黄芩苷对甲型流感病毒PR8株的体外抑制作用研究

目的:研究不同来源黄芩苷对甲型流感病毒PR8株的体外抑制作用。方法:制备流感病毒空斑模型,通过预防保护(病毒吸附前给药)和治疗(病毒吸附后给药)2种模式观察黄芩苷对流感病毒不同阶段的抑制作用并结合神经氨酸酶抑制试验寻找其可能的作用位点。结果:2种受试黄芩苷样品A和样品B对MDCK细胞毒性(半数有毒浓度,TC50)分别为0.099 mg/mL和0.8 mg/mL;黄芩苷A在预防保护和治疗模式中均未发现明显的病毒抑制作用(IC500.3mg/mL);黄芩苷B在预防保护和治疗模式中的半数有效抑制浓度(IC50)分别为0.08和0.045mg/mL(选择指数SI为10和17.7),并对神经氨酸酶(NA)活性显示一定的抑制作用(IC50=51.7μg/mL)。结论:市售商品化黄芩苷B有确定的体外抑制流感病毒PR8株的作用。     

连花清瘟胶囊体外抗甲型流感病毒的实验研究

目的研究连花清瘟胶囊体外抗甲型流感病毒的作用。方法以利巴韦林作阳性对照药物,采用存留细胞结晶紫染色法测定连花清瘟胶囊不同给药方式对甲型人流感病毒H3N2的体外抑制作用及其时效关系。结果连花清瘟胶囊具有多环节抗甲型人流感病毒的作用:综合抑制作用、对病毒吸附的预防作用、抑制病毒吸附后的复制增殖作用以及直接杀伤病毒的作用,这4种作用的半数有效浓度(EC50)分别为0.042,0.031,0.051,0.050g/mL,以预防给药方式抗流感病毒的作用最强。随药物作用时间的延长,连花清瘟胶囊的低浓度抗病毒有效率呈减少趋势,在高浓度时(≥0.031g/mL)其抗病毒能力基本不变。同时连花清瘟胶囊可明显降低病毒的感染性。结论连花清瘟胶囊具有明显的体外抗甲型人流感病毒作用。     

菘蓝有效成分抗流感病毒作用的实验研究

目的研究菘蓝有效成分在体内外抗甲型流感病毒的作用。方法体外用MTT法检测菘蓝有效成分对传代狗肾细胞(MDCK)的毒性浓度,观察菘蓝有效成分抑制甲型流感病毒的致细胞病变作用(CPE),MTT法检测菘蓝有效成分对流感病毒的抑制率;建立在体流感病毒感染小鼠肺炎模型,通过观察小鼠肺病变程度指标,测定肺组织内流感病毒血凝滴度判定菘蓝有效成分对小鼠肺炎的治疗作用。结果菘蓝有效成分在体外主要抑制甲型流感病毒在细胞内的复制,其对病毒的半数抑制率浓度为64μg.mL-1,治疗指数达28.88;口服菘蓝有效成分能明显减轻小鼠肺组织病变程度,对肺组织内病毒的增殖有明显抑制作用。结论菘蓝有效成分具有较好的抗甲型流感病毒的作用,且呈剂量效应关系。     

滨蒿总黄酮提取物的抗流感病毒作用

目的:观察滨蒿总黄酮提取物(滨蒿总黄酮)在体内外的抗流感病毒作用。方法:体外抗病毒实验观察样品对狗肾传代细胞(MDCK)的毒性,观察病毒致细胞病变(CPE)法测定样品在体外抑制甲、乙型流感病毒的半数抑制浓度(IC50),并计算选择指数(SI)。体内抗病毒实验用流感病毒鼠肺适应株(PR8)滴鼻感染小鼠建立流感病毒性肺炎模型,以死亡保护率、生命延长率和肺指数等为指标,评价样品的保护作用。结果:滨蒿总黄酮对甲、乙型流感病毒致细胞病变的IC50分别为74.6μg/mL、98.5μg/mL,SI分别为16.8、12.7;滨蒿总黄酮以200、400mg/kg剂量灌胃给药对小鼠流感病毒性肺炎模型有明显的保护作用,其死亡保护率分别为36.4%、54.5%;生命延长率分别为29.0%、38.2%;滨蒿总黄酮400mg/kg剂量对流感病毒性肺炎小鼠肺指数有明显的抑制作用,抑制率为25.9%。结论:滨蒿总黄酮在体内外均有明显的抗病毒作用。     

千里光总黄酮体外抗肿瘤和抗病毒活性研究

目的:观察千里光总黄酮的体外抗肿瘤和抗病毒作用。方法:采用MTT法测定千里光总黄酮对人肝癌细胞株SMMC-7721、人胃癌细胞株SGC-7901和人乳腺癌细胞株MCF-7的生长抑制情况;采用细胞体外病变效应(CPE)法检测千里光总黄酮在人宫颈癌HeLa细胞中对人呼吸道合胞病毒(RSV)的抑制作用。结果:千里光总黄酮对SMMC-7721、SGC-7901和MCF-7三种瘤株生长的半数抑制浓度分别为48.73、61.32和31.26μg/mL;千里光总黄酮半数中毒浓度为0.29 mg/mL,抑制RSV的半数有效浓度为38.3μg/mL,治疗指数(TI)为7.6。结论:千里光总黄酮体外具有明显的抗肿瘤和抗病毒活性。     

野菊花水提物体内外抗甲1型流感病毒(H_1N_1)作用研究

目的:从体内外抗病毒实验观察野菊花水提物抗甲1型流感病毒(H1N1)作用。方法:以病毒滴鼻感染小鼠,观察野菊花水提物对肺指数、病毒致小鼠死亡率的影响;体外实验以H1N1感染MDCK细胞,观察野菊花水提物抗H1N1病毒作用。结果:野菊花水提物0.34、0.17、0.085 g/kg 3个剂量组口服给药均能有效降低流感病毒感染小鼠肺指数,与模型组比较肺指数抑制率分别达到28.9%、28.9%、23.6%,野菊花水提物0.34 g/kg能延长流感病毒感染小鼠平均生存时间,降低死亡率;体外实验显示野菊花水提物在无毒浓度下的最大稀释浓度18.28μg/mL下可以完全抑制病毒。结论:野菊花水提物在体内外对甲1型流感病毒均有较好的抑制作用。     

防感煎剂含药血清体外抑制甲1型流感病毒作用的研究

目的：研究防感煎剂对甲1型流感病毒的体外抑制作用,并试图揭示该药抑制甲型流感病毒的作用机理。方法：采用血清药理学的实验方法,观测防感煎剂和H1N1型流感病毒之间在不同时间点作用于MDCK细胞所发生的CPE,MTT法定量检测存活细胞数量,以及血凝效价检测。结果：含药血清与病毒同时作用及预防给药方式时病毒抑制率明显高于治疗给药方式,而又以同时作用的抑制率最高,各含药血清组抑制作用高于正常血清组,高剂量组抑制作用强于低、中剂量组,稍低于达菲对照组血清。3种给药方式中同时作用和预防方式药物组的血凝效价低于治疗方式,而又以同时作用的最低。结论：防感煎剂对甲1型流感病毒感染有显著的预防与直接作用,作用机理可能主要是通过直接杀灭病毒、以及抑制病毒吸附及膜融合作用来阻止流感病毒进入宿主体内增殖复制而产生的。     

冰香散对甲Ⅰ型流感病毒感染小鼠脾淋巴细胞增殖及细胞因子分泌的影响

目的 观察冰香散挥发油对甲Ⅰ型流感病毒(H1N1)感染小鼠脾淋巴细胞增殖及细胞因子分泌的影响,探讨其影响机体免疫应答的作用机制。方法 冰香散挥发油不同途径给药(滴鼻、雾化)对甲Ⅰ型流感病毒感染小鼠干预性给药,用CCK-8法检测冰香散对刀豆蛋白A(ConA)、革兰氏阴性菌细胞壁脂多糖(LPS)诱导T、B淋巴细胞增殖的影响;酶联免疫法(ELISA)检测冰香散对白介素-4(IL-4)、白介素-2(IL-2)、干扰素-γ(IFN-γ)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)等相关细胞因子的影响。结果 与正常对照组比较,模型组H1N1对小鼠脾B淋巴细胞增殖有明显的抑制作用(P < 0.05),明显提升了TNF-α、IFN-γ和IL-2等相关致炎因子的水平(P < 0.05),而对IL-4等抗炎因子提升并不明显;利巴韦林对感染小鼠脾B淋巴细胞增殖有明显的增强作用(P < 0.01),明显提高IL-4和IFN-γ的水平,同时降低TNF-α水平(P < 0.05);冰香散滴鼻能促进感染小鼠脾B淋巴细胞的增殖(P < 0.05),抑制IL-2和TNF-α的分泌(P < 0.05);冰香散雾化能促进感染小鼠脾T淋巴细胞的增殖(P < 0.05),促进IL-4和IFN-γ产生的同时,抑制IL-2的分泌(P < 0.05)。结论 冰香散挥发油对甲Ⅰ型流感病毒感染小鼠脾细胞活性有一定的促进作用,对Th1/Th2免疫平衡有一定的调节作用,但不同给药途径(滴鼻、雾化)的抗病毒免疫机制有所不同。     

预防性中药防治流感病毒作用及其免疫调节机制探讨

目的:研究预防性中药抗流感病毒及其黏膜免疫调节机制。方法:56只雌性SPF级BALB/C小鼠,随机分为造模组(48只)和正常组(8只),建立小鼠流感病毒H1N1/FM/1感染模型,造模成功后随机分为模型组、病毒唑组(0.1 g·kg-1),银翘散组(40 g·kg-1),玉屏风散组(60 g·kg-1),冰香散雾化组(0.6 g·kg-1),冰香散滴鼻组(0.03 g·kg-1),ig给药,5 d后处死小鼠,测定病毒载量,同时进行肺组织病理学检查;检测对气管黏膜树突状细胞(DC)数量(OX-62),成熟度:以CD80,趋化因子激素受体7(CCR7)阳性表达面积表示及抗原识别受体Toll样受体2(TLR2)和TLR4的影响;对鼻通道淋巴组织细胞CD4+,CD8+进行相应的检查。结果:与模型组比较,预防性中药对病毒载量及肺组织病理学有显著的抑制作用,流感病毒感染小鼠气管黏膜OX-62增加,冰香散(雾化)能使流感病毒感染鼠DC数降低,CD80和CCR7明显下降,而病毒唑和银翘散制剂能提升CCR7阳性表达面积,流感病毒感染鼠黏膜TLR2,TLR4表达增强,冰香散能抑制流感病毒感染鼠TLR2的表达,冰香散滴鼻给药能提高CD4+,CD8+的水平,均具有明显的统计学差异(P0.05,P0.01)。结论:三类防治流感的中药均有较好的抑制流感病毒作用,其作用可能与其调节呼吸道黏膜免疫作用有关。     

冰香散挥发油对流感病毒引起的病毒性肺炎治疗作用研究北大核心CSCD

目的评价冰香散挥发油对流感病毒引起的病毒性肺炎的治疗效果。方法将80只BABL/c小鼠,随机分为空白对照组,安慰剂组(1%吐温-80,1 m L·d^(-1)),病毒唑组(100 mg·kg^(-1))以及冰香散挥发油组(0.05 m L·d^(-1)),每组20只。提前3 d给药,空白对照组正常饲养,安慰剂组、病毒唑组均灌胃给药,冰香散挥发油组雾化吸入,以5LD_(50)流感病毒液A/FM/1/47(H1N1)滴鼻感染小鼠,建立病毒性肺炎小鼠模型,连续给药7 d,第8天颈椎脱臼处死小鼠,每组10只,摘取肺组织,称肺质量,进行病理检测。每组剩余10只连续观察15 d,测定小鼠生存时间。结果与空白对照组比较,各组小鼠均出现不同程度的肺炎表现,肺指数增加,生存时间缩短,说明造模成功。与安慰剂组比较,病毒唑组和冰香散挥发油组的肺部病理改变较轻(P<0.05,P<0.01),肺指数较低(P<0.05),生存时间延长(P<0.01)。结论冰香散挥发油对流感病毒引起的病毒性肺炎具有治疗作用,能够减轻肺部炎症,延长感染小鼠的生存时间。     

桂枝挥发油及桂皮醛抗流感病毒的机制研究

目的 考察桂枝挥发油及其主要成分桂皮醛体外对甲型流感病毒鼠肺适应株A/PR/8/34 (H1N1)的直接杀灭作用,探讨其抗流感病毒作用机制中Toll样受体7(TLR7)信号通路的作用.方法 以流感病毒感染的狗肾传代细胞(MDCK)为载体,测定桂枝挥发油及桂皮醛体外抑制流感病毒增殖的半数抑制浓度(IC50)和治疗指数(TI); ELISA法检测MDCK细胞干扰素-β (IFN-β)的分泌;RT-PCR法考察MDCK细胞中Toll样受体3(TLR3)、TLR7、肿瘤坏死因子受体相关因子3 (TRAF-3)、白介素-1受体相关激酶4(IRAK-4)、IFN-β基因的表达.结果 桂枝挥发油及桂皮醛对流感病毒有明显的直接杀灭作用,IC50分别为1.85×10-7、5.77×10-7 g/mL,TI分别为27.04、9.51.与病毒组比较,桂枝挥发油和桂皮醛0.25×10-5 g/mL显著升高感染甲型流感病毒的MDCK细胞上清液中IFN-β的量(P＜0.05),显著上调细胞中TLR7、IRAK-4、IFN-βmRNA表达水平(P＜0.05).结论 桂枝挥发油及桂皮醛对流感病毒H1N1的增殖有显著抑制作用,作用机制可能与其激活TLR7信号通路、活化IRAK-4、诱导IFN-β高表达有关.     

克感复方对流感病毒抑制作用的实验研究

目的:探讨克感复方在MDCK细胞上抗流感病毒的作用并对其机制进行初步研究。方法:以利巴韦林为阳性对照药物,运用抑制试验、预防试验、中和试验3种方法,以MTT法检测细胞存活率,研究克感复方抗流感病毒的作用并判断其作用原理。同时,通过药物血凝抑制实验分析其抗流感病毒作用是否与病毒血凝素相关。结果:克感复方对MDCK细胞的半数毒性浓度(CC50)为(2.84±0.65)mg/mL,抑制流感病毒增殖的半数有效浓度(EC50)为(0.18±0.12)mg/mL,选择性指数(SI)为15.78。有细胞外杀流感病毒作用,但作用较弱,最高抑制率未超过50%。无阻断流感病毒吸附的作用。无药物血凝抑制作用。结论:克感复方在MDCK细胞上具有抗流感病毒的作用,其中抑制流感病毒增殖的能力最强。     

桂枝挥发油抗甲型流感病毒作用

目的:观察桂枝挥发油及其主要成分桂皮醛体外对甲型流感病毒A/PR/8/34(H1N1)增殖的影响及对该流感病毒株感染小鼠的治疗作用。方法:MTT法检测受试药物对狗肾传代细胞(MDCK)的半数中毒浓度(TC50)及最大无毒浓度(TC0);血凝法测定甲型流感病毒(H1N1)对MDCK细胞的感染性;MTT法和细胞病变法(CPE)测定两种药物体外抑制流感病毒增殖的有效浓度(IC50)和治疗指数(TI)。计算肺指数及HE染色观察药物对流感病毒(H1N1)感染小鼠的治疗作用。结果:桂枝挥发油和桂皮醛对MDCK细胞的TC50分别为5.38×10-3mg/ml和5.49×10-3mg/ml,TC0均为2.5×10-3mg/ml。桂枝挥发油和桂皮醛能抑制流感病毒在MDCK细胞内的增殖,其IC50分别为5.80×10-5mg/ml与5.31×10-5mg/ml,TI分别为92.82和103.35。桂枝挥发油0.174mg/kg和桂皮醛0.132mg/kg连续灌胃5d,明显降低病毒感染小鼠的肺指数,抑制率分别为26.7%和27.4%,并对病理组织形态有改善作用。结论:桂枝挥发油与桂皮醛体外明显抑制甲型流感病毒(H1N1)在MDCK细胞中的增殖,并对流感病毒株感染小鼠有较好的治疗作用。表明桂枝挥发油及桂皮醛具有抗甲型流感病毒作用,桂皮醛是桂枝挥发油抗病毒效应的主要有效成分之一。     

朱砂七抗单纯疱疹病毒Ⅰ型的体外实验研究

目的研究朱砂七粗提物和总蒽醌体外对单纯疱疹病毒Ⅰ型(HSV-Ⅰ)的抑制作用。方法运用HSV-Ⅰ,以非洲绿猴肾细胞(Vero)作为宿主细胞,通过三种给药方式观察感染病毒后的细胞变性反应(CPE),MTI比色法检测不同浓度朱砂七粗提物和总蒽醌对HSV-Ⅰ的直接杀灭、预防和阻止复制作用。结果朱砂七粗提物和总蒽醌能抑制HSV-Ⅰ病毒的复制,但无预防和直接杀灭作用,朱砂七粗提物抑制HSV-Ⅰ病毒复制IC50为0.031 5g/L,治疗指数(TI)为19.84;总蒽醌抑制HSV-Ⅰ病毒复制IC50为0.004 7 g/L,治疗指数(TI)为16.62。结论朱砂七粗提物和总蒽醌在体外具有明显的保护宿主细胞抵抗HSV-Ⅰ病毒复制的作用。     

甘草抗病毒有效部位体外抗副流感病毒(Ⅲ型)作用的研究

目的：研究甘草抗病毒有效部位（GC3—1—4）体外抑制副流感病毒（Ⅲ型）的作用。方法：采用煎煮法和柱层析法提取分离得到甘草抗病毒有效部位（GC3—1—4）。以病毒唑为阳性对照药，采用细胞病变抑制实验观察GC3—1—4在Hela细胞中对副流感病毒（Ⅲ型）的抑制作用。结果GC3—1—4半数中毒浓度（TQ50）为144．17μg／ml；抑制副流感病毒（Ⅲ型）的半数有效浓度（EC50）为12．82μg／ml，治疗指数（TI）为11．25；GC3—1—4对副流感病毒（Ⅲ型）的抑制作用存在量效反应关系；在感染后6h以内给药，GC3—1—4对副流感病毒（Ⅲ型）均有抑制作用。结论：GC3—1—4在Hela细胞中对副流感病毒（Ⅲ型）有抑制作用。     

金银花体外抗呼吸道合胞病毒作用研究

目的:研究金银花体外抑制呼吸道合胞病毒作用的效果和强度。方法:采用细胞病变抑制实验,噻唑蓝(MTT)比色法检测细胞活性,观察金银花在人宫颈癌传代细胞(Hela)中对人呼吸道合胞病毒3型的抑制作用,以治疗指数(TI)为评价指标。结果:金银花对Hela细胞半数中毒浓度(TC50)为5 mg/mL,最大无毒浓度(TC0)为3.6 mg/mL。对呼吸道合胞病毒有直接灭活作用,其半数抑制率(IC50)为0.16 mg/mL,TI为31.2;在吸附阶段也有作用,其IC50为0.48 mg/mL,TI为10.5;同时金银花有抑制呼吸道合胞病毒生物合成作用,其IC50为1.0 mg/mL,TI为5.0;金银花不能阻止呼吸道合胞病毒侵入细胞。结论:金银花在体外主要通过直接灭活、阻止病毒吸附和抑制生物合成三种方式发挥抗呼吸道合胞病毒作用。     

金蒿滴丸提取物纯化前后体外抗流感病毒作用对比研究

目的 观察比较金蒿滴丸提取物纯化前后体外抗流感病毒的作用,为优化工艺提供有效依据.方法 观察药物对狗肾传代细胞(MDCK)的毒性作用,计算半数有毒浓度(TC50)和最大无毒浓度(TC0);以甲型、乙型流感病毒分别接种狗肾传代细胞(MDCK),记录药物对病毒致细胞病变(CPE)的影响,计算半数抑制浓度(IC50)和治疗指数(TI).结果 金蒿滴丸提取物纯化前对甲、乙型流感病毒的直接抑制作用较弱,纯化后对流感病毒的直接抑制作用明显优于纯化前,其对甲、乙型流感病毒的IC50分别为118.88,136.88μg/ml,TI分别为6.4,5.6.结论 金蒿滴丸提取物纯化后具有明显的抗流感病毒作用.     

清开灵软胶囊制剂前体体外抗H1N1、H5N1和H7N9流感病毒作用

目的观察清开灵软胶囊制剂前体体外抗H1N1、H5N1、H7N9流感病毒的作用。方法通过测定细胞培养液上清血凝滴度(HA)和半数组织培养感染剂量(TCID_(50)),评价清开灵软胶囊制剂前体和利巴韦林注射液不同给药方式(灭活、治疗、中和、预防)对H1N1、H5N1和H7N9流感病毒的抑制作用,并且通过MTT法测定清开灵软胶囊制剂前体和利巴韦林注射液不同给药方式体外抗H1N1流感病毒作用。结果清开灵软胶囊制剂前体的最大无毒浓度为0.391 mg/ml,利巴韦林注射液的最大无毒浓度为3.907μg/ml。清开灵软胶囊制剂前体以预防方式给药可以明显抑制流感病毒增殖,能显著降低H1N1、H5N1和H7N9流感病毒的HA和TCID_(50),以治疗方式给药能明显降低H1N1流感病毒的HA和TCID_(50)(P0.05或P0.01)。清开灵软胶囊制剂前体和利巴韦林注射液抗H1N1流感病毒的半数有效浓度分别为0.25 mg/ml、2.19μg/ml,治疗指数分别为5.32、95.89。结论清开灵软胶囊制剂前体对H1N1、H5N1、H7N9流感病毒具有明显的预防作用,且对H1N1流感病毒具有良好的治疗作用。     

小儿宝泰康颗粒对流感病毒感染细胞的抗病毒作用研究

目的：观察小儿宝泰康颗粒对流感病毒感染细胞的抑制作用。方法：通过细胞培养技术观察不同浓度的小儿宝泰康颗粒对Madin-Darby犬肾（MDCK）细胞的细胞毒性作用,采用MTT法并结合CPE法检测细胞成活率和病毒抑制率,计算药物的抗病毒指数TI,以利巴韦林作为阳性对照药物,评价该药物对甲、乙型流感病毒的抗病毒活性。结果：小儿宝泰康颗粒对MDCK细胞的半数细胞毒性浓度（CC50）为5.6 mg/mL,对甲型H1N1流感病毒感染MDCK细胞的半数有效浓度（EC50）为2.1 mg/mL,而对乙型流感病毒的EC50为1.44 mg/mL,抗病毒指数分别为2.64和3.89。在阳性对照药物实验中,利巴韦林在200 μg/mL时,对甲、乙型流感病毒的抑制率均达到70%以上。结论：小儿宝泰康颗粒是一种对不同型流感病毒感染有抗病毒作用的药物,有临床应用前景和进一步研究的价值。     

热毒清口服液抑制呼吸道合胞病毒的体外实验研究

目的:评价热毒清口服液体外抑制呼吸道合胞病毒(respiratory syncytial virus,RSV)的效果.方法:采用MTT法及细胞病变抑制实验,以病毒唑为阳性对照,测定热毒清口服液在Hep-2细胞中对呼吸道合胞病毒的抑制作用.结果:热毒清口服液的半数中毒浓度(TC50)为9182.4 mg/L,抑制RSV的半数有效浓度(EC50)为559.8 mg/L,治疗指数(TI)为16.4.结论:热毒清口服液在体外实验中对呼吸道合胞病毒有显著抑制作用.