得信号清晰、核形态较好、背景清晰的FISH染色结果,可以满足临床应用要求。     

ras基因突变与侵蚀性葡萄胎组织分化的关系研究

【目的】探讨ras 基因突变与侵蚀性葡萄胎组织分化之间的关系。【方法】采用聚合酶链反应—单链DNA 构象多态性分析法,对30 例侵蚀性葡萄胎石蜡包埋组织Haras 基因Exon Ⅰ突变情况进行了检测。【结果】侵蚀性葡萄胎组织分化Ⅰ级,Ⅱ级,Ⅲ级,Haras 基因第一外显子点突变率依次为15 .4 % ,40 .0 % ,71 .4 % ,经秩和检验,差异有显著性( P< 0 .01) 。【结论】ras 基因突变与侵蚀性葡萄胎恶性程度有关,恶性程度越高,ras 基因突变率越高;提示ras 基因突变对疾病预后有负影响。     

ARMS法检测肺腺癌EGFR基因突变及临床意义

目的 探讨扩增阻滞突变系统(ARMS)法在肺腺癌中表皮生长因子受体(EGFR)基因突变检测的应用及其临床意义。方法 收集2015年1月～2016年8月西安交通大学第一附属医院病理科的肺腺癌标本566例作为研究对象。其中,胸腔积液细胞块标本34例,肺活检标本401例,手术切除标本131例,采用ARMS法进行石蜡标本EGFR基因突变检测,分析EGFR基因突变与肺腺癌患者临床资料的相关性。结果 肺腺癌标本566例中,吸烟腺癌患者239例,非吸烟腺癌患者327例。吸烟患者中,EGFR突变率与患者年龄、性别、手术方式等无明显关联(P>0.05),而与肺癌原发部位关系密切(P<0.05); 非吸烟患者中,EGFR突变率与性别、年龄、标本类型及肺癌原发病灶部位无明显相关性(P>0.05)。结论 ARMS法可有效应用于肺腺癌临床病理石蜡标本中EGFR基因突变检测。吸烟是EGFR突变率的重要影响因子,且对左、右肺均有影响,但是对右肺的影响较大。     

荧光原位杂交技术在套细胞淋巴瘤石蜡切片的应用研究

目的建立淋巴瘤石蜡切片应用荧光原位杂交(fluorescence in situ hybridization,FISH)检测的操作流程,探讨其在套细胞淋巴瘤(mantle cell lymphoma,MCL)诊断中的应用价值。方法优化石蜡切片FISH检测步骤和实验条件,在16例病理拟诊断MCL的石蜡切片上应用FISH检测IGH/CCND1融合基因。结果确立了本实验室石蜡切片FISH检测的实验方法和条件;拟诊断MCL的病例中IGH/CCND1融合基因阳性检出率为75%(12/16)。结论淋巴瘤石蜡切片FISH检测可满足临床应用要求;应用FISH技术检测IGH/CCND1融合基因有助于MCL的诊断。     

PIK3CA基因突变状态在乳腺癌不同临床病理特征中的研究

目的检测乳腺癌组织磷脂酰肌醇-3-激酶催化亚单位α(PIK3CA)基因突变状态,并分析突变与临床病理特征的关系。方法选取176例原发性乳腺癌患者石蜡组织标本,提取组织DNA,对外显子9及20进行探针扩增阻滞突变系统聚合酶链反应(ARMS-PCR)扩增,检测PIK3CA基因的突变状态,另取20例乳腺腺病组织标本作为阴性对照。结果 176例乳腺癌组织中发现突变45例,突变率25.6%,其中以20号外显子H1047R突变率为主,突变率26.7%(12/45);PIK3CA基因突变在ER阳性和阴性、PR阳性和阴性患者中差异有统计学意义(P0.05),但在HER2阳性和阴性患者中差异无统计学意义(P0.05);PIK3CA基因突变与乳腺癌患者肿瘤大小、年龄、淋巴结状态之间无明显相关性,但与组织学分级有相关性。结论 PIK3CA基因突变与乳腺癌激素受体表达和肿瘤进展相关,PIK3CA基因突变检测对指导临床制订个体化治疗有重要意义。     

甲状腺乳头状癌石蜡标本BRAF V600E基因突变检测方法的比较研究

目的分析、比较聚合酶链反应(PCR)-荧光探针法、微滴式数字聚合酶链反应(ddPCR)法、MassARRAY核酸质谱法和Sanger测序法检测甲状腺乳头状癌患者石蜡标本中BRAF V600E基因突变阳性率。方法收集35例2013年手术切除的甲状腺乳头状癌石蜡标本(已知新鲜组织用PCR-荧光探针法检测BRAF V600E基因突变全阳性),分别采用PCR-荧光探针法、ddPCR法、MassARRAY核酸质谱法和Sanger测序法检测甲状腺乳头状癌石蜡标本中BRAF V600E基因突变情况。结果 35例甲状腺乳头状癌石蜡标本PCR-荧光探针法、ddPCR法、MassARRAY核酸质谱法和Sanger测序法检测BRAF V600E基因突变阳性率分别为80.0%(28/35)、94.3%(33/35)、74.3%(26/35)和60.0%(21/35)。结论对于需要进行回顾性分析的甲状腺乳头状癌石蜡标本,ddPCR法更适用于BRAF V600E基因突变的检测。     

焦磷酸测序法检测结直肠癌患者K-ras基因外显子2第12和13密码子点突变

目的 探讨焦磷酸测序法检测结直肠癌患者肿瘤组织K-ras基因外显子2第12和13密码子点突变方法的临床应用价值.方法 以已知K-ras基因突变的结直肠癌细胞株SW480、DLD-1和野生型细胞株HT-29 DNA作为测序模板检验焦磷酸测序法的准确性.对含不同比例(2％、3％、5％、10％、20％、30％和50％)结直肠癌细胞株K-ras基因的DNA混合样本采用焦磷酸测序法进行基因突变率检测,并与Sanger测序结果平行进行Fisher精确检验比较,评价其灵敏度.同时用焦磷酸测序法检测分析30份临床结直肠癌患者石蜡包埋组织中K-ras基因第12和13密码子突变.结果 当混合已知突变类型的结直肠癌细胞株K-ras基因的DNA样本突变DNA比例在5％和10％浓度时,Sanger测序法检出K-ras基因突变率分别为33.3％ (4/12)和58.3％ (7/12),焦磷酸测序法分别为91.7％(11/12)和100％( 12/12),且2种方法检出K-ras基因突变率的差异有统计学意义(P＜0.05).此外,用焦磷酸测序法从30例结直肠癌患者石蜡包埋组织标本中检出K-ras基因外显子2第12和13密码子突变10例,均为杂合型突变,突变率为33.3％ (10/30).最常见的突变类型为G＞A转换[50％(5/1O)]和G＞T颠换[(30％(3/10)].结论 焦磷酸测序法检测结直肠癌K-ras基因外显子2第12和13密码子突变具有敏感、准确的优点,可用于临床个体化治疗中肿瘤基因突变检测.     

卵巢肿瘤90例快速石蜡切片的病理诊断分析

目的探讨术中快速石蜡切片病理诊断对卵巢肿瘤的诊断价值。方法对我院90例卵巢肿瘤患者，均行术中快速石蜡切片，再与常规石蜡切片的结果进行对照。结果90例卵巢肿瘤患者术后常规石蜡切片确诊为良性肿瘤56例，交界性13例，恶性21例。快速石蜡切片确诊84例，诊断符合率93．33％，6例诊断错误，原因其中4例为取材不当，2例为读片错误。结论快速石蜡切片作为一种术中快速病理组织学诊断方法，对确定卵巢肿瘤的性质，具有不可替代的作用，可为临床提供快速准确的诊断。     

宁夏某医院225例非小细胞肺癌患者EGFR基因突变检测结果分析

目的分析宁夏某医院非小细胞肺癌(NSCLC)患者表皮生长因子受体(EGFR)基因突变检测结果。方法选择2014年1月至2017年12月在宁夏医科大学总医院住院的NSCLC患者225例进行回顾性分析,用扩增阻滞突变系统-聚合酶链反应(ARMS-PCR)检测EGFR基因突变情况。结果 EGFR基因总突变率50.22%(113/225),最常见突变位点为19外显子19-del及21外显子L858R,突变率分别为21.33%及17.78%,20外显子T790M耐药突变率及20-Ins插入突变(非敏感突变)的突变率分别为3.56%及1.33%;EGFR各外显子双突变共10例;EGFR基因突变率在性别、年龄、民族、季节、标本类型之间差异无统计学意义(P>0.05),在年份、病理类型之间差异有统计学意义(P<0.05)。结论 ARMS-PCR可有效应用于临床病理石蜡标本基因突变检测,EGFR基因在19和21外显子存在较高的突变率,其突变亚型能指导小分子表皮生长因子酪氨酸酶抑制剂(EGFR-TKI)的肿瘤靶向治疗。     

聚合酶链式反应检测石蜡切片中结核杆菌DNA的敏感性的评价

目的　本研究通过聚合酶链式反应检测结核病组织石蜡切片中的结核菌 ,并与抗酸染色及免疫组织化学染色作一比较 ,探讨此方法在结核病诊断中的敏感性。方法　 1用聚合酶链反应检测结核菌特征性的长度为 32 0 b P的DNA序列 ;2应用多克隆抗体对结核菌进行免疫组化标记 ,用 SABC法检测组织中的结核杆菌 ;3传统的萋 -尼抗酸染色。结果　聚合酶链式反应检测石蜡切片中结核菌的阳性率 77.8% (2 1/ 2 7) ;免疫组化检测结核杆菌阳性率 83.3% (15 /18) ;抗酸染色检测结核菌阳性率 35 .4 % (40 / 113)。结论　在石蜡切片中诊断结核 ,如果抗酸染色和免疫组化这两种方法都无法确诊 ,配合 PCR检测 ,诊断率会大大提高。本实验也说明 PCR是一种安全、稳定、灵敏度高的好方法 ,为临床诊断结核提供了一个非常有效的诊断技术。     

肺及肺癌组织芯片PBK/TOPK蛋白表达:检测的可靠性

背景:组织芯片技术可高通量检测组织中的生物分子.但是组织芯片所用的组织很小,直径仅0.6 mm,且肿瘤细胞具有异质性,所以组织芯片检测结果是否可靠尚不清楚.目的:比较石蜡组织芯片和对应组织常规石蜡切片PBK/TOPK蛋白在正常成人肺泡Ⅱ型上皮细胞、人胚胎肺泡上皮细胞、肺癌原发灶和相应的淋巴结转移灶的表达差异,探讨组织芯片检测PBK/TOPK蛋白表达的可靠性.方法:采用组织微阵列技术按照正常成人肺组织,胚胎肺组织,肺鳞癌原发灶及其相应淋巴结转移癌,肺腺癌原发灶及其相应淋巴结转移癌,肺小细胞癌原发灶及其相应淋巴结转移癌,肺大细胞癌原发灶及其相应淋巴结转移癌的顺序依次构建包含760点阵的石蜡组织芯片.应用免疫组化SP法,检测石蜡组织芯片和对应组织常规石蜡切片PBK/TOPK蛋白的表达.应用Leica Q500MC图像分析系统分别对石蜡组织芯片和常规石蜡切片上PBK/TOPK蛋白表达的阳性单位和阳性表达率进行定量测试.结果与结论:组织芯片和对应常规切片相应细胞中PBK/TOPK的阳性强度及阳性表达率基本相同,相对偏差不足0.6%,两者比较差异无显著性意义.结果说明石蜡组织芯片和常规组织切片检测PBK/TOPK蛋白表达结果高度一致;应用组织芯片检测肺癌、胚胎肺及正常肺组织中PBK/TOPK蛋白的表达结果可靠.     

KRAS基因突变高分辨率熔解曲线检测技术参数的优化

目的建立KRAS基因突变高分辨率熔解曲线分析法(high resolution melting,HRM)检测方法,确立最佳反应体系和反应条件,为将此技术用于临床基因突变的快速检测奠定基础。方法根据引物Tm值设立退火温度梯度,确定适宜的退火温度。利用正交实验,对影响实时荧光定量PCR(qPCR)-HRM反应体系的模板DNA、Mg2+、引物等3种主要因素进行优化。通过对SW480和MDA-MB-231细胞基因组DNA进行HRM分析检测突变,并直接测序验证,观察反应体系和反应条件的可行性。结果引物最适退火温度为60.8℃。KRAS基因突变qPCR-HRM最佳反应体系为:20μl qPCR-HRM反应体系中,引物浓度为0.5μmol/L,Mg2+为2.5mmol/L,模板DNA为40ng。优化的qPCR-HRM反应体系和反应条件能检测基因突变,和直接测序结果一致。结论采用正交实验优化的qPCR-HRM反应体系,操作简便,电泳条带清晰,熔解曲线峰型单一,特异性好,结果准确可靠,可为进一步建立HRM技术检测基因突变的临床应用提供借鉴。     

2166例婴幼儿先天性耳聋基因检测结果分析

目的探讨婴幼儿先天性耳聋基因的突变类型及分布特征,为先天性耳聋的遗传咨询及产前诊断提供参考依据。方法将2016年1月至2017年5月在该院出生的2 166例新生儿作为研究对象,采用PCR-RDB法检测4个基因16个位点。结果 2 166例新生儿基因检测共发现79例基因携带者,检出率为3.65%,其中GJB2、SLC26A4、GJB3、12SrRNA基因突变检出例数分别为37(1.71%)、28(1.29%)、8(0.37%)、6(0.28%)例。结论该地区以GJB2基因突变和SLC26A4基因突变类型为主,基因检测可有效检出婴幼儿先天性耳聋,建议在条件许可的情况下将其作为产前先天性耳聋的辅助筛查手段。     

常规石蜡切片、超声波快速石蜡切片在乳腺肿块病理诊断中的作用及特点

目的 探讨常规石蜡切片、超声波快速石蜡切片在乳腺肿块病理诊断中的作用及特点。方法 选取2019年1月至2020年12月我院收治的116例乳腺疾病患者作为研究对象,均行常规石蜡切片、超声波快速石蜡切片病理检查。比较两种切片处理方式的疾病检出率;分析两种切片处理方式对良性、恶性乳腺肿瘤的诊断价值;比较两种切片处理方式的切片制作时间和诊断时间。结果 以常规石蜡切片为诊断金标准,80例为良性病变,36例为恶性病变;两种切片处理方式的疾病检出率比较,差异无统计学意义（P>0.05）。超声波快速石蜡切片诊断良性乳腺肿瘤的延迟诊断率为2.50%(2/80),诊断恶性乳腺肿瘤的延迟诊断率为2.78%(1/36)。超声波快速石蜡切片的切片制作时间和诊断时间均短于常规石蜡切片,差异具有统计学意义（P<0.05）。结论 在乳腺肿块病理诊断中应用超声波快速石蜡切片,可准确判定断乳腺肿块性质和类型,操作简便,其相较于常规石蜡切片可缩短切片制作时间和诊断时间,值得临床推广应用。     

细针穿刺细胞块石蜡包埋切片技术联合CK19、CD56、Galectin-3、 HBME-1检测在甲状腺结节诊断中的临床意义

目的 探讨细针穿刺细胞块石蜡包埋切片技术联合人骨髓内皮细胞标记物-1(H BME-1)、细胞角蛋白19(CK19)、半乳糖凝集素-3(Galectin-3)、CD56检测在甲状腺结节诊断中的临床意义.方法 选取2018年7月至2020年5月于该院进行甲状腺结节细针穿刺病理检查的196例患者为研究对象,根据制片方法不同分为细胞涂片组98例,细胞块石蜡包埋切片组98例.细胞块石蜡包埋切片组中26例进行了CK19、CD56、Ga-lectin-3、HBME-1免疫组织化学染色.以术后病理检查结果为"金标准",分析细针穿刺标本的不同制片方法在甲状腺结节诊断中的价值.结果 制作的细胞块石蜡包埋切片中可清楚观察到细胞排列方式及组织结构,染色鲜艳、定位准确、背景清晰.甲状腺乳头状癌HBME-1阳性率为93.75％,CK19阳性率为87.50％,Galectin-3阳性率为81.25％;滤泡性腺瘤CD56阳性率为100.00％.细胞涂片组的检测准确率为71.43％,低于细胞块石蜡包埋切片组的95.92％,且良性符合率和恶性符合率也均低于细胞块石蜡包埋切片组,差异有统计学意义(P<0.05).结论 甲状腺细针穿刺细胞块石蜡包埋切片技术联合CK19、CD56、Galectin-3、HBME-1检测能提高甲状腺结节病理诊断的准确性.     

某地区结直肠癌患者K-Ras基因突变检测结果分析

目的 探讨广东地区结直肠癌患者组织中K-Ras基因突变模式,为临床治疗提供科学依据.方法 选取广东地区的40例结直肠癌患组织标本,应用聚合酶链反应以及测序法对患者K-Ras基因进行检测,结果采用卡方检验进行统计学分析.结果 在40例结直肠癌患者中发现4种K-Ras基因突变类型,包括密码子12位点GGT→GAT、GGT→...     

凝血因子Ⅹ基因外显子1 T58→G突变导致的因子Ⅹ缺陷症

目的检测1例凝血因子Ⅹ缺陷患者的基因突变.方法 PCR对凝血因子Ⅹ基因进行扩增,扩增范围包括因子Ⅹ基因的所有外显子及其侧翼内含子序列,用DNA测序检测因子Ⅹ的基因突变.结果因子Ⅹ基因外显子1第58位核苷酸存在T→G的突变,从而导致在外显子1编码的信号肽中11Ser(AGT)→Arg(AGG)的错义突变.结论该基因突变可能是导致患者因子Ⅹ缺陷的原因.     

两个遗传性凝血因子Ⅻ缺陷症家系FⅫ基因突变分析

目的:检测两个中国汉族人遗传性凝血因子Ⅻ缺陷症家系中的FⅫ基因突变。方法:检测先证者及家系成员血浆FⅫ∶C,并以其外周血单个核细胞中提取的基因组DNA为模板,PCR扩增FⅫ基因的所有外显子及其侧翼序列,用DNA测序仪检测FⅫ的基因突变。结果:在两个家系中共发现3种杂合型基因突变,即Gly526Asp、7142insertC和Gly542Ser。结论:上述3种FⅫ基因突变是导致中国人遗传性FⅫ缺陷的分子发病机制之一,且均为国际首次发现。