梅毒血清固定患者外周血Th17细胞的检测

目的检测梅毒血清固定患者外周血Th17细胞的细胞比例和相关细胞因子的变化,初步探讨Th17细胞在梅毒血清固定现象中的作用。方法梅毒血清固定患者30例,同时以30例健康体检人作为对照组。采用流式细胞术(Flow cytometry, FCM)检测外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cel s, PBMC)中Th17细胞在CD4+T细胞中的比例;采用实时定量PCR方法检测Th17细胞特异性转录因子孤独受体γt（orphan nuclear receptor gammat , RORγt）及细胞因子IL-17mRNA的表达。结果梅毒血清固定患者外周血Th17细胞比例及RORγt和IL-17的表达量显著低于健康对照组（P<0.05）。结论 Th17细胞的异常可能是梅毒血清固定现象形成的重要原因之一。     

高血压合并颈动脉粥样硬化患者外周血效应性T细胞亚群的变化及意义

目的:探讨高血压合并颈动脉粥样硬化患者外周血效应性T细胞各亚群Th1、Th2和Th17细胞活性的变化。方法:行颈动脉超声检查选择20例高血压合并颈动脉粥样硬化患者(CA组),颈动脉正常的25例高血压患者(EH组)以及20例性别、年龄匹配的健康体检者作为对照组(Control组)。清晨空腹抽血。以流式细胞术检测外周血中Th1、Th2和Th17细胞比例,实时定量RT-PCR方法检测T-bet、GATA3和RORγt mRNA,ELISA法检测血浆中IFN-γ、IL-4和IL-17水平。结果:与EH组和Control组相比较,CA组Th1、Th17细胞比例显著升高,T-bet和RORγt mRNA表达增加,血浆IFN-γ和IL-17水平显著升高。与Control组相比较,EH组Th1、Th17细胞比例、T-bet和RORγt mRNA、血浆IFN-γ和IL-17水平均无统计学差异。三组间Th2细胞比例、GATA3 mRNA和血浆IL-4水平均无统计学差异。结论:高血压病患者的Th1、Th17细胞活性升高,这种改变可能与颈动脉粥样硬化的发生发展有关。     

胃癌患者外周血单个核细胞RORγt和IL-17 mRNA水平的检测及临床意义

目的 检测胃癌患者外周血中单个核细胞(PBMC)中转录因子RORγt和细胞因子IL-17的表达水平及血浆IL-17的表达,探讨Th17细胞特异性RORγt及IL-17的变化在胃癌临床监测中的意义.方法 收集43例胃癌患者外周血标本,40例健康志愿者标本;实时荧光定量PCR(QRT-PCR)检测患者PBMC中RORγt和IL-17 mRNA的表达水平;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血浆IL-17的表达;采用直线相关检验方法对健康人群和胃癌患者转录因子RORγt和IL-17表达水平进行相关性分析.结果 胃癌患者外周血PBMC的RORγt、IL-17 mRNA表达水平均明显高于健康对照组(P＜0.05),且二者呈现明显正相关(P＜0.01);胃癌转移组与未转移组相比,RORγt和IL-17 mRNA明显升高(P＜0.05),此外,血浆IL-17的表达也明显升高(P＜0.01).结论胃癌患者PBMC中RORγt和IL-17 mRNA表达水平及血浆IL-17明显升高,提示Th17细胞与胃癌的发生发展可能存在着一定的关系.     

食管鳞癌患者肿瘤微环境中Th17细胞的表达及临床意义

目的:了解Th17细胞在食管鳞癌患者肿瘤微环境中表达水平,探讨其在食管鳞癌进展中的作用。方法:收集健康人外周血、食管鳞癌患者外周血、癌旁组织、癌组织标本,流式细胞术检测Th17细胞水平;实时荧光定量聚合酶链反应(QRT-PCR)检测RORγt、IL-17a mRNA表达水平。结果:食管鳞癌患者外周血、癌旁组织、癌组织中Th17细胞水平和RORγt、IL-17a mRNA表达水平较健康人外周血均升高,且癌组织>癌旁组织>患者外周血>健康人外周血,差异有统计学意义(均P<0.05)。食管鳞癌患者外周血中Th17细胞水平升高与患者性别、年龄、肿瘤大小无明显关系,但与有无淋巴结转移和TNM分期有关(P<0.01)。结论:食管鳞癌患者肿瘤微环境中Th17细胞水平和RORγt、IL-17a mRNA表达水平均升高,Th17细胞可能通过RORγt和IL-17a参与食管鳞癌进展过程。     

反复自然流产患者外周血Th17和Treg细胞相关细胞因子的测定

目的 通过检测反复自然流产(RSA)患者外周血Th17和Treg细胞特异性转录因子RORγt和Foxp3 mRNA的表达及IL-6、IL-17、TGF-β1的水平,探讨Th17和Treg细胞在RSA发病中的作用.方法 选取2011-12/2012-04郑州大学第三附属医院50例RSA患者为研究对象,同期选取50名健康早孕女性作为对照组.采用实时荧光定量PCR检测外周血RORγt和Foxp3 mRNA的表达水平,并分析二者之间的相关性;采用ELISA测定血清中IL-6、IL-17、TGF-β1的含量.结果 RSA组RORγt mRNA水平(25.358 ±9.236)显著高于正常对照组(10.611±5.792);Foxp3 mRNA水平(6.851±2.875)显著低于正常对照组(32.218±5.023).RSA患者RORγt和Foxp3 mRNA表达呈显著负相关(r=-0.530,P=0.018).RSA组IL-6、TGF-β1含量分别为(82.7±23.2)、(269.3±29.6) pg/mL,明显低于正常对照组(210.4±40.6)、(497.8±54.6)pg/mL;IL-17含量(172.8±33.9) pg/mL明显高于正常对照组(53.4±10.8) pg/mL.结论 RORγtmRNA表达上调与Foxp3mRNA表达下调所致的Th17和Treg细胞免疫失衡可能是RSA的原因之一;IL-6、IL-17、TGF-β1含量变化的异常在RSA的发生发展中可能起一定作用.     

调节性T细胞平衡相关因子在儿童紫癜性肾炎中的表达及其与血清中期因子的相关性

目的探讨调节性T细胞平衡相关因子在儿童紫癜性肾炎(HSPN)中的表达及其与血清中期因子(MK)的相关性。方法抽取本院2015年1月至2017年12月收治的HSPN患者75例(急性期35例,缓解期40例),通过流式细胞仪测定调节性T细胞、Th17细胞比例,通过酶联免疫吸附法(ELISA)测定血清白介素-6(IL-6)、白介素-17(IL-17)、转化生长因子-β1(TGF-β1)及MK水平,且经由逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)检测特异性转录因子叉状头转录因子(Foxp3)、维甲酸相关孤核受体转录因子(RORγt)mRNA表达,另Pearson相关性分析血清MK与相关指标的关系。结果与对照组比较,观察组急性期、缓解期患儿调节性T细胞比例、Foxp3 m RNA表达均显著低,Th17细胞比例、血清IL-6、IL-17、TGF-β1、MK水平、RORγt mRNA表达均显著高,差异有统计学意义(P<0.05);观察组急性期患儿调节性T细胞比例显著低于缓解期患儿,而Th17细胞比例、血清IL-6、IL-17、TGF-β1、MK水平均显著高于缓解期患儿(P<0.05);观察组患儿血清MK水平与L-6、IL-17、TGF-β1均显著正相关(P<0.05),而与Foxp3、RORγt mRNA表达不相关(P>0.05)。结论 HSPN患儿调节性T细胞降低,Th17细胞及其相关因子、MK水平上升,血清MK与IL-6、IL-17相关,而与Foxp3、RORγt不相关;MK水平上升、Th17细胞与调节性T细胞失衡可能共同参与HSPN发病过程。     

MiR-155-5p介导Treg/Th17免疫失衡致变应性鼻炎机制研究

为探讨miR-155-5p异常表达对变应性鼻炎(allergic rhinitis, AR)小鼠Th17/Treg免疫平衡的影响及机制,将6周龄BALB/c小鼠随机平均分成6组:A.对照组(Control)、B.模型组(AR)、C.miR-155-5p空载对照组(AR+Vector)、D.miR-155-5p过表达组(AR+miR-155-5p)、E.miR-155-5p阴性对照组(AR+NC)、F.miR-155-5p沉默组(AR+抗miR-155-5p抗体)。采用卵清蛋白(ovalbumin, OVA)诱导建立AR小鼠模型,鼻腔内给予miR-155-5p过表达或沉默慢病毒进行干预。实验末对各组小鼠过敏症状进行评分,HE染色观察鼻黏膜组织病理学变化,real-time PCR、Western blotting检测鼻黏膜组织中miR-155-5p、Foxp3、RORγt的表达水平,ELISA检测血清中IgE及炎性因子TGF-β1、IL-10、IL-17A、IL-6表达,流式细胞术检测外周血Treg和Th17百分比。结果发现,与对照组比较,模型组小鼠鼻炎症状评分明显增加,Foxp3、RORγt mRNA及蛋白表达水平明显升高,血清IgE、IL-17A、IL-6及Th17百分比显著上升,TGF-β1、IL-10及Treg百分比明显降低。MiR-155-5p过表达加重模型组小鼠鼻炎症状,同时促进IgE及Th17相关细胞因子的表达,抑制Treg相关细胞因子的表达,而miR-155-5p沉默后Treg/Th17免疫失衡得到缓解,小鼠鼻炎症状评分显著下降。MiR-155-5p可以显著加重AR小鼠的鼻炎症状,可能与影响Foxp3、RORγt表达,调节Treg/Th17免疫平衡有关。     

茯苓多糖对系统性红斑狼疮患者Th17/Treg平衡的影响

目的:研究茯苓多糖对系统性红斑狼疮(SLE)患者外周血辅助性T细胞17(Th17)/调节性T细胞(Treg)平衡的免疫调节作用。方法:选取45例SLE患者和35例健康对照者,应用磁珠分选法分离外周血CD4~+ T细胞,流式细胞术检测CD4~+ T细胞中Th17和Treg细胞的比例。用茯苓多糖分别处理健康对照者及患者的CD4~+ T细胞,MTT法检测细胞活力以测定茯苓多糖毒性,ELISA检测细胞中白细胞介素17(IL-17)、IL-6、IL-10及转化生长因子β(TGF-β)的含量,RT-q PCR和Western blot法分别测定维甲酸相关孤儿受体γt(RORγt)与叉头框蛋白P3(Foxp3)的mRNA和蛋白表达水平。结果:与健康对照组相比,SLE患者的Th17细胞比例显著升高,Treg细胞比例明显降低(P0.05)。用100μg/L的茯苓多糖处理SLE患者CD4~+ T细胞,与空白对照组相比,IL-17和IL-6的含量显著降低,IL-10和TGF-β的含量明显上升(P0.05);RORγt的mRNA和蛋白表达显著下降,同时Foxp3的表达在mRNA和蛋白水平上明显增加(P0.05);并且Th17/Treg的比值降低(P0.05)。结论:茯苓多糖可以通过升高Treg并降低Th17细胞的比例,对SLE起到一定的治疗作用。     

Th17细胞在系统性红斑狼疮免疫炎症反应中的作用机制研究

目的从Th17/Treg、IL-17及RORγt mRNA表达3方面进行研究,探讨Th17细胞在SLE免疫炎症反应中的作用机制。方法研究对象为26例活动期SLE患者、16例非活动期SLE患者和20例正常对照,采用细胞内染色流式细胞术检测Th17/Treg,ELISA法检测IL-17及RT-PCR法检测RORγt mRNA表达,并探讨它们与SLE疾病活动性的关系。结果活动期SLE患者组Th17/Treg、IL-17及RORγt mRNA表达水平显著高于非活动期及正常对照组;非活动期SLE患者组RORγt mRNA表达显著高于正常对照组,但两组间Th17/Treg、IL-17水平无显著差异。SLE患者Th17/Treg、IL-17及RORγt mRNA表达水平均与和SLEDAI呈正相关。结论 SLE患者存在着Th17细胞高表达现象,阻断Th17细胞分化的上游或下游均可能减轻SLE的免疫炎症反应而达到治疗SLE的目的。     

Th17细胞在子痫前期患者外周血表达增加

观察正常妊娠妇女和子痫前期疾病患者外周血CD4+T细胞中Th17细胞和特异性转录因子维A酸相关孤独受体(retinoid-related orphan nuclear receptor,RORγt)的表达和意义。实验组为子痫前期疾病患者25例,正常妊娠妇女20例,未孕妇女20例。采集研究对象外周血,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测Th17细胞相关细胞因子IL-17A,IL-6,TNF-α的表达,Ficoll法分离外周血单个核细胞(PBMC),免疫磁珠分选CD4+T淋巴细胞,逆转录-聚合酶联反应(RT-RCR)半定量检测CD4+T细胞中Th17细胞特异性转录因子RORγt的表达,流式细胞术检测CD4+IL-17+T细胞比例。子痫前期患者外周血清中IL-6、IL-17A的含量分别为(31.72±13.34)ng/L、(2.61±1.64)ng/L,高于正常妊娠组水平,差异有显著统计学意义(P<0.01),TNF-α在子二组间的表达分别为(18.00±8.64)ng/L和(11.69±3.68)ng/L,差异有统计学意义(P<0.05);RORγt mRNA在子痫前期组的表达高于正常妊娠组,净光密度值差异有显著统计学差异(P<0.01),CD4+IL-17+T细胞在子痫前期组的表达为(1.83±0.42)%,高于正常妊娠组(0.87±0.26)%,差异有显著统计学意义(P<0.01)。子痫前期患者外周血CD4+T细胞中RORγt mRNA、Th17细胞以及Th17细胞相关细胞因子表达异常,可能在疾病的发病机理中起到重要作用。     

Th17细胞在Graves’病中的变化及意义

目的:探讨Th17细胞在中国人Graves’病(GD)中的变化及意义。方法:应用电化学发光法测定30例初发GD患者及30例健康体检者血清中促甲状腺激素(TSH)、游离三碘甲腺原氨酸(FT3)、游离甲状腺激素(FT4)、甲状腺球蛋白抗体(TgAb)和甲状腺过氧化酶抗体(TPOAb)的水平;采用流式细胞术检测外周血单个核细胞(PBMC)中CD4+IL-17+T(Th17)细胞的数量;用ELISA法测定初发GD患者和健康对照者PBMC产生IL-17的水平;应用实时定量PCR(qRT-PCR)检测PBMC中ROR-γt、IFN-γ、IL-4 mRNA的表达量;采用免疫组化染色检测甲状腺组织中IL-17+细胞的分布和数量。结果:初发GD组外周血中Th17细胞占CD4+T细胞的比例[(20.59±4.63)%]、PBMC分泌的IL-17水平[(83.22±34.28)pg/ml]以及PBMC中ROR-γt mRNA表达(1.67±0.98)均明显高于正常对照组Th17[(11.77±4.18)%](P<0.01)、IL-17[(19.74±5.99)pg/ml](P<0.01)和ROR-γt mRNA(0.92±0.18)(P<0.05)的水平。与正常对照组比较,GD患者PBMC中IFN-γmRNA的表达(0.31±0.07)、IL-4 mRNA的表达(2.53±0.70)均明显降低(P<0.01)。初发GD组患者PBMC中Th17细胞百分率与ROR-γt mRNA表达呈正相关(r=0.5047,P=0.01);与IFN-γmRNA表达量呈负相关(r=-0.5085,P<0.01);与IL-4 mRNA表达量呈负相关(r=-0.5372,P<0.01)。正常对照组甲状腺组织中未发现IL-17+细胞,GD组甲状腺组织滤泡间质内可见散在的IL-17+细胞。结论:初发GD患者PBMC中Th17细胞数量、PBMC分泌IL-17的水平和ROR-γt mRNA表达明显增高。GD患者甲状腺组织中有IL-17+细胞浸润,提示Th17细胞可能参与了中国人GD的发生。     

MicroRNA‐155 may be involved in the pathogenesis of atopic dermatitis by modulating the differentiation and function of T helper type 17 (Th17) cells

Our aims were to identify the differential expression of microRNA (miR)‐155, as well as to explore the possible regulatory effects of miR‐155 on the differentiation and function of T helper type 17 (Th17) cells in atopic dermatitis (AD). The Th17 cell percentage and expression levels of miR‐155, retinoic acid‐related orphan receptor (ROR)γt, interleukin (IL)‐17 and suppressor of cytokine signalling‐1 (SOCS1) in peripheral CD4⁺ T cells, plasma and skin specimens were detected and compared in AD patients and healthy subjects. A miR‐155 mimic and an inhibitor were transfected separately into AD CD4⁺ T cells to confirm the in‐vivo data. The Th17 cell percentage, miR‐155 expression, RORγt mRNA expression, IL‐17 mRNA expression and plasma concentration were increased significantly in AD patients compared with healthy subjects. Conversely, SOCS1 mRNA expression and plasma concentration were decreased significantly. Similar results were detected in cultured CD4⁺ T cells transfected with the miR‐155 mimic compared with a miR‐155 inhibitor or a negative control. Additionally, there was a sequential decrease in miR‐155 expression, as well as RORγt and IL‐17 mRNA expression, but an increase in SOCS1 mRNA expression, from AD lesional skin and perilesional skin to normal skin. Positive correlations were found between miR‐155 expression and AD severity, Th17 cell percentage, RORγt mRNA expression and IL‐17 mRNA expression and plasma concentration, while negative correlations were observed between miR‐155 expression and SOCS1 mRNA expression and plasma concentration in AD peripheral circulation and skin lesions. In conclusion, miR‐155 is over‐expressed and may be involved in AD pathogenesis by modulating the differentiation and function of Th17 cells.     

尿毒症患者外周Th17/Treg细胞变化与机体微炎症状态的关系

目的: 通过研究尿毒症患者外周血维甲酸相关孤儿受体γt (RORγt)和叉头框P3蛋白(Foxp3)mRNA的表达,明确调节性T细胞(Treg细胞)和辅助性T细胞17(Th17细胞)在尿毒症患者中的变化情况,探讨这种变化与尿毒症患者微炎症状态的关系。方法: 选取尿毒症患者30例,其中未接受透析治疗的10例,维持性血液透析患者20例,年龄及性别相匹配的健康志愿者20例。采用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-PCR)、酶联免疫吸附测定(ELISA)和免疫透射比浊法检测外周血RORγt和Foxp3 mRNA的表达、血浆白细胞介素6(IL-6)、IL-17、IL-10和高敏C反应蛋白(hs-CRP)的浓度及其相关性,并分析Treg细胞与Th17细胞的平衡性变化。结果: 与健康对照组相比,尿毒症组RORγt mRNA表达量、IL-6、IL-17和hs-CRP显著上升(P<0.05),而Foxp3 mRNA表达量和IL-6明显下降(P<0.05)。未接受透析治疗与维持性血液透析患者之间,上述指标无显著差异。同时,RORγt与hs-CRP存在正相关,而Foxp3与hs-CRP存在负相关。结论: Treg细胞与Th17细胞在尿毒症患者体内存在不平衡性,这种不平衡性与尿毒症患者微炎症状态有关。     

Differentiation Imbalance of Th1/ Th17 in Peripheral Blood Mononuclear Cells Might Contribute to Pathogenesis of Hashimoto’s Thyroiditis

T helper 17(Th17) cell is a new subset of CD4⁺ T cells that produce a proinflammatory cytokine interleukin‐17 (IL‐17). Th17 cells have recently been shown to play a critical role in many autoimmune diseases that had previously been thought to be Th1 dominant. Although Hashimoto’s thyroiditis (HT) was thought to be a Th1‐type disease, the contributions of Th17 cells to the pathogenesis remain unclear. In this study, we investigated the expression levels of Th1/Th17 cell‐associated factors in peripheral blood mononuclear cells (PBMC) and plasma from patients with HT by quantitative real‐time polymerase chain reaction (RT‐qPCR) and enzyme‐linked immunosorbent assay (ELISA). Our results showed that the expression levels of Th1 cells‐related T‐bet and interferon‐γ (IFN‐γ) mRNA in PBMC from HT significantly decreased. However, the mRNA of Th17 coherent retinoic acid‐related orphan nuclear receptor gamma t (RORγt) and IL‐17 in patients with HT increased. In addition, a negative correlation between T‐bet and RORγt mRNA expression was found in patients with HT, and the similar phenomena also appeared on the levels of mRNA and plasma concentration between IFN‐γ and IL‐17. It suggested that Th17 cells rather than Th1 cells predominated among patients suffering from HT, and Th17 cells might be involved in the pathogenesis of HT.