ERCC1表达与肺癌顺铂化疗敏感性的关系

目的 探讨非小细胞肺癌(NSCLC)患者癌组织内错配切除交叉互补修复酶1(ERCC1)表达与顺铂化疔敏感性的相关性.方法 选择天津胸科医院就诊临床病理资料完整的NSCLC患者168例,以免疫组化及RT-PCR方法检测肿瘤组织中ERCC1蛋白及mRNA表达.结果 在168例NSCLC患者中,ERCC1表达呈阳性者99例(5 8.93%).ERCC1表达与患者性别、年龄、分期及病理类型无关.在随访的133例NSCLC患者中,显效者91例,其中3例Ⅰa～Ⅰb期患者术后未行化疗.在130例NSCLC患者中,ERCC1呈阳性表达者76例(58.46%).显效者88例,其中ERCC1呈阳性表达者38例(43.18%),阴性者50例(56.82%).而未显效者42例,ERCC1呈阳性表达者为37例(88.10%),阴性表达者仅为5例(11.90%).显效组与未显效组相比,ERCC1表达降低,经x2检验,差异有统计学意义(x2=23.50,P＜0.01).显效组ERCC1 mRNA表达量为(0.624±0.275),未显效组为(2.758±0.771),可见显效组ERCC1 mRNA表达较未显效组减低,差异有统计学意义(t=11.54,P=0.013).结论 ERCC1表达增强可能是NSCLC患者对以顺铂为基础的联合化疗不敏感的重要因素,可为临床制定NSCLC患者的个体化化疗方案提供了有益参考.     

miR-223-3P对肺鳞癌细胞顺铂敏感性的影响

目的研究miR-223-3p对肺鳞癌细胞顺铂(CDDP)敏感性的影响。方法通过分别升高或降低(miR-223-3p mimics、NC-mimics、miR-223-3p inhibitor、NC-inhibitor)肺鳞癌NCI-H520和SK-MES-1细胞内miR-223-3p的含量后,qRT-PCR检测细胞内miR-223-3p基因表达水平;CCK-8法检测细胞半数抑制浓度(IC50);流式细胞仪检测细胞加入CDDP药物刺激后凋亡率的改变(分别设计四组不同的处理:miR-223-3p mimics+CDDP、NC-mimics、miR-223-3p inhibitor+CDDP、NC-inhibitor);Transwell实验检测SK-MES-1细胞迁移能力的变化;Western blot法检测SK-MES-1细胞中Bax、ZEB1和E-cadherin的变化。结果 CCK-8实验结果表明,miR-223-3p mimics组的IC50低于对照组的IC50,miR-223-3p inhibitor组的IC50高于对照组的IC50;流式细胞术凋亡检测结果显示,miR-223-3...     

抑制肺鳞癌细胞FANCM和USP1基因对顺铂的增敏效应

［摘要］目的: 研究抑制FANCM和USP1基因后,人肺鳞癌SK-MES-1细胞株FA/BRCA通路激活状态以及对顺铂敏感性的变化。方法: 用脂质体转染试剂将FANCM siRNA和USP1 siRNA分别和共转染于SK-MES-1细胞株,采用蛋白质印迹法测定转染后FANCM和USP1蛋白表达,并检测转染前后经DDP处理后细胞FANCD2蛋白单泛素化水平。免疫荧光染色检测胞核内FANCD2核聚小体表达。CCK-8法测定转染前后细胞生存率的变化;Annexin V/PI流式细胞术测定转染前后细胞凋亡率。结果： 转染FANCM-siRNA和USP1-siRNA后,SK-MES-1细胞中FANCM和USP1蛋白表达均较转染前明显降低。转染FANCM siRNA后经顺铂诱导的FANCD2单泛素化水平和核聚小体表达明显下调;转染USP1-siRNA后,顺铂诱导的FANCD2单泛素化水平和核聚小体形成明显增加;转染USP1 siRNA后细胞生存率和细胞凋亡率高于转染FANCM-siRNA,同时共转染USP1-siRNA+FANCM siRNA后细胞对顺铂的致敏效应与转染USP1 siRNA相似。结论： 沉默FANCM和USP1基因后,通过阻断FA/BRCA通路,抑制其DNA修复功能,导致SK MES 1细胞对顺铂的敏感性增高,其中沉默USP1基因的增敏效应更为明显。     

RNA干扰ERCC1基因表达对卵巢癌顺铂敏感性的影响

目的研究ERCC1基因表达与卵巢癌顺铂耐药的关系。构建携带ERCC1基因小发夹干扰RNA的重组质粒表达载体,观察RNA干扰ERCC1基因表达对卵巢癌顺铂敏感性的影响。方法RT-PCR方法检测COC1、COC1/DDP细胞中ERCC1基因表达,基因重组技术构建携带ERCC1小发夹干扰RNA的重组质粒表达载体,脂质体法转染COC1/DDP细胞,RT-PCR及westernblot方法检测转染后细胞内ERCC1mRNA和蛋白的表达,MTT法检测转染后细胞对顺铂敏感性的改变。结果COC1/DDP细胞中ERCC1基因表达明显高于COC1细胞。重组质粒转染后,COC1/DDP细胞中ERCC1mRNA和蛋白表达显著下调。转染后细胞对顺铂的敏感性显著增加。结论COC1/DDP中ERCC1基因表达增强与卵巢癌顺铂耐药相关。RNA干扰抑制ERCC1基因表达能增加卵巢癌耐药细胞COC1/DDP对顺铂的敏感性。     

RNAi沉默ERCC1基因对肺腺癌细胞顺铂敏感性的影响

目的 目的用包含切除修复交叉互补(ERCC1)基因特异RNA序列的慢病毒,将其转染入宣威肺腺癌细胞XWCL05中,沉默ERCC1基因表达,初步探讨其基因沉默效果及对顺铂敏感性的影响,为顺铂耐药逆转提供思路和依据.方法 经293T细胞包装后构建ERCC1基因RNAi的慢病毒载体及阴性对照,分别使用XWCL05空白组(空白对照)、XWCL05-neg组(转染空载体)、XWCL05-RNAi组(转染ERCC1-RNAi慢病毒).Western blot法检测转染前后XWCL05细胞中ERCC1蛋白的表达.12.5 μg/mL顺铂作用48 h后,用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测顺铂对各组XWCL05细胞增殖抑制率的影响;流式细胞术检测各组中XWCL05细胞的凋亡率.结果 (1) Western blot结果显示,XWCL05-RNAi组中ERCC1蛋白表达水平显著低于XWCL05-neg组(P＜0.05),而XWCL05-neg和XWCL05空白组差异无统计学意义(P＞0.05).(2)MTT法检测显杀相同浓度顺铂作用下,XWCL05-RNAi组的增殖抑制率显著高于XWCL05-neg组和XWCL05空白组(P＜0.05),而XWCL05-neg组.(3)流式细胞术检测结果显示,XWCL05-RNAi组凋亡率显著高于XWCL05-neg组和XWCL05空白组(P＜0.05).而顺铂作用后,各组凋亡率较前均显著升高(P＜0.05),且XWCL05-RNAi组凋亡率显著高于其余两组.结论 ERCC1基因RNAi的慢病毒能够有效地沉默宣威肺腺癌细胞XWCL05中ERCC1基因的表达,并增强XWCL05对顺铂的敏感性.     

八宝丹处理肺腺癌细胞A549和SPCA-1对顺铂化疗敏感性的影响

目的：探讨八宝丹处理人肺腺癌A549和SPCA‐1细胞系对顺铂（DDP）抗肿瘤化疗敏感性影响。方法收集人肺腺癌A549和SPCA‐1细胞系进行不同处理,随机分为对照组（空白）、DDP组（4 uM ）、（八宝丹＋DDP）组（0.75 mg／kg＋4 uM ）,处理3周,采用MTT法检测细胞增殖能力;末端脱氧核苷酸转移酶介导的d UTP缺口末端标记测定（TUNEL）法检测细胞凋亡率,采用transwell检测细胞迁移能力。结果与对照组比较,DDP组和（八宝丹＋DDP）组的 A549和SPCA‐1细胞增殖能力明显降低（P＜0.01）;与DDP组比较,（八宝丹＋DDP）组的A549和SPCA‐1细胞增殖能力无明显差异（P＞0.05）。与对照组比较,DDP组和（八宝丹＋DDP）组的A549和SPCA‐1细胞凋亡明显增加（P＜0．01）;与DDP组比较,（八宝丹＋DDP）组的A549和SPCA‐1细胞凋亡明显增加（P＜0.05）。与对照组比较,DDP组和（八宝丹＋DDP）组的A549和SPCA‐1细胞迁移数目明显降低（P＜0.01）;与DDP组比较,（八宝丹＋DDP）组的A549和SPCA‐1细胞迁移数目明显降低（P＜0.001）。结论（八宝丹＋DDP）可以增加肿瘤细胞的凋亡,降低肿瘤细胞的增殖,减少 A549和SPCA‐1细胞迁移数目,增加肿瘤细胞的DDP抗肿瘤敏感性。     

共抑制RAD18和REV1基因显著增加顺铂对肺癌细胞的毒性

目的: 探讨采用基因敲减技术抑制跨损伤合成（translesion synthesis,TLS）通路和范可尼贫血（Fanconi anemia,FA)通路上游的RAD18基因与TLS通路的REV1基因后增加顺铂对人肺腺癌耐药细胞株（A549/DDP）细胞毒性的可行性及其机制。方法: 蛋白质印迹法测定顺铂诱导的A549和A549/DDP细胞RAD18和REV1蛋白表达;应用脂质体转染试剂转染针对RAD18基因的siRNAs (RAD18 siRNA),检测A549/DDP细胞转染前后顺铂诱导的FANCD2和PCNA蛋白单泛素化水平;CCK 8法检测分别转染RAD18 siRNA、REV1 siRNA以及两者共转染前后经顺铂处理的A549/DDP细胞的增殖率;流式细胞术检测转染前后A549/DDP细胞凋亡率和细胞周期。结果： A549/DDP细胞转染RAD18 siRNA和REV1 siRNA后,RAD18和REV1蛋白表达明显降低,表明转染有效,基因敲减成功。转染RAD18 siRNA后顺铂诱导的FANCD2和PCNA蛋白的单泛素化水平明显下降,提示FA通路和TLS通路的激活受到抑制。分别转染RAD18 siRNA或REV1 siRNA均可增强顺铂对A549/DDP的细胞毒性,增加顺铂诱导的细胞凋亡率,并增强细胞周期S/G2期的阻滞效应。共转染RAD18 siRNA和REV1 siRNA后,顺铂对A549/DDP细胞的毒性增强作用较单转染更为显著,顺铂诱导的细胞凋亡进一步增加。 结论： 敲减A549/DDP细胞的RAD18和REV1基因可通过抑制FA通路和TLS通路的DNA损伤修复功能,增加A549/DDP细胞对顺铂的敏感性;RAD18和REV1基因共敲减对顺铂的这一增敏作用更加明显,显示出A549/DDP细胞对顺铂耐药的逆转效应。     

RAD18基因敲除增强肺腺癌细胞对顺铂的敏感性

目的:研究敲除E3泛素连接酶RAD18基因后,人肺腺癌A549细胞株和顺铂耐药A549(A549/DDP)细胞株FA/BRCA途径DNA修复功能的变化及其对顺铂敏感性的改变。方法:合成针对RAD18基因的siRNA(RAD18-siRNA),通过脂质体将其分别转染人A549和A549/DDP细胞株。蛋白质印迹法检测经顺铂处理的两种细胞株转染siRNA前后RAD18蛋白表达及FANCD2单泛素化水平;CCK-8法测定经顺铂处理的两种细胞株转染siRNA前后细胞增殖率的变化;免疫荧光测定胞核内FANCD2核聚小体的形成;Annexin V/PI流式细胞术测定转染前后细胞凋亡率。结果:与转染RAD18-siRNA前相比,转染后经顺铂处理的A549和A549/DDP细胞株RAD18表达均明显降低;FANCD2蛋白单泛素化水平下调和核聚小体形成减少;同时细胞增殖率明显降低,细胞凋亡率则明显增加。结论:应用RNA干扰技术敲除RAD18基因可通过抑制A549和A549/DDP细胞株FA/BRCA途径的DNA损伤修复功能,增加这两种细胞株对顺铂的敏感性。     

靶向OPN的miRNA对人肺腺癌细胞株A549顺铂敏感性的影响

目的通过miRNA介导RNAi沉默OPN表达探讨其对人肺腺癌细胞株A549顺铂(DDP)敏感性的影响。方法利用体外构建的靶向OPN的miRNA表达质粒瞬时转染A549,酶联免疫吸咐法(ELISA)检测转染后48h细胞OPN蛋白表达;转染后24、48、72、96h,四甲基偶氮唑蓝(MTT)法分别检测转染细胞和转染联合5μg/mL顺铂作用后细胞的增殖;于转染后24h联合不同浓度的顺铂作用48h,MTT法检测细胞增殖抑制率。结果(1)转染后48h,OPN蛋白表达水平下调了47.34%(P0.01)。(2)转染后24h细胞增殖开始受抑制(P0.05),48、72、96h细胞增殖被明显抑制,细胞增殖活性差异均有统计学意义(P0.01)。(3)转染联合顺铂作用24h细胞增殖开始受抑(P0.05),48、72、96h细胞增殖明显受抑,细胞增殖活性转染组与未转染组及非特异性转染组差异均有统计学意义(P0.01)。转染后24h联合不同浓度的顺铂作用48h,当顺铂浓度为2.5、5、10、20μg/mL时,细胞增殖被明显抑制,细胞增殖抑制率差异均有统计学意义(P0.01)。结论靶向OPN的miR-NA抑制人肺腺癌细胞A549增殖,增强细胞对DDP的敏感性。     

LncGAS5对肺癌细胞顺铂耐药性的调控机制

目的 探讨长链非编码RNA(lncRNA)生长阻滞特异性转录因子5(GAS5)对肺癌细胞顺铂(DDP)耐药性的影响和调控机制。方法 采用CCK8法检测A549、A549/DDP细胞转染sg-lncGAS5后进行顺铂处理之后,对细胞存活率的影响。通过平板克隆形成实验检测A549、A549/DDP细胞经脂质体转染构建lncGAS5过表达模型,再用顺铂处理之后细胞的增殖能力的变化。通过QPCR实验技术定量检测lncRNA GAS5的表达量。通过生物信息学预测和双荧光素酶实验检测293T细胞中GAS5与miR-152-3p mimics之间的靶向互作关系。结果 在A549和A549/DDP细胞中感染sg-lncGAS5后,与NC组相比,sg-lncGAS5组细胞存活率上调,差异有统计学意义(P<0.001)。在A549细胞中,OE-lncGAS5组与OE-NC组相比克隆形成数减少(P<0.001),sg-lncGAS5组与sg-NC组相比,克隆形成数增多(P<0.001);A549/DDP细胞中,OE-lncGAS5组与OE-NC组相比,克隆形成数减少(P<0.001)...     

抑制RhoC基因对卵巢癌细胞紫杉醇敏感性的影响

目的 探讨RNA干扰技术沉默Ras homolgyC(RhoC)基因对卵巢癌细胞SKOV3细胞对紫杉醇敏感性的影响.方法 体外设计合成针对RhoC基因的微小干扰RNA(miRNA),转染卵巢癌细胞SKOV3,应用RT-PCR和Western印迹方法检测转染前后基因mRNA和蛋白的变化,应用MTT方法检测干扰后SKOV3细胞对紫杉醇敏感性的变化,同时应用RT-PCR法检测转染前后SKOV3细胞中的凋亡基因Caspase-3、Survivin mRNA的表达水平.结果 转染针对RhoC基因的miRNA后24、48、72 h,SKOV3细胞mRNA和蛋白水平显著下降;关闭RhoC基因后,SKOV3细胞对紫杉醇的敏感性显著提高.与单独使用紫杉醇相比,在RhoC-miRNA联合紫杉醇组中促进凋亡的基因Caspase-3明显增高,而抗凋亡蛋白Suvlvin mRNA水平显著降低.结论 RNA干扰RhoC基因能增加卵巢癌SKOV3细胞对紫杉醇的敏感性,其协同机制可能与Caspase-3基因的上调,Suvivin基因的下调有关.     

ERCC-1在晚期非小细胞肺癌中的表达及其与铂类药物化疗敏感性关系

①目的 探讨DNA切除修复基因ERCC-1在晚期非小细胞肺癌中的表达及其与铂类药物化疗敏感性的关系.②方法 采用免疫组化S-P法检测61例ⅢB、Ⅳ期非小细胞肺癌患者中DNA切除修复基因ERCC-1的表达情况.所有患者均经铂类为基础的化疗方案化疗.③结果 在61例患者中,ERCC-1的表达为37.7%（23/61）,与患者性别、年龄及临床分期无关;腺癌的表达明显高于其它病理类型,其表达与以顺铂为基础的化疗耐药有关.化疗耐药组ERCC1的阳性表达率为54.84.%,化疗敏感组的ERCC1的阳性表达率为20%,组间差异有统计学意义（P＜0.05）.ERCC1阳性组平均生存时间为645天,阴性组为500天,用Kaplan-Meier进行单因素的生存分析,其差异无统计学意义（P＞0.05）.④结论 晚期肺癌存在ERCC1的表达,且与DDP为基础的化疗敏感性相关.检测ERCC-1可以预测晚期肺癌的铂类药物化疗敏感性.     

叶酰聚谷氨酸合成酶基因在甲氨蝶呤对映体获得性耐药A549细胞株中的表达差异

目的 研究不同甲氨蝶呤(MTX)对映体耐药与叶酰聚谷氨酸合成酶(FPGS)基因水平表达的关系.方法 用大剂量冲击递增结合低剂量持续诱导法诱导获得两组含不同构型15～55μmol/L浓度的MTX对映体[L-(+)-MTX和D-(-)-MTX]耐药的细胞系,细胞为人源非小细胞性肺癌A549细胞,用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测各细胞系的耐药指数;用实时荧光定量聚合酶链反应(RFQ-PCR)方法检测这两组各细胞系中胞质型FPGS(cFPGS)和线粒体型FPGS(mFPGS)基因的相对含量.结果 D-(-)-MTX耐药细胞组耐药指数高于L-(+)-MTX耐药细胞组(32.7±9.3比11.5±2.9,P＜0.05),L-(+)-MTX/A549细胞系耐药指数均在5～15之间,为中度耐药,而D-(-)-MTX/A549细胞系耐药指数均＞15,为高度耐药.在D-(-)-MTX和L-(+)-MTX两组耐药细胞系中,mFPGS表达水平仪在MTX为15 μmol/L时差异无统计学意义,在MTX其他各浓度点两组间差异均有统计学意义(25 μmol/L:2.3±0.9比1.3±0.7,35 μnol/L:2.6±0.3比1.1±0.9,45 μmol/L:1.4±0.8比1.0±1.0,55 μmol/L;1.0±0.2比0.2±0.1均P＜0.05);cFPGS表达水平在MTX为15μmol/L时两组间差异也同样无统计学意义,在25～55 μmol/L浓度区间内D-(-)-MTX/A549细胞系的cFPGS表达与耐药指数呈现高度负相关(r=-0.95,P＜0.05).结论 在A549细胞中MTX对映体初次剂量15 μmol/L冲击法诱导获得的对映体耐药与再次接受更大剂量(≥25 μmol/L)MTX诱导获得耐药的机制不同,D-(-)-MTX/A549耐药细胞系表现为更高的耐药性,提示临床使用MTX时应考虑该药物存在手性对映体问题.

Abstract：

Objective To investigate the relationship between the resistance of methotrexate (MTX) enantiomer and the gene expression levels of folylpolyglutamate synthetase (FPGS).Methods The cell lines of MTX enantiomer resistance from 15 -55 μmol/L were obtained when the A549 cell lines were exposed intermittently and progressively to an incremental dose of each MTX enantiomer.The resistant index of MTX resistance cell lines were detected by MTT.The gene expressions of FPGS in cytoplasm and mitochondria were detected by real-time quantitative polymerase chain reaction (PCR).Results The resistance indice of D-( - )-MTX resistant cell lines were higher than those of L-( + )-MTX resistant cells (32.7±9.3 vs 11.5 ±2.9,P ＜0.05).The resistant indice of L-( + )-MTX /A549 were from 5 to 15,which mean the middle resistance.The resistant indice of D-( - )-MTX/A549 were more than 15,which mean the severe resistance.The expression of mFPGS had difference between resistant cell lines of L-( + )and D-( - )-MTX except at 15 μmol/L MTX (at 25 μmol/L,1.3 ±0.7 vs.2.3 ±0.9;at 35 μmol/L,1.1 ±0.9 vs.2.6±0.3;at 45 μmol/L,1.0±1.0 vs.1.4±0.8;at 55 μmol/L,0.2±0.1 vs.1.0±0.2;all P＜0.05).The expressions of cFPGS had no difference between resistant cell lines of L-( + ) and D-( - )-MTX at 15 μmol/L MTX,while at 25 -55 μmol/L,the cFPGS levels and resistance indice of D-( - )-MTX/A549 resistant cell lines showed a highly negative correlation ( r = - 0.95,P＜0.05 ).Conclusion There may be a different mechanism between the first time treatment with 15 μmol/L dosage and the continual treatment with more than 25 μmol/L dosage in A549 cell lines.There had higher resistant index in D-( - )-MTX/A549 cell line than in L-( + )-MTX/A549 cell line.The results indicated that the difference in chirality should be considered in clinical treatment with MTX.     

XPC和XPD基因遗传多态与晚期非小细胞肺癌对铂类药的敏感性

目的探讨核苷酸切除修复系统基因XPC和XPD遗传多态与晚期非小细胞肺癌对铂类药化疗敏感性的关系。方法对晚期非小细胞肺癌患者151例施行顺铂或卡铂为主的化疗,以影像学方法判定其疗效。在治疗前抽血检测XPC-PAT和XPD Lys751Gln基因多态,比较不同基因型的化疗敏感性。结果本组的化疗后评价完全缓解(CR)1例,部分缓解(PR)52例,稳定(SD)75例,进展(PD)23例,有效率(CR PR)为35．1％。多因素分析表明,携带XPCLL基因型个体的化疗敏感性是携带ss基因型个体的3．19倍(95％CI为1．11—9．17,P=0．031),但未观察到XPD Lys751Gin多态与化疗敏感性相关。XPC-PAT和XPD Lys751Gin基因多态,在影响铂类药敏感性中可能存在联合作用。结论核苷酸切除修复遗传多态与晚期非小细胞肺癌对铂类化疗的敏感性相关。     

术前化疗对小细胞肺癌远期生存的影响

目的 观察术前化疗联合外科手术治疗对小细胞肺癌(SCLC)长期生存的影响.方法 总结北京市结核病胸部肿瘤研究所1994年1月至2005年1月手术切除的263例SCLC的综合治疗效果.比较术前化疗组(A组,n=111例)和术后化疗组(B组,n=96例)的治疗效果.结果 全组5年生存率42.16%.A组5年生存率38.25%,B组5年生存46.57%.A组5年生存率Ⅰ期60.15%、Ⅱ期35.70%、Ⅲ<,a>期40.16%、Ⅲ<,b>期14.29%、Ⅳ期0,A组5年生存率NO-1和N2为40.12%和39.22%.B组5年生存率Ⅰ期61.10%、Ⅱ期50.23%、Ⅲa期42.32%、Ⅲb期26.47%、Ⅳ期0,B组5年生存率NO-1和N2组为51.91%和42.69%.结论 术前化疗病例比术后化疗病例有预后变差倾向;SCLC要取得较好的治疗效果,手术+术后化疗模式不可缺少.     

人肺腺癌耐药细胞模型的建立及生物学特性的初步鉴定

目的建立人肺腺癌耐药细胞模型Anitp973／NVB（去甲长春新碱）并鉴定其生物学特性。方法应用人肺腺癌细胞系Anip973,采用NVB逐步增加剂量法,诱导建立耐药细胞模型Anip973／NVB,观察其生长规律;用MTT法鉴定抗药性;观察细胞形态和超微结构;流式细胞技术检测其细胞周期分布;高效液相色谱法测定细胞内NVB的浓度变化。结果经MTT法鉴定Anip973／NVB细胞较Anip973细胞的NVB半数致死浓度（IC50）增大21．81倍。两细胞系的倍增时间无明显差异。光镜及电镜下观察到,两细胞系结构变化较大。经流式细胞仪测定Anip973／NVB细胞,S期细胞减少（P=0．035）而G0-G1期细胞增多（P=0．014）;高效液相色谱法检测发现Anip973细胞内药物浓度明显高于Anitp973／NVB。结论Anip973／NVB细胞是一个明确的多药耐药细胞模型,具有耐药细胞的基本生物学特性。     

RNA干扰抑制PARP-1基因表达对卵巢癌细胞增殖及耐药性的影响

目的研究PARP-1基因在卵巢癌化疗耐药发生机制中的作用,探讨以该基因为靶向的小干扰RNA(siR-NA)能否有效逆转C13*细胞对顺铂(CDDP)的耐药性。方法采用实时荧光定量PCR(RFQ-PCR)和蛋白印迹法(Western blotting)检测C13*、OV2008细胞中PARP-1 mRNA和蛋白表达差异;转染PARP1-siRNA后,通过RFQ-PCR和Western法验证干扰效果;应用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法观察转染后细胞对CDDP敏感性变化及对细胞增殖活性的影响。结果 C13*细胞中PARP-1 mRNA和蛋白的表达量分别是OV2008细胞表达量的(2.12±0.97)和(1.89±0.23)倍;特异性PARP1-siRNA能有效降低C13*细胞中PARP-1 mRNA、蛋白水平及其对顺铂的半数抑制浓度(IC50),分别下降(71.23±5.41)%、(73.84±3.78)%和(89.77±10.06)%(P<0.05),且C13*细胞的生长活力明显下降(P<0.05)。结论 PARP-1蛋白在卵巢上皮性癌细胞中的表达与顺铂敏感性相关;靶向PARP-1基因的siRNA可在转录和翻译水平抑制PARP-1基因表达,并能有效逆转C13*细胞对CDDP的耐药性。