Antagomir-30d对大鼠骨髓基质干细胞成骨分化的影响

目的：探讨miR-30d拮抗剂（antagomir-30d）正性调控大鼠骨髓基质干细胞（BMSCs）的成骨分化作用并确认转染的最佳浓度。方法：BMSCs培养并分组，分为不同浓度的antagomir-30d（antagomir-30d组）、阴性对照（NC组）和未做转染的BMSCs（空白组）；将不同浓度的antagomir-30d及其NC转染至BMSCs后进行成骨诱导。通过RT-PCR技术进行比较，测定成骨基因碱性磷酸酶（ALP）、骨钙素（OC）、Runt相关转录因子2（RUNX2）的mRNA的表达情况，并确定最佳转染浓度及其转染效率。通过ALP染色验证antagomir-30d对成骨分化的调控作用。结果：RT-PCR结果表明，antagomir-30d体外可以促进BMSCs的成骨分化。不同浓度antagomir-30d组的成骨基因表达量随浓度变化而改变，当antagomir-30d转染浓度为150 nmol/L时，ALP、OC、RUNX2的mRNA水平均显著高于空白组和NC组（P＜0.05）。Antagomir-30d的转染最佳浓度为150 nmol/L，此时ALP染色结果显示其活性最高，成骨分化作用好。结论：Antagomir-30d体外正性调控BMSCs的成骨分化，其转染至BMSCs的最佳浓度为150 nmol/L。     

嘌吗啡胺靶向激活Hedgehog信号 通路调控骨髓来源间充质干细胞 成骨-成脂分化平衡的机制研究

目的 探讨小分子药物嘌吗啡胺（PM）靶向激活 Hedgehog（Hh）信号通路后对骨髓来源间充质干细胞（BMSCs）成骨-成脂分化平衡的影响及其机制。 方法 通过细胞计数试剂盒-8 法评估 PM 对 BMSCs 增殖的细胞毒性,并通过检测 不同浓度 PM 处理下 BMSCs 细胞内 Gli1 转录水平,选择合适的 PM 处理浓度。随后通过诱导 BMSCs 成骨、成脂分化,检测 ALP 表达（ALP 染色）、钙结节（Von Kossa 矿化结节染色法）评估 PM 对 BMSCs 成骨诱导的影响,采用油红 O 染色检测 PM 对 BMSCs 成脂诱导的影响。最后通过 qRT-PCR 法验证 PM 干预下 BMSCs 成骨-成脂分化过程中相关核心转录因子、特征基因的变 化。 结果 10 μmol/L 及以下浓度的 PM 对 BMSCs 增殖无明显毒性反应,并且 2 μmol/L PM 即可显著激活 BMSCs 细胞内 Hh 信 号通路（P＜0.01）。在 2 μmol/L PM 干预下,BMSCs 成骨分化诱导时 ALP 表达、钙结节形成较对照组显著增强,而成脂分化诱 导时脂滴的形成受到了明显的抑制。在此基础之上,qRT-PCR 结果提示 2 μmol/L PM 可明显促进 BMSCs 成骨分化过程中核 心转录因子 Sp7 以及特征性基因 ALP、整合素结合唾液酸蛋白（Ibsp）的转录,并抑制成脂分化过程中核心转录因子过氧化物酶 体增殖物激活受体 γ（Pparg）、CCAAT 增强子结合蛋白 α（Cebpa）以及特征基因围脂滴蛋白 1（Plin1）、脂联素（Adipoq）、脂肪 酸转位酶（Cd36）的转录。 结论 PM 可通过激活 Hh 信号通路,调控成骨-成脂分化相关核心转录因子,促进 BMSCs 成骨分化 并抑制其成脂分化。     

雷奈酸锶通过骨形态发生蛋白-2/Smad通路促进骨髓间充质干细胞成骨分化

目的探讨骨形态发生蛋白-2（BMP-2）/Smad通路在雷奈酸锶（Sr）促进大鼠骨髓间充质干细胞（BMSCs）分化为成骨细胞
过程中的作用。方法体外分离培养大鼠BMSCs,根据实验目的加入不同浓度Sr、BMP-2 的拮抗剂noggin 及Smad1 小干扰
RNA（SiRNA）。酶标法检测碱性磷酸酶（ALP）活性,茜素红染色检测钙结节,Western blotting法检测磷酸化Smad1/5/8及Runt
相关转录因子-2（Runx2）蛋白的表达。结果应用0.1~10 mmol/L Sr处理BMSCs细胞1 h后,细胞内磷酸化Smad1/5/8表达增
高,其中浓度为1 mmol/L时,表达达到高峰;在Sr处理BMSCs前,应用BMP-2拮抗剂noggin预处理细胞2 h能抑制Sr对磷酸化
Smad1/5/8表达的上调作用;应用0.1~5 mmol/L Sr处理细胞6 h后,细胞内Runx2表达增高,其中浓度为1 mmol/L时,表达达到
高峰;在Sr处理BMSCs前,应用Smad1 SiRNA转染细胞后能下调Smad1/5/8、磷酸化Smad1/5/8的表达,并抑制Sr对Runx2表
达的上调作用,还拮抗Sr对ALP活性及钙化结节形成的促进作用。结论BMP-2/Smad通路参与了Sr促进BMSCs成骨分化。
     

鸢尾素对静态和牵张力作用下BMSCs成骨向分化的研究

目的：在静态及牵张力作用下,研究鸢尾素（irisin）对大鼠骨髓间充质基质细胞（bone marrow mesenchymal stromal cells,BMSCs）成骨向分化的影响。方法：分离培养原代大鼠BMSCs,应用四点弯曲加力系统建立体外细胞牵张模型。通过碱性磷酸酶（alkaline phosphatase,ALP）活性检测在静态及牵张力作用下,不同浓度的鸢尾素对BMSCs成骨向分化的影响并筛选最适鸢尾素浓度。实验分组如下：A,对照组;B,鸢尾素组（100 ng/mL鸢尾素）;C,牵张力组（2 000 με牵张力）;D,鸢尾素+牵张力组（100 ng/mL 鸢尾素+2 000 με 牵张力）。细胞计数法检测各组细胞增殖情况,通过定量逆转录PCR（qRT-PCR）及Western blot检测成骨相关mRNA及蛋白的表达,并检测P38、ERK1/2 MAPK通路表达。采用SPSS 20.0软件对数据进行统计学分析。结果：ALP活性检测结果示,在静态及牵张力作用下,鸢尾素浓度为100 ng/mL时,BMSCs的ALP活性显著升高（P<0.01）。细胞增殖检测结果示,与对照组相比,鸢尾素+牵张力组可促进BMSCs的增殖（P<0.05）。qRT-PCR结果示,鸢尾素+牵张力可促进成骨标志物Runx2、ALP、 COL-Ⅰ、OPN表达的升高（P<0.05）。Western blot结果示,鸢尾素+牵张力可促进Runx2蛋白表达的升高（P<0.05）。此外,鸢尾素+牵张力联合作用促进BMSCs增殖与成骨向分化的机制可能与P38、ERK1/2 MAPK通路的激活有关。结论：鸢尾素对静态和体外牵张力作用下BMSCs增殖及成骨向分化具有促进作用,此效应可能通过P38、ERK1/2 MAPK通路发挥作用。     

富血小板血浆对骨髓间充质干细胞向成骨细胞定向分化的影响

目的 观察富血小板血浆（platelet-rich plasma,PRP）对兔源骨髓间充质于细胞（bone mesenchymal stem cells,BMSCs）定向分化为成骨细胞的作用及机制. 方法 离心法分离兔骨髓后,体外培养BMSCs,体积分数5％和10％的PRP与BMSCs共培养,观察BMSCs诱导分化过程中茜素红染色阳性率,应用酶标仪检测碱性磷酸酶（alkaliphosphatase,ALP）活性,应用ELISA法检测BMSCs诱导分化过程中骨钙素（osteocalcin,OCN）及结缔组织生长因子（connective tissue growth factor,CTGF）的含量,应用real time-PCR检测成骨相关基因CTGF、ALP、成骨细胞核心结合因子α1（core-binding factor alpha 1,Cbf-α1）、兔Ⅰ型胶原（Col-Ⅰ）和OCN的表达. 结果 BMSCs诱导分化后细胞茜素红染色阳性率、ALP活性、OCN及CTGF含量升高,CT-GF、ALP、Cbf-α1、Col-Ⅰ和OCN的mRNA表达增加. 结论 PRP可促进BMSCs向成骨细胞分化,可能与PRP促进BMSCs中CTGF、ALP、Cbf-α1、Col-Ⅰ和OCN表达有关.     

胶体金对MC3T3-E1增殖、分化及RUNX2基因表达的影响

目的研究30nm胶体金对小鼠成骨细胞系MC3T3-E1增殖、分化及成骨相关基因RUNX2表达的影响。方法体外培养小鼠成骨细胞MC3T3-E1,在仪-MEM培养液中加入不同体积的胶体金处理细胞,利用M1Tr法检测胶体金对成骨细胞增殖活性的影响,碱性磷酸酶活性测定及RT—PCR法分别检测其对成骨细胞分化及成骨相关基因RUNX2表达的影响。结果浓度为10^（-10）、10^（-11）、10^（-12）mg／L的胶体金均促进成骨细胞的增殖,且ALP相对活性及RUNX2基因表达也均高于阳性对照组。结论30nm胶体金能促进小鼠前成骨细胞系MC3T3-E1增殖、分化及成骨相关基因RUNX2的表达,进而促进成骨。     

雷公藤多苷对强直性脊柱炎患者成纤维细胞中BMP-2表达的影响

目的：探讨雷公藤多苷（LGTDG）对骨形态发生蛋白(BMP)信号转导通路及BMP-2表达的影响,阐明LGTDG抗强直性脊柱炎（AS）骨化的作用机制。方法：体外培养的AS成纤维细胞分为对照组与0.5、 1.0、 1.5和2.0 mg/L 给药组,检测各组细胞内碱性磷酸酶(ALP)活性及最佳药物浓度;CCK-8法检测1.0 mg/L给药组的细胞增殖率;生化检测法定量检测对照组与1.0 mg/L 给药组BMP-2表达水平;Western blotting法检测对照组与1.0 mg/L给药组BMP-2和Cbfal蛋白表达。结果：各给药组细胞中ALP活性均低于对照组,其中以1.0 mg?L-1 给药组细胞的ALP活性为最低(P<0.01)。CCK-8法检测,1.0 mg/L 给药组AS成纤维细胞增殖率明显低于对照组(P<0.01),LDTDG诱导第4天细胞增殖率最高,进入平台期后细胞的增殖率开始下降。生化检测法和Western blotting法检测,1.0 mg/L给药组BMP-2的蛋白表达明显低于对照组(P<0.01)。结论：LGTDG通过对BMP信号转导通路的影响有效地抑制AS成纤维细胞内BMP-2表达,延缓细胞向成骨型分化导致AS骨化发生。     

PPARγ通路对模拟微重力条件下大鼠骨髓间充质干细胞向成骨细胞分化的影响

目的观察过氧化物酶体增殖物激活受体γ（PPARγ）通路对模拟微重力条件下大鼠骨髓间充质干细胞（BMSC）向成骨细胞
分化的影响,并通过调节PPARγ信号通路开闭影响这一分化过程。方法以大鼠BMSCs作对象,以回转器模拟微重力效应。
将细胞随机分为5组,包括实验组：模拟微重力组、模拟微重力+10 μmol/L吡格列酮组、模拟微重力+10 μmol/L GW9662组、模
拟微重力+10 μmol/L吡格列酮+10 μmol/L GW9662组;对照组：正常重力组。体外成骨诱导14 d后,利用茜素红进行成骨结节
染色、油红-O进行脂肪细胞染色,并计算成脂率;测定各组细胞ALP活性;利用RT-PCR技术检测各组细胞PPARγmRNA表达水
平。结果吡格列酮明显抑制BMSCs向成骨细胞分化,GW9662通过抑制PPARγ的激活而增加BMSCs向成骨细胞分化。结
论推测PPARγ信号通路的激活是模拟微重力条件下抑制BMSCs向成骨细胞分化的主要因素之一,而通过抑制这条通路的激
活可以有效预防及治疗失重导致的骨质疏松症。
     

20(S)-原人参二醇对大鼠骨髓间充质干细胞成骨分化的影响及其机制

目的：探讨20(S)-原人参二醇(PPD)对大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)成骨分化的作用,并阐明其成骨诱导机制。方法：采用全骨髓法提取SD大鼠BMSCs,分为对照组和不同剂量(2.5、5.0、10.0、20.0和40.0 mg·L^-1) PPD组,采用CCK-8法检测各组BMSCs增殖活性,采用Calcein/PI染色法观察各组BMSCs存活情况,筛选合适浓度PPD用于后续实验。将BMSCs分为对照组和PPD组,于成骨诱导第7天,采用BCIP/NBT比色法进行碱性磷酸酶(ALP)染色并定量检测各组BMSCs中ALP活性;成骨诱导第21天,采用茜素红染色检测各组BMSCs中矿化结节形成情况并定量分析细胞矿化活性;成骨诱导第7天,采用实时荧光定量PCR (RT-qPCR)法检测各组BMSCs中ALP、1型胶原蛋白(COL^-1)、骨钙素(OCN)和Runt相关转录因子2 (Runx-2) mRNA表达水平,免疫荧光染色法检测各组BMSCs中Runx-2和OCN蛋白表达荧光强度。结果：PPD处理第1和3天,与对照组比较,40.0 mg·L     

异槲皮苷联合大鼠骨髓间充质干细胞促进大鼠骨折愈合

目的 探讨异槲皮苷通过促进骨髓间充质干细胞迁移和成骨分化对大鼠骨折愈合的影响。方法 体外实验：CCK 8检测骨髓间充质干细胞（BMSCs）增殖,Transwell实验检测BMSCs迁移,茜素红S染色检测BMSCs钙沉积,碱性磷酸酶(ALP)检测试剂盒检测BMSCs中ALP活性,Western blot检测runt相关转录因子2（Runx2）和骨钙素（OCN）蛋白表达;体内实验：40只骨折模型SD大鼠随机分为对照组、BMSC组、异槲皮苷组和BMSC+异槲皮苷组,每组10只。对照组大鼠尾静脉和腹腔注射PBS; BMSC组大鼠尾静脉注射2×106个BMSCs,腹腔注射PBS; 异槲皮苷组大鼠腹腔注射40 mg/kg异槲皮苷,尾静脉注射PBS; BMSC+异槲皮苷组尾静脉注射2×106个BMSCs,腹腔注射40 mg/kg异槲皮苷。X线摄影检测大鼠骨折情况,免疫组织化学检测骨痂组织OCN和Ⅰ型胶原蛋白（ColⅠ）的表达。结果 与对照组相比,异槲皮苷促进BMSC增殖,其中10 μmol/L效果最明显（P＜0.05）;与对照组相比,异槲皮苷（5μmol/L和10μmol/L）促进BMSCs迁移、钙沉积和ALP活性,促进BMSCs中Runx2和OCN蛋白表达（均P＜0.05）。体内实验中,与对照组及BMSC组相比,BMSC+异槲皮苷组大鼠在骨折2周后,骨折愈合评分、OCN和ColⅠ的表达升高（P＜0.05）;而BMSC组、异槲皮苷组与对照组相比,无明显差异（P＞0.05）。与对照组相比,BMSC组、异槲皮苷组和BMSC+异槲皮苷组大鼠在骨折3周后,骨折愈合评分升高,OCN和ColⅠ的表达升高（P＜0.01）;与BMSC组相比,BMSC+异槲皮苷组大鼠在骨折3周后,骨折愈合评分升高,OCN和ColⅠ的表达升高（P＜0.05）。结论 异槲皮苷通过促进大鼠骨髓间充质干细胞迁移和成骨分化促进大鼠骨折愈合。     

miR-144-3p在大鼠骨髓间充质干细胞成骨分化过程中的表达及其靶向调控作用

目的探讨在骨髓间充质干细胞成骨分化过程中,miR-144-3p表达的生理功能和作用机制,并预测其靶基因,为成骨细胞 分化的深入研究提供实验依据。方法采用大鼠骨髓间充质干细胞（BMSCs）,并在体外诱导间充质干细的成骨分化,通过 qRT-PCR 检测成骨分化标志基因（Runx2, OCN）以及miR-144-3p 的表达;通过向BMSCs 株转染miR-144-3p mimic 以及 miR-144-3p inhibitor,检测miR-144-3p 表达对BMSCs分化的影响,并通过Western blot 以及qRT-PCR检测miR-144-3p 靶蛋 白在RNA水平以及蛋白水平的表达变化。结果在体外诱导BMSCs成骨分化过程中,成骨分化标志基因（Runx2, OCN）的 表达量逐渐升髙,而miR-144-3p 的表达量则逐渐降低,到诱导成骨第21 天表达水平最低;检测各组ALP活性发现,相比于 对照组miR-144-3p mimics 转染组ALP活性显著降低（P<0.05）,miR-144-3p inhibitor 转染组ALP活性显著升高（P<0.05）;运 用多种靶基因预测数据库TargetScan、microRNA.org和miRanda对miR-144-3p进行靶基因的预测分析发现,smad4最可能是 miR-144-3p的靶基因;qRT-PCR结果表明,smad4在各组中的表达水平差异无统计学意义（P>0.05）;Western blot结果显示,smad4 在miR-144-3p mimics转染组表达显著下降,在miR-144-3p inhibitor转染组则显著升高,相比于对照组差异均有统计学意义（P< 0.05）。结论miR-144-3p参与调控大鼠BMSCs成骨分化,其抑制成骨分化的功能是通过降低smad4转录后的表达水平来实现。     

Effect of rhBMP-2 and Osteogenic Revulsants on Proliferation and Differentiation of Bone Marrow Stromal Cells in Rats

The effects of recombinant human bone morphogenetic protein-2 （rhBMP-2） and osteogenic revulsants alone or in combination at different time points and in different dosages on proliferation and osteogenesis of bone marrow stromal cells （BMSCs） in SD rats were investigated. Rat BMSCs were cultured in vitro and induced by rhBMP-2 in different dosages （10, 50, 100 and 200μg/L） alone or in combination with osteogenic revulsants. MTT colorimetric assay was used to evaluate The proliferation, activity of alkaline phosphoric （ALP） and osteocalcin were measured at 3rd, 6th, 9th, 12th day respectively. The results showed that rhBMP-2 and osteogenic revulsants could promote the differentiation of BMSCs towards osteoblast phenotype. The proliferation of BMSCs could be enhanced by rhBMP-2 in a dose-dependent manner. The expression of osteoblast phenotype was significantly higher by using both of them than by using them alone, which was verified by the activity of ALP and osteocalcin. It was suggested that the combined use of rhBMP-2 and osteogenic revulsants could promote the proliferation and simultaneously induce and maintain the expression of osteoblast phenotype of BMSCs in rats.     

地黄多糖对 SD大鼠骨髓间充质干细胞骨向诱导的实验研究

目的：观察地黄多糖对 SD 大鼠骨髓间充质干细胞（ bone marrow mesenchymal stem cells, BMSCs）增殖及骨向分化的影响。方法：采用全骨髓贴壁法分离培养SD 大鼠骨髓间充质干细胞;MTT 法检测不同浓度地黄多糖在不同时间点（1、3、5、7、9,、11 d）对大鼠 BMSCs 增殖情况的影响;对硝基苯磷酸盐（pNPP）法检测不同浓度地黄多糖在不同时间点（3、7、14 d）对细胞上清中 ALP 活性的影响;茜素红染色法检测不同浓度地黄多糖对 BMSCs 矿化能力的影响。结果：地黄多糖可以促进BMSCs 增殖,其最佳浓度为50μg/mL, P＜0.05;同时可以促进 BMSCs向成骨分化,其最佳浓度也为50μg/mL,P＜0.05。结论：地黄多糖具有促 BMSCs 增殖及骨向分化的作用。     

淫羊藿苷对大鼠成骨细胞核结合因子α1、骨形成蛋白-2、骨形成蛋白-4 mRNA表达的影响

目的:研究淫羊藿苷对成骨细胞增殖、分化以及对核心结合因子α1(Cbfαl)、骨形成蛋白-2(BMP2)、骨形成蛋白-4(BMP4)mRNA表达的影响.方法:以酶序列消化法从新生大鼠颅骨分离、培养成骨细胞,采用碱性磷酸酶染色和钙结节茜素红染色法鉴定细胞.取第3-5代细胞,用CCK-8法检测经0 mol/L、10~(-8)mol/L、10~(-7)mol/L、10~(-6)mol/L、10~(-5)mol/L、10~(-4)mol/L的淫羊藿苷处理24、48、72 h后成骨细胞的增殖情况.分别用流式细胞技术和对硝基苯酚法检测上述各浓度的淫羊藿苷处理48 h后成骨细胞的增殖指数和碱性磷酸酶(ALP)活性.用real-timePCR法检测10～(-6)mol/L淫羊藿苷处理48 h后成骨细胞Cbfα1、BMP2和BMP4 mRNA表达的改变.结果:10~(-8)～10~(-4)moL/L的淫羊藿苷对成骨细胞均无增殖促进作用,但可促进成骨细胞的ALP活性;10~(-6)mol/L淫羊藿苷可以上调成骨细胞Cbfα1、BMP2和BMP4 mRNA的表达.结论:淫羊藿苷可能是通过上调Cbfα1、BMP2和BMP4 mRNA的表达而促进成骨细胞的分化.     

丹参对大鼠成骨细胞增殖和分化的影响

目的：了解丹参对SD大鼠成骨细胞增殖和分化的影响。方法：取新生的SD大鼠头盖骨，胶原酶法培养成骨细胞，用MTT法来测定不同浓度丹参对体外培养成骨细胞在24、48、72h不同时段的促细胞增殖作用；采用碱性磷酸（ALP）活性观察上述药物的促细胞分化作用。结果：0．05％、0．10％、0．15％的丹参可促进成骨细胞增殖率提高（P〈0．05）；不同浓度丹参可使碱性磷酸酶（ALP）活性增强（P〈0．05）。结论：丹参具有促进成骨细胞增殖及分化的作用。     

脉冲电磁场促进成骨细胞成熟分化依赖于初级纤毛-PI3K/AKT途径

目的: 研究脉冲电磁场(pulse electromagnetic fields, PEMF)促进大鼠成骨细胞成熟分化是否与初级纤毛和PI3K/AKT途径相关,探讨PEMF促进骨形成的作用机制。方法: 用酶解法获取新生SD大鼠颅骨成骨细胞(rat calvarial osteoblasts, ROB), 50 Hz、0.6 mT PEMF处理0、0.5、1、1.5和2 h后检测磷脂酰肌醇-3-激酶(phosphatidylinositol-3-kinase, PI3K)和蛋白激酶B(protein kinase B, AKT)蛋白表达量及初级纤毛长度和发生率的变化情况;用LY294002阻断PI3K/AKT信号途径,观察PEMF促进ROB成骨性分化是否受到影响;以RNAi法干扰IFT88的基因表达以抑制初级纤毛发生,观察PEMF激活的PI3K/AKT信号途径及ROB的成骨性分化是否受到影响。成骨性分化指标包括碱性磷酸酶(alkaline phosphatase, ALP)活性,real-time PCR法和Western blot法检测的成骨性相关基因BMP-2、COL-1和OSX的基因表达量,以及钙化结节数量等。结果: 经PEMF处理0、0.5、1、1.5、2 h后,ROB的PI3K、AKT蛋白表达量升高(P<0.01),初级纤毛变长;其中PI3K在0.5 h时蛋白表达量达到最高,随着PEMF处理时间增加,蛋白表达量降低; AKT在0.5 h和1.5 h时蛋白表达量较高。用PI3K阻断剂LY294002阻断PI3K/AKT信号途径后,PEMF不再能提高成骨细胞中ALP 活性和成骨性相关基因BMP-2、COL-1、OSX的基因表达量,但在阻断前PEMF能增加ROB中ALP活性和成骨性相关基因的表达;RNAi干扰初级纤毛发生后,PEMF不再能增加PI3K的蛋白表达量,说明初级纤毛干扰后,PEMF不能激活PI3K/AKT信号途径;其次,PEMF提高ALP活性的作用消失,也不能提高BMP-2、COL-1和OSX的基因表达量,其增加ROB钙化结节形成能力的作用也消失,说明初级纤毛干扰后,PEMF促进成骨细胞成熟矿化的能力消失。结论: PEMF通过成骨细胞表面的初级纤毛激活了PI3K/AKT信号途径,进而发挥了骨形成活性的促进作用。     

骨碎补总黄酮对大鼠成骨细胞VEGF和FGF-2表达的影响

目的：观察骨碎补总黄酮对体外培养大鼠成骨细胞血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor,VEGF）和成纤维细胞生长因子2（fibroblast growth factor 2,FGF-2）表达以及碱性磷酸酶（alkaline phosphatase,ALP）活性和矿化结节的影响。方法：在大鼠成骨细胞体系中加入不同浓度的骨碎补总黄酮作用24 h和48 h。采用ELISA和RT-PCR法检测VEGF和FGF-2表达变化,PNPP法检测ALP活性以及von Kossa染色检测矿化结节形成。结果：骨碎补总黄酮可刺激VEGF和FGF-2,使其在蛋白和mRNA水平表达均明显升高,显著提高成骨细胞ALP的活性和促进矿化结节的形成。结论：骨碎补总黄酮可提高成骨细胞VEGF和FGF-2的表达,促进其成骨作用。     

高浓度葡萄糖条件下罗格列酮对NIT-1细胞FOXO1、TSC2基因表达及细胞分泌功能的影响

目的：研究罗格列酮在不同浓度葡萄糖条件下,对胰岛β细胞增殖凋亡与胰岛素分泌以及叉头转录因子-1(FOXO1)和结节性硬化症-2(TSC2)表达的影响。方法： 将 NIT-1细胞按每孔5×10个放置于24孔细胞培养板,培养48 h后随机分为各处理组：5.6、7.8、11.1、16.7、22.2 和27.6 mmol/L葡萄糖组,继续培养24 h后再分别施加1×10^-5mol/L罗格列酮,分别于干预24和48 h后取细胞培养上清液,采用放射免疫法检测胰岛素水平和免疫荧光法检测细胞增殖情况,RT-PCR半定量法检测FOXO1和TSC2 mRNA表达水平。结果：①1×10^-6～1×10^-5 mol/L罗格列酮可以分别在不同浓度葡萄糖培养条件下使胰岛NIT-1细胞增殖（P<0.05）,且这种变化趋势随剂量的增加而增加（即1×10^-5 mol/L罗格列酮组＞1×10^-6 mol/L罗格列酮组＞1×10^-7 mol/L罗格列酮组）。1×10^-5 mol/L的罗格列酮干预后,可见细胞凋亡百分率增加趋势随着葡萄糖浓度不断升高;②在同一浓度罗格列酮作用下,当葡萄糖浓度为11.1 mmol/L时,胰岛素分泌水平最高,高于其他各组（均P<0.05）,随着葡萄糖浓度增加,胰岛素分泌量逐渐下降（11.1 mmol/L葡萄糖组>16.7 mmol/L葡萄糖组>22.5 mmol/L葡萄糖组>27.6 mmol/L葡萄糖组）,而葡萄糖为5.6 mmol/L时,胰岛素分泌量最低;③ 在1×10^-5 mol/L罗格列酮干预后,FOXO1和TSC-2 mRNA的表达水平均较未干预组明显下降,且呈现出5.6 mmol/L组＜11.1 mmol/L组＜16.7 mmol/L组＜22.5 mmol/L组＜27.6 mmol/L组的变化趋势,而且葡萄糖浓度＞16.7 mmol/L的各组均较前面小剂量葡萄糖组（≤11.1 mmol/L各组）表达明显。结论：罗格列酮可以通过直接影响胰岛β细胞内FOXO1和TSC2表达促进胰岛β细胞的增殖及影响细胞胰岛素分泌功能,提示通过调控FOXO1和TSC2表达,可以直接影响胰岛β细胞的生物学功能,如分泌功能、细胞的增殖与凋亡以及改善胰岛素抵抗状况。     

氟对成纤维细胞和成骨细胞TGF-β和Smad2/3表达的影响

目的: 观察不同浓度氟化物在不同时间段对成纤维细胞和成骨细胞中转化生长因子β（TGF-β）和Smad2/3表达的影响。方法：将成纤维细胞和成骨细胞各分7个染氟组（0、0.0001、0.001、0.1、1、10和20 mg•L^-1），在5个染氟时间段（2 、4、24、48 和72 h） 采集细胞培养上清，应用酶联免疫吸附（ELISA）法检测TGF-β和Smad2/3含量，应用RT-P CR方法检测染氟48 h细胞 TGF-β mRNA 的表达。结果：与染氟0 mg•L^-1组 比较，氟作用2 h的0.001、0.1、1、10 和20 mg•L^-1组和氟作用4 h的0.0001、0.001、0.1、10 和20 mg•L^-1组成 纤维细胞TGF-β蛋白表达明显降低（P<0.01或P<0.05)；染氟48 h 时1和20 mg•L^-1组成纤维细胞TGF-β mRNA表达有所增强，染氟2～24 h时Smad2/3表达多呈上升趋势，但差异无 显著性（P>0.05）；成骨细胞染氟48 h时0.0001、0.001和1 mg•L^-1组TGF- β蛋白表达增强 （P<0.01或P<0.05），TGF-β mRNA的表达呈增强趋势；染氟成骨细胞Smad2/3表达多呈上升趋势，其中染氟48 h 的20 mg•L^-1组表达明显升高（P<0.01）。结论：染氟对 成纤维细胞和成骨细胞TGF-β表达具有不同的作用特点，TGF-β在成纤维细胞成骨表型转换过程中可 能起重要作用。