白藜芦醇诱导CNE-2Z细胞凋亡过程中caspase-3的活化

目的　探讨白藜芦醇 (Res)诱导鼻咽癌细胞CNE 2Z凋亡过程中是否有caspase 3的活化。方法　用Western blot分析caspase 3酶原的变化 ,半定量RT PCR检测caspase 3mRNA水平的改变 ,比色法测定caspase 3的相对活性。结果　用0、2 5、5 0、10 0、2 0 0 μmol LRes处理CNE 2Z细胞 2 4h ,随药物浓度的增加 ,caspase 3酶原的蛋白水平减少 ,caspase 3的mRNA水平增加 (P <0 .0 1)。用 10 0 μmol LRes分别处理细胞 1、2、4、8、12、2 4h ,caspase 3活性于 2h开始升高 ,12h达高峰 (为对照组的6 .6倍 ,P <0 .0 1) ,2 4h仍高于对照组 (P <0 .0 1) ;用不同浓度的Res处理细胞 12h ,caspase 3活性呈浓度依赖性的升高。结论　Res诱导CNE 2Z细胞凋亡过程中有caspase 3的活化     

高三尖杉酯碱通过激活Caspase-3诱导鼻咽癌细胞凋亡

目的　了解高三尖杉酯碱 (HHT)是否可通过激活Caspase 3诱导鼻咽癌细胞CNE 2Z凋亡。方法　将细胞分为 4组 :对照组、1mg/LHHT处理组 (HHT组 ) ,以及分别用Caspase抑制剂 (z VAD fmk)和Caspase 3抑制剂 (DEVD fmk)预处理 2h后 ,再用 1mg/LHHT处理的z VAD fmk +HHT组和DEVD fmk +HHT组。采用流式细胞术及荧光染色法 ,检测 4组细胞的凋亡率 ,以比色法检测它们中Caspase 3的相对活性。结果　流式细胞术和荧光染色均发现 ,HHT组的凋亡率明显高于其它各组 (P <0 .0 1) ;Caspase 3的活性于 2h开始升高 ,8h达高峰 ,明显高于其它各组 (P <0 .0 1) ,2 4h时同其它各组的差异无显著性 (P >0 .0 5 )。结论　HHT可通过激活Cas pase 3诱导CNE 2Z细胞凋亡 ,Caspase 3的活性升高具有时间依赖性     

PKC-α反义核酸对鼻咽癌CNE-2Z细胞增殖及c-myc和c-fos表达的影响

为探讨PKC α反义核酸对CNE 2Z细胞增殖及c myc、c fos表达的影响 ,采用脂质体 (LP)介导法 ,用 0 0 1～1 0 0 μmol/L各浓度PKC α反义核酸 (asODN)转染CNE 2Z ;MTT法及软琼脂克隆形成法分别检测CNE 2Z生长指数(growthindex ,GI)及其体外增殖能力 ;免疫组化法检测PKC α、及c myc、c fos的表达。结果表明 :PKC αasODN 0 0 5～ 1 0 0 μmol/L各浓度组CNE 2ZGI显著降低 (P <0 0 5 ) ,且呈量效依耐关系 ;其中 1 0 0 μmol/L和 0 5 0 μmol/LPKC αasODN对CNE 2Z生长有非常显著抑制作用 (P <0 0 1) ;0 5 0 μmol/LPKC αasODN组CNE 2Z软琼脂克隆形成率均低于对照组 (P <0 0 5 ) ,并可下调其PKC α、c Myc、c Fos的表达 (P <0 0 5 )。结果提示 :LP介导PKC αasODN转染CNE 2Z细胞 ,可有效阻断CNE 2ZPKC α的表达 ,抑制其体外增殖能力 ,下调c myc、c fos蛋白表达 ;PKC αasODN可能通过下调c myc、c fos表达发挥作用     

白藜芦醇诱导鼻咽癌细胞CNE-2Z凋亡过程中caspase-6的活化

目的:探讨白藜芦醇(Res)诱导鼻咽癌细胞CNE-2Z凋亡过程中是否有caspase-6的活化。方法:用Western-blot分析caspase-6酶原的裂解,半定量RT-PCR检测caspase-6mRNA表达的改变,比色法测定caspase-6活性的变化。结果:用Res 0(对照)、25、50、100、200μmol/L处理细胞24小时,caspase-6酶原的表达随药物浓度的增加而减少,100 μmol/L时开始出现活性裂解片段P20(20 kD),200μmol/L时P20增加;caspase-6 mRNA的表达呈浓度依赖性的增加(P<0.01);caspase-6活性呈浓度和时间依赖性的升高(P<0.01)。结论:Res诱导CNE-2Z细胞凋亡过程中有caspase-6的活化。     

同型半胱氨酸诱导人脐静脉内皮细胞凋亡caspase 3的活化

目的：本研究拟探讨Hcy致内皮细胞凋亡的信号途径。 方法： 以Hcy诱导培养人脐静脉内皮细胞24 h后，通过检测细胞膜磷脂双分子层的改变，DNA ladder的形成确证细胞凋亡，并检测caspase3 及其抑制蛋白c-IAP1/2 mRNA 及蛋白质水平，以及caspase3的活化情况。 结果： Hcy(0.3 mmol/L)即可引起内皮细胞凋亡, 随Hcy浓度升高caspase3酶原含量增加，活化增强；c-IAP2 mRNA 及蛋白质表达降低。 结论： Hcy(0.3-3 mmol/L)可增加细胞内caspase3酶原表达，通过活化caspase3信号途径诱导HUVEC凋亡。在细胞凋亡过程中，凋亡抑制蛋白c-IAP-2表达水平下降。     

汉防己甲素对人鼻咽癌CNE1和CNE2细胞株的放疗增敏作用

目的:探讨最大非毒性剂量汉防己甲素(tetrandrine,Tet)对人鼻咽癌细胞株CNE1和CNE2的放疗增敏机制。方法:分别采用最大非毒性剂量Tet(对CNE1细胞为1.5μmol/L;对CNE2细胞为1.8μmol/L)、4 Gy放疗和最大非毒性剂量Tet联合放疗处理CNE1和CNE2细胞;流式细胞术检测各组细胞周期分布,Western blot检测各组细胞γ-H2AX、cleaved caspase-3、p-CDC25C、CDK1、p-CDK1、cyclin B1、ERK和p-ERK的蛋白水平。结果:最大非毒性剂量Tet联合放疗后可上调CNE1和CNE2细胞中γ-H2AX的表达。放疗组CNE1和CNE2细胞G_2/M期的比例分别为(18.09±0.42)%和(18.48±1.32)%,联合处理组CNE1和CNE2细胞G_2/M期的比例降为(15.88±1.04)%和(13.80±0.82)%,与放疗组比较差异有统计学意义(P0.05)。联合处理可增加放疗所致的cleaved caspase-3的蛋白水平(P0.05)。不同浓度Tet处理CNE1和CNE2细胞后,p-CDC25C和p-CDK1的蛋白水平随Tet浓度增加而升高(P0.05),CDK1的表达无明显改变;最大非毒性剂量Tet不影响p-CDC25C、p-CDK1和CDK1的蛋白水平。在CNE1和CNE2细胞中,联合处理可明显降低放疗引起的p-CDC25C和p-CDK1的蛋白水平(P0.05),上调放疗后cyclin B1的表达,而对总CDK1的表达无明显调节作用;联合处理可显著抑制放疗所致的pERK蛋白水平(P0.05)。结论:最大非毒性剂量Tet可以增加放疗引起的CNE1和CNE2细胞的DNA断裂及细胞凋亡,其放疗增敏的机制可能与Tet调控ERK/CDC25C/CDK1/cyclin B1通路、去除放疗导致的G2/M期阻滞有关。     

受体酪氨酸激酶Axl高表达促进鼻咽癌临床进展

目的:探讨受体酪氨酸激酶anexelekto(Axl)在鼻咽癌(nasopharyngeal carcinoma,NPC)中的表达及意义。方法:采用免疫组化法检测78例NPC和32例鼻咽黏膜慢性炎中Axl的表达,分析Axl蛋白表达与NPC患者临床参数的相关性。常规培养NPC细胞,免疫荧光法检测不同分化NPC细胞系CNE1、CNE2Z及C666-1中Axl的蛋白表达情况。应用Axl特异性抑制剂TP-0903处理CNE1和C666-1细胞,CCK-8实验检测细胞的活力,流式细胞术检测细胞周期的分布,q PCR检测Axl和增殖细胞核抗原(PCNA)的mRNA表达,Western blot检测Axl及p-Axl蛋白的表达。结果:Axl蛋白定位于胞膜和胞质。NPC中Axl高表达阳性率显著高于鼻咽黏膜慢性炎(P0.01)。Axl高表达与患者年龄、性别及M分期无关,与临床分期、T分期和N分期呈正相关(P0.05)。Axl在高分化CNE1细胞中低表达,在低分化CNE2Z细胞和未分化C666-1细胞中表达水平明显增高。TP-0903呈浓度和时间依赖性抑制NPC细胞的活性,2 nmol/L TP-0903即具有显著抑制效应,能阻滞细胞周期于G0期,在降低Axl活性的同时也显著抑制PCNA的表达。结论:Axl高表达可促进NPC的临床进展;TP-0903显著抑制NPC细胞的增殖,提示Axl可能在NPC靶向治疗中具有一定的价值。     

香烟提取物和脂多糖对人胚肺成纤维细胞TGF-β1 mRNA及蛋白表达的影响

目的 :探讨香烟提取物 (CSE)和脂多糖 (LPS)对体外培养的人胚肺成纤维细胞 (HELF)转化生长因子- β1(TGF - β1)mRNA及其蛋白表达的影响。方法 :应用不同浓度的CSE(1∶5 0、1∶2 5和 1∶10 )、LPS(0 1mg/L、1mg/L和 10mg/L)及CSE(1∶2 5 )与LPS(1mg/L)联合作用于HELF ,37℃作用 2 4h后 ,提取细胞总RNA ,应用逆转录 -多聚酶链反应 (RT -PCR)及免疫细胞化学技术检测TGF - β1mRNA和蛋白表达的变化。结果 :CSE低浓度 (1∶5 0和 1∶2 5 )时可增加HELFTGF - β1mRNA及蛋白的表达 (P <0 0 5 ) ,高浓度 (1∶10 )时未引起TGF - β1mRNA及蛋白表达增强 (P >0 0 5 )。不同浓度的LPS均引起HELFTGF - β1mRNA及蛋白表达增强 (P <0 0 5 )。CSE与LPS联合作用也可增加HELFTGF - β1mRNA及蛋白的表达 (P <0 0 5 )。结论 :一定浓度的CSE和LPS可上调肺成纤维细胞TGF - β1mRNA及蛋白表达。     

口虾蛄提取物对人鼻咽癌细胞P53、COX-2和VEGF表达的影响

目的: 研究口虾蛄提取物(EOS)对人低分化鼻咽癌细胞系(CNE-2Z)中P53、环氧化酶2(COX-2)和血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响及意义。方法: 不同浓度EOS(0 mg/L、125 mg/L、250 mg/L和500 mg/L)作用CNE-2Z细胞24 h后,Western blotting检测P53蛋白表达,免疫细胞化学法及RT-PCR法分别检测COX-2 、VEGF蛋白和mRNA的表达。结果: CNE-2Z细胞中P53蛋白、COX-2和VEGF蛋白和mRNA表达均随EOS作用浓度增高而逐渐降低,呈量效关系(P<0.01);且COX-2 和VEGF表达量呈正相关(P<0.05),COX-2 和P53表达量亦呈正相关(P<0.05)。结论: EOS可能通过抑制CNE-2Z细胞中P53蛋白的表达,干扰COX-2和VEGF的表达而发挥其抗肿瘤作用的。     

巨噬细胞移动抑制因子提高鼻咽癌细胞体外侵袭能力

目的　研究巨噬细胞移动抑制因子 (MIF)体外提高鼻咽癌细胞侵袭能力的原因 ,探讨鼻咽癌细胞早期发生侵袭和转移的机制。方法　采用微孔迁移分析法 (micron migrationassay)检测鼻咽癌细胞株CNE 1、CNE 2在细胞因子MIF诱导下通过 8μm直径微孔的细胞数量变化 ,采用Western蛋白印迹法、流式细胞术和酶联免疫吸附法检测侵袭转移相关因子基质金属蛋白酶 2、9(MMP2 ,MMP9)及白介素 8(IL 8)在此过程中的相应改变。结果　 (1)经MIF诱导后 ,CNE 1通过 8μm微孔的细胞数由原来的 2 3 7± 11 0 2增加至 113 7± 2 0 9,CNE 2则由原来的 3 4 7± 7 41增加至 3 11 3± 48 9,差异均呈显著性 (P =0 0 0 5,P =0 0 0 1)。 (2 )经MIF诱导后 ,癌细胞表达MMP9蛋白的细胞比例均明显增加 ,CNE 1细胞由 2 8 5%± 2 45%增加至 82 4%± 3 49% (P =0 0 0 1) ,而CNE 2细胞则由刺激前的 3 2 8%± 3 48%增加至 86 1%± 1 62 % (P =0 0 0 2 )。同时癌细胞MMP9蛋白表达强度也显著增强 ,CNE 1和CNE 2细胞MMP9蛋白的平均相对强度均比诱导前提高 3倍以上 (P <0 0 5)。但MIF刺激前后 ,MMP2蛋白的细胞表达数量和表达强度在两株细胞中却未见明显变化 (P值均大于 0 0 5)。 (3 )MIF诱导后 ,CNE 2细胞培养上清液中的IL 8浓度为 12     

ClC-3氯通道在二甲双胍抑制鼻咽癌细胞周期进程中的作用

目的:探讨ClC-3氯通道在二甲双胍抑制鼻咽癌细胞周期进程中的作用。方法:采用不同浓度二甲双胍处理低分化鼻咽癌细胞CNE-2Z,CCK-8法检测细胞活力,流式细胞术检测细胞周期分布,Western blot法检测ClC-3氯通道蛋白表达,全细胞膜片钳技术检测细胞氯电流。构建高表达ClC-3氯通道蛋白的质粒pEZ-M03-ClC-3转染CNE-2Z细胞,流式细胞术检测ClC-3氯通道对细胞周期分布的影响。结果:5、10和20 mmol/L浓度的二甲双胍均可有效抑制CNE-2Z细胞的活力。10 mmol/L二甲双胍可阻抑CNE-2Z细胞周期于G0/G1期,并抑制CNE-2Z细胞氯电流及ClC-3氯离子通道蛋白的表达。ClC-3氯通道蛋白高表达可逆转二甲双胍对CNE-2Z细胞周期分布的影响。结论:二甲双胍抑制鼻咽癌CNE-2Z细胞周期进程可能与抑制ClC-3氯通道功能和蛋白表达有关。     

小脑颗粒神经元细胞凋亡中caspase-8基因变化与二乙酰吗啡的影响

背景：半胱-天冬氨酸蛋白酶8(Caspase-8)是细胞凋亡过程起始的重要因子,二乙酰吗啡可致神经元细胞凋亡,其与二乙酰吗啡致小脑颗粒神经元细胞凋亡之间关系尚未见报道。 目的：验证二乙酰吗啡诱导小脑颗粒神经元细胞凋亡与caspase-8基因表达情况,明确caspase-8参与二乙酰吗啡致神经元凋亡过程。 方法：取出生7 d SD大鼠小脑颗粒神经元细胞进行体外培养,第7天后,以不同质量浓度的二乙酰吗啡(10,40,80,100,120 mg/L)和C-jun氨基末端激酶通路特异性抑制剂SP600125作用小脑颗粒神经元细胞24 h,并分对照组(0 mg/L二乙酰吗啡),80 mg/L二乙酰吗啡组,二乙酰吗啡+SP 600125组;采用Hoechst 33258 荧光染色观察细胞形态学改变,流式细胞仪测细胞凋亡率,免疫荧光、RT-PCR及Western Blotting检测caspase-8 mRNA和蛋白表达情况。 结果与结论：①施加不同质量浓度二乙酰吗啡致神经元细胞凋亡,凋亡细胞出现透亮深蓝色的凋亡小体,细胞核呈现固缩、凝聚及断裂,随给药浓度增加细胞凋亡率呈现升高趋势(P < 0.05)。②与对照组相比,在80 mg/L二乙酰吗啡干预时caspase-8 mRNA和蛋白表达明显明显表达(P < 0.05);caspase-8 mRNA随给药浓度增加呈现升高趋势(P < 0.05),二乙酰吗啡+SP600125组中caspase-8 mRNA和蛋白较80 mg/L二乙酰吗啡组明显下调(P < 0.05)。结果提示caspase-8参与二乙酰吗啡致小脑颗粒神经元细胞凋亡过程,同时也是C-jun氨基末端激酶信号通路中的重要候选促凋亡因子。 中国组织工程研究杂志出版内容重点：组织构建;骨细胞;软骨细胞;细胞培养;成纤维细胞;血管内皮细胞;骨质疏松;组织工程全文链接：     

Nodosin通过Apaf-1和caspase-3诱导HepG2细胞凋亡

目的:研究传统中药提取物nodosin对人肝细胞癌Hep G2细胞凋亡的影响,并探讨其作用机制。方法:将nodosin设置为1. 25μmol/L、2. 5μmol/L、5μmol/L、10μmol/L和20μmol/L不同浓度组,作用于Hep G2细胞24 h后,用Hoechst 33258染色和电镜观察不同浓度的药物对细胞形态学的影响,用流式细胞术检测细胞凋亡率,用RT-qPCR检测凋亡蛋白酶激活因子1 (Apaf-1) mRNA的表达,用Western blot检测caspase-3及其前体和活化体的蛋白水平。结果:形态学结果显示,随着用药剂量的增加,细胞皱缩和细胞核偏移越明显,凋亡小体在5μmol/L、10μmol/L和20μmol/L剂量组明显增多。Apaf-1 mRNA的表达增加,caspase-3及其前体的表达和cleaved caspase-3的蛋白水平随着用药剂量的增加逐渐增加(P 0. 01)。结论:Nodosin能够诱导Hep G2细胞凋亡。该作用可能是通过增加Apaf-1 mRNA的表达继之激活caspase-3实现的。     

阻断Sonic Hedgehog信号对不同人肝癌细胞生长的影响

 目的: 研究阻断Sonic Hedgehog (Shh)信号对不同人肝癌细胞生长的影响,探讨阻断Shh信号抑制肝癌细胞生长的机制。方法: RT-PCR法检测Shh信号分子在3株人肝癌细胞(BEL-7402、Huh7和HepG2)中的表达,并检测Shh阻断抗体作用后BEL-7402细胞Shh信号效应分子表达变化;MTT法检测人肝癌细胞增殖活性;流式细胞术检测人肝癌细胞凋亡;Western blot 检测凋亡相关蛋白表达。结果: Shh信号分子在3株人肝癌细胞中均有表达,Shh阻断抗体可以下调Shh信号效应分子patched (Ptch)、Gli1和Gli2的表达;Shh阻断抗体可以抑制3株肝癌细胞生长,增加G₀/G₁期细胞,并诱导细胞凋亡;Shh阻断抗体作用后,BEL-7402细胞pro-caspase-3、pro-caspase-8和pro-caspase-9蛋白表达水平下降,cleaved caspase-3、cleaved caspase-8和cleaved caspase-9蛋白表达水平升高。结论: 阻断Shh信号可抑制Shh高表达的人肝癌细胞生长,阻滞细胞周期于G₀/G₁期,并诱导肝癌细胞凋亡。     

口虾蛄提取物对人鼻咽癌细胞端粒酶活性的影响

目的:研究口虾蛄提取物(EOS)对人低分化鼻咽癌细胞系(CNE-2Z)端粒酶活性的抑制作用及其可能机制。方法:MTT法检测不同浓度的EOS对CNE-2Z细胞增殖能力的影响;端粒酶重复序列扩增-酶联免疫吸附法(TRAP-ELISA)检测各组细胞端粒酶活性,RT-PCR法检测端粒酶逆转录酶(hTERT)mRNA表达,Western blotting检测c-Myc蛋白表达。结果:EOS对CNE-2Z细胞增殖具有抑制作用,且呈剂量依赖性(P0.01);EOS处理组CNE-2Z细胞端粒酶的活性、hTERT mRNA和c-Myc蛋白的表达水平均低于对照组(P0.01),也呈剂量依赖性,并且hTERT mRNA的下调与c-Myc的抑制存在相关性(P0.05)。结论:EOS可能通过下调细胞c-Myc表达而抑制了hTERT mRNA的转录,以致端粒酶的活性降低而抑制CNE-2Z细胞增殖。     

表没食子儿茶素没食子酸酯通过调控P53/miR-34a抑制鼻咽癌细胞的增殖

目的:观察表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)对鼻咽癌细胞增殖的影响,并以微小RNA-34a(miR-34a)为靶点探讨其作用机制。方法:不同浓度的EGCG处理CNE-2Z细胞,CCK-8法、Ed U染色法和平板克隆形成实验检测细胞增殖能力的改变;流式细胞术检测细胞周期分布的改变;Western blot检测P53和Notch1蛋白水平的变化;real-time PCR检测miR-34a和Notch1 mRNA的表达。结果:EGCG处理后,CNE-2Z细胞的增殖受到明显抑制,克隆形成能力降低,细胞周期阻滞于G0/G1期,呈剂量依赖关系;随着EGCG浓度增高,P53和miR-34a的表达水平明显上调,而其下游Notch1 mRNA和蛋白的表达水平则明显下降。结论:EGCG可能通过调控P53/miR-34a/Notch1通路诱导细胞周期阻滞,抑制鼻咽癌细胞增殖。     

X线电离辐射诱导人鼻咽癌CNE-2细胞发生上皮-间充质转化及其潜在机制

目的:探讨X线电离辐射诱导鼻咽癌CNE-2细胞发生上皮-间充质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)及其可能的信号通路。方法:分别采用0 Gy、2 Gy、4 Gy和8 Gy的X线照射鼻咽癌CNE-2细胞,通过倒置显微镜观察照射24 h后细胞形态的改变;应用细胞划痕实验和Transwell实验观察细胞迁移和侵袭能力的变化;分别采用real-time PCR和Western blot法检测EMT相关蛋白E-钙黏蛋白(E-cadherin)、N-钙黏蛋白(N-cadherin)和波形蛋白(vimentin)mRNA及蛋白水平的变化,并采用Western blot法检测Akt和p-Akt蛋白水平的变化。结果:经X线照射后鼻咽癌CNE-2细胞呈典型的"鹅卵石"样或纺锤形,且伸出伪足,细胞间隙增大,细胞的侵袭和迁移能力增强(P0.01);real-time PCR和Western blot法检测结果显示,与未照射组相比,各照射组细胞中E-cadherin mRNA和蛋白的表达水平均显著下调(P0.01),而N-cadherin和vimentin mRNA和蛋白的表达水平明显上调(P0.05);PI3K/Akt信号通路中p-Akt蛋白的水平显著升高(P0.01),而Akt的表达无明显变化。结论:X线电离辐射能够诱导鼻咽癌CNE-2细胞发生EMT,其机制可能与PI3K/Akt信号通路的激活有关。     

吗啡对人鼻咽癌CNE-2细胞增殖和凋亡的影响

目的 探讨吗啡对人鼻咽癌CNE-2细胞增殖与凋亡的影响及可能的机制.方法 以含0.1、1、10、100、1000mg/L吗啡的培养液作用于体外培养的鼻咽癌CNE-2细胞,等体积培养基作为对照组.MTT法检测吗啡作用24、48和72 h的细胞增殖抑制率,并在不同浓度吗啡作用细胞48 h后,用Hoechst33258荧光染色、流式细胞仪检测细胞凋亡,Western免疫印迹检测Bc1-2、Bax和caspase-3、cleaved-caspase-3蛋白表达.结果 相同作用时间点0.1～100 mg/L吗啡并不影响CNE-2细胞的增殖.而在1000 mg/L吗啡作用下细胞增殖受到明显的抑制,在24、48、72 h CNE-2细胞增殖抑制率随作用时间延长而增加,分别达到(15.0±4.4)%、(30.7±4.9)%和(50.0±4.4)%.48 h后,荧光显微镜下对照组CNE-2细胞未见明显凋亡,0.1～100mg/L吗啡组仅见少量凋亡,而在1000mg/L吗啡组,可见到大量细胞出现典型的凋亡形态学改变.流式细胞仪检测结果显示0.1～100 mg/L吗啡组细胞凋亡率与对照组差异并无统计学意义(P>0.05),而1000mg/L吗啡组细胞凋亡率则明显增加[(39.33±6.03)%比(9.36±1.57)%,P<0.05].Western免疫印迹检测显示在1000 mg/L吗啡作用CNE-2细胞48 h后,Bcl-2蛋白的表达量较对照组明显下降,Bax表达增多,caspase-3活性升高,cleaved-caspase-3表达增多.而其他浓度作用下CNE-2细胞Bcl-2、Bax和caspase-3、cleaved-caspase-3蛋白表达未见明显变化.结论 大剂量吗啡可诱导鼻咽癌CNE-2细胞的凋亡,其机制可能与吗啡上调CNE-2细胞Bax蛋白表达,下调其Bcl-2蛋白表达,引起caspase-3活化有关.     

Increased activity of caspase 3 and caspase 8 in anti-Fas-induced apoptosis in lymphocytes from ageing humans.

We have previously shown an increased susceptibility of T cell subsets to anti-Fas-induced apoptosis in human ageing [1]. In this study, we have examined the role of downstream mediators, including caspases, in Fas-mediated apoptosis in lymphocytes from ageing humans. The cleavage activity of caspase-8 and caspase-3 was compared between ageing and young subjects at different times following anti-Fas treatment, using colorimetric detection analysis. The expression of Fas-associated death domain (FADD), caspase-8, and caspase-3 in lymphocytes was compared at the protein level using Western blotting, and at the mRNA level by Northern blot analysis. In lymphocytes from ageing subjects, there was an early increase in the cleavage activity of caspase-8 and caspase-3 compared with young controls. Furthermore, increased protein expression of FADD, caspase-8 and caspase-3 at the basal level was observed in lymphocytes from ageing humans. Our results suggest that the altered expression and activity of molecules in the Fas/FasL signalling pathway may play a role in increased Fas-induced apoptosis and T cell deficiency in ageing humans.