选择性COX-2抑制剂罗非昔布对胃癌细胞增殖的影响

目的研究选择性环氧合酶-2(COX-2)抑制剂罗非昔布(rofecoxib)对人胃癌细胞株SGC7901增殖的影响,并探讨其作用机制。方法采用MTT比色分析法测定人胃癌细胞株SGC7901分别在1×10-5、1×10-6、1×10-7、1×10-8、1×10-9、1×10-10molL的罗非昔布作用72h后的增殖及凋亡情况;增殖细胞核抗原(PCNA)免疫细胞化学染色观察罗非昔布对胃腺癌细胞SGC7901增殖的影响;采用免疫细胞化学染色观察1×10-5molL的罗非昔布对SGC7901细胞c-myc基因表达的影响。结果1×10-5～1×10-9molL的罗非昔布对SGC7901细胞的生长均有抑制作用,以1×10-5molL浓度的抑制作用最为显著,其抑制率为35.46%;1×10-5molL罗非昔布作用后SGC7901的PCNA表达明显降低;c-myc的表达自用药6h时起显著升高,12、24h最明显。结论罗非昔布可抑制人胃癌细胞株SGC7901的生长,其可能的作用机制之一为诱导细胞高表达c-myc基因。     

奥曲肽抑制肝癌生长的实验研究

目的研究生长抑素类似物奥曲肽在体外、体内对肝癌生长及凋亡的影响.方法采用3H-胸腺嘧啶核苷(3H-TdR)掺入法、DNA末端原位标记染色(TUNEL)及流式细胞技术检测奥曲肽对体外培养的肝癌细胞生长影响及凋亡的诱导作用.利用SMMC-7721肝癌细胞株建立裸鼠肝癌原位种植瘤模型,实验组皮下注射奥曲肽100μg@kg-1@d-1;对照组予生理盐水20μg@d-1;共给药8周.结果培养细胞经不同浓度的奥曲肽作用48h后,对肝癌细胞的生长具有明显的抑制作用,且肝癌细胞3H-TdR掺入值与奥曲肽的浓度呈负相关(r=-0.97,P<0.01).TUNUL显示,1×10-6mol/L的奥曲肽作用24h后,肝癌细胞凋亡率为15.2%±2.4%;流式细胞检测可见明显的凋亡峰.奥曲肽治疗组裸鼠肝癌原位种植瘤重量明显低于对照组(0.27±0.05vs0.85±0.37,P<0.01).结论体内及体外实验表明,奥曲肽能有效抑制肝癌生长,其机制可能与抑制肝癌细胞DNA合成及诱导肝癌细胞凋亡有关.     

尼美舒利诱导胃癌细胞凋亡的作用

目的探讨选择性环氧化酶2(COX-2)抑制剂尼美舒利体外诱导胃癌细胞株SGC7901凋亡的作用和可能的细胞内信号转导机制。方法体外将选择性COX-2抑制剂尼美舒利作用于胃癌细胞株SGC7901,流式细胞仪检测尼美舒利对细胞凋亡的影响;Western blot法检测药物作用前后STAT3蛋白的磷酸化活性(P-STAT3)和bcl-2的表达。结果FCM显示SGC7901细胞经100、200μmol/L尼美舒利作用48h后与对照组相比细胞凋亡百分数增高,且在同一时间随药物浓度增加凋亡百分数增高;Western blot结果显示尼美舒利作用24、48h后P-STAT3、bcl-2蛋白的表达降低。结论尼美舒利体外可促进胃癌细胞凋亡,其机制可能与抑制STAT3信号通路相关蛋白P-STAT3、bcl-2表达有关。     

联合应用干扰素α-2b及选择性环氧化酶2抑制剂对肝癌细胞抑制作用的研究

目的观察干扰素α-2b(IFN-α-2b),选择性环氧化酶2(COX-2)抑制剂非甾体类消炎药塞来昔布单用以及两者联合应用时,对人肝癌细胞株HepG2的生长抑制作用及同时检测药物作用后COX-2和血管内皮生长因子(VEGF)及Bcl-2表达的情况,探讨药物作用的机制。方法 HepG2细胞根据所加药物不同分为不同浓度的IFN-α-2b组(1250、2500、5000、10 000、20 000、40 000 U/mL)、塞来昔布组(25、50、100、200μmol/L)、联合用药组(IFN-α-2b 5000 U/mL+塞来昔布50μmol/L、IFN-α-2b 5000 U/mL+选择性COX-2 100μmol/L)。MTT法检测不同时间(24、48 h)各组细胞增殖抑制率,流式细胞术检测细胞凋亡率,Western blot检测用药前后COX-2、VEGF、Bcl-2蛋白在HepG2细胞中的表达变化。结果不同浓度的塞来昔布和干扰素对HepG2细胞均有抑制作用,且联合效果明显优于单用,各组与对照组差异有统计学意义(P<0.05);流式细胞术分析:塞来昔布50μmol/L组、塞来昔布100μmol/L组、IFN-α-2b 5000 U/mL组、IFN-α-2b 5000 U/mL+塞来昔布50μmol/L组、IFN-α-2b 5000 U/mL+塞来昔布100μmol/L组细胞凋亡率分别为(14.93±0.79)%、(25.43±0.89)%、(20.52±1.46)%、(27.12±3.34)%、(48.17±2.04)%,与阴性对照组(8.73±0.83)%比较差异均有统计学意义(P<0.05);塞来昔布单用及联合IFN-α-2b作用48 h后,各组COX-2、VEGF、Bcl-2蛋白的表达下调,呈剂量依赖性,联合用药组较单药组作用明显。结论干扰素α-2b和塞来昔布均有抑制肝癌细胞HepG2增殖的作用,同时对细胞具有凋亡诱导作用,亦能抑制细胞中COX-2、VEGF、Bcl-2的表达。上述抑制作用随药物浓度的增加、作用时间的延长而增强,联合作用更强。     

选择性环氧合酶-2抑制剂对胃癌细胞Bgc-823增殖的影响

目的探讨选择性环氧合酶-2（COX-2）抑制剂——美洛昔康、塞来昔布对胃癌细胞Bgc-823增殖与凋亡的影响。方法四唑盐比色实验法（MTT法）检测Bgc-823细胞的生长情况;流式细胞术检测细胞凋亡及细胞周期。结果美洛昔康、塞来昔布呈剂量和时间依赖性抑制Bgc-823细胞的增殖;塞来昔布的作用强于美洛昔康。塞来昔布可诱导Bgc-823细胞凋亡,将细胞阻滞在G0/G1期;随着药物浓度的增加,凋亡率增加,G0/G1期细胞比例增加。结论选择性COX-2抑制剂呈剂量和时间依赖性抑制胃癌细胞生长,这种作用可能依赖于对COX-2表达的抑制。选择性COX-2抑制剂呈剂量依赖性影响细胞周期,诱导胃癌细胞凋亡。     

非甾体类抗炎药Celecoxib对人卵巢癌细胞环氧合酶2表达的影响

目的探讨非甾体类抗炎药Celecoxib对人卵巢癌环氧合酶2(COX-2)表达的影响,以及其抗卵巢癌作用与COX-2表达之间的关系。方法采用流式细胞技术(FCM)、逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和Western免疫印迹法,检测不同浓度Celecoxib(COX-2特异性抑制剂)加入人卵巢癌SKOV3细胞株中共同培养24h后,SKOV3细胞COX-2的蛋白表达和mRNA水平变化,同时与非选择性COX-2抑制剂Aspirin相比较。采用免疫组化法检测Celecoxib对人卵巢癌裸鼠移植瘤组织中COX-2表达的影响。结果RT-PCR显示,随药物浓度增加,COX-2mRNA表达逐渐下降,与对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05);FCM显示,Celecoxib(5×10-5mol/L)和Aspirin(7×10-3mol/L)组COX-2的平均荧光强度明显低于对照组(P<0.05),尤以Celecoxib(5×10-5mol/L)组更显著;Westernblot检查结果相同;免疫组化发现,Celecoxib不同剂量(10、25、50mg/kg·d)用于人卵巢癌裸鼠移植瘤后,其COX-2的IOD值均明显低于对照组(P<0.05),且随药物剂量的增大,其IOD减小。结论Celecoxib对人卵巢癌的抗肿瘤效应与COX-2表达下降有关,可能存在COX-2依赖和非依赖途径,值得进一步研究。     

塞来昔布与吉西他滨合用对胰腺癌的抑制作用及其机制

目的探讨环氧合酶2(COX2)选择性抑制剂塞来昔布和吉西他滨抑制胰腺癌生长的影响及其机制。方法观察塞来昔布与吉西他滨联合作用对裸鼠SW1990胰腺癌细胞移植瘤生长的影响,并与两者单独应用作比较,免疫组织化学染色观察肿瘤组织增殖细胞核抗原(PCNA)和细胞周期蛋白D1表达的变化;四唑蓝法、克隆形成试验观察塞来昔布和吉西他滨体外对SW1990细胞增殖的影响;流式细胞术检测细胞凋亡和细胞周期变化;Western印迹检测细胞周期蛋白D1、A和B1表达的变化。结果药物作用于裸鼠移植瘤32d后,对照组、吉西他滨组、塞来昔布组和联合组肿瘤体积分别为(2.31±0.41)cm3、(0.41±0.12)cm3、(1.56±0.17)cm3、(0.05±0.04)cm3,塞来昔布和吉西他滨联合可明显抑制胰腺癌移植瘤的生长,对照组PCNA、细胞周期蛋白D1呈强阳性表达,吉西他滨组PCNA、细胞周期蛋白D1阳性细胞数明显减少,塞来昔布组PCNA阳性细胞数较对照组略有减少,细胞周期蛋白D1阳性细胞数则无明显减少,而联合组中PCNA、细胞周期蛋白D1阳性细胞数较前3组明显减少。塞来昔布和吉西他滨剂量依赖性抑制SW1990细胞增殖,两药联合应用,对细胞增殖的抑制有增强作用。药物作用24h或72h后,塞来昔布组和联合组凋亡细胞数较对照组及吉西他滨组明显增加(P<0.05)。药物作用24h后,塞来昔布组和联合组G0/G1期细胞比例明显增加,G2/M期细胞明显减少,吉西他滨组G0/G1期细胞明显减少,而S期和G2/M期细胞明显增加,药物作用72h后,塞来昔布组和联合组G0/G1期细胞进一步增加,S期细胞明显减少,G2/M期细胞进一步减少,而联合组在作用24h和72h,G2/M期细胞比例均为0。细胞周期素的表达与细胞周期的分布相一致。结论COX2选择性抑制剂塞来昔布可增强吉西他滨对胰腺癌增殖的抑制作用,其机制可能部分通过调节细胞周期素的表达,诱导细胞周期阻滞和胰腺癌细胞凋亡而实现的。     

选择性及非选择性COX-2抑制剂对结肠癌细胞生长的影响

目的探讨选择性及非选择性环氧合酶-2（cylooxygenase-2,COX-2）抑制剂对体外培养的结肠癌细胞生长的影响及凋亡的诱导作用。方法体外培养HT-29、SW480及LS174-T三种结肠癌细胞,分别加入不同浓度的非选择性COX-2抑制剂阿司匹林（aspirin）、选择性COX-2抑制剂塞来昔布（celecoxib）及美洛昔康（meloxicam）作用于HT-29及SW480细胞。采用MTT法检测结肠癌细胞增殖;用免疫细胞化学法及免疫印迹技术分别检测结肠癌细胞增殖细胞核抗原（PCNA）及细胞COX-2的表达;流式细胞技术分析对结肠癌细胞周期的影响;用Annexin V／PI染色结合流式细胞术检测细胞凋亡。结果aspirin、celecoxib及meloxicam均能有效抑制体外培养的HT-29、SW480结肠癌细胞生长,并具有良好的量-效关系。Western blot表明,HT-29细胞表达COX-2,而SW480细胞不表达COX-2。Aspirin及celecoxib处理组细胞PCNA表达较对照组明显下调。10mmol／L的aspirin及50μmol／L的celecoxib能诱导HT-29及SW480细胞凋亡,凋亡率分别为4．8％,17．7％;5．1％,20．4％。结论选择性及非选择性COX-2抑制剂均能有效抑制结肠癌细胞生长,这种作用亦存在于COX-2阴性表达的结肠癌细胞。     

NS-398对人胃癌裸鼠移植瘤血管生成的影响

目的探讨NS-398对裸鼠胃癌移植瘤血管生成的影响.方法12只裸鼠随机分为2组,以人胃癌细胞株SGC7901建立荷瘤裸鼠动物模型.治疗组于接种第2 d开始给予10 mg/kg NS-398腹腔注射,隔d给药;对照组隔d腹腔注射同体积PBS,连续20 d,观察抑瘤率,应用免疫组织化学技术检测2组肿瘤组织环氧合酶-2(COX-2)、VEGF表达及微血管密度(MVD).结果NS-398抑瘤率达88.7%,COX-2、VEGF及MVD在治疗组分别为2.6±0.8,2.3±1.2和21.2±4.8,显著低于对照组的5.0±0.6,5.8±0.4和41.3±2.6(P均＜0.05).结论NS-398可能通过抑制COX-2、减少VEGF的表达抑制裸鼠胃癌移植瘤血管生成.     

塞来昔布抑制人胃癌细胞MGC803细胞增殖及其分子机制

目的：研究塞来昔布在体外对人胃癌细胞MGC803生长增殖及其抗肿瘤的相关分子机制。方法：体外培养人胃癌细胞MGC803,MTT法检测塞来昔布在相同浓度下,不同时间对于胃癌细胞增殖的影响,并计算IC50值;RT-PCR法检COX-2、MMP-9的mRNA的表达影响;结果：MTT结果显示：相同干预浓度塞来昔布抑制人胃癌细胞增殖,其24 h,48 h,72 h的IC50分别为：（98.67±11.755）μmol/L、（67.506±6.646）μmol/L、（57.662±15.809）μmol/L;RT-PCR结果显示：人胃癌细胞MGC803正常对照组及塞来昔布干预组COX-2mRNA灰度值分别为：0.918±0.031,0.301±0.002（t=16.037,P=0.000）;MMP-9mRNA灰度值分别为：0.928±0.041,0.360±0.012（t=10.487,P=0.003）;结论：塞来昔布抑制胃癌细胞增殖,塞来昔布抗肿瘤机制可能通过抑制COX-2及MMP-9的mRNA的表达来实现的。     

阿司匹林抑制胃癌细胞生长及其机制探讨

目的　研究阿司匹林对 SGC- 790 1胃癌细胞生长的影响 ,并初步探讨其作用的分子机制。方法　采用 3H- Td R法及流式细胞术检测不同浓度阿司匹林对胃癌细胞 DNA合成及细胞周期的影响 ;用免疫细胞化学法检测阿司匹林对胃癌细胞 COX- 2表达的影响 ;Western blotting法及 EMSA法检测阿司匹林对胃癌细胞 c- fos表达及 AP- 1活化的影响。结果　胃癌细胞经不同浓度的阿司匹林作用后 ,其 3H- Td R掺入值明显降低 ,且与阿司匹林浓度呈高度负相关 ( r=- 0 .9,P<0 .0 5 )。细胞周期分析显示 ,阿司匹林主要作用于胃癌细胞 S期。免疫细胞化学染色显示 ,阿司匹林能下调胃癌细胞 COX- 2表达 ,且具有良好的量效关系。Western blotting检测表明 ,阿司匹林能降低胃癌细胞 c- fos蛋白的表达。EMSA分析显示 ,阿司匹林能有效抑制血清刺激的 AP- 1的 DNA结合活性。结论　阿司匹林能有效抑制胃癌细胞的生长 ,这种作用可能是其通过抑制胃癌细胞 c- fos表达以及 AP- 1活化 ,进而抑制COX- 2表达所致     

RNA干扰突变型p53基因对胃癌SGC7901细胞生物学行为的影响

目的:利用RNA干扰(RNAi)技术稳定沉默人胃癌SGC7901细胞中的突变型p53基因,观察其对细胞生物学行为的影响。方法:p53小干扰RNA(siRNA)重组质粒用脂质体介导法转染SGC7901细胞,另设未转染组和对照组。RT-PCR和Western blot分别检测p53基因mRNA和蛋白的表达,MTT法检测细胞增殖情况及其对奥沙利铂药物敏感性的变化,流式细胞仪检测细胞周期分布和凋亡,平板克隆形成试验、裸鼠移植瘤成瘤实验分析细胞成瘤性变化。结果:p53 siRNA可显著下调SGC7901细胞中突变型p53基因mRNA和蛋白的表达,实验组较未转染组和对照组细胞生长曲线左移。实验组的G0/G1期细胞数较对照组和未转染组分别减少7.4%和6.7%,进入S期的细胞数增加17.2%,奥沙利铂诱导的细胞凋亡率明显降低,未转染组、对照组和实验组细胞的IC50分别为15.88μmol/L、14.32μmol/L和20.34μmol/L。与未转染组和对照组相比,实验组细胞平板克隆形成数量显著增多,裸鼠体内细胞成瘤性增加。结论:p53 siRNA可有效抑制突变型p53基因在胃癌SGC7901细胞中的表达,但利用RNA干扰技术靶向突变型p53基因在胃癌的治疗上尚存在不确定性。     

脂肪酸-辅酶A连接酶4的表达与胃癌细胞增殖、凋亡的关系

目的:研究脂肪酸-辅酶A连接酶4(FACL4)在胃癌中的表达,及其与8-溴-环腺苷酸(8-Br-cAMP)调控胃癌细胞增殖、凋亡的关系。方法:采用逆转录聚合酶链反应技术,检测23例胃腺癌组织和癌旁正常胃黏膜、以及8-Br-cAMP作用SGC7901细胞后FACL4 mRNA的表达水平。应用流式细胞仪及透射电镜技术,检测2×10-5mol/L浓度的8-Br-cAMP作用48 h后SGC7901细胞的凋亡情况。结果:与正常胃黏膜相比,胃腺癌组织及SGC7901细胞中FACL4 mRNA表达水平显著上调(P<0.05),胃腺癌组织FACL4 mRNA阳性表达率为87%。2×10-5mol/L的8-Br-cAMP可抑制SGC7901细胞中FACL4的表达,从而抑制胃癌细胞增殖,诱导细胞凋亡。结论:FACL4在胃癌组织中表达增高,8-Br-cAMP作为选择性FACL4抑制剂,可抑制胃癌细胞增殖和FACL4表达,诱导胃癌细胞凋亡,可能成为胃癌诊治的一个新靶点。     

TRAIL联合PDTC对SGC-7901细胞生长抑制和凋亡诱导的实验研究

目的观察肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体（TRAIL）及TRAIL联合核转录因子核因子-κB（NF-κB）活性特异性抑制剂吡咯烷二硫代氨基甲酸盐（PDTC）对胃癌细胞SGC-7901的生长抑制和凋亡诱导作用,并寻找逆转TRAIL耐药的方法。方法采用不同浓度的TRAIL及TRAIL联合PDTC作用于胃癌细胞后,MTT法检测细胞生长抑制率,流式细胞仪检测细胞的凋亡率,免疫细胞化学染色方法观察药物作用前后NF-κB表达情况。结果单独使用TRAIL时,随着浓度从50μg/L增加到500μg/L,细胞的生长抑制率和凋亡率逐渐增加（P〈0.05）,但这种作用是非线性的。TRAIL联合0.05μmol/L、0.1μmol/L PDTC后肿瘤细胞的生长抑制率和凋亡率较单用TRAIL显著下降（P〈0.05）;而联合1μmol/L、10μmol/L PDTC后其作用较上有所上升（P〈0.05）。联合作用组p65蛋白在胞核中染色的强度低于单纯使用TRAIL组（P〈0.05）。结论TRAIL对胃癌细胞株SGC-7901具有一定程度的生长抑制和凋亡诱导作用;NF-κB信号转导途径可能具有双向调节作用,大剂量PDTC可能逆转胃癌细胞对TRA...     

组蛋白脱乙酰基酶抑制剂丁酸钠对胃癌细胞系生长及p16基因表达的影响

目的 探讨组蛋白脱乙酰基酶抑制剂丁酸钠(NaB)对体外培养的胃癌细胞系SGC7901和BGC823生长及p16基因表达的影响.方法 应用四甲基偶氮唑盐比色法(MTT)检测细胞增殖活性,流式细胞仪检测细胞周期分布,膜联蛋白V-异硫氰酸荧光素染色法检测细胞凋亡率,逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)及蛋白质印迹法检测p16基因mRNA及蛋白质表达,甲基化特异性PCR法(MSP)检测p16基因的甲基化状态.结果 NaB处理后SGC7901和BGC823细胞生长受到抑制,1×10-3,3×10-3,5×10-3mol/L NaB处理72 h后两株细胞G0/G1期细胞数量显著增加,S期细胞数显著降低(P<0.01),呈现G1阻滞,各浓度组细胞凋亡率均显著增加(P<0.01).p16基因在SGC7901及BGC823细胞中低表达,启动子区呈异常甲基化状态,NaB处理后在两株细胞中表达均增强.结论 NaB对胃癌细胞具有生长抑制作用,其机制可能与阻滞细胞周期、诱导凋亡及上调p16基因表达有关,NaB可能通过增加组蛋白乙酰化水平及甲基化下调增加胃癌细胞中p16基因的表达.     

分化抑制因子1在环氧合酶2介导的胃癌血管生成中的作用及机制研究

目的验证分化抑制因子1（Id-1）在环氧合酶2（COX-2）介导的胃癌血管生成中的作用及机制。方法建立高表达COX-2和表达COX-2特异性siRNA的胃癌SGC7901细胞,通过Western印迹和逆转录PCR方法检测两种亚细胞系中Id1的表达,ELISA方法分析两种细胞上清中血管内皮生长因子（VEGF）的表达差异。通过四唑盐比色（MTT）实验分析两种细胞亚系的上清对体外脐静脉内皮细胞（HU-LT）增殖的影响,并在SGC7901／COX-2中抑制Id1后观察培养上清中VEGF的变化以及对脐静脉内皮细胞（HU-LT）增殖的影响。裸鼠成瘤实验观察转染细胞的成瘤性及肿瘤新生微血管密度（MVD）。结果成功建立高表达COX-2以及表达特异性COX-2小干扰RNA（siRNA）的稳定克隆,并鉴定了不同克隆的转染效率。高表达COX-2的胃癌SGC7901细胞中Id1的蛋白及mRNA表达水平增高,而转染COX-2-siRNA的SGC7901细胞中Id1的表达则均低于对照组。COX-2高表达的SGC7901／COX-2细胞上清中VEGF的蛋白含量高于对照组（2060±42 vs 1248±28,P=0．000）,而SGC7901／COX-2-siRNA细胞上清中VEGF的蛋白含量低于对照组（1024±20,2033±27vsP=0．000）。在SGC7901／COX-2细胞条件培养基中,HU-LT细胞生长较对照组快;在SGC7901／COX-2-SiRNA细胞条件培养基中,HU-LT细胞生长较对照组缓。在SGC7901／COX-2中抑制Id1后,培养上清中VEGF的含量增加以及对HU-LT促进增殖的作用均被逆转。裸鼠成瘤试验显示抑制Id1后SGC／901／COX-2细胞成瘤性降低[（353±12）mg vs（1020±91）mg,P=0．038],MVD降低（8．8±1．6vs20±1．7,P=0．001）。结论COX-2可以上调SGC7901细胞中Id1的表达,并通过此途径影响内皮细胞的体外增殖能力。因此在胃癌发生发展中Id1参与了COX-2所介导的促血管生成过程,有可能成为胃癌抗血管治疗的新靶标。     

靶向蛋白激酶B1和环氧合酶2短发夹RNA对胃腺癌细胞生长的作用

目的 研究靶向蛋白激酶B1(PKB1/Akt1)和环氧合酶2(COX-2)短发夹RNA(shRNA)腺病毒载体对SGC-7901人胃腺癌细胞生长的作用.方法 构建腺病毒载体pGSadeno-Akt1+COX-2(rAd5-A+C),体外转染人胃癌细胞株SGC-7901后,噻唑蓝比色分析法(MTT法)和流式细胞术评价转染后胃癌细胞的增殖活性.裸鼠皮下荷瘤模型进一步观察rAd5-A+C对SGC-7901生长的抑制效果,并应用原位末端标记技术检测肿瘤细胞的原位凋亡.结果构建的rAd5-A+C重组腺病毒载体转染SGC-7901后,胃癌细胞的增殖活性明显被抑制.细胞周期分析显示对照组和空载组在G0/G1期,S期和G2/M期的细胞数占细胞总数分别为49.8%、35.2%、15.0%和50.8%、36.5%、12.7%;而治疗组在G0/G1期、s期和G2/M期的细胞数占细胞总数的68.1%、21.8%和10.1%.裸鼠皮下荷瘤模型显示rAd5-A+C可抑制肿瘤的生长和诱导细胞的凋亡.结论 腺病毒介导的Aktl和COX-2 shRNA可抑制人胃癌细胞的生长,这可能为胃癌靶向性联合基因治疗提供了新的策略.     

1，25-二羟维生素D3联合塞莱昔布对胃癌细胞株SGC-7901凋亡的影响

目的本研究探讨1,25-二羟维生素D3（1 alpha,25-dihydroxy vitamin D3,VitD3）联合塞莱昔布（CELE）对胃癌细胞株SGC-7901凋亡诱导作用及Bcl-2、Bax蛋白表达的影响,探讨其联合应用是否具有协同抗胃癌作用,并初步探讨ViD3与CELE联合应用抗胃癌的可能作用机制,为临床制定合理的联合化疔方案,寻求最佳治疗效果提供理论依据。方法体外培养胃癌细胞SGC-7901至指数生长期,加入一定浓度的CELE、VitD3及CELE和VitD3,作用48h后,采用吖啶橙染色观察细胞凋亡,Western blot法检测Bcl-2、Bax蛋白的表达变化,分析两种药物对胃癌细胞SGC-7901的增殖、凋亡及相关基因表达的影响。结果吖啶橙染色观察细胞凋亡从形态学上证实了VitD3和CELE对胃癌细胞的诱导凋亡作用,且两药联合增强诱导凋亡作用;VitD3、CELE及二者联合应用均显著抑制SGC-7901细胞Bcl-2蛋白的表达、促进Bax蛋白的表达（P〈0．05）,联合用药组与单一用药组相比差异有统计学意义（P〈0．05）。结论VitD3和CELE可诱导胃癌SGC-7901细胞凋亡,其凋亡机制之一可能为通过抑制Bcl-2、并促进Bax的表达,从而改善Bcl-2／Bax的平衡实现的。两者联合应用对胃癌细胞SGC-7901诱导凋亡具有协同作用。     

奥曲肽对中分化胃腺癌细胞的生长调控

目的　研究生长抑素类似物奥曲肽 (OCT)对人胃癌细胞株SGC790 1的体外调控作用及其机制 ,并探讨奥曲肽与 5 -FU是否具有协同作用。方法　采用MTT比色分析法测定奥曲肽和 5 -FU对细胞生长的调控 ;采用流式细胞术分析OCT 10 -6mol/L对SGC790 1细胞周期分布的影响。结果　OCT 10 -5mol/L、10 -6mol/L和 5 -FU及两药联合对SGC790 1细胞生长均有抑制作用 ,OCT 10 -5mol/L的抑制率为 32 .36 % ;OCT 10 -6mol/L与 5 -FU联合的抑制率 (37.5 6 % )高于两药单独使用 (5 -FU 31.0 1% ;10 -6mol/LOCT 13.5 0 % )。OCT 10 -6mol/L可诱导SGC790 1细胞G0 /G1阻滞 ,于加药后 12h开始 ,2 4h最显著 (71.2 9%± 1.2 5 % ,P <0 .0 1vs相应对照组 ) ,36h消失 ;而 2 4h换液、换药组 36h时G0 /G1阻滞依然存在 ,4 8h也消失。G0 /G1阻滞的同时伴S期细胞比例减少 ;亚二倍体细胞比例未见显著改变。结论　OCT可以抑制体外培养的人胃癌细胞株SGC790 1的生长 ,其机制之一是诱导细胞G0 /G1期阻滞。OCT和 5 -FU协同抑制SGC790 1细胞生长。     

利用RNA干扰技术抑制环氧合酶-2表达对人胃癌细胞系SGC-7901增殖和凋亡影响的实验研究

目的研究环氧合酶(COX)-2表达与肿瘤细胞增殖和凋亡的关系,探讨利用RNA干扰技术作为肿瘤基因治疗的方法。方法构建靶向COX-2的短发夹状双链RNA(shRNA)的真核表达质粒WBH1转染人胃癌细胞系SGC-7901,采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和Western印迹分别从mRNA和蛋白质水平检测抑制效果。四甲基偶氮唑蓝(MTT)和流式细胞仪检测COX-2表达被抑制后细胞的增殖和凋亡情况。15只裸鼠随机分为3组,每组5只,皮下接种胃癌细胞。抑制组接种转染抑制质粒的胃癌细胞;正常对照组接种未转染的胃癌细胞;阴性对照组接种转染阴性对照质粒的胃癌细胞。4周后观察比较各组裸鼠皮下形成瘤体的大体和病理情况并计算抑瘤率。结果WBH1高效特异地抑制了人COX-2的表达,抑制率达70.42%。COX-2表达被抑制后,细胞增殖受到明显抑制(P=0.002),细胞凋亡率明显增高,与未转染和转染阴性对照质粒的胃癌细胞的凋亡率相比有统计学意义(52.28%±17.91%、0.52%±0.27%、0.54%±0.16%,P=0.009,实验重复5次)。正常对照组和阴性对照组所有裸鼠均有瘤体形成,平均瘤重分别为(0.490g±0.017g,5只)和(0.490g±0.013g,5只)。抑制组仅2只有瘤体形成平均瘤重0.050g±0.003g,与正常对照组相比差异有统计学意义(P<0.01),抑瘤率为89.8%。结论COX-2与肿瘤细胞的增殖和凋亡密切相关,抑制细胞中COX-2的表达可以抑制肿瘤细胞增殖,促进肿瘤细胞凋亡。通过构建靶向COX-2的shRNA真核表达载体导入细胞可以高效特异地抑制人胃癌细胞中COX-2的表达。