用不同周龄小鼠外周血红细胞微核试验检测苯的遗传毒性

在众多的致突变初筛试验中,小鼠骨髓微核试验(MNT)较为经济、简便和快速。但该方法仍有一些不足,如取骨髓必须处死动物,不能对动物作长期动态观察等。Schlegel等通过实验证明,小鼠脾脏不象以往认为的那样能选择地除去含有微核的红细胞,含微核的正染红细胞可以在外周血中累积,小鼠外周血红细胞微核试验与骨髓法相比,敏感性相当或更佳〔1〕。1　材料和方法1.1　动物的选用及分组　选用华西医科大学实验动物中心提供的615纯系小鼠。成年(13周龄)小鼠40只,平均体重18.39g;未成年(5周龄)小鼠40只,平均体重16.27g。随机分为4组(其中3个试验组,1…     

微核试验和SOS/umu试验在水环境遗传毒性检测中应用的研究进展

环境污染与人体健康关系密切,恶性肿瘤尤为突出.大量研究表明,环境中存在多种具有诱变毒性的化学物质;且流行病学研究已证实,环境污染与恶性肿瘤发病率的升高有一定的关系.因此,环境的遗传毒性监测是目前亟待开展的工作之一.本研究重点选取遗传毒性检测技术中的微核试验及SOS/umu试验,综述了二者在检测水环境遗传毒性方面的应用,并归纳总结了方法学上的发展,以期为水环境的遗传毒性监测领域提供信息基础及科学依据.     

用微核试验评价生物羊膜遗传毒性的研究

目的：用微核试验评价生物羊膜引起遗传毒性的可能性。方法参照《GB／T16886．3-1997／ISO10993-3：1992》的方法及指导原则进行试验。结果：在研究过程中所有动物临床表现和体重变化都是正常的，生物羊膜浸提液与阴性对照嗜多染红细胞（PCEs）／红细胞（RBc）总数无显著性差异（P〉0．05），没有出现遗传毒性的迹象。结论：生物羊膜用微核试验评价不会引起遗传毒性。     

体内Pig-a基因突变试验组合评估丁香酚的遗传毒性

目的 采用大鼠3天染毒与体内Pig-a基因突变试验、彗星试验和微核试验组成的试验组合,评价丁香酚的体内遗传毒性。方法 雄性SD大鼠连续3天灌胃给予丁香酚,剂量为241.25mg/kg·bw(低)、482.5mg/kg·bw(中)、965.0mg/kg·bw(高),另设阳性对照组(N-乙基-N-亚硝基脲)和空白对照组。在第0、7、14、29天收集尾部静脉血进行体内Pig-a基因突变试验,检测样本中红细胞及网织红细胞突变率;在末次灌胃6h后收集尾部静脉血进行彗星试验;在末次灌胃36h后收集尾部静脉血进行外周血微核试验。结果 体内Pig-a基因突变试验中,各组间各时间点外周血突变红细胞和突变网织红细胞率差异均无统计学意义;彗星试验中,各组间彗星尾长和Tail-DNA%差异无统计学意义,但中、高剂量组Olive尾矩分别为6.42μm和8.35μm,与空白对照组比较差异有统计学意义,且呈剂量反应关系;微核试验中,高剂量组外周血网织红细胞微核率为0.45%,与空白对照组比较差异有统计学意义。结论 在本实验条件下,丁香酚在较高剂量下可能具有一定的遗传毒性。     

使用体内遗传毒性综合测试体系评价顺铂的遗传毒性

目的使用大鼠体内遗传毒性综合测试体系全面评价顺铂的遗传毒性,为顺铂临床应用提供重要依据。方法雄性SD大鼠(150～160 g)25只,每组5只。溶剂对照组为0.9%生理盐水,顺铂剂量组分别为0.125、0.25、0.5、1 mg/kg.bw,均按5 ml/kg.bw腹腔注射连续28 d染毒。于试验第0、14、28、42、56、84、112 d进行外周血Pig-a基因突变试验;于试验第0、4、28 d进行外周血微核试验;于试验第4、28 d给药后4 h进行外周血彗星试验。主要遗传毒性指标使用ANOVA进行假设检验,使用Dunnett-t进行剂量组和对照组之间的比较(检验水准α=0.05,双侧)。结果 Pig-a基因突变试验,0.250～1.000 mg/kg.bw组RBCs突变率和RETs突变率均有升高,与对照组比较差异有统计学意义。外周血微核试验,0.500～1.000 mg/kg.bw组RET微核率均有显著升高,与对照组比较差异有统计学意义;彗星试验,0.500～1.000mg/kg.bw组尾部DNA含量均有显著增加,与对照组比较差异有统计学意义。结论顺铂体内重复染毒具有引起DNA损...     

微核试验对东湖水中有机物遗传毒性的评价

目的　了解武汉东湖水源水及自来水中非挥发性有机物遗传毒性状况。方法　采用小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验。结果　无论是自来水还是水源水均可不同程度地诱导小鼠骨髓细胞微核率升高 ,并且有剂量反应关系。平水期、丰水期的有机提取物细胞微核率高于枯水期。结论　东湖水中非挥发性有机提取物对小鼠骨髓微核细胞具有遗传毒性     

五味子的急性毒性和遗传毒性研究

目的研究五味子的急性毒性和遗传. 方法将五味子干燥果实用80%的乙醇提取制备其粗提物.用霍恩氏法设2.15、4.64、10.0、21.9和46.4 g/kg BW五个剂量组研究五味子乙醇粗提物对昆明种小鼠的急性毒性;用2.5、5.0和10.0 g/kgBW三个剂量组进行了小鼠微核试验;用0.04、0.12、0.58、2.32、11.59和57.97 mg/皿六个剂量组进行了Ames试验;用113.28、226.56、453.12和906.25 μg/ml四个剂量组进行了TK基因突变试验. 结果 46.4 g/kgBW剂量组10只小鼠24 h内全部死亡,21.9 g/kgBW剂量组24 h内死亡8只;10.0 g/kgBW剂量组小鼠灌胃后出现精神萎靡、活动量减少,行动迟缓,无死亡;4.64 g/kgBW剂量组仅有活动量减少,无其它症状;2.19 g/kgBW剂量组无异常表现;其LD50分别为雄14.67和雌19.96 g/kg BW.微核试验中各剂量组的雄雌小鼠均未见微核率增加;Ames试验中各剂量组均未见回变菌落数增加,其中57.97 mg/皿剂量组菌落数显著减少,五味子乙醇粗提物有明显的抑菌作用;TK基因突变试验中各剂量组的突变频率与对照组比较差异均无显著性. 结论在所选试验和剂量范围内五味子的乙醇粗提物未显示致突变作用.     

长春花碱3和24h处理TK6细胞TK基因突变试验比较研究

[目的]比较用长春花碱对人淋巴母细胞TK6处理3 h和24 h的诱变性. [方法]用长春花碱对TK6细胞分别进行3 h和24 h染毒处理,用微孔板法进行TK基因突变试验.计算TK6细胞的接种效率(PE)、相对存活率RS、相对悬浮增值率RSG、总的相对增长率RTG、突变频率MF. [结果]在3 h处理条件下,随长春花碱浓度的增加,RS、RTG和RSG等均降低,中、高剂量水平已表现出明显的细胞毒性,但各剂量水平的MF与溶剂对照比较差异均有统计学意义(P＜0.05);在24h处理条件下,其MF随VBL浓度的增加而增加,并有一定的剂量一反应关系. [结论]较长时间处理对于长春花碱等细胞周期依赖性的毒物是必要的.     

叶枯宁的小鼠微核试验

叶枯宁的小鼠微核试验张遵真，张浩，孙棉龄新农药叶枯宁（原名川化０１８）是一种有机硫杀菌剂。对于叶枯宁的＂三致＂毒性已有全面研究，但对其小鼠微核试验结果报道不一，且该农药在以往的生产性试验过程中，曾因排放有害废水污染水源、农田，造成了较为严重的人畜中毒...     

四氯化碳对雄性小鼠的遗传毒性

目的检测环境污染物四氯化碳的诱变活性,评价其可能的潜在遗传毒性。方法21只雄性昆明种小鼠随机分成7组,每组3只,其中1组为对照组,其余6组采用腹腔注射的方法,分别用5、15、25mg/kg四氯化碳进行染毒24h和48h分别进行精子畸形试验和小鼠股骨骨髓嗜多染红细胞(PCE)微核试验,然后每组观察5000个精子计算精子畸变率;每组观察5000个股骨骨髓PCE细胞,计算微核率。结果染毒小鼠的精子有明显的畸变效应,小鼠股骨骨髓PCE细胞的微核率和精子畸变率明显高于对照组(P<0.01)。结论四氯化碳对小鼠生殖细胞和血红细胞有遗传毒性作用。     

含HSV-TK基因及IL-18基因复制缺陷型腺病毒载体的构建和鉴定

目的：分别构建含TK及IL-18基因的重组腺病毒载体,并进行鉴定。方法：通过DNA重组技术,构建含有目的基因的复制缺陷型腺病毒Ad CMV-TK及Ad CMV-IL-18;将上述重组腺病毒液感染293细胞,提取DNA,进行PCR鉴定;将病毒液感染293细胞,扩增病毒,用OD260法测定病毒滴度。结果：经PCR鉴定,鉴定正确的腺病毒命名为Ad CMV-TK及Ad CMV-IL-18,测定病毒滴度Ad CMV-TK=1.28×109 PFU/m L;Ad CMV-IL-18=1.28×109 PFU/m L。结论：成功构建了含HSV-TK基因及IL-18基因重组腺病毒载体,为肿瘤的基因治疗提供了理论依据及实验数据。     

三氯乙醛的毒性和致突变研究

【目的】了解三氯乙醛的毒性和致突变作用。[方法]对三氯乙醛进行急性毒性试验、致突变试验、单细胞凝胶电泳试验。【结果】雄性大鼠急性经口LD50为1000mg／kg，雌性大鼠为681mg／kg。雄性大鼠急性经皮LD50为1470mg／kg，雌性大鼠为1210mg／kg。对皮肤具中等刺激性，对眼具中度至重度刺激性。Ames试验1mg／皿为阳性。小鼠骨髓细胞身长核试验160mg／kg时为阳性。小鼠与人淋巴细胞单细胞凝胶电泳试验为阳性。【结论】三氯乙醛属低毒级化学药物，致突变试验阳性。     

人类淋巴母细胞TK6检测环磷酰胺诱发微核及TK基因突变的体外实验研究

目的 建立TK6细胞检测环境诱变剂诱发微核及TK基因突变的实验方法。方法 用诱变剂环磷酰胺(CP)体外染毒TK6细胞4h后检测细胞毒性,微核及kt位点突变频率。结果 CP处理导致TK6细胞的相对存活率下降,细胞微核率及TK基因突变频率明显上升,并均有剂量——反应关系。最高浓度组(4．0μg／ml)的细胞微核率及TK基因突变频率分别是对照组的8、8和15．7倍。CP诱发tk位点两种不同表型的突变细胞集落,即正常生长突变体集落及缓慢生长突变体集落,并以后者为主。结论 CP可以诱发TK6细胞微核及TK基因突变,揭示CP可能是一种断裂剂。TK6细胞可用于评估环境化学物细胞水平遗传改变及TK基因突变。     

应用微核实验和彗星电泳实验评价氯化镧90d喂养对小鼠遗传毒性作用

[目的]应用微核实验和彗星电泳实验评价氯化镧亚慢性染毒致小鼠遗传毒性作用. [方法]将100只SPF级ICR小鼠随机分为5组:4个氯化镧染毒组和1个对照组,每组20只,雌雄各半.5个剂量组分别以灌胃的方式给予不同浓度的氯化镧溶液(0、10、20、50和100 mg/kg).每周染毒6次,连续染毒13周后,取小鼠外周血进行彗星实验及镧含量的测定,取小鼠骨髓观察骨髓细胞微核率. [结果]镧染毒剂量达50 mg/kg时,彗星细胞的尾长及尾部DNA含量与对照组相比,差异有统计学意义(P＜0.05),小鼠骨髓细胞微核率与对照组相比,差异有统计学意义(P＜0.05).4个氯化镧染毒组血液中均有不同程度的镧的蓄积,与对照组相比,差异均有统计学意义(P＜0.05). [结论]稀土镧元素可以在血液中蓄积,具有一定的遗传毒性.     

纳米氧化铜对小白鼠的急性毒性及蓄积毒性试验研究

目的:观察纳米氧化铜对小白鼠的急性毒性及蓄积毒性,为临床提供依据。方法:1.急性毒性试验:给试验小鼠灌服不同浓度的纳米氧化铜混悬液,观察14 d内小鼠的活动情况及死亡情况,测定小鼠灌胃的LD50,采用改良寇氏公式计算LD50及可信限;2.蓄积毒性试验:依据20 d蓄积毒性试验法设计,取20~22 g小白鼠,共设5组,每组10只,雌雄各半,第1组为空白对照组,给试验小鼠灌服不同浓度的纳米氧化铜混悬液分别为28.90(1/20LD50)、57.81(1/10LD50)、115.62(1/5LD50)和298.05(1/2LD50)mg/(kg.bw)剂量,每日灌胃1次,连续灌胃20 d,通过对小白鼠灌服纳米氧化铜进行了蓄积毒性试验。结果:1.急性毒性试验:纳米氧化铜对小白鼠的LD50为578.09 mg/(kg.bw),其95%可信限343.92~971.63 mg/(kg.bw)。2.蓄积毒性试验:试验结果表明0和1/20LD50剂量组小白鼠全部存活,1/2LD50剂量组10只小白鼠全部死亡;1/5LD50剂量组小白鼠死亡5只,存活5只;1/10LD50剂量组小白鼠死亡2只,存活8只。结论:高剂量纳米氧化铜可对小鼠的肾脏、小肠、肝脏等组织器官造成广泛性损伤,并引起严重的淤血、出血等病理变化。依据判定标准,证明纳米氧化铜对小白鼠有中等蓄积毒性作用。     

长春花碱和秋水酰胺诱导TK6和TK6-E6细胞TK基因突变比较研究

目的比较TK6和TK6-E6人类淋巴母细胞TK基因突变试验对2种纺锤体毒物——长春花碱(VBL)和秋水酰胺(CCM)检出情况的差异。方法用长春花碱和秋水酰胺处理TK6和TK6-E6细胞24小时,进行常规TK基因突变试验,检测细胞毒性及tk位点突变频率。结果随着长春花碱和秋水酰胺浓度的增加,TK6和TK6-E6细胞的相对存活率(RS%)和相对悬浮生长率(RSG%)均降低。相同剂量下,TK6-E6细胞的RS%和RSG%均比TK6高。长春花碱和秋水酰胺对TK6和TK6-E6细胞均有致突变性,TK6-E6细胞的诱发和自发突变频率高于TK6,而除了突变频率(MF)中CCM5·0ng/ml组和SC%中CCM0·625ng/ml组外,其它相同剂量下,TK6-E6的MF和慢生长集落百分比(SC%)均高于TK6细胞(P<0·05)。结论两种细胞都可用于TK基因突变试验,但由于TK6-E6所用细胞量少,倍增时间较短,故建议使用TK6-E6细胞。     

90%单甲脒盐酸盐原药的TK基因突变试验

目的研究90%单甲脒盐酸盐原药的致突变性。方法在活化和非活化条件下,采用小鼠淋巴瘤细胞株(L5178Y-3.7.2C)进行TK基因突变试验,分析不同剂量90%单甲脒盐酸盐原药(0.078～5.0 mg/ml)的致突变性。结果在有和无体外代谢活化系统S9时,1.25、0.625、0.313、0.156 mg/ml剂量组的90%单甲脒盐酸盐原药TK位点突变频率稍有增加,但与溶剂对照组比较,均无统计学意义(P>0.05)。结论在本体外哺乳动物细胞基因突变试验剂量范围内,未见90%单甲脒盐酸盐原药具有致突变性。     

汞作业所致工人的遗传效应

目的探讨汞作业所致工人的遗传效应。方法选择荧光灯生产厂汞作业工人20名为接触组,无汞接触的其他从业人员20名为对照组,取外周血淋巴细胞,通过微核试验、彗星试验、hprt和TCR基因突变试验进行检测。结果接触组平均微核率(MNR)、平均微核细胞率(MCR)分别为(5.90±0.91)‰和(5.30±0.81)‰,对照组的MNR和MCR分别为(1.50±0.47)‰和(1.30±0.31)‰,两组差异有统计学意义(P<0.01)。接触组和对照组的平均尾长(MTL)分别为(3.16±0.31)和(0.99±0.07)μm,两组平均尾相(MTM)分别为1.63±0.22和0.39±0.03,差异有统计学意义(P<0.01)。接触组的hprt和TCR平均突变率与对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论汞作业可致工人不良的遗传效应。     

HBV P区聚合酶基因变异研究

目的 建立快速特异的HBV基因变异检测技术及变异株的酶切位点分析。方法 对酪氨酸、缬氨酸、天冬氨酸、天冬氨酸(YVDD)及酪氨酸、异亮氨酸、天冬氨酸、天冬氨酸(YIDD)变异病人进行测序分析。结果 在HBV感染的病例中，不仅检出酪氨酸、蛋氨酸、天冬氨酸、天冬氨酸(YMDD)到YIDD/YVDD变异，还存在亮氨酸、亮氨酸、亮氨酸、亮氨酸(LLLL)到亮氨酸、蛋氨酸、亮氨、亮氨酸(LMLL)变异，天冬氨酸、亮氨酸、组氨酸、天冬氨酸(DLHD)到天冬氨酸、蛋氨酸、组氨酸、天冬氨酸(DMHD)变异及亮氨酸、亮氨酸、丙氨酸、谷氨酸(LLAQ)到亮氨酸、蛋氨酸、丙氨酸、谷氨酸(LMAQ)变异。酶切位点分析结果表明不同的变异株存在不同的限制性酶切位点。结论 提示这些变异位点均在“ATG”(M)蛋氨酸密码子尚需进一步探讨研究。YVDD、YIDD、LMAQ变异与拉米夫定治疗有关。