毛叶茶和龙井茶提取物的抗瘤作用以及对DNA拓扑异构酶Ⅱ的抑制作用

作者用噻唑蓝(MTT)法研究了毛叶茶提取物(毛茶C)和龙井茶提取物(龙井A)对人宫颈癌HeLa细胞、鼻咽低分化鳞癌CNE_2细胞和胃低分化粘液腺癌MGC—803细胞的细胞毒作用。毛茶C对上述3种细胞株的半数抑制浓度(IC_(50))分别为495.6μg/ml、243.4μg/ml、268.6μg/ml;而龙茶A分别为421.1μg/ml、311.4和274.6μg/ml。体内抑瘤试验表明,毛茶C在2.5—10mg//kg剂量范围内,对小鼠艾氏腹水癌实体型(ESC)有明显抑制作用,抑瘤率为17.8％—48.3％;对小鼠网织细胞肉瘤(L_2)的抑瘤率为28.3％—54.5％;龙茶A在2.5—10mg/kg剂量范围内对艾氏实体瘤ESC的抑制率为31.5％—49.4％;对L_2的抑瘤率为35.8％—50％。而二种茶叶提取物对小鼠肉瘤S—180仅有边缘的抗瘤活性。用琼脂糖凝胶电泳方法则得毛茶C和龙茶A在1—50μg/ml浓度范围内,对DNA拓扑异构酶Ⅱ的抑制率分别为75—100％,抑酶作用有明显的量效关系。在50μg/ml浓度均可抑制全部酶活性,推测DNA拓扑异构酶Ⅱ可能是这两种茶叶提取物的靶酶。     

孕期黄酮类化合物摄入与婴幼儿白血病相关性研究的现状

目的:探讨黄酮类化合物作为DNA拓扑异构酶Ⅱ抑制剂以及孕期黄酮类化合物摄入与婴幼儿白血病间的关系.方法:应用PubMed、万方和维普科技期刊数据库检索系统,以“黄酮类化合物、白血病和拓扑异构酶Ⅱ抑制剂”为关键词,检索1987-01-2012-09的相关文献,共检索到英文文献7条,中文文献0条,以任意2个关键词搜索,共检索到英文文献1 445条,中文文献108条.纳入标准:1)黄酮类化合物的基本资料介绍.2)婴幼儿白血病的基本资料介绍.3)拓扑异构酶及拓扑异构酶Ⅱ抑制剂的基本资料介绍.4)拓扑异构酶Ⅱ抑制剂与白血病的关系.5)黄酮类化合物与婴幼儿白血病的关系.根据纳入标准精选46篇文献,最后纳入分析32篇.结果:黄酮类化合物广泛存在于日常食物中,对人类健康有许多积极作用.但是,黄酮类化合物作为拓扑异构酶Ⅱ抑制剂也存在遗传毒性、细胞毒性,某些实体瘤患者在应用DNA拓扑异构酶Ⅱ抑制剂治疗后可继发白血病,其细胞遗传学异常多与原发急性髓系白血病(AML)有关,其中最常见的是位于染色体11q23的混合系白血病(MLL)基因异位.孕期黄酮类化合物摄入与婴幼儿某种类型白血病的发生风险增高有一定的关系.在急性婴幼儿白血病患者中,＞80％都包括位于染色体11q23的MLL基因异位或异常重组.样本量均超过200例的5个病例对照研究显示,孕期摄入大量含DNA拓扑异构酶Ⅱ抑制剂的食物(主要为含黄酮类化合物的水果和蔬菜等)后,MLL重排引起的AML的发病风险增高.结论:了解黄酮类化合物作为DNA拓扑异构酶Ⅱ抑制剂以及孕期黄酮类化合物摄入与婴幼儿白血病间的关系,有助于孕妇膳食指导及膳食指南的修订与完善.     

以DNA拓扑异构酶Ⅱ为靶点的一种抗癌药筛选的新方法

借鉴文献方法,我们以小鼠L_(1210)白血病细胞为村料,提取DNA拓扑异构酶Ⅱ,鉴别了其生物学特性,并观察了十多种已知及未知的抗癌药物对其活性的影响,初步建立了以DNA拓扑异构酶Ⅱ为靶点的新抗癌药筛选方法。实验表明DNA拓扑异构酶Ⅱ对DNA链切割反应是可逆的,并且高浓度的氯化钠对其活性有抑制作用。许多药物能促进拓扑酶Ⅱ引起的DNA链断裂如ADM、DNR、Vp16及ACM—B等,而另一些药物如萜类化合物BC_1、BC_4等则能抑制链断裂反应。     

二乙基鄰菲缠啉二氯锡的细胞毒作用和对DNA的损伤

本文研究了二乙基鄰菲缠啉二氯锡(SnI)的细胞毒作用和对DNA的损伤。用噻唑蓝(MTT)法,SnI与HeLa细胞一起温育48小时后,细胞生长半数抑制浓度(IC50)为4.4μg/ml。用台盼蓝拒染法,SnI与HeLa细胞一起温育72小时后,IC50为0.32μg/ml。两种方法表明二乙基鄰菲缠啉二氯锡对HeLa细胞有显著的细胞毒作用。用琼脂糖凝胶电泳技术表明,SnI浓度为50μg/ml能直接使P_4DNA和PBR_(322)DNA断裂水解而不要求DNA拓扑异构酶Ⅱ的参予。     

拓扑异构酶——癌化疗的新靶

一类具有调节DNA三维结构的核酶称为DNA拓扑异构酶(Topoisomerases),它们在细胞的翻译、转录和有丝分裂的生命过程中起重要作用。抗癌药蒽环类、鬼臼霉素类和吖啶类干扰这些酶,尤其是干扰TopoⅡ酶的活性。DNA—拓扑异构酶Ⅱ复合物是酶活性的中介体,其如果被药物所稳定则形成一种“断裂复合物”而显示药物的细胞毒作用。 拓扑异构酶有二型,即TOPOⅠ和TOPOⅡ。TOPOⅠ酶是分子量为100KD的单体,它能断裂一条     

DNA嵌入剂和DNA拓扑异构酶Ⅱ抑制剂与抗癌作用的关系——介绍两种抗癌药物的筛选方法

本文介绍两种抗癌药物的筛选方法。实验表明,对pBR322 DNA能起嵌入和断裂作用或对DNA拓扑异构酶Ⅱ有抑制作用的化合物可能具有抗癌作用。吖啶衍生物9-(2-4-二氯苯氧乙酰氨基)吖啶,9-(2-4-5-三氯苯氧乙酰氨基)吖啶和9-(对-氯苯氧乙酰氨基)吖啶对pBR322 DNA能起嵌入和断裂作用。它们对体外生长细胞显示强力的细胞毒作用。山茶A和山茶C化合物对拓扑异构酶Ⅱ有强力的抑制作用,对体外培养细胞亦具有细胞毒作用。     

榄香烯联合热疗对Raji细胞增殖的影响及其机制探讨

目的:观察榄香烯(elemene,ELE)联合热疗(hyperthermia,HTM)对人Burkitt’s淋巴瘤Raji细胞增殖及DNA拓扑异构酶Ⅰ和Ⅱ(TOPOⅠ,TOPOⅡ)表达的影响。方法:采用噻唑蓝还原法(MTT)观察ELE联合HTM对Raji细胞增殖的影响;流式细胞术(FCM)检测细胞周期;RT-PCR法检测细胞TOPOⅠ和TOPOⅡmRNA表达;Western Blot法检测细胞TOPOⅠ和TOPOⅡ蛋白表达。结果:与单纯HTM和单纯ELE比较,ELE联合HTM对Raji细胞增殖的抑制作用增强(P<0.05),呈时间和剂量依赖性,而ELE联合HTM作用Raji细胞24h、48h和72h后,IC50值(93μg/ml、68μg/ml和41μg/ml)小于单纯ELE IC50值(116μg/ml、84μg/ml和60μg/ml);ELE联合HTM阻滞Raji细胞于S期[(35.40±1.27)%、(42.38±2.50)%VS(48.88±1.93)%,P<0.05],并下调TOPOⅠ和TOPOⅡmRNA及蛋白的表达。结论:ELE联合HTM可增强对Raji细胞增殖的抑制作用,下调TOPOⅠ、TOPOⅡ表达可能是其机制之一。     

拓扑异构酶与肿瘤细胞耐药性

拓扑异构酶可分为二类即拓扑异构酶Ⅰ(TOPOI)和拓扑异构酶Ⅱ(TOPOⅡ)。TOPOⅠ在细胞中DNA空间构型变化,DNA复制、重组、转录、切割、再连接、细胞染色质的组化以及有丝分裂中均起重要作用。TOPOⅡ是真核细胞生存所必不可少的核酸,它的作用涉及到核酸代谢的诸方面,包括DNA复制、mRNA加工、染色体的分离及浓缩、核基质的组成等。许多抗癌药物正是通过干扰DNA的正常代谢而发挥抗癌作用。肿瘤化疗失败的重要原因之一是耐药性的产生。耐药性的原因多种多样,最近研究表明拓扑异构酶的变化是一个不可忽视的原因,现综述如下。     

DNA拓扑异构酶抑制剂与抗癌作用(摘要)

自七十年代发现了一类能控制和改变DNA拓扑异构状态(三维结构)的酶,称为DNA拓扑异构酶(DNAT、opoisomerases)。按其在反应中暂时断裂一条或二条DNA链的不同,可分为Ⅰ型和Ⅱ型DNA拓扑异构酶。这类酶在DNA的复制和转录过程中起着非常重要的作用,它们控制DNA     

顺铂与足叶乙甙对白血病细胞K562的协同杀伤作用及其机制

背景与目的:足叶乙甙(etoposide,VP鄄16)为白血病化疗最常用的化疗药之一,其临床应用日益受到天然与继发耐药的影响。对一些实体瘤的研究发现顺铂(cisplatin,DDP)与VP鄄16联合应用具有协同效应。本研究通过DDP与VP鄄16联合作用杀伤白血病细胞K562,探讨其增强VP鄄16疗效的作用机制。方法:采用VP鄄16(0,5μg/ml)与不同浓度DDP(0,0.3,3,15,30μg/ml)联合对K562细胞进行处理。应用噻唑蓝(MTT)法检测用药后细胞的存活相对数量,计算VP鄄16和DDP应用对K562细胞的抑制作用;AO/EB双荧光法定量分析细胞凋亡率。半定量RT鄄PCR法和Westernblot检测拓扑异构酶(topoisomerase,TOPO)Ⅱα、Ⅱβ、Sp1、Sp3基因的mRNA和蛋白水平。结果:VP鄄16与DDP合用具有明显的协同效应。两药合用后,细胞凋亡率明显增加。单独应用DDP可以明显上调TOPOⅡ和Sp1表达(呈浓度依赖,TOPOⅡα、Ⅱβ、Sp1在30μg/mlDDP时比正常对照分别上调36%,25%和75%),并使Sp3的表达降低49%;单用5μg/mlVP鄄16时TOPOⅡ则下调(TOPOⅡα下降72%),TOPOⅡβ和Sp1的表达未受影响,Sp3的表达上调14%。5μg/mlVP鄄16与DDP联合应用具有协同效应,使TOPOⅡ和Sp1表达水平升高。TOPOⅡα、Ⅱβ、Sp1在5μg/mlVP鄄16与30μg/mlDDP联合应用时比单用VP鄄16分别上升83%,11%,58%,但低于单独应用DDP的表达水平;而Sp3的表达水平与单独应用DDP比较下调61.3%。Western印迹检测结果与RT鄄PCR结果相符。结论:DDP在化疗中与VP鄄16发挥协同作用,通过上调拓扑异构酶Ⅱ的表达水平,为VP鄄16提供更多的靶酶,使VP鄄16杀伤K562细胞效果明显提高。     

国产盐酸拓扑替康对小细胞肺癌疗效的初步研究

盐酸拓扑替康（ topotecan）是具有抑制拓扑异构酶Ⅰ活性的抗肿瘤新药。其作用机制是拓扑异构酶Ⅰ可诱导 DNA单链可逆性断裂，使 DNA螺旋链松解。盐酸拓扑替康与拓扑异构酶Ⅰ -DNA复合物结合并阻止这些单股断链的重新连接，其细胞毒作用是在 DNA的合成中。盐酸拓扑替康、拓扑异构酶 I和 DNA形成的三元复合物与复制酶相互作用产生双股 DNA的损伤，而哺乳动物的细胞不能有效地修复这些双股 DNA链的中断。国外研究表明盐酸拓扑替康对多种肿瘤有效 [1～ 3]，本研究采用国产盐酸拓扑替康对小细胞肺癌的疗效进行临床研究，报告如下。     

NB901对胃癌细胞DNA拓扑酶Ⅱ的活力及其对C─Ha─ras基因表达的影响

本文从胃癌ＢＧＣ８２３细胞中分离出ＤＮＡ拓扑酶Ⅱ，应用ｐＢＲ３２２质粒ＤＮＡ作为底物测定酶的活力，发现５’脱氧－５＇醛基腺嘌呤核苷─ＮＢ９０１可以诱导拓扑酶Ⅱ对超螺旋ｐＢＲ３２２质粒ＤＮＡ的松散和裂解，并且可以抑制胃癌ＢＧＣ８２３细胞中Ｃ─Ｈａ─ｒａｓ基因的表达。结果提示抗癌化合物ＮＢ９０１是以癌细胞中ＤＮＡ拓扑酶Ⅱ为作用靶点，癌细胞中拓扑酶Ⅱ可能参与细胞增殖相关基因的转录调控，ＮＢ９０１能够干扰ｃ─Ｈａ─ｒａｓ基因的转录，从而抑制胃癌ＢＧＣ８２３细胞的增殖。     

葡萄糖调节蛋白78与肿瘤耐药关系的研究进展

目的:总结葡萄糖调节蛋白78(glu-cose regulated protein78,GRP78)与肿瘤细胞对化疗药物耐药的关系.方法:以葡萄糖调节蛋白78、肿瘤和耐药为关键词,运用万方数据库、维普数据库、CNKI、EMCC和PubMed检索系统,检索2003～2008年发表的文献,共收集文献55篇,仔细阅读全文,排除重复或类似的研究文献,选取具有代表性的文献,最终纳入分析27篇.结果:GRP78通过多种机制使肿瘤细胞对化疗药物产生耐药.它可以抑制细胞内DNA合成的关键酶之一--拓扑异构酶Ⅱ的表达,细胞内拓扑异构酶Ⅱ的水平直接影响到拓扑异构酶Ⅱ押制剂的化疗效果;可以与Caspase-7和Caspase-12形成复合物,抑制Caspase-7对Caspase-12的激活,从而抑制化疗药物诱导的内质网凋亡途径;并可以通过抑制CHOP即生长停滞及DNA损伤基因(GADD153)的表达,从而抑制与CHOP相关的细胞凋亡.结论:GRP78与肿瘤耐药存在密切关系,对GRP78与肿瘤耐药关系的研究可以丰富对肿瘤耐药机制的认识,为肿瘤化疗提供新的思路.目前针对GRP78治疗的研究正在进行,GRP78可能成为肿瘤化疗的新靶点.     

青藤碱抑制肺癌细胞株Calu-1增殖、凋亡影响的实验研究

目的:探讨青藤碱对肺癌细胞株Calu-1增殖、凋亡影响及相关作用机制。方法:青藤碱150μg/ml、200μg/ml、250μg/ml作用于肺癌细胞株Calu-1,采用MTT、流式细胞术、RT-PCR及Westernblot检测经不同浓度青藤碱处理和空白对照组(0μg/ml),12h、24h、36h后肺癌细胞株Calu-1增殖、凋亡及MEK/ERK蛋白和iASPP基因表达情况。结果:ERK,p-ERK表达随处理浓度的增加而降低,MEK/ERK通路活化受到抑制,在第36h 250μg/ml处理组p-ERK表达最低,且此时iASPP-mRNA基因表达明显降低。不同浓度青藤碱均对肺癌Calu-1细胞株增殖呈现明显抑制并促进其凋亡,随青藤碱浓度增加和作用时间的延长,抑制率增加,促凋亡作用增强,在第36h 250μg/ml处理组抑制率达到(51.23±4.34)%。结论:青藤碱明显抑制肺癌细胞的增殖和凋亡。     

肿瘤化疗增敏剂研究进展

化疗增敏剂通过逆转肿瘤组织耐药而提高化疗疗效。其作用机制包括：抑制药物泵功能；针对谷胱甘肽代谢相关酶、拓扑异构酶Ⅱ、DNA修复相关酶、蛋白激酶C等靶点逆转耐药；促凋亡；干扰肿瘤细胞与组织微环境之间耐药信号转导等。现按其作用机制,分类介绍化疗增敏剂的研发现状。     

肿瘤化疗增敏剂研究进展

化疗增敏剂通过逆转肿瘤组织耐药而提高化疗疗效。其作用机制包括：抑制药物泵功能；针对谷胱甘肽代谢相关酶、拓扑异构酶Ⅱ、DNA修复相关酶、蛋白激酶C等靶点逆转耐药；促凋亡；干扰肿瘤细胞与组织微环境之间耐药信号转导等。现按其作用机制，分类介绍化疗增敏剂的研发现状。     

急性白血病患者多药耐药基因和TopoⅡ的表达及临床意义

目的:探讨急性白血病患者多药耐药基因(mdr1)和DNA拓扑异构酶Ⅱ(TopoⅡ)的表达及其临床意义。方法:采用反转录—聚合酶链反应(RT-PCR)技术检测了52例急性白血病患者mdr1基因和DNA拓扑异构酶Ⅱ的表达。结果:复发难治组白血病患者mdr1阳性率83.3 %,明显高于初治组36.7 %和完全缓解组10.0 %。复发难治组TopoⅡ表达阳性率25.0 %,低于初治组43.3 %和完全缓解组70.0 %。mdr1和TopoⅡ二者表达之间无相关性(P>0.05)。mdr1(+)/TopoⅡ(-)者预后最差。结论: mdr1阳性和TopoⅡ的表达降低均是判断疗效和预后的重要指标。mdr1和TopoⅡ之间无相关性。     

洗涤剂中两种活性成分对细胞间隙交通功能的作用研究

近年来研究发现肿瘤形成与细胞间隙交通功能异常有关。一些促癌剂可以抑制细胞隙交通功能。因此提出了细胞间隙交通受抑制是肿瘤多阶段形成过程中的一个重要步骤的假说。本文采用EL-Fouly等推荐的细胞间隙交通测定方法测定脂肪醇环氧乙烷缩合物(AEO)。直链烷基苯磺苯磺酸钠(LABS)对细胞间隙交通的作用,以及其拮抗苯巴比妥(PB)对细胞间隙交通抑制作用。结果表明AEO在测试浓度范围内(0.1μg/ml-1000μg/ml)不具有抑制细胞间隙交通的作用,当AEO与PB共同作用时,10μg/ml的AEO开始出现拮抗PB对细胞间隙交通抑制作用,浓度达500μg/ml时。AEO几乎完全能拮抗500μg/mlPB对细胞间隙交通的抑制作用;而LABS在测试浓度范围为(0.1μg/ml—100μg/ml)时不具有抑制细胞间隙交通的作用,当LABS浓度升高到500μg/ml时开始出现抑制细胞间隙交通。浓度达1000μg/ml时抑制作用明显。以上结果与长期动物实验结果相印证,表明AEO可能通过促进细胞间隙功能而起到抗癌作用;LABS则抑制细胞间隙成为促癌物。     

拓扑异构酶抑制剂治疗白血病的研究进展

 DNA拓扑异构酶是参与细胞基本活动的重要核酶,其抑制剂主要通过形成"DNA-药物-酶"三聚复合物干扰DNA的复制发挥抗肿瘤作用。重点阐述以拓扑异构酶Ⅰ为靶点的新药在白血病治疗中应用现况、拓扑异构酶表达水平与临床疗效及预后的关系和白血病细胞对拓扑异构酶抑制剂产生耐药的发生机制等方面研究进展。     

CPT-11临床应用进展

CPT-11(盐酸伊立替康)是一种半合成的可溶性喜树碱类衍生物,主要作用于细胞周期的S期,通过抑制拓扑异构酶I,干扰DNA复制和细胞分裂.在体内经羧酸酯酶的催化作用,代谢成活性产物7-乙基-10-羟基喜树碱(SN-38),其抗癌活性为前者的100-1000倍[1].目前临床上应用广泛,现对其应用进展作一综述.