通络方剂对糖尿病大鼠肝纤维化相关血清学指标及形态学的影响

目的 探讨通络方剂(Tongluo recipe,TLR)对糖尿病大鼠肝纤维化相关血清学指标及形态学的影响. 方法 SD大鼠予链脲佐菌素(streptozotocin, STZ)60 mg/kg腹腔注射,制备糖尿病模型.模型动物按随机数字表法分为2组,每组10只:糖尿病对照组、通络方剂干预组,同时取10只大鼠作为正常对照组,正常对照组和糖尿病对照组大鼠仅给予等量的生理盐水溶液,每日同一时间灌胃.造模12周后测血清肝纤维化指标,取肝组织测超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、丙二醛(malondialdehyde,MDA),观察肝组织形态学改变. 结果 糖尿病大鼠血清透明质酸(hyaluronic acid ,HA)、Ⅳ型胶原(collagen type Ⅳ,Ⅳ-c)水平显著升高(P<0.01),肝血窦边缘及肝汇管区胶原纤维增生,Disse间隙贮脂细胞增生;糖尿病大鼠肝组织SOD活性显著降低,MDA水平显著升高(P<0.01).经通络方剂治疗12周后,血清HA、Ⅳ-c水平显著降低(P<0.05),肝纤维化病理形态有明显改善;糖尿病大鼠肝组织SOD活性显著增加、MDA水平显著下降(P<0.01),氧化应激水平有所下降. 结论 通络方剂可降低糖尿病大鼠血清肝纤维化指标,改善肝纤维化的病理形态,其作用机制可能与其增强了肝组织抗氧化酶类活性以及清除脂质过氧化物有关.     

通络方药对糖尿病肾病的保护作用与机制探讨

目的:探讨通络方药对糖尿病大鼠肾脏损害的保护作用,及对肾皮质氧自由基代谢状态及抗氧化酶活性的影响.方法:选择雄性SD大鼠予链脲佐菌素55 mg/kg单次腹腔注射诱发糖尿病,3 d后血糖≥16.7 mmol/L者视为造模成功.将糖尿病模型鼠随机分为模型组(DM)、通络方药处理组(TLR)、褪黑素处理组(MEL),正常鼠作为正常对照组(CN),每组7只.TLR组每天灌服通络方药水溶液1 g/kg,MEL组灌服褪黑素溶液5 mg/kg,其余两组均灌服等体积稀释液.连续处理12周,麻醉下取肾脏组织进行电镜病理观察并用比色法测定肾皮质超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性及丙二醛(MDA)含量.结果:与CN组相比,DM组大鼠24 h尿蛋白排泄量明显增加(P＜0.01),经通络方药及褪黑素处理后,蛋白排泄量明显降低(P＜0.01).电镜下可见DM组大鼠肾小球系膜细胞和内皮细胞增生肿胀,足突融合、消失,系膜基质增多,基底膜厚度不均匀增加,线粒体数目增多、肿胀,线粒体嵴减少、形态紊乱.经Mel、通络方药处理后,上述改变有所好转.与CN组比较,DM组大鼠肾皮质内MDA含量升高,GSH-Px、SOD水平下降(P＜0.05),经通络方药与褪黑素处理后,MDA含量较DM组有所下降,其中MEL组MDA含量下降更明显,显著低于DM组(P＜0.05), GSH-Px、SOD水平稍有升高,但较DM组差异无统计学意义(P＞0.05).结论:通络方药可降低糖尿病大鼠肾脏蛋白排泄,改善肾小球基底膜结构,具有保护糖尿病肾病的作用;但其仅轻微降低肾脏MDA含量,抗氧化损伤作用不明确.     

通络方剂减轻糖尿病大鼠肾小球足细胞损伤

目的：采用糖尿病大鼠模型研究通络方剂对肾小球足细胞的保护作用及其可能的机制。 方法：SD大鼠分为正常对照组、糖尿病对照组、通络方剂组和α硫辛酸组。干预组大鼠分别予以通络方剂（0.4g/kg/d）、α硫辛酸（100mg/kg/d）灌胃,干预12周后处死大鼠,留取血清和尿标本,测定肾重体重比,24h尿蛋白定量、BUN、Cr、Alb/Cr等肾功能指标,留取肾组织标本,体视学方法计数足细胞数量,计算足细胞相对密度,western blot方法检测肾皮质Nephrin的表达,同时测定肾皮质MDA含量和SOD活力。 结果：通络方剂组和α硫辛酸组大鼠24小时尿蛋白定量低于DM对照组,足细胞计数和Nephrin表达量高于DM对照组,差异有统计学意义（p<0.05）;与DM组相比,通络方剂组和α硫辛酸组大鼠肾皮质MDA含量较少,SOD活力较高（p<0.05）。 结论：通络方剂对糖尿病大鼠肾小球足细胞损伤具有保护作用,其机制可能与其抗氧化作用有关。     

通络方剂减轻糖尿病大鼠肾脏损伤的机制探讨

目的：检测通络方剂（TLR）对糖尿病大鼠肾小球血管内皮生长因子（VEGF）、血管生成素（Ang）表达和内皮细胞增殖的作用。方法：雄性SD大鼠21只,体质量150-180g,一次性腹腔注射链脲佐菌素（65mg／kg）,1周后测血糖≥16．7mmol／L为糖尿病模型大鼠。将大鼠随机分为正常对照组（NC）,糖尿病对照组（DMC）和通络方剂组（DM＋TLR,1g／kg）,每组7只,干预12周。每2周检测末梢血糖和体质量。     

通络方剂对糖尿病大鼠体内抗氧化系统的影响分析

目的初步研究通络方剂对糖尿病大鼠体内抗氧化系统的影响。方法链脲佐菌(STZ)素诱导的糖尿病大鼠给予通络方剂治疗6周后,测定血清中超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽(GSH)含量。结果与正常对照组相比,各模型组SOD、GSH明显下降,差异有统计学意义;通络方剂干预组的大鼠血清中SOD活性和GSH明显高于阳性对照组。结论通络方剂能提高糖尿病大鼠机体抗氧化能力,抑制脂质过氧化,进一步证明糖尿病血管病变属于络病范畴,通络方剂有望成为糖尿病慢性并发症的防治药物。     

通络方剂对糖尿病大鼠肾脏氧化应激的影响

目的:研究两种剂型通络方剂(超微粉和微粉)对糖尿病SD大鼠肾脏氧化应激的影响.方法:链脲佐菌素(60 mg/kg)腹腔注射诱导糖尿病大鼠.1周后测血楮≥16.7 mmol/L为糖尿病,将大鼠随机分为糖尿病对照组(DMC,n=7)、通络方剂超微粉组(DM UT,n=8)和通络方剂微粉组(DM FT,n=8)3组,同时取8只大鼠作为正常对照组(NC).DM UT组和DM FT组按每天1 g/kg UT或FT灌胃,NC和DMC组给予等量的生理盐水溶液.干预4周后,测肾质量/体质量(KW/BW)和24 h尿蛋白(24 h UP),比色法检测肾皮质抗氧化酶和丙二醛(MDA),实时PCR法检测NADPH氧化酶亚基p47phox和p22phox mRNA表达的改变.结杲:与正常大鼠相比,糖尿病大鼠肾皮质MDA含量、24 h UP和KW/BW升高,总超氧化物歧化酶(TSOD)活性降低,谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性升高,均有统计学意义;正常大鼠与糖尿病大鼠问过氧化氢酶(CAT)活性差异无统计学意义.与DMC组相比,两个通络方剂干预组糖尿病大鼠肾皮质MDA、24 h UP和Kw/BW明显降低;TSOD和GSH-Px活性增强,差异均有统计学意义.DMC组和两个通络方剂组间CAT活性差异无统计学意义.其中DM UT组对24 h UP,KW/BW、MDA、TSOD和GSH-Px的作用较DM FT组更明显,差异有统计学意义.与正常大鼠相比,糖尿病大鼠肾皮质NADPH氧化酶亚基p47phox mRNA表达增强,差异有统计学意义.与DMC组相比,两个通络方剂干预组p47phox mRNA表达降低,差异有统计学意义,但两干预组间差异无统计学意义.在各实验组问NADPH氧化酶亚基p22phox mRNA表达的差异无统计学意义.结论:通络方剂能增强糖尿病大鼠肾脏TSOD和GSH-Px活性,降低NADPH氧化酶p47phox mRNA的表达,可能因此抑制肾脏氧化应激水平,减轻糖尿病大鼠早期的肾脏损伤.     

通络方剂对糖尿病大鼠肾小球足细胞的保护作用

目的观察通络方剂对糖尿病大鼠肾小球足细胞的保护作用,探讨糖尿病肾病足细胞损伤的可能机制。方法通过腹腔注射链脲佐菌素(60mg/kg)制作糖尿病大鼠模型,将成模大鼠随机分为糖尿病组(DM组,12只)、糖尿病TLR干预组(DM+TLR组,12只),另设正常对照组(CON组,8只)。DM+TLR组大鼠予以TLR[0.4g/(kg.d)]灌胃,DM组和CON组每日均在同一时间予同体积蒸馏水一次性灌胃。干预12周后测定各组大鼠24h尿蛋白定量;取大鼠肾皮质,采用电子显微镜观察肾小球足细胞超微结构;采用体视学方法计数足细胞、计算足细胞相对密度;采用蛋白质印迹分析法检测足细胞nephrin蛋白的表达;测定血浆和肾皮质中超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性和脂质过氧化产物丙二醛(MDA)含量。结果与CON组比较,DM组和DM+TLR组大鼠肾质量/体质量比值、血糖和24h尿蛋白升高(P均<0.01);12周时DM组大鼠肾小球基底膜增厚、足细胞足突融合、微绒毛化,足细胞计数减少(P<0.01)、足细胞相对密度降低(P<0.01)且nephrin表达减少(P<0.01)。DM+TLR组足突形态接近正常,基底膜增厚,但较DM组减轻,足细胞计数、足细胞相对密度和nephrin表达量均高于DM组(P均<0.01)。与CON组比较,DM组和DM+TLR组大鼠在观察终点血浆和肾皮质SOD、GSH-Px活性均降低(P<0.01,P<0.05),MDA含量则升高(P<0.01,P<0.05);与DM组相比较,DM+TLR组血浆和肾皮质SOD、GSH-Px活性增加(P均<0.01),MDA含量降低(P<0.01,P<0.05)。结论 TLR可以改善糖尿病大鼠肾小球的足细胞损伤,可能与其抗氧化应激作用有关。     

通络方剂对糖尿病大鼠心肌细胞凋亡作用的研究

目的：研究通络方剂和褪黑素（Mel）对糖尿病大鼠心肌细胞的抗凋亡作用及其作用机制。方法：SD大鼠腹腔注射链脲佐菌素（65mg／kg）诱导1型糖尿病模型。模型大鼠随机分为5组：Mel1组：小剂量Mel[0．2mg／（kg·d）3灌胃;Mel2组：大剂量Mel[10mg／（kg·d）]灌胃;TLR组：通络方剂[1．0g／（kg·d）]灌胃;以及糖尿病对照组（DM）和正常对照组（CN）,每组8只。普通饲料喂养12周后处死,取左心室心肌组织,[第一段]     

通络方剂对1型糖尿病大鼠糖脂代谢的影响

目的探讨通络方剂对1型糖尿病大鼠糖脂代谢的影响。方法 30只成年雄性SD大鼠随机分为正常对照组(NC)、糖尿病组(DM)、通络方剂治疗组(TLR),每组10只;后两组大鼠采用链脲佐菌素(STZ)60 mg/kg腹腔注射制备1型糖尿病模型。模型制备成功后,通络方剂组给予通络方剂(1.0 g.kg-1.d-1)灌胃,糖尿病组、正常对照组给予同剂量双蒸水灌胃。8周后比较各组大鼠体质量、附睾周围脂肪组织质量、空腹血糖(FBG)、空腹胰岛素(FINS)及血总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、游离脂肪酸(FFA)、瘦素(leptin)水平,检测脂肪组织中瘦素mRNA表达水平。结果与糖尿病组相比,通络方剂治疗组大鼠体质量增加(P<0.01)、血FBG降低(P<0.05)、FINS升高(P<0.01)、FFA降低(P<0.01)、血leptin水平增加(P<0.05);脂肪组织leptin mRNA表达水平升高(P<0.05)。结论通络方剂可能通过改善糖尿病大鼠瘦素、胰岛素低水平状态纠正糖脂代谢紊乱。     

通络方剂对糖尿病大鼠血管内皮细胞的保护作用

目的：以抗氧化剂褪黑素（Mel）为对照，观察通络方剂对糖尿病大鼠血清抗氧化指标的影响及对大血管内皮细胞的作用。方法：健康、雄性、4～6周龄SD大鼠23只，随机抽取5只作为正常对照组（只注射等体积枸橼酸钠缓冲液），其余大鼠按60mg／kg剂量给予链脲佐菌素（STZ）溶液，1周后测血糖≥16．7mmol／L、尿糖卅者为造模成功。造模成功15只，随机分为3组：模型组、通络方剂组、Mel组，每组5只。     

通络方药抑制糖尿病大鼠肾小球内皮细胞增殖

目的:研究通络方药(Tongluo recipe,TLR)对糖尿病(DM)大鼠肾小球内皮细胞增殖的作用。方法:大鼠随机分为正常对照(NC)组、糖尿病对照(DMC)组、糖尿病TLR干预(DM+TLR)组(n=7)。DMC和DM+TLR组大鼠采用链脲佐菌素(STZ,65 mg/kg)腹腔注射诱导糖尿病,1周后血糖≥16.7 mmol/L者为糖尿病模型制备成功;DM+TLR组按每天1 g/kg TLR灌胃,NC和DMC组给予等量的生理盐水。干预12周后,测肾功能和24 h尿白蛋白(UAE),比色法测血浆丙二醛(MDA)和超氧阴离子水平(O2-),ELISA法测糖基化终末产物(AGE),H-E染色及CD31免疫组化染色观察肾组织病理改变,蛋白质印迹法检测肾组织AGE受体(RAGE)、血管内皮生长因子(VEGF)、VEGF受体(Flk-1)、血管生成素(Ang)-1、Ang-2和Ang-2受体(Tie-2)蛋白表达。结果:与NC组相比,DMC组肾质量/体质量(KW/BW)、24 h尿白蛋白(UAE)、MDA、O2-、AGE、RAGE、VEGF、Flk-1、Ang-2、CD31水平和肾小球系膜面积增加,肌酐清除率(Ccr)、Tie-2水平降低(P<0.01或0.05)。与DMC组相比,DM+TLR组大鼠KW/BW、UAE、MDA、O2-、AGE、RAGE、VEGF、Flk-1、Ang-2、CD31水平和肾小球系膜面积降低,Ccr、Tie-2水平升高(P<0.01或0.05)。结论:TLR可能通过降低糖尿病大鼠肾小球氧化应激水平,抑制AGE-RAGE、VEGF表达,进一步抑制肾小球内皮细胞增殖,从而减少糖尿病时肾小球新生血管形成,减轻肾损伤。     

红杉醇对2型糖尿病大鼠心肌损伤的保护作用

目的：探讨红杉醇（sequoyitol,Seq）对2型糖尿病大鼠心肌损伤的保护作用。方法：采用高脂高糖饮食加小剂量链脲佐菌素（ STZ,30 mg/kg）腹腔注射诱导2型糖尿病大鼠模型,灌服Seq[12．5、25、50 mg/（kg· d）]。治疗6周后,于末次给药后测定血糖及左心室质量指数、血清乳酸脱氢酶（LDH）、磷酸肌酸激酶（CPK）活性、C-反应蛋白（CRP）水平及心肌一氧化氮（ NO）、丙二醛（ MDA）含量;Masson染色观察大鼠心肌胶原纤维变化;免疫组化检测心肌诱导型一氧化氮合酶（ iNOS）蛋白表达。结果：Seq各剂量组能降低模型大鼠血糖及左心室质量指数,改善心肌纤维化,降低CK、LDH、CRP水平,下调心肌iNOS蛋白表达,降低心肌NO及MDA含量（ P＜0．05或P＜0．01）。结论：Seq可能通过抗氧化机制,下调心肌iNOS表达,进而对糖尿病大鼠心肌损伤产生保护作用。     

通络方剂对糖尿病大鼠肾脏p38 MAPK-FN通路的影响

目的研究通络方剂(TLR)对链脲佐菌素(STZ)诱导的糖尿病大鼠肾脏p38 MAPK-纤维连接蛋白(FN)信号转导通路的影响,探讨TLR对肾脏保护作用的可能机制。方法将SD大鼠随机分成3组(n=7):正常对照组(CON组)、糖尿病未干预组(DM组)和糖尿病TLR干预组(DM+TLR组),DM组和DM+TLR组予以STZ(65 mg/kg)腹腔注射诱导糖尿病模型。制模成功后,DM+TLR组大鼠予以1 g/(kg.d)TLR灌胃,CON组和DM组用等剂量的双蒸水灌胃,持续12周。用自动化生化分析仪检测生化指标,用考马斯亮蓝法定量测定24 h尿蛋白,肾皮质进行PAS染色,用蛋白印迹分析法检测t-p38MAPK、p-p38 MAPK、t-CREB、p-CREB、FN的表达。结果与CON组相比,DM组大鼠的左肾质量/体质量、血糖、尿素氮、血肌酐、24 h尿蛋白、尿蛋白/肌酐增加(P<0.05),体质量减少(P<0.05),p-p38 MAPK、p-CREB、FN表达水平分别增加2.37倍、2.21倍、2.03倍(P<0.05);与DM组相比,DM+TLR组左肾质量/体质量、血肌酐、24 h尿蛋白、尿蛋白/肌酐降低(P<0.05),p-p38 MAPK、p-CREB、FN表达水平降低(P<0.05)。结论 TLR可能通过抑制p38 MAPK-FN通路对糖尿病肾病大鼠的肾脏产生保护作用。     

Lieber-DeCarli酒精性肝损伤模型的复制

目的复制经典的酒精性肝损伤动物模型,为防治酒精性肝损伤的实验研究提供理想的研究工具。方法根据Lieber-DeCarli酒精液体饲料配方配制含酒精和不含酒精而热卡相同的液体饲料。23只大鼠随机分正常对照组(n=5)、无酒精液体饲料组(n=9)、酒精液体饲料组(n=9)。正常对照组大鼠给予常规饲料,无酒精液体饲料组与酒精液体饲料组分别定量给予相应液体饲料自动饮服。8周后,观察大鼠肝组织病理形态、肝细胞超微结构的变化,血清丙氨酸氨基转移酶(alanineaminotransferase,ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(aspartateaminotransferase,AST)以及肝组织γ-谷氨酰转肽酶(γ-glutamyltransferase,γ-GT)活性、甘油三酯(triglyceride,TG)含量,以及脂质过氧化损伤相关指标的变化。结果酒精液体饲料组大鼠血清ALT、AST活性,肝组织TG含量以及脂质过氧化产物较正常对照组和无酒精液体饲料组有较大幅度的升高,同时抗氧化物质减少;酒精液体饲料组肝细胞肿胀、脂肪变性等病理改变严重。结论自行配制Lieber-DeCarli液体饲料可成功复制出早期酒精性肝损伤病理改变的大鼠模型。     

罗格列酮对大鼠肝缺血再灌注损伤的保护作用

目的：探讨罗格列酮(rosiglitazone,RGZ)对肝缺血再灌注损伤(hepatic ischemia reperfusion injury,HIRI)的 保护作用及其相关机制。方法：用无创血管夹夹闭左、中叶肝蒂构建70%HIRI大鼠模型。30只Sprague-Dawley大鼠 随机均分为假手术组、HIRI组和RGZ组,每组10只。再灌注2 h后,检测血清中谷丙转氨酶(alanine aminotransferase, ALT)、谷草转氨酶(aspartate aminotransferase,AST)、乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)表达水平,以及肝丙二醛 (malondialdehyde,MDA)的含量和过氧化氢酶(content and catalase,CAT)、谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase, GPx)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)的活性;HE染色检测肝病理形态;Western印迹检测肝过氧化物 酶体增殖物激活受体-γ(peroxisome proliferators-activated receptor γ,PPAR-γ)、磷酸化修饰的PPAR-γ(p-PPAR-γ)、核因 子相关因子2(nuclear factor related factor 2,Nrf-2)、抗氧化反应元件(antioxidant response element,ARE)、血红素氧化酶 1(heme oxygenase 1,HO-1)、还原型辅酶/醌氧化还原酶-1(quinone oxidoreductase-1,NQO-1)表达量。结果：与HIRI组 相比,RGZ组ALT,AST,LDH 和MDA表达水平均明显降低(均P<0.05),而p-PPAR-γ,Nrf-2,ARE,HO-1和NQO-1表 达水平,以及CAT,GPX和SOD活性均明显增高(均P<0.05),此外,肝组织肿胀和坏死以及病理损伤均明显减轻(均 P<0.05),而PPAR-γ表达水平差异无统计学意义(P>0.05)。结论：PPAR-γ激动剂RGZ能减轻肝HIRI,其作用途径可能与 激活Nrf2/ARE信号途径而增强机体抗氧化能力有关。