重组抗原在戊型肝炎病毒感染诊断中的应用

目的 探讨重组抗原在戊型肝炎病毒（ＨＥＶ）感染诊断中的应用。 方法 用ＨＥＶ重组抗原建立酶免疫试验（ＥＩＡ）检测肝病患者和健康人群血清中抗戊型肝炎病毒抗体（抗－ＨＥＶ）。结果 ５５份用新加坡ＤＢＬ公司抗－ＨＥＶ诊断试剂盒检测为抗－ＨＥＶ阳性的肝炎患者血清中，５３份（９６．４％）用本方法检测也为阳性；４５份ＤＢＬ试剂盒检测为抗－ＨＥＶ阴性的血清中，本法检测有３份为抗－ＨＥＶ阳性。检测甲、乙、丙型肝炎     

丙型肝炎病毒不同区抗原酶免疫试剂研究

目的　探讨丙型肝炎病毒（ＨＣＶ） 不同区抗原的反应性,为建立抗ＨＣＶ 酶免疫测定（ＥＩＡ） 确认试剂提供依据。方法　利用基因工程技术,重组所表达的ＨＣＶ 不同区抗原片段（ ＨＣＶＣ、ＮＳ３ 、ＮＳ４ 、ＮＳ５） ,建立了ＨＣＶ 单片段抗原ＥＩＡ 检测方法,检测了７４７ 份四川地区献血员血清。对其中３７３ 份血清,用２ 个厂生产的经批检合格的抗ＨＣＶＥＩＡ 试剂进行检测比较,对个别结果不符的样品进一步进行逆转录聚合酶链反应（ＲＴ－ ＰＣＲ） 分析。结果　献血员中抗ＨＣＶＣ 等４ 种抗体阳性检出率分别为４ ．６８ ％ （３５／７４７） 、５ ．２ ％ （３９／７４７） 、１ ．１ ％ （８／７４７） 、１ ．２ ％ （９／７４７） ,２ 家试剂阳性检出率均为４ ％（１５／３７３） 。结论　ＨＣＶ 不同区抗原片段的抗体检出率差异较大,ＮＳ３ 检出率最高,其次为Ｃ 区、ＮＳ５ 、ＮＳ４ 。说明抗ＨＣＶＥＩＡ 检测试剂以ＨＣＶ ＮＳ３ 区和Ｃ 区为主要抗原片段。     

丙型肝炎病毒不同区抗原酶免疫试剂研究

目的 探讨丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）不同区抗原的反应性,为建立抗ＨＣＶ酶免疫测定（ＥＩＡ）确认试剂提供依据。方法 利用基因工程技术,重组所表达的ＨＣＶ不同区抗原片段（ＨＣＶ－Ｃ、ＮＳ３、ＮＳ４、ＮＳ５）,建立了ＨＣＶ单片段抗原ＥＩＡ检测方法,检测了７４７份四川地区献血员血清。对其中３７３份血清,用２个厂生产的经批检合格的抗ＨＣＶ ＥＩＡ试剂进行检测比较,对个别结果不符的样品进一步进行逆转录－聚合酶链反     

以合成肽作抗原的酶联免疫吸附法诊断戊型肝炎病毒感染

建立了用合成多肽抗原测定戊型肝炎病毒（ＨＥＶ）抗体的酶联免疫吸附法。合成多肽Ｅ３３（ｃ）（２μｇ／ｍｌ）、Ｅ１５（Ｍ）（１μｇ／ｍｌ）混合包被，测定了４８份ＨＥＶ抗体阳性血清，阳性符合率为９５．８％。４１份阴性血清均为阴性。此方法灵敏度高、特异性强、简便快速，适合临床应用。     

以合成肽作抗原的酶联免疫吸附法诊断戊型肝炎病毒感染

建立了用合成多肽抗原测定戊型肝炎病毒（ＨＥＶ）抗体的酶联免疫吸附法。合成多肽Ｅ３３（ｃ）（２μｇ／ｍｌ），Ｅ１５（Ｍ）（１μｇ／ｍｌ）混合包被，测定了４８份ＨＥＶ抗体阳性血清，阳性符合率为９５．８％。４１份阴性血清均为阴性。此方法灵敏度高，，特异中，简便快速，适合临床应用。     

太原市不同人群戊肝感染调查分析

为了解我市不同人群戊型肝炎病毒（ＨＥＶ）感染情况，为今后预防戊肝提供依据。戊型肝炎主要侵犯青壮年［１］，我们于１９９７年１０月收集１８～４０岁年龄组不同人群血清２００份，进行抗－ＨＥＶＩｇＧ检测。材料与方法收集正常人群、肝功异常（ＴＴＴ＞６单位或ＡＬ...     

武汉地区住院患儿抗HEV抗体的调查

采用进口ＨＥＶＥＬＩＳＡ诊断试剂盒，检测了武汉地区８５１例住院患儿血清中的抗─ＨＥＶ，共有１１例（１．２９％）阳性。     

输血后丙型肝炎患者不同功能区抗体的研究

为了了解丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）不同功能区抗体的诊断价值，利用体外表达的ＨＣＶＣ、Ｅ１、Ｅ２／ＮＳ１、ＮＳ３、ＮＳ５蛋白作为重组抗原，按ＥＬＩＳＡ方法检测了已确诊为输血后丙型肝炎患者的血清１１２份。结果，检出率最高的是抗ＨＣＶ－Ｃ（８１．３％），最低的是抗ＨＣＶ－Ｅ１（１０．７％），输血后１个月内检出率最高的也是抗ＨＣＶ－Ｃ（８０％）。表明Ｃ蛋白是进行ＨＣＶ诊断的最重要抗原。另外，动态观察１０例输血     

血清丙型肝炎病毒核心抗原、ＮＳ３抗原的检测及临床意义

目的　为检测病人血清中丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）核心抗原、ＮＳ３抗原井探讨其临床意义。方法　用基因工程表达的ＨＣＶ核心蛋白、ＮＳ３抗原制各其单克隆抗体，建立检测病人血清中ＨＣＶ核心抗原、ＮＳ３抗原的ＥＬＩＳＡ法。结果　６０例慢性丙型肝炎患；２５０例杭—ＨＣＶ—１８Ｇ阳性；３０例抗—ＨＣＶ—ＩｇＧ、ＩｇＭ均阳性；２００例透析病人；２０例白血病病人；１５０例普通病人中ＨＣＶ核心抗原、ＮＳ３抗原阳性检出率分别为：６．６％、８．４％、１６．７％、４％、５％、２％和１３．３％、１０．４％、２３．３％、３．０％、５．０％、２．６％。结论ＨＣＶ核心抗原、ＮＳ３抗原的检测，可作为现有检测方法的补充，能更好地反映患体内ＨＣＶ的活动情况。     

人工合成HEV抗原多肽的抗原性筛选及HEV抗体检测的ELISA法

利用固相合成法，参考已克隆和测序了的ＨＥＶ病毒基因组序列，通过计算机对ＨＥＶ抗原结构的模拟分析，设计合成了６个ＨＥＶ抗原的多肽片段，再用间ＥＬＩＳＡ法筛选出抗原性好、专一性强的肽段。ＣＥＰ５为主肽，加及ＥＰ４和ＥＰ２混合包被酶标板，建立检测ＨＥＶ抗体的ＥＬＩＳＡ方法。本方法通过与Ｇｅｎｅｌａｂｓ公司的ＤＢ－抗ＨＥＶＥＬＩＳＡ检测试剂盒的对比研究和临床标本检测，阳性血清的检出符合率为９６．８％，阴性     

重组蛋白与合成肽抗原对戊型肝炎的诊断价值比较

目的　比较重组蛋白与合成肽抗原建立的酶联免疫吸附试验 (ELISA)在戊型肝炎实验室诊断中的应用价值。方法　选择戊型肝炎病毒第二开放读码框架 (ORF2 ) ,分别采用重组蛋白及合成肽抗原 ,建立酶联免疫吸附试验 (ELISA) ,同时检测 97份戊型肝炎急性期患者 ,4 7份甲、乙、丙、丁、庚型肝炎患者及 12 0份健康献血者的血清抗 HEV。结果　重组蛋白ELISA、合成肽ELISA与Genelabs重组抗原ELISA试剂盒检测结果的总符合率分别为 96 .9%和 92 % ;重组蛋白ELISA与合成肽ELISA的一致率为 91% ;合成肽ELISA对重组蛋白ELISA的灵敏度为 90 % ,特异度为 10 0 %。结论　戊型肝炎病毒相同表位的重组蛋白和合成肽抗原用于抗 HEVELISA检测有较好的一致性。     

实时荧光逆转录PCR检测戊型肝炎病毒RNA的临床应用

目的 探讨实时荧光逆转录(RT)-PCR方法检测急性戊型肝炎患者血清戊型肝炎病毒(HEV)RNA的意义.方法 采用实时荧光RT-PCR方法,对HEV ORF3基因保守区进行扩增和检测.收集北京佑安医院住院和门诊434例急性戊型肝炎患者血清;甲型肝炎患者40例、乙型肝炎患者100例、健康献血员110名作为对照组;提取HEV RNA进行荧光RT-PCR检测.结果 434例急性戊型肝炎患者血清中232例(53.5%)为HEV RNA阳性.对照组血清HEV RNA检测均为阴性.与血清抗-HEV IgM检测比较,434例急性戊型肝炎患者HEV RNA检测的总符合率为67.1%,两种检测方法差异有统计学意义(Kappa=0.308,P=0.000).5例患者的首份血清检测为HEV RNA阳性,但抗-HEV IgM为阴性,系列追踪检测,相继出现抗-HEV IgM阳性.急性戊型肝炎患者的血清HEVRNA的检出多在发病的2～10 d内.结论 荧光RT-PCR方法有较高的特异性,应用实时荧光RT-PCR方法能对Ⅰ和Ⅳ戊型肝炎病毒感染的患者血清中的RNA进行定性检测.在临床使用可以提高对HEV早期诊断的水平.     

戊型肝炎病毒IgM抗体阳性患者系列血清3种生物标志物结果分析

目的分析戊型肝炎病毒（HEV）IgM抗体阳性患者的入院时、住院中和出院时的系列血清中3种生物标志物的变化情况及其诊断意义。方法收集临床常规检测的HEVIgM抗体阳性患者的入院时、住院中和出院时的血清,用酶联免疫（EIA）试剂检测HEVIgG抗体和IgM抗体,用实时荧光PCR方法检测核酸,分析其变化情况。结果在25例HEVIgM抗体阳性患者系列血清中,HEVIgM抗体为4例高值无明显变化、15例高值明显下降变化、1例明显升高变化、5例低值无明显变化,HEVIgG抗体为3例高值无明显变化、15例高值明显升高变化、4例高值下降后维持高值、1例低值转为阴性、2例始终阴性,HEVRNA为入院第1天22例（88％）阳性、入院后1周15例（62．5％）阳性、入院后2周1例（5．6％）阳性。结论戊型肝炎患者发病过程中,系列血清HEV IgG抗体和IgM抗体及HEV RNA联合检测有助于戊型肝炎的明确诊断。     

长春地区人群HEV流行特点及病毒基因型分析

目的探讨长春地区戊型肝炎病毒（既v）在人群中的感染情况及戊型肝炎病毒系统进化关系。方法用抗，HEV抗体试剂盒检测人血清中的抗体；对部分血清和粪便标本用逆转录聚合酶链式反应的方法（RT-PER）检测HEV RNA，并对PER阳性产物进行克隆测序，然后将序列进行分析。结果长春地区各年龄组共4944份人血清中有1127份为抗-HEV抗体阳性，阳性率为22．79％；其中男性阳性率为34．27％，女性阳性率为10．88％。20岁以下人群感染率为1．00％左右，自20岁起男性和女性分别以每年接近10．00％和3．00％的速度平稳上升。戊肝感染者中男性与女性的抗体阳性率之比为3．3：1，随着年龄上升，人群中戊肝感染者的抗体水平也缓慢上升。我们从急性戊肝患者血清中检测到1份HEV RNA阳性样本，从急性戊肝患者粪便中检测到2份为HEV RNA阳性样本。序列分析显示从我们克隆出的3株HEV的核苷酸序列的同源性为91．2-99．1％。该3株序列在ORF 2区438bp同1-4型间核苷酸同源性分别为：77．8％-82．3％、77．2％-78．1％、77．2％-99．1％、85．2％-95．2％；结论HEV在各年龄段人群中均有流行，但在年龄段20岁人群后的流行率呈逐年增长趋势，说明长春地区HEW感染主要发生在成年后。人感染的HEV的基因序列与猪群戊型肝炎病毒的基因Ⅳ型同源性最高。由进化关系看在长春地区人HEV与猪HEV不能分为不同的两支。说明长春地区人HEV和猪HEV很可能是由同一支分支进化而来。     

胶体金免疫层析法检测乙型肝炎病毒表面抗原

目的建立一种简易快速、自测式胶体金免疫层析法（ＧＩＣＡ）用于检测血清中乙型肝炎病毒表面抗原（ＨＢｓＡｇ）。方法采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金颗粒、标记乙型肝炎病毒表面抗体（抗ＨＢｓ），制成免疫层析检测试条。血清中ＨＢｓＡｇ与测试条上金标记抗体结合后沿着硝酸纤维素膜移动，与膜上的固相抗体结合形成肉眼可见的红色线条。结果ＧＩＣＡ试条只与ＨＢｓＡｇ有特异性反应，与乙型肝炎病毒核心抗原、ｅ抗原等无交叉反应。检测中国药品生物制品检定所ＨＢｓＡｇ标准品，灵敏度可达１ｎｇ／ｍｌ。用ＧＩＣＡ与酶免疫法比较检测了３９５份不同血清标本中ＨＢｓＡｇ，两法符合率为９９．０％。结论ＧＩＣＡ检测血清中的ＨＢｓＡｇ特异性强、灵敏度高、简便快速，无需特殊仪器设备，有广泛应用价值。     

HEVⅣ型ORF2编码蛋白N-端合成肽的抗原性检测

目的　检测戊型肝炎病毒 (HEV)Ⅳ型开放阅读框架 2 (ORF2 )编码蛋白N 端表位的抗原性 ,寻找良好的抗原肽 ,以便用于HEV抗体测。方法　根据HEVORF2编码蛋白N 端中含有的抗原表位 ,从HEV中国株蛋白的氨基酸序列中选取 2 5～ 38位序列氨基酸 ,用固相化学合成法合成抗原肽 ,并用ELISA检测抗原性。结果　HEVⅣORF2编码蛋白N 端氨基酸顺序为2 5～ 38的抗原肽与急性期戊型肝炎病人血清有较高的反应性 ,与Genelab诊断试剂盒的符合率达 93.8%。结论　为提高HEV抗体的检出率 ,在包被抗原中应含有HEVⅣ型ORF2编码蛋白N 端的抗原肽     

利用戊型肝炎病毒开放读码框架2截短多肽降低抗戊型肝炎病毒IgM检测中的假阳性

目的 研究用戊型肝炎病毒4型(HEV4-)开放读码框架(ORF)2主要免疫表位截短多肽排除抗-HEV IgM检测中发生假阳性的可行性.方法 用重组HEV-4 ORF2蛋白主要抗原决定簇多肽(459～607位氨基酸)及其截短多肽(472～607位氨基酸)为抗原分别包被ELISA板,用间接ELISA法分别检测35份HEV RNA阳性患者血清、69份健康人血清和117份可疑阳性血清标本的抗-HEV ISM,并用免疫印迹法(Western blot,WB)确认,逆转录(RT)-PCR检测HEV RNA加以比较.结果 WB检测结果显示,戊型病毒性肝炎患者血清中抗-HEV ISM仅与459～607多肽二聚体反应,而不与其单体及472～607多肽反应.间接ELISA法检测35份HEV RNA阳性患者血清抗-HEV IgM均能与459～607多肽反应,而不与472～607多肽反应;69名健康人血清与2种多肽都不反应.117份可疑阳性血清中,5份能同时与2种多肽反应,但450 nm吸光度(A450)值之差小于0.5.WB检测这5份血清抗-HEV IgM均阴性;RT-PCR检测HEV RNA为阴性,说明这5份血清为非特异性吸附引起的假阳性.结论 ORF2 459～607多肽可有效检测抗-HEV ISM,根据血清与2种多肽反应的A450差异,能有效排除因非特异性吸附导致的抗-HEV IgM假阳性.     

Performance of a conventional enzyme immunoassay for hepatitis C virus core antigen in the early phases of hepatitis C infection

There are periods within the early phase of hepatitis C virus (HCV) infection in which the anti-HCV antibody test is unable to confirm HCV viremia. To reduce the risk of transmitting HCV through transfusions, we developed a simple and highly sensitive enzyme immunoassay (EIA) which detects the core antigen of HCV (HCVcAg). This assay employed a conventional colorimetric EIA system, and was based on a two-step sandwich assay, using a 96- well microplate. The reproducibility of the results was very high. When the cutoff values were set to 30 fmol of recombinant HCVcAg/L, as determined by the distribution of healthy subject sera (n=223), 99.6% of healthy subject sera and 100% of hepatitis B patient sera (n=50) were negative for HCVcAg. The clinical performance of this EIA was examined using 14 commercially available seroconversion panels. In every panel, HCVcAg could be detected at points preceding the seroconversion of anti-HCV antibodies. The points at which HCVcAg was detected were the same as those at which it was detected by an AMPLICOR HCV Monitor test. The EIA's window period for detecting the HCVcAg in all panels was on average 26 days shorter than that of the anti-HCV antibody test. In three panels where the first sample is negative for HCV RNA, the window period was shortened 50 days by this EIA for HCVcAg. There was a positive correlation between the concentration of HCVcAg and HCV RNA in anti-HCV antibody negative specimens. This assay was simpler to perform than assays based on gene amplification technology for the detection of HCV RNA, and the window period was shortened to that of the AMPLICOR HCV Monitor test. Thus, the EIA for HCVcAg would be useful in screening seroconverting donors and could reduce the residual risk of secondary HCV infections through transfusions.     

丙型肝炎国产诊断试剂与第三代进口试剂的临床比较研究

目的考察丙型肝炎（丙肝）国产改进酶标诊断试剂与国外第三代主流试剂的灵敏度与特异性。方法用改进后的国产新伟凯公司丙肝试剂（ＸＷＫ）和两种国外第三代主流试剂（Ａ３，Ｏ３）检测了２８８２份供血员血样和５５６份各种肝炎病人血样。结果３种试剂（ＸＷＫ，Ａ３，Ｏ３）分别检出３８０，３７８和３７１份阳性样品，经免疫印迹条法（ＲＩＢＡ）和聚合酶链反应（ＰＣＲ）方法确证，３种试剂的假阳性数分别为７，６和１份，假阴性数分别为１，２和４份。结果说明，改进后的国产丙肝试剂，其检出灵敏度与目前国际上最新一代试剂接近，但其特异性略逊于国外两种第三代主流试剂。结论分析ＲＩＢＡ和ＰＣＲ所测得的３种试剂漏检样品的结果可以看出，目前国际上的第三代丙肝酶标试剂对丙肝核心抗体的检出灵敏度较低，这一点与我们以前的研究结果相同。而改进后的国产丙肝试剂既赶上了国外第三代试剂对丙肝ＮＳ３抗体的检出力度，同时又避免了国外试剂所暴露出的对丙肝核心抗体检出力弱的缺点。