黄秋葵毛状根的诱导及培养

目的 利用4种发根农杆菌15834,R1601,1025,1000诱导黄秋葵产生毛状根,建立黄秋葵的毛状根培养体系.方法 利用共培养法研究不同外植体、菌株、预培养时间和侵染时间等对黄秋葵毛状根诱导率的影响和不同液体培养基对毛状根生长的影响筛选出最佳培养基,并研究了不同蔗糖浓度和外源激素对毛状根生长的影响.结果 利用发根农杆菌R1601,预培养48 h的叶片为转化材料,感染8 min的诱导率最高,最佳培养基为MS液体培养基.结论 黄秋葵毛状根离体培养体系的建立,为研究黄秋葵的有效药用成分的大规模生产奠定了基础.     

王不留行毛状根培养体系建立及其黄酮苷的测定

目的建立王不留行毛状根培养体系。方法分别用发根农杆菌R15834、R1601、R1000、A4感染王不留行叶片产生毛状根,考察不同理化因子对其生长的影响,并利用HPLC测定王不留行中黄酮苷的量。结果发根农杆菌R1601转化王不留行叶片的诱导率最高,p H值为6.0,蔗糖浓度为3%的MS培养基培养毛状根增殖速度最快,王不留行毛状根中王不留行黄酮苷量略高于种子中的量。结论王不留行成功诱导毛状根,为进一步筛选适宜的王不留行发根培养体系并调控次生代谢产物的研究奠定了基础。     

金铁锁毛状根诱导及培养体系的建立

目的:研究金铁锁毛状根制备方法及液体培养条件,为规模化生产金铁锁提供技术支持.方法:利用发根农杆菌ACCC10060菌株侵染金铁锁幼叶及茎段.结果:将外植体与菌液(A6000.8)在含有20mg·L-1乙酰丁香酮的B5培养基上共培养48h,可以有效地诱导金铁锁毛状根;叶片比茎段的诱导率高.转化的毛状根具有激素自养和抗卡那霉素的特性,并且组织中含有冠瘿碱,证明该菌对金铁锁组织成功地进行了转化.在无激素的1/2Ms液体培养基中培养35d后,金铁锁毛状根生物量增加了14.11倍(鲜重)和8.39倍(干重),其总皂苷为0.857%(干重),愈伤组织和原植物中分别为0.388%,0.217%.结论:金铁锁毛状根离体培养系统的成功建立,对进一步规模化培养金铁锁毛状根具有重要意义.     

圆叶牵牛毛状根的诱导及培养

目的:利用发根农杆菌,R1601,1000,1025,15834诱导药用植物圆叶牵牛产生毛状根。方法:采用共培养方法,通过对外植体、菌种、浸染时间、预培养、共培养、外源激素等因素对转化率的影响。结果:利用发根农杆菌1601,预培养60h的叶片、叶柄为转化材料,感染6～8min,加入1mg.L-1NAA转化率最高。结论:圆叶牵牛毛状根的诱导成功,为其遗传转化提供了依据。     

圆叶牵牛毛状根的诱导及培养

目的：利用发根农杆菌,R1601,1000,1025,15834诱导约用植物圆叶牵牛产生毛状根。方法：采用共培养方法,通过对外植体、菌种、浸染时间、预培养、共培养、外源激素等因素对转化率的影响。结果：利川发根农杆菌1601,预培养60h的叶片、叶柄为转化材料,感染6～8min,加入1mg·L^-1 NAA转化率最高。结论：圆叶牵牛毛状根的诱导成功,为其遗传转化提供了依据。     

丹参毛状根的诱导及培养条件的优化

为了建立丹参毛状根的诱导方法及液体培养体系,以发根农杆菌A4,LBA9402,15834为试验菌株分别侵染丹参无菌苗叶片,诱导丹参毛状根,PCR扩增筛选阳性株系,HPLC测定丹酚酸含量并在此基础上进一步优化毛状根的液体培养条件。结果显示：3种发根农杆菌A4,LBA9402,15834均诱导出丹参毛状根,经PCR鉴定证明其Ri质粒T-DNA均已整合到丹参基因组中,其中发根农杆菌LBA9402和A4诱导的丹参毛状根丹酚酸含量较高,质量分数分别为（3.27±0.37）%,（3.17±0.20）%;由发根农杆菌LBA9402诱导MSOH液体培养基培养的丹参毛状根丹酚酸含量较高,质量分数为（4.56±0.36）%;由发根农杆菌LBA9402诱导,pH为4.81的MSOH液体培养基培养的丹参毛状根丹酚酸含量最高可达4.85%。因此,以发根农杆菌LBA9402和A4诱导的丹参毛状根在pH为4.81的MSOH液体培养基中培养的丹酚酸含量较高。为进一步利用基因工程技术改良中药丹参的品质奠定了基础。     

人参毛状根合成人参皂苷培养条件的优化

目的：对影响人参(Panax ginseng)状根生长及人参皂苷合成的培养条件进行了研究。方法：比较了不同培养基上人参毛状根和人参皂苷的含量变化。结果：人参毛状根在MS IBA0．5mg／l的培养液里预培养72h后，再转入MS基本培养液培养，经过6周的培养，人参总皂苷含量达到5．190％，人参皂苷(Re Rg)含量达到了0．3271％，人参毛状根干重增加98．74倍。结论：确定了最佳的培养基和培养条件，为工业化再生产提供了基础。     

毛状根培养技术在中草药中的应用

阐述了发根农杆菌中Ri质粒诱导毛状根形成的机制;分析了毛状根培养技术在中草药有效成分生产、转基因研究、种质保存和良种繁育等方面的应用;探讨了影响毛状根形成的因素;最后预测了毛状根培养技术在中草药中的应用前景.     

紫锥菊毛状根诱导及离体培养

 目的 研究紫锥菊毛状根的诱导及活性成分的产生。方法 用发根农杆菌（Agrobacterium rhizogenes）A4,R1601,1025感染紫锥菊外植体。结果 紫锥菊外植体被3种发根农杆菌感染后,外植体伤口处均能陆续分化生长出白色的毛状根。A4菌株的诱导效果明显好于其他2种菌株,A4对紫锥菊叶片的毛状根诱导率高达66.7%。紫锥菊毛状根的最佳诱导条件为：发根农杆菌A4,感染时间12 min,菌液A₆₀₀值 0.8,共培养温度24 ℃,共培养时间2 d,预培养时间2 d,培养基pH值6.0,此条件下紫锥菊毛状根的平均诱导率达到54%;对诱导出的毛状根进行PCR检测,证明其确为已转化的毛状根。检测得到紫锥菊毛状根中的多糖含量为15.54%,总酚的含量为2.491%。结论 本实验所建立的紫锥菊毛状根培养系统,为研究紫锥菊毛状根大量培养生产活性成分奠定了基础。     

掌叶大黄毛状根的诱导及其蒽醌类化合物产生的研究

目的:研究掌叶大黄毛状根的诱导及蒽醌类化合物的生产。方法:用发根农杆菌Agrobacterium rhizo-genesLBA9402和R1601感染掌叶大黄外植体。结果:2种发根农杆菌均能诱导掌叶大黄产生毛状根,LBA9402比R1601表现出较强的对掌叶大黄的感染能力。毛状根单克隆DH7 a(由R1601诱导)生长速度高于DH5 a,DH5 c(由LBA9402诱导),且明显比非转化根(NOR)快。DH5 a中蒽醌类化合物以大黄素为主,DH5 c则以大黄素甲醚含量最高,DH7 a中4种蒽醌———大黄酸、大黄素、大黄素甲醚和大黄酚含量相近,非转化根中大黄酚含量最高,而芦荟大黄素的含量在4种根中均较低。结论:本实验所建立的掌叶大黄毛状根培养系统,为研究大黄毛状根大量培养生产蒽醌类化合物奠定了基础。     

炒王不留行的化学成分分析

目的:分析炒王不留行中化学成分.方法:采用C18反相硅胶柱色谱法、凝胶柱色谱法、聚酰胺柱色谱法和制备高效液相色谱法对化合物进行分离、纯化,通过理化常数测定和紫外(UV)、红外(IR)、质谱(FAB-MS)核磁共振(1H-NMR,13C-NMR)等光谱法鉴定其化学结构.结果:从炒王不留行中分离并鉴定了4个化合物,分别为(2S)-N,N,N-三甲基色氨酸内铵盐,洋芹素-6-C-阿拉伯糖-葡萄糖苷,王不留行黄酮苷(洋芹素-6-C-葡萄糖-阿拉伯糖-4′-0-葡萄糖苷),洋芹素-6-C-双葡萄糖苷.结论:(2S)-N,N,N-三甲基色氨酸内铵盐为首次从植物中分离得到.     

不同元素对丹参毛状根生长及丹参酮类成分积累的影响

目的:研究不同浓度大量、微量、有机元素对丹参毛状根生长量及丹参酮类成分积累的影响。方法:以6,7-V液体培养基为基本培养基,分别将其大量、微量和有机元素的含量设定为缺失(0)、1/8、1/4、1(对照)、4、8倍,取培养相同时间的毛状根测定其增长倍数,利用HPLC法测定二氢丹参酮、隐丹参酮、丹参酮Ⅰ、丹参酮Ⅱ_A的含量。结果:大量元素可显著影响丹参毛状根的生长和丹参酮类成分的积累,其中大量元素缺乏时可显著促进丹参酮类成分的积累,但其生长量受到明显抑制,而过量大量元素虽可在一定程度上提高生长量,但丹参酮类成分并无显著增长;微量元素和有机元素的改变对毛状根的生长和丹参酮类成分的积累无显著影响。结论:大量元素是影响丹参毛状根生长和丹参酮类成分积累的主要因素,大量元素缺乏(逆境)可显著促进丹参酮类成分积累,为毛状根培养及不同品质丹参形成机理研究提供了一定的基础。     

聚乙二醇-6000胁迫对丹参毛状根中丹参酮积累的影响

目的 研究聚乙二醇-6000(polyethylene glycol-6000,PEG-6000)胁迫对丹参毛状根丹参酮类成分积累的影响.方法 用发根农杆菌ATCC 15834诱导生产丹参毛状根,经20 d悬浮振荡培养后,分别采用1.2％、2.0％、5.5％、10％的PEG-6000处理,并用HPLC法测定PEG-6000处理1周后丹参毛状根中丹参酮Ⅰ、隐丹参酮、二氢丹参酮Ⅰ、丹参酮ⅡA的量.结果 PEG-6000能够抑制丹参毛状根的生长,PEG-6000为1.2％、2.0％、5.5％和10％处理条件下,丹参毛状根干质量分别减少为对照组的75.1％、83.0％、76.2％、76.1％; PEG-6000处理能够显著提高丹参毛状根中4种丹参酮的量,2.0％、5.5％的PEG-6000能够显著促进丹参酮Ⅰ量的提高,1.2％PEG-6000能够显著提高隐丹参酮量的;二氢丹参酮Ⅰ的量以2.0％PEG-6000处理条件下最高;丹参酮ⅡA的量以5.5％ PEG-6000处理条件下最高.结论 PEG-6000能显著促进丹参毛状根中丹参酮类成分的积累.     

中药王不留行中黄酮甙类成分的研究

目的 :对王不留行的化学成分进行研究。方法 :溶剂提取 ,硅胶柱色谱分离 ,根据化合物理化性质和光谱数据鉴定其结构。结果 :分离并鉴定了 3个化合物 ,为洋芹素-6-C-阿拉伯糖 葡萄糖甙 (1) ,洋芹素-6-C-双葡萄糖甙 (2) ,王不留行黄酮甙 (3)。结论 :化合物 1,2为首次从该植物中分得。     

川黄柏毛状根的诱导及活性成分的产生

目的：诱导川黄柏毛状根的发生。方法：利用发根农杆菌ATCC15834,A4,R1600和R1000诱导川黄柏不同外植体产生毛状根。结果与结论：经PCR扩增实验证实发根农杆菌Ri质粒的T-DNA片段已整合进入川黄柏植物核基因组中,HPLC测定结果显示,川黄柏毛状根培养物中含有盐酸小檗碱,并且其含量高于川黄柏组培苗和愈伤组织。     

杜仲毛状根培养条件优化及其桃叶珊瑚苷药用成分的研究

目的:诱导杜仲毛状根的发生及筛选优良毛状根系.方法:利用发根农杆菌C58C1诱导杜仲不同外植体产生毛状根,并利用HPLC测定桃叶珊瑚苷含量.结果:采用杜仲无菌苗胚轴经菌液浸染20 min,共培养3 d可得到最佳转化效果.液体培养的生长量优于固体培养,最有利于毛状根生物量和药用成分的积累,并筛选到桃叶珊瑚苷高产根系E_1.结论:可通过毛状根的培养来获得桃叶珊瑚苷药用成分.     

甘草毛状根诱导培养及其黄酮含量检测的研究

 目的 探讨影响甘草毛状根的诱导培养的因素及其总黄酮含量。方法 利用发根农杆菌的遗传和液体培养技术,研究了甘草（Glycyrrhiza uralensis毛状根的诱导和离体培养及其黄酮的产生情况。结果 不同发根农杆菌中,A4菌株侵染效果最好,约96%的子叶节外植体产生毛状根;不同外植体中,子叶节的转化效果最高,毛状根产生只需3~4 d;在毛状根的液体培养过程中,接种量为0.3 g,培养容积为500 mL时生长速率最快,毛状根湿重增长41倍;毛状根能产生药用成分甘草黄酮,根系中最高黄酮含量高于商品甘草,达干重的2.042%,约为未转化植株根的4.3倍;毛状根中的黄酮还分泌到培养液中,最高量为每100 mL培养液1.36 mg。结论 较为系统地研究了甘草毛状根的诱导培养条件和总黄酮量,为今后规模培养甘草毛状根生产药用甘草黄酮提供了可能性。