丹参酮Ⅱ A联合NK细胞杀伤急性髓系白血病细胞的机制研究

目的 探讨丹参酮ⅡA联合自然杀伤（NK）细胞对急性髓系白血病细胞杀伤作用的机制。方法 采用浓度分别为0、8、16、32、64μmol/L的丹参酮ⅡA处理NK细胞和HL-60细胞,用噻唑蓝（MTT）实验检测细胞增殖变化。钙黄绿素-AM释放法检测杀伤率;酶联免疫吸附法（ELISA）法检测肿瘤坏死因子α(TNF-α)、干扰素γ(IFN-γ)含量;流式细胞术检测NKG2D配体MICA、MICB、ULBP1及ULBP2表达率。结果 丹参酮ⅡA呈剂量效应抑制急性髓系白血病细胞增殖、促进NK细胞增殖,丹参酮ⅡA浓度为32μmol/L增殖率较高。丹参酮ⅡA+NK细胞组的杀伤率较丹参酮ⅡA组、NK细胞组明显增加。丹参酮ⅡA+NK细胞+HL-60细胞组的TNF-α、IFN-γ含量较丹参酮ⅡA+NK细胞组、NK细胞+HL-60细胞组、NK细胞组明显增加;丹参酮ⅡA+NK细胞、NK细胞+HL-60细胞组的TNF-α、IFN-γ含量较NK细胞组明显增加。丹参酮ⅡA+HL-60细胞组的NKG2D配体MICA、MICB、ULBP1、ULBP2表达率较HL-60细胞组明显增加。结论 丹参酮ⅡA联合NK细胞对急性髓系白...     

坎地沙坦阻断血管紧张素Ⅱ介导的原代急性髓样白血病细胞增殖的作用及机制

目的: 观察血管紧张素Ⅱ 1型受体(AT1R)拮抗剂坎地沙坦抑制血管紧张素Ⅱ(Ang Ⅱ)介导的原代急性髓样白血病(AML)细胞增殖的作用及机制。方法: MTT法观察Ang Ⅱ对原代AML细胞、正常骨髓单个核细胞增殖的影响以及坎地沙坦和AT2R拮抗剂 PD123319对AngII促原代AML细胞增殖的拮抗作用; Western blotting法观察坎地沙坦和PI3K抑制剂对原代AML细胞Akt磷酸化的影响。结果: AngII能剂量和时间依赖性促进原代AML细胞增殖(P<0.05),而对正常骨髓无此作用。坎地沙坦随浓度和时间依赖性阻断Ang II作用下白血病细胞增殖(P<0.05)。PI3K抑制剂可抑制Ang II促进原代AML细胞的增殖(P<0.05),坎地沙坦能明显下调Ang II增加原代AML细胞Akt的磷酸化水平(P<0.05)。结论: 坎地沙坦通过抑制PI3K/Akt信号转导途径抑制Ang II/AT1R介导的白血病细胞增殖。     

Hedgehog信号通路抑制剂GANT61对急性髓系白血病细胞增殖和凋亡的影响

目的:探讨以Gli为靶点的hedgehog信号通路抑制剂GANT61对人急性早幼粒细胞白血病细胞HL-60增殖和凋亡的作用及机制。方法:采用CCK-8法观察不同浓度GANT61对HL-60细胞生长增殖的影响;Annexin V-FITC/PI双染检测GANT61对HL-60细胞凋亡的影响;RT-PCR检测48 h时HL-60细胞中gli1、bcl-2、bcl-xl mRNA表达;免疫荧光检测48 h时HL-60细胞中Gli1蛋白表达。结果:GANT61呈时间和浓度依赖性抑制HL-60细胞增殖;GANT61呈浓度和时间依赖性诱导HL-60细胞凋亡;GANT61呈浓度依赖性抑制gli1、bcl-2、bcl-xl mRNA表达;GANT61呈浓度依赖性抑制Gli1蛋白表达。结论:GANT61通过抑制Hedgehog-gli信号通路进而下调bcl-2和bcl-xl基因的表达,对人急性髓系白血病细胞HL-60起抑制增殖,并诱导其凋亡作用。     

下调miR-21 抑制PI3K / AKT 信号通路对白血病细胞增殖凋亡的影响

目的:探讨miR-21 对白血病K562 细胞增殖凋亡的影响及对PI3K/ AKT 信号通路的调控作用。方法:将K562 细胞分为对照组、miR-21 NC 组和miR-21 干扰组,对照组不做处理,后两组采用阳离子脂质体LipofectamineTM2000 转染miR-21 inhibitor 和miR-21 negative control。转染48 h 后,利用实时荧光定量(qRT-PCR)检测各组细胞中miR-21 mRNA 的表达情况,采用MTT 比色法检测miR-21 对细胞增殖率的影响,流式细胞仪检测miR-21 对细胞周期和凋亡率的影响,蛋白质免疫印迹法(Western blot)检测miR-21 对各组细胞中PI3K/ AKT 信号通路相关蛋白PI3K、AKT 和p-AKT 表达的影响。结果:miR-21 干扰组中细胞的miR-21 mRNA 表达水平和细胞的存活率较对照组和miR-21 NC 组均明显降低;与对照组和miR-21 NC 组比较,流式细胞仪检测miR-3 干扰组中G0/ G1 期所占细胞比例明显升高,S 期细胞所占比例明显下降,细胞的凋亡率明显升高。Western blot 检测p-AKT 的表达水平较对照组和miR-21 NC 组明显下降,但PI3K 和AKT 蛋白的表达水平变化不大。结论:下调miR-21 能够抑制白血病K562 细胞的增殖,促进其凋亡,其作用机制可以与抑制PI3K/ AKT 信号通路有关。     

重楼皂苷Ⅵ诱导急性髓系白血病THP-1细胞凋亡机制研究

目的探究重楼皂苷Ⅵ对人急性髓系白血病THP-1细胞增殖和凋亡的影响及机制。方法采用CCK8实验考察重楼皂苷Ⅵ对THP-1细胞活力的影响,并确定给药剂量。流式细胞术检测重楼皂苷Ⅵ对THP-1细胞凋亡的影响。Western blot进一步检测细胞凋亡与p38 MAPK通路相关蛋白的变化,通过p38抑制剂SB203580验证THP-1细胞中上述通路与凋亡的关系。结果一定剂量的重楼皂苷Ⅵ能抑制THP-1细胞增殖且抑制效应呈浓度依赖与时间依赖性。流式细胞术显示,与对照组比较,给药组细胞凋亡率明显升高(P<0.05)。Western blot进一步表明,随着药物浓度增加,cleaved caspase-3与Bax蛋白表达增多,Bcl-2蛋白表达下降,p-p38/p38比值增加(P<0.05),上述作用可被p38 MAPK抑制剂SB203580阻断。CCK8实验结果显示,抑制p38通路可降低药物导致的细胞增殖抑制。结论重楼皂苷Ⅵ可抑制急性髓系白血病THP-1细胞增殖并通过p38 MAPK通路诱导细胞凋亡。     

白藜芦醇对糖尿病大鼠血管平滑肌细胞凋亡的影响及其机制研究

目的:探索白藜芦醇对糖尿病大鼠血管平滑肌细胞凋亡的影响及其调控机制。方法:实时定量PCR (qRT-PCR)检测血清中单核细胞趋化蛋白鄄1 (MCP1)、巨噬细胞移动抑制因子(MIF)和白细胞介素18(IL-18)的mRNA 水平;HE 染 色和Masson 染色评价心肌纤维化水平;流式细胞术分析细胞凋亡;蛋白印迹检测Cleaved caspase-3、Cleaved caspase-9、B 淋巴 瘤2 蛋白(Bcl-2)、Bcl-2 相关蛋白X(Bax)、PI3K、p-PI3K、AKT、p-AKT 蛋白表达。结果:白藜芦醇可降低STZ 诱导的糖尿病大 鼠血清MCP-1、MIF 和IL-18 的mRNA 水平并改善心肌纤维化加剧。STZ 诱导糖尿病组血管平滑肌细胞凋亡率明显高于对照 组(P<0.05)。与STZ 诱导糖尿病组相比,STZ+白藜芦醇组血管平滑肌细胞凋亡率明显降低(P<0.05)。而且,白藜芦醇可抑 制STZ 诱导的糖尿病大鼠血管平滑肌细胞Cleaved caspase-3、Cleaved caspase-9 和Bax 蛋白表达,提高Bcl-2 表达(P<0.05)。 与对照组相比,STZ 诱导糖尿病组血管平滑肌细胞中p-PI3K/ PI3K 和p-AKT/ AKT 比率明显降低(P<0.05)。STZ+白藜芦醇组 血管平滑肌细胞p-PI3K/ PI3K 和p-AKT/ AKT 比率明显高于STZ 诱导糖尿病组(P<0.05)。结论:白藜芦醇可通过激活PI3K/ AKT 信号通路抑制STZ 诱导的糖尿病大鼠血管平滑肌细胞凋亡。     

急性髓系白血病干细胞研究进展

急性髓系白血病干细胞多数亚型的干细胞具有相似的免疫表型(CD34+、Cd38-、CD90-、CD117-、CD123+),表达核因子NF-KB。急性髓系白血病干细胞对化疗和放疗均不敏感,是急性髓系白血病复发的原因之一。选择急性髓系白血病干细胞高表达的抗原CD123或核因子NF-KB,作为清除急性髓系白血病干细胞或诱导急性髓系白血病干细胞凋亡的标记,是探索彻底治愈急性髓系白血病的最佳途径。     

急性髓系白血病淋系抗原的表达及其意义

<正>自1993年以来,我们用单克隆抗体(McAb)对40例急性髓系白血病(AML)的白血病细胞免疫表型进行了检测.1 材料和方法1.1 病例和标本 40例AML均系我院住院患者,都为初发病例;男性21例,女性19例;年龄13～71岁;按FAB分型标准,M_16例,M_2.9例,M_39例,M_47例,M_5 9例.检测标本多数为化疗开始前抽取的骨髓,少数为外周血.1.2 检测方法 间接免疫荧光法,荧光阳性细胞≥0.20作为阳性指标.实验中采用的McAb有:CD2、CD3、CD4、CD7、CD8、CD10、CD11b、CD13、CD14、CD15、CD19、CD20、CD22、CD33、CD34、CD41b、HLA-DR、μ、SmIg等.McAb分别购自军事医学科学院和中国医学科学院血液学研究所.     

miRNA130a调控HCV复制的机制研究

目的探讨miRNA130a调控HCV复制的作用与机制。方法将Huh7.5.1细胞随机分为4组,正常组不予任何处理,感染组、实验组、NC组建立HCV感染模型;实验组在进行HCV感染前2 h在Huh7.5.1细胞内转染MiRNA130a mimic 100 nmol/L;NC组在HCV感染前2 h,加入等体积的无效miRNA。qRT-PCR法检测miRNA表达与HCV复制情况,CCK-8法检测细胞存活率,双染法检测细胞凋亡,Western blotting法检测细胞蛋白表达。结果感染组的MiRNA130a表达量低于正常组,实验组高于感染组,差异有统计学意义(P<0.05)。感染组的细胞存活率低于正常组,实验组的细胞存活率高于感染组;感染组的HCV复制水平高于正常组,实验组的HCV复制水平低于感染组,差异都有统计学意义(P<0.05)。感染组、实验组、NC组的细胞凋亡率高于正常组(P<0.05),感染组的细胞凋亡率最高(P<0.05)。感染组的PTEN、AKT蛋白表达水平高于正常组,实验组的PTEN、AKT蛋白表达水平低于感染组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论MiRNA130a可抑制PTEN/PI3K/AKT信号通路,抑制HCV RNA的复制,降低细胞凋亡水平,提高细胞存活率。     

胡椒碱对卵巢癌细胞株SKOV-3侵袭与凋亡的影响及其机制

目的:观察胡椒碱对卵巢癌细胞株SKOV-3的侵袭与凋亡的影响并讨论其作用机制.方法:CCK-8法检测不同浓度的胡椒碱(0,5,10和20μmol/L)对SKOV-3细胞作用不同时间(12,24和36 h)后,SKOV-3细胞存活率的变化;Transwell小室法与TUNEL法分别检测SKOV-3细胞侵袭能力与凋亡能力的变化;Western印迹检测p-PI3K与p-Akt蛋白表达水平的变化.结果:CCK-8法结果显示胡椒碱随浓度增加与培养时间增长,对SKOV-3细胞存活率的抑制程度增强;采用10μmol/L胡椒碱培养SKOV-3细胞36 h后,SKOV-3细胞的细胞侵袭数明显降低,细胞凋亡数明显增加,差异有统计学意义(P<0.05);p-PI3K与p-Akt蛋白表达水平明显降低,差异有统计学意义(P<0.05).结论:胡椒碱能够抑制卵巢癌细胞SKOV-3的增殖与侵袭能力,其增加凋亡能力可能与抑制PI3K/Akt信号通路有关.     

BCL6B对人结直肠癌LoVo细胞增殖和迁移的影响及机制

目的:研究B细胞白血病/淋巴瘤6B(BCL6B)在人正常肠上皮细胞FHC及结直肠癌细胞LoVo中的表达水平及BCL6B对LoVo细胞增殖和迁移的影响,并探讨其相关分子机制。方法:采用RT-PCR及Western blot检测FHC细胞和LoVo细胞中BCL6B的内源性表达;用脂质体法将重组质粒pc DNA3.1-BCL6B转入LoVo细胞,运用MTT、集落形成、细胞划痕及Transwell小室实验检测BCL6B对LoVo细胞增殖和迁移的影响,采用RT-PCR及Western blot检测细胞周期蛋白D1(cyclin D1)和基质金属蛋白酶9(MMP-9)的表达,Western blot检测蛋白激酶B(AKT)的磷酸化水平。结果:与正常肠上皮细胞FHC相比,BCL6B在LoVo细胞中呈明显低表达;转染pc DNA3.1-BCL6B后的LoVo细胞内BCL6B水平显著增高。过表达BCL6B的实验组细胞72 h的增殖活性及划痕愈合力分别较对照组降低28.33%(P0.01)和36.11%(P0.05)。实验组细胞cyclin D1和MMP-9的m RNA水平分别降低39.90%(P0.01)和77.36%(P0.05),同时cyclin D1、MMP-9和磷酸化蛋白激酶B(p-AKT)的蛋白水平分别降低44.00%(P0.05)、47.06%(P0.01)和32.88%(P0.05)。结论:BCL6B可抑制结直肠癌LoVo细胞的增殖和迁移,其机制可能涉及PI3K/AKT信号通路的抑制。     

急性髓系白血病FLT3-ITD基因突变分析

目的:探讨初发急性髓系白血病(AML)患者FLT3-ITD基因突变情况。方法:选择2015年3月1日~2017年6月1日四川省人民医院血液科收治的初发急性髓系白血病患者207例,取入组患者骨髓标本。采用PCR法检测FLT3-ITD基因的突变情况;采用染色体R显带技术在获得相应染色体后制片、显带,每份标本自动挑选出20个分裂相对清晰的核型完成核型分析,并结合临床资料、随访及预后等进行分析,评价FLT3-ITD基因突变在急性髓系白血病患者中的价值。结果:207例AML患者的标本中42例存在FLT3-ITD基因突变,阳性率为20.29%。FLT3-ITD阳性患者中有3条显示带;42例FLT3-ITD基因突变阳性患者结果表明FLT3-ITD基因突变多依次首尾相接,并且其中插入多个核苷酸,但是所有的突变均为框内突变;根据FAB标准及WHO标准分级,42例FLT3-ITD阳性患者中M0占0.00%,M1占2.38%(1/42)、M2占23.81%(10/42)、M3占0.00%、M4占2.38%(1/42)、M5占69.05%(29/42)、M6占0.00%、M7占2.38%(1/42);FLT3-ITD阳性患者的白细胞(WBC)水平和完全缓解(CR)率均低于FLT3-ITD阴性患者(P0.05)。结论:FLT3-ITD基因突变阳性患者的WBC水平和CR率低于阴性患者,能作为临床危险因素用于AML患者预后的判断。     

阿魏酸通过调节PTEN/PI3K/AKT信号通路抑制急性T淋巴细胞白血病进展

目的 探究阿魏酸是否可通过调控PTEN/PI3K/AKT信号通路在体内外抑制急性T淋巴细胞白血病进展。方法将急性T淋巴细胞白血病Jurkat细胞分为对照组、阿魏酸处理组和LY294002处理组进行体外实验,对照组正常培养;阿魏酸处理组分别给予不同浓度（1.25、2.5、5、10、20、40、80、160μmol/L）阿魏酸,采用CCK-8法检测细胞增殖能力,筛选实验浓度;LY294002处理组给予50μmol/L PI3K/AKT抑制剂LY294002,采用克隆形成实验、流式细胞术、Transwell实验检测细胞增殖、凋亡、侵袭情况,采用Western blot检测核蛋白Ki67、增殖细胞核抗原（PCNA）、cleaved caspase-3、cleaved caspase-9、E-cadherin、N-cadherin、Vimentin、PTEN、p-PI3K、PI3K、p-AKT和AKT蛋白相对表达量。使用30只雄性BALB/c裸鼠建立移植瘤裸鼠模型,平均分为正常组和阿魏酸处理组进行体内实验,正常组接种Jurkat细胞后以生理盐水灌胃,阿魏酸处理组接种Jurkat细胞后以75 mg...     

胃癌中LINC00659的表达及其通过调控PI3K/AKT信号通路影响胃癌细胞增殖

目的 探讨LINC00659在胃癌组织及胃癌细胞中的表达,并探讨其通过调控PI3K/AKT信号通路影响胃癌细胞增殖的分子机制。方法 采用qRT-PCR法检测LINC00659在胃癌组织及人胃癌细胞株中的表达情况;构建慢病毒介导LINC00659敲减或过表达胃癌细胞株模型,qRT-PCR法检测转染效率;CCK-8法检测LINC00659对胃癌细胞增殖能力的影响;克隆形成实验检测细胞集落形成能力;Western blot法检测敲减或过表达LINC00659后胃癌细胞中Ki-67、PCNA、PI3K和p-AKT蛋白表达水平。结果 LINC00659在胃癌组织和人胃癌细胞株中高表达(P<0.01);qRT-PCR结果显示,慢病毒感染胃癌细胞后,成功敲减或过表达LINC00659(P<0.01);CCK-8法结果显示：敲减LINC00659显著抑制胃癌AGS细胞的增殖活力,过表达LINC00659促进HGC-27细胞增殖活力(P<0.05);克隆形成实验结果显示,敲减LINC00659抑制AGS细胞的集落形成能力,过表达LINC00659促进胃癌HGC-27细胞集落形成能力(P...     

山苍子油对乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖和凋亡的影响及其可能机制的研究

目的:研究山苍子油对体外培养的人乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖和凋亡的影响及可能机制.方法:CCK-8比色法和流式细胞术(FCM)分别检测山苍子油对MDA-MB-231细胞增殖和凋亡的影响;Western blot方法检测经山苍子油作用后MDA-MB-231细胞凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2、caspase-3、E...     

MicroRNA-26a的表达对急性髓系白血病细胞增殖的影响

目的观察构建has-miR-26a重组慢病毒的表达载体对急性髓系白血病细胞增殖能力的影响。方法构建人MicroRNA-26a慢病毒表达载体(LV-miR-26a-GFP)并感染人急性髓系白血病细胞系NB4;分为未感染组、感染组(感染LV-miR-26a-GFP)以及阴性对照组(感染LV-GFP);用real-time RT-PCR检测miR-26a在NB4细胞内的表达水平,Western blot检测PTEN的表达;用CCK-8法绘制细胞的生长曲线和软琼脂克隆形成实验检测细胞的增殖。结果成功构建miR-26a重组慢病毒的表达载体,感染白血病细胞NB4后,能够成功过表达miR-26a。生长曲线的结果显示与感染LV-GFP阴性对照组和未感染组相比,LV-miR-26a-GFP感染组细胞的增殖速度显著增加(P<0.01),软琼脂克隆形成实验证实了感染LV-miR-26a-GFP的NB4细胞的克隆形成能力(GFP+克隆数为75+10)与阴性对照组(感染LV-GFP)相比(GFP+克隆数为26+5)显著增强(P<0.05)。在NB4细胞中过表达miR-26a后,其靶基因PTEN的表达明显被抑制。结论 MicroRNA-26a的表达可增强急性髓系白血病细胞的增殖能力,促进白血病细胞的增殖。     

交叉表达髓系和淋系相关抗原急性白血病的免疫学及临床特征研究

交叉表达淋系和髓系相关抗原的急性白血病（AL）包括伴有髓系抗原阳性的急性淋巴细胞性白血病（My^＋ -ALL）、伴有淋系抗原阳性的急性髓细胞性白血病（Ly^＋ -AML）及多系表达（即同时表达T、B及髓系三系以上的抗原）。而多系表达是AL免疫分型中的少见类型，国内外报道甚少。本研究对以上几种类型AL的表达特征及意义做简要分析，以利于今后白血病的诊治。[第一段]     

急性髓系白血病中DLX4基因异构体的差异性表达及其临床相关性分析

目的 探索DLX4基因异构体在急性髓系白血病(acute myeloid leukemia,AML)中的表达与甲基化态势及其临床意义.方法 采用RT-qPCR法检测37例健康骨髓捐献者(对照组)、8例人白血病细胞株及153例AML患者骨髓单个核细胞中DLX4基因异构体(BP1及DLX7)表达及甲基化水平,并分析其临床意...     

急性髓系白血病中CD64表达的敏感性及特异性研究

研究急性髓系白血病(AML)免疫分型中CD64的敏感性和特异性.用系列抗原对132例AML患者的骨髓细胞进行直接标记,并用流式细胞术进行分析.结果表明:在AML中,CD64对急性粒-单细胞白血病(M4)和急性单核细胞白血病(M5)中敏感性最高(分别为96.4%和100%),在其他AML(M0、M1、M2、M3,M6、M7)中表达均较低.CD64对M4和M5中的特异性为56.5%.因此,CD64有助于AML中M4、M5的鉴别诊断.