蛇毒Ⅱ类磷脂酶A2功能分化的分析研究

目的：研究蛇毒Ⅱ类磷脂酶A2(PLA2)中D49 PLA2和K49 PLA2的功能分化及其功能分化决定位点的鉴定。方法：运用序列比较分析，进化树构建和DIVERGE v1．04软件计算研究D49 PLA2和K49 PLA2的功能分化情况及其分化位点。结果：序列比较分析，进化树构建和DIVERGE v1．04软件计算结果表明蛇毒Ⅱ类PLA2中D49 PLA2和K49 PLA2的确发生了功能分化，对于K49 PLA2来说，1S，7K，11Q，E12，R34，T56，N88，L92，E108，K116，K128可能为功能分化决定位点。对于D49 PLA2，L2，G33，G35，F46和Y118可能为功能分化决定位点。结论：我们首次通过序列比较分析，进化树构建和DIVERGE v1．04软件计算鉴定出蛇毒Ⅱ类PLA2中D49 PLA2和K49 PLA2可能的功能分化位点，为今后通过基因重组和定点突变方法研究蛇毒Ⅱ类PLA2结构功能关系提供了线索。     

中国眼镜蛇毒对血小板聚集的影响

中国常见八种蛇毒包括眼镜蛇毒;银环蛇毒;金环蛇毒;眼镜王蛇毒;蝰蛇毒;蝮蛇毒;竹叶青蛇毒;五步蛇毒。在体外前四种蛇毒通过ADP的诱导,抑制家兔血小板的聚集,后四个毒促进家兔血小板聚集。用CM-Sephaex C 50柱层析3.0×65cm。眼镜蛇毒分为9个组份。组份Ⅰ和组份Ⅱ有明显抑制血小板聚集作用。组份I和组份Ⅱ经聚丙烯酰胺凝胶园盘电泳,鉴定为一区带。     

携带blaKPC-2基因泛耐药肺炎克雷伯菌16S rRNA甲基化酶基因和氨基糖苷类修饰酶基因分析

目的 了解临床分离的携带blaKPC-2型碳青霉烯酶基因泛耐药肺炎克雷伯菌中16S rRNA甲基化酶基因和氨基糖苷类修饰酶（AMEs）基因的分布。方法 在2008年11月～2009年7月从笔者医院住院患者中分离19株携带blaKPC-2型碳青霉烯酶基因泛耐药肺炎克雷伯菌,采用PCR及序列分析的方法分析6种16S rRNA甲基化酶基因（armA、rmtA、rmtB、rmtC、rmtD和npmA）和14种AMEs基因[ant（3″）-Ⅰ、ant（2″）-Ⅰ、ant（4′）-Ⅰ a/b、aadA4/5、aadA6/16、aac（3）-Ⅰ、aac （3）-Ⅱ、aac（3）-Ⅲ、aac（3）-Ⅳ、aac（6′）-Ⅰb、aac（6′）-Ⅱ、aph（3′）-Ⅰ、aph（3′）-Ⅱb和aph（3＇）-Ⅵa].结果 19株中,5种基因aac（3）-Ⅱ、aac（6′）-Ⅰb、aac（6′）-Ⅱ、ant（3″）-Ⅰ和aph（3′）-Ⅰ的阳性株数[阳性率（％）]分别为2（10.5％）、1（5.3％）、19（100.0％）、19（100.0％）和2（10.5％）,其余15种基因均阴性;AMEs基因总阳性率为100.0％ （19/19）.对1株（6号菌株）aac（6′）-Ⅰb基因PCR阳性产物进行测序,证实为aac（6＇）-Ⅰb-cr双功能酶基因.结论 氨基糖苷类修饰酶基因aac（6′）-Ⅱ和ant（3″）-Ⅰ在携带blaKPc-2型碳青霉烯酶基因泛耐药肺炎克雷伯菌中广泛分布。     

一种新的蝮蛇蛇毒磷脂酶A2同源物的分离纯化及其对Hep3B细胞基因谱的影响

目的从中国蝮蛇蛇毒中分离纯化出一种新的磷脂酶A2（PLA2）同源物,并研究其对Hep3B细胞基因谱的影响。方法用C18反相高效液相层析从蛇毒粗毒中分离纯化出PLA2同源物,并检测其纯度。用电喷雾质谱仪测定PLA2同源物分子量。体外培养Hep3B细胞,以139μg／mlPLA2同源物处理12h,应用基因芯片检测基因表达的改变。结果从蛇毒粗毒中分离纯化出一种新的PLA2同源物,纯度为97．2％,相对分子质量为13900。139μg／mlP乙嘘同源物处理Hep3B细胞12h后．19个基因表达下调,20个基因表达上调。表达改变的基因按功能分主要为以下6类：细胞周期控制和DAN损伤修复类、细胞调亡和衰老类信号转导分子和转录因子、细胞黏附类、血管生成类以及肿瘤细胞入侵和转移类。结论PLA2同源物作用于Hep3B细胞后,可影响细胞多种基因的表达,表达改变的基因主要参与肿瘤细胞的生长和转移。本研究为进一步深入研究PLA2对肿瘤细胞的作用机制提供线索和依据。     

PLA2G4和ABCC1基因多态性与支气管哮喘患儿孟鲁司特疗效的研究

目的 探讨胞浆型磷脂酶A2（PLA2G4）基因和ATP结合盒亚家族C成员1（ABCC1）基因单核苷酸多态性（SNPs）与支气管哮喘儿童白三烯受体拮抗剂（LTRA）孟鲁司特疗效的关系。方法 选取2019年3月—2021年9月于中国人民解放军北部战区总医院诊治的121例哮喘患儿为研究对象，受试儿童均采用常规治疗+孟鲁司特方案治疗1个月。应用imLDR^TM技术检测受试儿童PLA2G4基因rs10157410、rs10489409、rs932476位点和ABCC1基因rs215066位点的SNPs，探究各位点不同基因型间治疗前后肺功能、炎症指标及哮喘症状控制水平分级的变化情况。结果 孟鲁司特治疗前后PLA2G4基因rs10157410、rs10489409、rs932476位点不同基因型间的肺功能指标比较，差异均无统计学意义（P >0.05）。孟鲁司特治疗后，PLA2G4基因rs10157410位点GC和GG基因型、rs10489409位点CT和TT基因型、rs932476位点GA和AA基因型及ABCC1基因rs215066位点的第1秒用力呼气容积占预计值百分比、第1秒用力呼气容积与用力肺活量比值、用力呼出50%和75%肺活量时的瞬时流量占预计值百分比均升高（P <0.05）。孟鲁司特治疗后，PLA2G4基因rs10489409位点CC基因型患儿嗜酸性粒细胞计数较治疗前改善不显著（P >0.05），PLA2G4、ABCC1基因各位点不同基因型的免疫球蛋白（IgE）、呼出气一氧化氮均较治疗前改善显著（P <0.05）。孟鲁司特治疗后，PLA2G4基因rs10157410位点GC基因型良好控制比例高于GG基因型，未控制低于GG基因型（P <0.05）；PLA2G4基因rs932476位点GA和AA基因型良好控制比例与GG基因型比较，差异有统计学意义（P <0.05）。Logistic回归分析结果显示，PLA2G4基因rs10157410位点GC基因型良好控制比例是GG基因型的5.639倍［O^R =5.639（95% CI：2.078，15.298）］，rs932476位点GG基因型良好控制比例是AA基因型的0.053倍［O^R =0.053（95% CI：0.006，0.430）］。结论 PLA2G4基因rs10157410位点GC基因型和rs932476位点AA基因型对孟鲁司特具有更好的敏感性。     

单纯疱疹病毒Ⅰ型胸苷激酶基因的扩增、克隆和测序

目的：对单纯疱疹Ⅰ型胸苷激酶基因扩增、克隆和测序．方法：从单纯疱疹病毒Ⅰ型（ＨＳＶ－１）１７ｓｙｎ＋株感染的ＢＨＫ２１细胞上清液中提取ＨＳＶ－１基因组ＤＮＡ，以此为模板，用ＰＣＲ方法扩增胸苷激酶（ＴＫ）．将扩增的片段克隆入载体ｐＵＣ１８中，并进行测序．结果：除终止码外，ＨＳＶ－１ＴＫ基因全部编码区为１１２８ｂｐ，编码３７６个氨基酸，其中含１２个蛋氨酸，４个半胱氨酸．ＴＫ的第２４９和２５０位氨基酸残基分别为Ｌｅｕ和Ｇｌｎ，其相应密码子为ＣＴＧ，ＧＡＧ，构成１个ＰｓｔＩ位点，第３１３和３１４氨基酸残基分别为Ａｓｐ和Ｖａｌ，其相应密码子为ＧＡＣ和ＧＴＣ，构成另一个ＰｓｔＩ位点．结论：本研究扩增出了ＨＳＶ－１ＴＫ基因的全部编码区序列     

大鼠心血管系统中Ⅱ型磷脂酶A2 mRNA表达及cDNA克隆

目的：探讨Ⅱ型磷脂酶A2（PLA2）mRNA在正常大鼠心血管系统中的分布情况,研究其基因和氨基酸顺序结构的特征,了解与心血管疾病有密切关系的PLA2。方法：从大鼠血、心肌、主动脉弓、下腔静脉近心段、腹主动脉和下腔静脉腹腔段的组织匀浆中提取总RNA,合成第一链cDNA,利用PCR扩增大鼠Ⅱ型PLA2 mRNA,并对大鼠腹主动脉的PLA2 cDNA进行克隆和序列分析。结果：在所检测的几个心血管系统组织中均能测到Ⅱ型PLA2 mRNA,大鼠腹主动脉的DNA和氨基酸结构与其他组织来源的PLA2有高度同源性。结论：Ⅱ型PLA2广泛存在心血管系统中,Ⅱ型PLA2 mRNA在血液和主动脉弓中的表达较高,提示这可能是一种有益的选择性表达,发挥着潜在的宿主防御细菌感染功能。     

鲍曼不动杆菌氨基糖苷类修饰酶基因研究

目的：对临床分离鲍曼不动杆菌耐药性及氨基糖苷类修饰酶基因进行研究,以指导临床合理应用抗生素。方法：K-B琼脂纸片扩散法进行药敏试验,PCR法检测8种氨基糖苷类修饰酶基因,并对PCR产物进行测序。结果：70株ABA对13种药物的耐药率均在65％以上,仅对头孢哌酮／舒巴坦、亚胺培南、美洛培南的敏感率较高。氨基糖苷类修饰酶基因总检出率为64．29％（45／70）,其中aac（6’）-Ⅰ检出率最高为41．40％,其次为基因aae（3）-Ⅱ,aac（3）-Ⅰ和ant（3’）-Ⅰ,检出率分别为34．29％,31．435％和25．71％;未检出aac（6’）-Ⅱ,ant（2’）-Ⅰ,aph（3’）-Ⅰ及aph（3’）-Ⅱ基因。结论：氨基糖苷类修饰酶基因aac（6’）-Ⅰ、aac（3）-Ⅱ、aac（3）-Ⅰ及ant（3’）-Ⅰ为本地区鲍曼不动杆菌对氨基糖苷类药物耐药的主要原因。     

105例广西壮族人（牙合）型、骨型、软组织面型一致性研究

目的：探讨105例广西壮族人（牙合）型、骨型、软组织面型在各类错（牙合）畸形中的相互关系,以加深对错（牙合）畸形的了解.方法：随机抽取13～33岁广西壮族籍安氏各类错（牙合）患者105例,采用卡方检验分析各类错（牙合）分型、骨型与软组织面型的一致性.结果：（牙合）型与骨型、软组织面型三者之间一致现象以Ⅲ类错（牙合）（84.62％）最为明显,其次是Ⅱ类错（牙合）（58.97％）,Ⅰ类错（牙合）（42.50％）;不一致的现象以Ⅰ类错（牙合）（47.50％）最为明显,其次是Ⅱ类错（牙合）（41.03％）,Ⅲ类错（牙合）（15.38％）.组间比较,差异有统计学意义（x2 =11.588,P=0.003）.结论：105例广西壮族人（牙合）型、骨型、软组织形态之间关系复杂,需重视其对矫治设计和矫治结果的影响.     

天津地区IL-1 Ra基因内含子2可变串联重复序列与脓毒症的相关性研究

目的：探讨白细胞介素-1受体拮抗剂（IL-1 Ra）基因第2内含子中可变串联重复序列（VNTR）多态性与脓毒症的相关关系。方法：应用PCR法,观察90例脓毒症患者、120例健康对照者的IL-1 Ra基因VNTR多态性的分布。结果：两组人群中共发现了IL-1 RNI／I、IL-1RN Ⅰ／Ⅱ、IL- 1RNI／Ⅳ3种基因型,以I型等位基因为主,未发现Ⅲ型和Ⅴ型。正常对照组中Ⅱ型等位基因和Ⅰ／Ⅱ基因型的分布频率与脓毒症组相比明显增加（8％vs2％,P〈0．05;17％vs4％,P〈0．05）。另外,不携带Ⅱ型等位基因的基因型（Ⅰ／Ⅰ和Ⅰ／Ⅳ）和非Ⅱ型等位基因携带者（Ⅰ,Ⅳ）与携带Ⅱ型等位基因的基因型（Ⅰ／Ⅱ）和Ⅱ型等位基因携带者相比发生脓毒症的相对危险度分别为4．3和4．0。结论：I-1RN Ⅱ型等位基因可能在脓毒症的发生发展过程中具有潜在的保护作用。     

2型糖尿病患者血浆TXA2和PGI2失衡及PLA2活性变化

目的：探讨2型糖尿病（DM）患者血栓素A2（TXA2）和前列环素（PGI2）失衡及PLA2活性变化。方法：以放免法测定血栓素B2和6－酮－前列腺素含量,以改良Zieve法测定血浆PLA2活性,同时观察空腹血糖（FBG）、空腹胰岛素（FINS）、甘油三酯（TG）等的变化。结果：①2型DM患者存在TXA2和PGI2合成异常,且Ⅱ组（有微血管病变组）较I组（无微血管病变组）更为严重;②2型DM患者组血浆PLA2显著低于正常对照组,但I组与Ⅱ组之间无显著差异;③2型DM患者组TXB2与FBG、TG显著正相关,6－K－PGF1a与FINS显著负相关,TXB2与6－K－PGF1a均与血浆PLA2无显著相关性。结论：①TXA2和PGI2失衡在2型糖尿病及微血管病变的发生发展中起重要作用;②血浆分泌型PLA2活性变化与2型糖尿病密切相关,但在糖尿病患者TXA2和PGI2失衡及微血管病变中可能不起直接作用;③糖脂代谢紊乱以及高胰岛素血症在TXA2和PGI2失衡及DM微血管病变中起重要作用。     

眼镜蛇毒体外抗人类小涎腺腺样囊性癌细胞活性研究

目的：研究眼镜蛇毒（Cobra venom）体外抗人类小涎腺腺样囊性癌（NACC）细胞活性以及对细胞凋亡的影响。方法：以不同浓度的眼镜蛇毒作用于NACC细胞,应用三磷酸腺苷-生物荧光肿瘤化疗药物敏感试验法（ATP-TCA法）测定细胞的增殖状态;应用细胞形态学和流式细胞仪分析细胞凋亡。结果：实验显示眼镜蛇毒对体外培养的NACC有明显的抑制作用,与浓度和作用时间呈正比。用浓度2．0mg／L的眼镜蛇毒处理癌细胞48h后,试验组细胞凋亡率（52．4％）显著高于对照组（5．7％）。HE染色观察到眼镜蛇毒作用NACC细胞后其形态发生改变。结论：眼镜蛇毒能抑制NACC细胞增殖并诱导其凋亡。     

PCR—RFLP法检测上海地区汉和载脂蛋白E基因型

载脂蛋白Ｅ基因位于第１９号染色体上，与载脂蛋白ＣＩ及ＣⅡ基因紧密连锁，其编码第１２及第１５８位氨基酸的密码子具有多态性。研究运用聚合酶链反应扩增该基因第４号外显子内２９２ｂｐ片段，以限制性内切酶ＨｈａⅠ酶解，最后对酶解产物进行聚丙烯胺凝胶电泳，根据电泳带型判断载脂蛋白Ｅ基因型。     

冠心病患者脂肪酸结合蛋白的基因多态性

目的研究脂肪酸结合蛋白基因（FABP2）编码区exon2第54位密码子的多态性与冠心病的相关性。方法采用随机化同期平行病例一对照试验，冠心病组86例，正常对照组90例。应用聚合酶链反应（PCR）技术检测176例样本FABP2基因Hae—Ⅱ酶切位点的多态性。结果（1）样本人群的FABP2基因编码区exon2第54位密码子存在Hae—Ⅱ酶切位点．可产生多态性片段：野生型FABP2Ala54／Ala54；杂合变异型FABP2Ala54/Thr54；纯合变异型Thr54/Thr54。（2）冠心病组变异型FABP2Ala54/Trhr54及Thr54/Thr54基因型频率显著高于正常对照组（P=0．017）。（3）与野生型基因携带者相比，冠心病组FABP2Ala54/Thr54及Thr54/Thr54基因携带者的OR值为2．16（95％CI，1．03—3．54）结论（1）所研究的样本人群存在FABP2基因多态性；（2）FABP2基因多态性可能是涉及冠心病发生的遗传易感因素。（3）FABP2基因多态性可能是冠心病患者脂质代谢异常的影响因素之一。     

双相Ⅰ型与Ⅱ型障碍临床特征和BDNF及糖代谢指标的对比观察

目的：对比分析双相Ⅰ型与Ⅱ型障碍临床特征,进一步对比分析双相Ⅰ型障碍患者、双相Ⅱ型障碍患者、健康对照人群之间血清脑源性神经营养因子（BDNF）水平以及部分糖代谢指标。方法：根据DSM-IV轴I障碍用临床定式检查（病人版）提供的的诊断标准,我们将135例双相障碍患者分为双相Ⅰ型障碍组（89例）、双相Ⅱ型障碍组（46例）,另选择52例健康个体作为健康对照组。结果：（1）双相Ⅰ型障碍组患者的精神病性症状阳性率、情感稳定剂使用率、肥胖发生率显著高于双相Ⅱ型障碍组（P〈0.05）,以抑郁为首发症状患者的比例、既往自杀未遂率显著低于双相Ⅱ型障碍组（P〈0.05）。（2）三组间血清BDNF、空腹胰岛素（FINS）、胰岛素抵抗指数（HOMA2-IR）不全相等（P〈0.05）,双相Ⅰ型障碍组、双相Ⅱ型障碍组血清BDNF显著低于健康对照组（P〈0.05）,FINS、HOMA2-IR显著高于健康对照组（P〈0.05）,双相Ⅰ型障碍组与双相Ⅱ型障碍组之间血清BDNF、FINS、HOMA2-IR相比差异未见统计学意义（P〈0.05）。结论：双相Ⅰ型与Ⅱ型障碍临床特征有一定的区别,双相障碍患者的血清BDNF水平有所下降,且存在一定程度的糖代谢紊乱。     

炎症状态下大网膜Ⅰ型乳斑和Ⅱ型乳斑的变化研究

目的：探讨炎症状态下，大鼠大网膜Ⅰ型乳斑和Ⅱ型乳斑在数量、面积及巨噬细胞超微结构上的变化。方法：SD大鼠腹腔注射沙培林诱发炎症反应，微粒子活性炭和HE染色双重标记大网膜乳斑，Image-Pro Plus软件测定乳斑的数量和面积，电镜观察乳斑内巨噬细胞的超微结构。 结果：Ⅰ型乳斑数量显著增多[（11.053±1.543）个/㎝2vs（1.913±0.851）个/㎝2，p <0.01]，Ⅰ型乳斑面积显著增大[（0.316±0.066）㎜2vs（0.102±0.041）㎜2，p <0.01]；Ⅱ型乳斑数量显著增多[（14.147±1.702）个/㎝2vs（9.153±0.818）个/㎝2，p <0.01]，Ⅱ型乳斑面积显著增大[（0.486±0.080）㎜2vs（0.421±0.136）㎜2，p <0.05]；Ⅰ型乳斑数量变化较Ⅱ型乳斑数量变化显著（p <0.01），Ⅰ型乳斑面积变化较Ⅱ型乳斑面积变化显著（p <0.01）。实验组两型乳斑巨噬细胞内的溶酶体丰富，线粒体及粗面内质网肿胀扩张，伪足粗大密集并包裹活性炭颗粒。结论：在炎症状态下，两型乳斑数量增多、面积增大，表明两型乳斑在腹腔内均有重要的免疫功能，Ⅰ型乳斑变化更为显著。     

耐药鲍曼不动杆菌氟喹诺酮类耐药基因研究

目的 了解耐药不动杆菌氟喹诺酮类耐药基因的存在状况.方法 GNS-448药敏卡及K-B法测定抗菌药物的敏感性,聚合酶链反应（PCR）检测靶位DNA回旋酶编码基因（gyrA）与拓扑异构酶Ⅳ编码基因（parC）之氟喹诺酮耐药决定区突变分析,以及可移动遗传元件可介导的喹诺酮类耐药基因[qnrA、qnrB、qnrS、qepA、aac（6’）-Ⅰb-cr].结果 20株不动杆菌对12种常用抗菌药物严重耐药,对左氧氟沙星耐药率85％,亚胺培南90％,美洛培南耐药率达到95％.19株耐药鲍曼不动杆菌均检出gyrA基因氟喹诺酮耐药决定区（QRDR）第83位密码子TCA→TTA有义突变（氨基酸序列Ser→ Leu）;20株不动杆菌中,parC基因均检出存在QRDR区第80位密码子TCG→TTG有义突变（氨基酸序列Ser→Leu）;没有检出耐药鲍曼不动杆菌可移动遗传元件可介导的氟喹诺酮类耐药基因qnrA、qnrB、qnrS、qepA、aac（6’）-Ⅰ b-or.结论 鲍曼不动杆菌氟喹诺酮类药物的耐药机制主要与gyrA和parC基因QRDR区突变相关.     

原发性高血压病胰岛素受体基因的分析

应用聚合酶反应／单链构象多态分析了４６例高血压患者和４９例正常血压对照者胰岛受体基因第１７外显子的多态性，显示３种不同的ＳＳＣＰ带型，分别称为Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ带型。其中带型Ⅰ在高血压和对照组的出现频率分别为５４．３％和３２．７％（Ｐ＝０．０５），两组间有差异；带型Ⅱ在高血压和对照组的频率分别为２６．１％和３２．７％（Ｐ＝０．０５）；带型Ⅲ两组间无差异。根据ＰＣＲ直接测序结果，带型Ⅰ的第１０４０位编码基因     

多重耐药铜绿假单胞菌氨基糖苷类修饰酶基因及耐消毒剂基因的检测

目的了解我院多重耐药铜绿假单胞菌中氨基糖苷类修饰酶编码基因及耐消毒剂基因的存在状况。方法聚合酶链反应（PCR）法对多重耐药的铜绿假单胞菌进行氨基糖苷类修饰酶（AMEs）基因、qacE△1-sul1耐消毒剂基因的检测。结果本组7株多重耐药的Pa菌分别检出aac（6’）-Ⅰ、aac（6’）-Ⅱ、ant（3″）-Ⅰ和ant（2″）-Ⅰ等4种氨基糖苷类修饰酶基因和qacE△1-sul1型耐消毒剂基因。结论多重耐药铜绿假单胞菌存在多重耐药基因。     

干扰素对HCVⅡ型和Ⅲ型的治疗反应

目的 探讨重组干扰素α（ｒＩＦＮ－α）对丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）Ⅱ型和Ⅲ型的治疗反应。方法 采用ＲＴ－ＰＣＲ检测血清ＨＣＶ ＲＮＡ，并按Ｏｋａｍｏｔｏ等基因分型方法进行ＨＣＶ基因分型。应用ｒＩＦＮ－α治疗２４例ＨＣＶⅡ型和６例Ⅲ型感染者。结果 ３０例ＨＣＶⅡ、Ⅲ型感染者的总治疗反应为：完全反应（ＣＲ）２１例（７０％），部分反应（ＰＲ）６例（２０％）和无反应（ＮＲ）３例（１０％）。Ⅱ型和Ⅲ型ＣＲ率分别