夹竹桃麻素对过氧化氢所致兔心房肌细胞超速激活延迟整流钾电流及瞬时外向钾电流异常的保护作用

目的研究夹竹桃麻素(APO)对过氧化氢(H2O2)引起的兔单个心房肌细胞超速激活延迟整流钾电流(IKUr)及瞬时外向钾电流(Ito)异常的保护作用。方法用酶解法分离兔心房肌细胞,将细胞分为4组:对照组(细胞不经任何处理)、H2O2组(细胞经50μmol/L的H2O2培养0.5 h)、H2O2+APO组(细胞预先经100μg/ml APO培养1 h后再加入50μmol/L的H2O2培养0.5 h)、APO组(细胞经100μg/mlAPO培养1.5 h)。采用全细胞膜片钳技术记录4组细胞IKUr和Ito,分析50μmol/L的H2O2对兔单个心房肌细胞IKUr及Ito的影响,并研究预先应用100μg/ml APO对其的保护作用。结果①与对照组比较,H2O2组使兔心房肌细胞IKUr峰值降低(6.1±1.4 pA/pF vs16.0±2.1 pA/pF,P<0.05,n=15),而H2O2+APO组使电流得到部分恢复(10.1±1.3 pA/pF),与H2O2组比差异有显著性(P<0.01,n=15),APO组(15.3±1.2 pA/pF)较对照组变化不大(P>0.05,n=15)。②与对照组比较,H2O2组使兔心房肌细胞Ito峰值降低(20.8±2.0 pA/pF vs 42.6±3.0 pA/pF,P<0.05),而H2O2+APO组使电流得到部分恢复(31.8±2.7 pA/pF),与H2O2组比差异显著(P<0.05,n=15),APO组(40.1±2.9 pA/pF),与对照组相比变化不大(P>0.05,n=15)。H2O2使Ito通道稳态激活曲线右移,通道稳态失活曲线及恢复时间不变,关闭态失活加速,APO可以部分恢复上述改变。结论 APO可减轻氧化应激对心房肌细胞IKUr及Ito的影响。     

兔慢性心力衰竭心房肌细胞离子通道重构及分子机制

目的 观察兔慢性心力衰竭(CHF)心房肌细胞复极离子通道电流的变化及孔道蛋白mRNA的改变,探讨心力衰竭房性心律失常的可能机制.方法 使用结扎左室支建市兔心衰模型;用全细胞膜片钳记录兔心房肌细胞L钙通道电流(ICa-L)、瞬时外向钾电流(Ito)的变化;用定量PCR方法测定兔心房肌细胞L型钙通道α1、Kv4.3、钠钙交换蛋白的mRNA表达.结果 心衰组和假手术组兔心房肌细胞ICa-L峰电流密度分别为(-4.79±0.80)pA/pF和(-7.19±1.82)pA/pF(P<0.01),其α1 mRNA表达分别为1.10±0.27(×10-1)和1.73+0.33(×10'-1>)(P<0.01).心衰组与假手术组心房肌细胞的Lto峰电流密度分别为(15.60±1.60)pA/pF和(28.70±2.71)pA/pF(P<0.01),其Kv4.3 mRNA分别为3.13±0.36(×10)和6.30±0.61(×10)(P<0.01);心衰组与假手术组心房肌细胞钠钙交换蛋白mRNA的含最分别为2.76±0.60(×10)和1.02±0.14(×10)(P<0.01).结论 兔慢性心力衰竭心房肌细胞ICa-L、Ito电流密度下调,孔道亚单位α1、Kv4.3 mRNA表达减少可能是其机制之一,同时钠钙交换蛋白mRNA的含量增加,可能是导致房性心律失常的原因.     

卡维地洛对氧自由基所致心肌细胞L型钙电流异常的保护作用

目的　研究卡维地洛对氧自由基引起的豚鼠单个心室肌细胞L型钙电流异常的保护作用。方法　采用全细胞膜片钳技术 ,观察 0 5mmol/L的H2 O2 引起单个豚鼠心室肌细胞L型钙电流改变及预先应用 0 5 μmol/L卡维地洛对这种改变的影响。结果　 0 5 μmol/L卡维地洛对正常豚鼠心室肌细胞L型钙电流及其通道动力学影响不显著。 0 5mmol/LH2 O2 作用下 ,豚鼠心室肌细胞L型钙电流峰值明显降低 (P <0 0 0 1) ,电流 电压曲线上移 ,通道稳态激活曲线和稳态失活曲线左移 ,通道恢复时间明显延长 (P <0 0 0 1)。预先给予 0 5 μmol/L卡维地洛 ,明显减轻H2 O2 对L型钙电流的抑制作用 (P <0 0 1) ;并且可减轻H2 O2 对L型钙通道动力学的异常影响。结论　卡维地洛可减轻氧化应激对心肌细胞L型钙电流的影响 ,这可能是其治疗心力衰竭的机制之一     

卡维地洛对大鼠心室肌细胞L型钙电流的影响

目的研究卡维地洛对大鼠心室肌细胞L型钙电流(ICa,L)的影响,探讨卡维地洛在离子通道水平的药理机制。方法用急性酶解法获得大鼠单个心室肌细胞,用标准全细胞膜片钳技术记录ICa,L,观察不同浓度卡维地洛对ICa,L的影响。结果①卡维地洛呈浓度依赖性抑制ICa,L,1μmol/L卡维地洛能使心肌细胞ICa,L电流-电压关系曲线明显上移,峰电流密度减少(7.80±0.65pA/pFvs4.89±0.52pA/pF,n=10,P<0.05),但激活电位、峰电位和翻转电位无明显改变。②卡维地洛能使ICa,L失活曲线明显左移,但对ICa,L激活和复活曲线无明显影响。③0.1μmol/L卡维地洛对钙电流无明显影响,但可以明显阻断异丙肾上腺素增加钙电流效应。同时,卡维地洛对钙电流的抑制效应不能被哌唑嗪和普奈洛尔阻断。结论卡维地洛呈浓度依赖性地抑制心室肌细胞L型钙通道。     

巨噬细胞移动抑制因子对HL-1细胞T型钙电流的调控

目的 观察巨噬细胞移动抑制因子（macrophage migration inhibitory factor,MIF）对心房肌细胞T型钙电流（T-type calcium channel current,ICa,T）的调控.方法 使用全细胞膜片钳和分子生物分析方法检测心房肌细胞ICa,T的表达.结果 在体外培养的心房肌细胞株（HL-1细胞）中,小鼠重组MIF（20、40 nmol/L,24 h）可明显抑制ICa,T的峰值电流,与对照组比较,差异均有统计学意义[峰值内向电流：（-17.5±2.9）pA/pF vs.（-27.9±3.4） pA/pF,P＜0.05;（-11.3±1.7）pA/pF vs.（-27.9±3.4）pA/pF,P＜0.01];并可损伤电压依赖的ICa,T激活,使T型钙通道α1G和α1H亚单位mRNA表达下调.而Src非特异性抑制剂genistein和特异性抑制剂PP1可逆转40 nmol/L MIF所致的ICa,T下调[genistein：（-11.3±1.7）pA/pF vs.（-16.1±0.8）,P＜0.05;PPI：（-11.3±1.7）pA/pFvs.（-19.0±3.2）pA/pF,P＜0.05].结论 MIF可能通过影响ICa,T参与心房颤动的病理过程,Src可能参与该信号转导途径.     

硫化氢对大鼠心房肌细胞三磷酸腺苷敏感性钾通道电流的影响

目的观察内源性及外源性硫化氢(H2S)对大鼠离体心房肌细胞三磷酸腺苷(ATP)敏感性钾通道(KATP)外向电流的影响,以探讨H2S对心房肌细胞的作用。方法对大鼠离体心脏采用胶原酶酶解法得到单个心房肌细胞,采用膜片钳全细胞技术记录H2S生成酶——胱硫醚-γ-裂解酶的不可逆抑制剂DL-propargylglycine(PPG)用药前、用药后5,10,15,20,25 min及不同浓度外源性H2S的供体硫氢化钠(NaHS)干预前后的KATP电流。结果经200μmol/L PPG干预后KATP峰电流密度(+70 mV)显著减小(6.906 6±1.902 9 pA/pF vs 3.924 4±0.988 5 pA/pF,P<0.01),且具有时间依赖性。经9.375,18.75,37.5,75,150μmol/L NaHS干预后KATP峰电流密度呈浓度依赖性增大,至150μmol/L时峰电流密度明显增大(6.5974±1.1527 pA/pF vs 10.463 1±2.329 7 pA/pF,P<0.01)。结论内源性及外源性H2S均可以开放大鼠离体心房肌KATP通道,使KATP电流增加。     

夹竹桃麻素对兔心房肌IK1氧化损伤的保护作用

目的 探讨夹竹桃麻素(APO)对兔左心房肌细胞内向整流钾电流(I_K1)的保护作用。 方法 运用低浓度(50 μmol/L)的过氧化氢(H₂O₂)建立氧化应激模型。应用膜片钳全细胞技术,探讨APO(100 μmol/L)对兔左心房肌细胞I_K1及动作电位时程(APD)氧化应激损伤的保护作用。Western blot检测各组兔左心房中Kir2.1蛋白的表达。反转录聚合酶联反应(RT-PCR)检测兔左心房中的KCNJ2 mRNA表达。 结果 与对照组比较,低浓度H₂O₂(50 μmol/L)组I_K1峰值从(?182.2±15.6) pA/pF 下降到(?119.3±8.9)pA/pF (P<0.05),APO(100 μmol/L)组I_K1峰值为(?175.3±15.2)pA/pF无差异;与H₂O₂组比较,H₂O₂(50 μmol/L)+APO(100 μmol/L)组I_K1峰值恢复到(?160.5±13.5)pA/pF (P<0.05);APO使由于H₂O₂处理后减小的静息膜电位(RMP)绝对值及缩短的90%的APD(APD₉₀)得以恢复;与对照组相比,H₂O₂组Kir2.1蛋白表达下降(P<0.05);与H₂O₂组相比,H₂O₂+APO组Kir2.1蛋白表达明显恢复(P<0.05);与对照组相比,H₂O₂组KCNJ2 mRNA表达下降(P<0.05);与H₂O₂组相比APO+H₂O₂组KCNJ2 mRNA表达恢复(P<0.05) 结论 APO对兔左心房肌细胞I_K1具有保护作用。     

索他洛尔对豚鼠心室肌动作电位及延迟整流钾电流的作用特性

目的　研究索他洛尔对豚鼠乳头状肌动作电位 (AP)和单个心室肌细胞延迟整流钾电流的作用及索他洛尔致心律失常的可能机制。方法　用标准微电极技术和全细胞膜片钳技术 ,分别测定豚鼠乳头状肌AP和单个心室肌细胞离子电流。结果　在索他洛尔浓度为 10 0 μmol/L时可明显延长APD ,使APD2 0 和APD90 分别延长13.33%和 19.71%。且该作用随BCL增加而增加 ,呈现出逆频率依赖性特点。在单个心室肌细胞的实验中10 0 μmol/L索他洛尔仅对IKr有阻滞作用 ,使IKr及IKr,tail的幅值从 (0 .6 8± 0 .2 7) pA/pF和 (0 .94± 0 .30 ) pA/ pF降至(0 .4 7± 0 .18) pA/ pF和 (0 .6 0± 0 .32 )pA/ pF ;且此作用也呈逆频率依赖性。结论　索他洛尔对心肌电生理的逆频率依赖性的作用特性可能是其诱发尖端扭转性室速 (TdP)等心律失常的机制之一。     

缬草单萜氧化物对兔单个心室肌细胞L-型钙电流的影响

利用全细胞膜片钳记录技术研究30μg/L和100μg/L缬草单萜氧化物(VMO)对兔单个心室肌细胞L型钙电流(ICaL)和动作电位的影响。结果:30μg/L和100μg/L的VMO使兔心室肌细胞ICaL峰值由6.04±0.59pA/pF分别减至3.99±0.31pA/pF和2.31±0.24pA/pF(n=8,P<0.01);VMO使ICaL的电流电压曲线上移,但不改变其激活电位、电位峰值和反转电位;VMO还使钙电流失活曲线左移。30μg/LVMO可使动作电位时程(APD)明显缩短,APD50和APD90分别缩短了50.3%和29.6%(n=16,P<0.05),而静息电位和动作电位幅值无明显改变。结论:VMO对LCaL具有浓度依赖性阻滞作用。这可能是其对心血管作用的重要机制之一。     

糖尿病兔心房电生理及L型钙电流的变化

目的研究糖尿病时心房电生理参数、L型钙电流(ICa,L)变化,探讨糖尿病引起心房颤动(简称房颤)的机制。方法本研究分为离体电生理实验和全细胞膜片钳实验两部分,每部分均分为糖尿病组和对照组。糖尿病兔采用四氧嘧啶诱导。每组各8只兔,饲养8周,离体电生理部分在建立Langendorff灌流的离体兔心脏模型后,测量心房间传导时间(IACT)、高位右房、高位左房、低位左房有效不应期(AERP)、AERP的离散度(AERPD)、应用Burst刺激观察房颤诱发情况;膜片钳实验采用酶解法分离单个心房肌细胞,采用全细胞膜片钳技术记录ICa,L。结果与对照组比较,糖尿病组IACT延长(37.66±8.88 ms vs 27.70±2.12 ms),AERPD增大(28.37±7.52 ms vs 11.62±5.60 ms);房颤诱发率升高(6/8 vs 1/8);心房肌细胞ICa,L最大电流密度显著增加(8.94±3.81 pA/pF vs 5.16±1.10 pA/pF),P均<0.05。结论糖尿病时存在心房电重构。     

胡椒碱减轻兔原代左心房肌细胞氧化应激损伤的作用

目的:利用低浓度过氧化氢（H2O2）建立兔原代左心房肌细胞氧化损伤模型,探讨胡椒碱减轻氧化应激损伤的保护作用。方法: 将18只新西兰白兔随机分为3组,每组6只:即正常对照(NC)组、H2O2组和胡椒碱组,均分别进行左心房肌细胞的原代培养。NC组对培养的心房细胞直接进行检测,H2O2组直接在培养的原代心房肌细胞中加入终浓度为100 μmol/L的H2O2培养2 h,胡椒碱组以7×10-6 mol/L浓度的胡椒碱处理细胞1 h之后,加入终浓度为100 μmol/L的H2O2共同培养2 h。检测氧化和抗氧化指标的变化。MTT法检测三组原代细胞活力,黄嘌呤氧化酶法检测超氧化物歧化酶（SOD）活力、比色法检测丙二醛（MDA）含量及还原型谷胱甘肽（GSH）含量,Fura-2 AM检测细胞内钙离子浓度,RT-PCR对线粒体mRNA进行定量分析。结果: 与NC组相比较,H2O2组细胞的活力、SOD的活力及GSH的含量明显下降（P<0.05）; MDA的含量、钙离子浓度和线粒体mRNA的表达均明显增加（P<0.05）。胡椒碱组和H2O2组比较,上述指标均有显著改善（P<0.05）。结论: 胡椒碱能够在氧自由基的产生清除等环节,减轻兔原代左心房肌细胞的氧化应激损伤。     

异丙肾上腺素对犬心房肌细胞动作电位及L型钙电流的影响

目的研究两种浓度的异丙肾上腺素(Isoproterenol,ISO)对犬心房肌细胞(AP)及L型钙电流(ICa,L)的作用。方法采用离体灌注和消化的方法获取心房肌细胞,用全细胞记录技术记录单个心房肌细胞AP以及ICa,L。结果低浓度ISO(10nmol/L)可延长APD,可使90%AP时程(APD90)延长34.4%,并降低AP平台期水平。高浓度ISO(1μmol/L)可减少APD,APD90减少32.1%。两种浓度的ISO均可诱发AP后除极及触发活动。10nmol/L和1μmol/LISO分别增加ICa,L36.7%和49.3%。结论两种浓度的ISO对心肌细胞ICa,L均有促进作用,Ca2+内流引起的肌浆网Ca2+释放可能是房性心律失常的发生机制之一。     

乙酰胆碱对离体豚鼠心房肌动作电位及其脱敏的影响

目的 :研究迷走神经递质乙酰胆碱 （ACh）对离体豚鼠心房肌细胞动作电位 （AP）的影响及其对心房肌的脱敏 ,探讨脱敏可能发生的机制。方法 :采用标准玻璃微电极细胞内记录方法 ,观察不同浓度 （0 .0 1,0 .1,1μm ol/ L） ACh对心房肌细胞 AP的影响及对动作电位时程 （APD）和收缩力的脱敏现象 ,并观察了受体或通道水平的阻断剂阿托品、氯化铯 （Cs Cl）对 ACh所致的心房肌 APD脱敏的影响。结果 :10 .0 1,0 .1,1μm ol/ L ACh分别缩短 APD的变化率为 （6 .0 2± 1.0 4） % ,（14.2 0± 3.79） % ,（30 .2 0± 3.6 5 ） %。 2 0 .0 1μmol/ L ACh对心房肌细胞没有脱敏 ;0 .1μm ol/ L ACh对心房肌细胞 APD有轻微脱敏 ,脱敏持续时间为 1m in;而 1μmol/ L ACh对心房肌细胞 APD脱敏明显 ,脱敏持续时间为 5 m in。 31μmol/ L 阿托品与 2 0 m mol/ L Cs Cl并不能阻断 1μmol/ L ACh对心房肌细胞APD的脱敏。结论 :ACh缩短 APD的作用随浓度增大而增大 ;ACh对离体豚鼠心房肌细胞 APD的脱敏有浓度依赖性与时间依赖性 ;脱敏的发生可能与毒蕈碱型胆碱能受体及 Ik,ACh电流有关。     

米诺环素对大鼠心室肌细胞L型钙电流的影响

目的 研究米诺环素对大鼠心室肌细胞L型钙电流（Ica-L）动力学特性的影响.方法 以酶解法分离获得单个心室肌细胞,采用全细胞膜片钳技术,研究米诺环素对Ica-L的影响.结果 10、50、250 μmol/L米诺环素对峰电位的抑制率分别为11%±5.86%,54.79%±6.32%,71.73%±5.29%,使Ica-LI-U曲线上移,激活曲线右移,并延长失活后恢复时间.结论 米诺环素通过延长钙通道的激活及失活后恢复时间,抑制心肌细胞Ica-L,预防钙超载.     

原花青素对血管内皮细胞过氧化氢损伤的保护作用

目的 观察原花青素对血管内皮细胞过氧化氢损伤的保护作用及可能机制.方法 用体外培养的人脐静脉内皮细胞传代后进行实验,实验分为3组:对照组常规培养;过氧化氢损伤组;药物干预组加入原花青素低、中、高浓度组(25 mg/L、50 mg/L和100 mg/L预处理).用MTT法观察原花青素对过氧化氢损伤的内皮细胞活性的影响,各组均测定细胞中超氧化物歧化酶、丙二醛和乳酸脱氢酶的活性,用Hoechst 33258荧光染色法观察过氧化氢损伤对血管内皮细胞的凋亡情况,蛋白免疫印迹法分析各组凋亡基因bcl-2蛋白的表达.结果 (1)原花青素使过氧化氢损伤的内皮细胞的脂质过氧化物丙二醛生成减少,乳酸脱氢酶漏出液减少,超氧化物歧化酶活力增加;(2)过氧化氢损伤可以诱导内皮细胞凋亡,原花青素可显著减少过氧化氢诱导的内皮细胞的凋亡,且上调抗凋亡基因bcl-2的蛋白表达.结论 原花青素处理对过氧化氢所致的内皮细胞的损伤有保护作用,机制可能通过抗脂质过氧化,对氧自由基的清除,以及抗细胞凋亡有关.     

快速刺激对豚鼠心房肌动作电位的影响及地尔硫卓、艾司洛尔的干预作用

研究钙离子拮抗剂、β受体阻断剂对豚鼠心房肌电生理性质的影响及对快速刺激引起的心房肌动作电位的变化的干预作用。采用玻璃微电极技术 ,对比 1.1,3.3μmol/L地尔硫卓和 4 ,12 μmol/L艾司洛尔灌流前后三种不同刺激频率 (5 0 0 ,10 0 0 ,15 0 0ms)下豚鼠离体心房肌动作电位的变化 ,然后给予 2 0min 15 0ms快速刺激 ,比较对照组和四个药物灌流组的恢复过程。结果 :地尔硫卓和艾司洛尔对基础状态的心房肌电生理性质无明显作用。快速刺激后对照组复极 90 %动作电位时程 (APD90 )、有效不应期 (ERP)在第 4分钟恢复 ,大剂量地尔硫卓组和艾司洛尔组在第 2分钟即恢复 ,两者均可改善短时间快速刺激后APD90 、ERP的恢复。结论 :细胞内Ca2 + 超载为电重构的发生机制之一 ,钙离子拮抗剂或 β受体阻断剂可减轻电重构的发生。     

亚麻酸对心力衰竭人心房肌细胞瞬时外向钾电流的影响

探讨亚麻酸对心力衰竭病人心房肌细胞瞬时外向钾电流 (Ito)的作用。应用膜片钳全细胞记录技术 ,记录细胞外应用亚麻酸 (十八碳二烯酸 )前后人心房肌细胞Ito。结果表明 :①亚麻酸对人心房肌细胞的Ito抑制作用表现为浓度依赖性 ,2 .5 ,5及 10 μmol/L的抑制率分别为 16 %± 4%、2 8%± 6 %和 5 1%± 6 % (P <0 .0 5 ) ,但无频率依赖性。②用药前后Ito的激活曲线几乎重叠 ,5 0 %的通道激活电压分别为 19.5± 1.7和 17.6± 1.4mV(P >0 .0 5 ) ;用药后的电流失活曲线左移 ,V1/2 电压为 - 33.3± 2 .4和 - 44 .4± 3.1mV ,即左移 11.2± 1.2mV(P <0 .0 1)。③Ito恢复 5 0 %的时间延长 ,即从 39.3± 3.4到 85 .1± 5 .8ms(P <0 .0 1)。结论 :亚麻酸对心力衰竭病人心房肌细胞Ito具有抑制作用 ,延长该通道的恢复时间