急性肺损伤大鼠肺部细胞因子水平变化及肺泡上皮细胞的凋亡情况

目的 观察急性肺损伤(ALI)时肺部几个主要凋亡相关细胞因子的水平变化及其与肺泡上皮细胞凋亡的相关性.方法 采用高浓度氧吸入、脂多糖(LPS)及盐酸(HCL)气道注入等方法制作ALI模型,酶联免疫吸附法检测大鼠肺泡灌洗液(BALF)中表面活性物质A(SPA)、血管紧张素Ⅱ(Ang Ⅱ)、凋亡蛋白-1(Fas)、凋亡蛋白-1配体(FasL)、肿瘤坏死因子(TNF)-α等的水平,免疫组织化学法检测肺组织中Fas/FasL的表达,原位缺口末端标记(TUNEL)法检测肺泡上皮细胞的凋亡情况.同时使用FasL干预体外培养的Ⅱ型肺泡上皮细胞,观察其凋亡情况.结果 各组动物模型上表现出的肺组织有不同程度ALI病理表现,其中LPS2组最典型.与对照组相比,LPS1、LPS2、HCl、高浓度氧组的BALF中SPA均显著降低(P值均<0.01),Fas、FasL均显著升高(P值分别<0.05、0.01).LPS2组肺组织标本Fas和FasL的阳性表达率分别为(24.7±4.8)%、(17.9±5.2)%,均显著高于对照组的(2.7±0.7)%,(2.3±0.8)%(P值均<0.05).用FasL处理RLE-6TN细胞24 h后,有(39.2±6.5)%的细胞出现调亡.结论 多种细胞因子在ALI肺部炎症中发挥作用,其中Fas/FasL介导的肺泡上皮细胞凋亡是ALI的重要致伤因素.     

肺泡Ⅱ型上皮细胞凋亡在急性肺损伤中的作用

细胞凋亡 (Ａｐｏｐｔｏｓｉｓ)又称为程序性细胞死亡(Ｐｒｏｇｒａｍｍｅｄｃｅｌｌｄｅａｔｈ ,ＰＣＤ) ,是一种由基因调控的主动而有序的细胞死亡过程 ,参与机体许多重要的生理及病理过程。目前认为许多参与全身炎症反应的细胞和介质均可对细胞凋亡产生影响 ,因此细胞凋亡已开始成为全身炎症性疾病的研究热点。急性肺损伤 (Ａｃｕｔｅｌｕｎｇｉｎｊｕｒｙ ,ＡＬＩ)是指机体遭受严重感染、创伤、辐射、休克等打击后 ,出现的以弥漫性肺泡毛细血管膜损伤导致的肺水肿和微肺不张为病理特征的一种肺部炎症和通透性增加综合征 ,目前认为是机体…     

急性肺损伤新生大鼠肺泡上皮细胞内钙离子变化的研究

目的:探讨钙超载在急性肺损伤/急性呼吸窘迫综合征(ALI/ARDS)发病机制中的作用。方法:采用内毒素(LPS)腹腔注射的方法复制新生大鼠急性肺损伤(ALI)模型,应用荧光测定法检测肺上皮细胞〔Ca2+〕i的水平。结果:ALI组的肺上皮细胞〔Ca2+〕i随着病程的进展呈逐渐升高的趋势,2 h时开始〔Ca2+〕i已显著高于对照组(P<0.05),至8 h时达高峰,之后虽略有下降,但仍明显高于对照组(P<0.05)。结论:肺上皮细胞胞浆内钙超载是导致ALI肺上皮细胞变性坏死的重要机制。     

肺泡Ⅱ型上皮细胞的新功能——防御肺损伤和调节肺泡免疫

肺泡是肺进行气体交换的场所,由Ⅰ型和Ⅱ型上皮细胞覆盖。肺泡Ⅰ型细胞呈扁平状,包绕肺泡内腔,参与气体交换。肺泡Ⅱ型细胞为长方形,位于肺泡拐角处,具有合成、分泌肺表面活性物质的功能。Ⅱ型细胞除与肺表面活性物质代谢有关外,还可调节肺泡水分,并兼有分化成Ⅰ型细胞起干细胞的作用,即在肺损伤失去Ⅰ型细胞时,Ⅱ型细胞替代Ⅰ型细胞,进行分裂、增殖,最终分化成Ⅰ型细胞。由此可以理解Ⅱ型细胞为“多功能细胞”,近     

肺泡上皮细胞与急性肺损伤水肿液清除的研究进展

急性肺损伤（ALI）和急性呼吸窘迫综合征（ARDS）是临床常见的危重病症，是指非心源性的各种肺内外因素导致的急性进行性呼吸衰竭，临床上以呼吸窘迫，顽固性低氧血症和非心源性肺水肿为特征。急性呼吸窘迫综合征是急性肺损伤的严重阶段。肺微血管通透性增高而导致的肺泡渗出液中富含蛋白质的肺水肿及透明膜形成，     

肠缺血再灌注时肺泡Ⅱ型上皮细胞凋亡与肺损伤

目的 观察肠缺血再灌注中肺损伤与肺泡Ⅱ型上皮细胞凋亡的关系及其可能的发生机制。方法 Ｗｉｓｔａｒ大鼠,肠系膜上动脉夹闭后松夹造成肠缺血再灌注,不同时间点活杀动物,测肺通透指数,肺泡灌洗液（ＢＡＬＦ）和血浆中ＮＯ、ＩＬ－２含量,分离肺泡Ⅱ型上皮细胞,观察凋亡率。结果与结论 肠缺血再灌注可能引起肺损伤：肠缺血再灌注后肺泡Ⅱ型上皮细胞凋亡来上升,再灌注３０ｍｉｎ达高峰;缺血再灌注后血,ＢＡＬＦ中ＮＯ、Ｉ     

肠缺血再灌注时肺泡Ⅱ型上皮细胞凋亡与肺损伤

目的 观察肠缺血再灌注中肺损伤与肺泡Ⅱ型上皮细胞凋亡的关系及其可能的发生机制。方法 Wistar大鼠,肠系膜上动脉夹闭后松夹造成肠缺血再灌注。不同时间点活杀动物,测肺通透指数、肺泡灌洗液（BALF）和血浆中NO、IL-2含量,分离肺泡Ⅱ型上皮细胞,观察凋亡率。结果与结论 肠缺血再灌注可能引起肺损伤;肠缺血再灌注后肺泡Ⅱ型上皮细胞凋亡率上升,再灌注30 min 达高峰;缺血再灌注后血、BALF中NO、IL-2增加;肺泡Ⅱ型上皮细胞凋亡率与肺通透指数显著相关,BALF中IL-2水平与肺通透指数、肺泡Ⅱ型上皮细胞凋亡率显著相关。     

外源性硫化氢对急性肺损伤大鼠氧化应激的调节作用

目的观察外源性硫化氢对急性肺损伤大鼠氧化应激的调节作用。方法雄性SD大鼠18只,随机分为对照组（n=6）、油酸组（OA,n=6）、OA＋硫氢化钠（NaHS）组（n=6）。OA组鼠尾静脉注射油酸0.1ml/kg;OA＋NaHS组先腹腔注射NaHS56umol/kg,30min后再尾静脉注射油酸0.1ml/kg。对照组鼠尾静脉注射0.1ml/Kg生理盐水。以上3组观察6h后处死动物。观察指标：支气管肺泡灌洗液（BALF）沉渣行白细胞分类计数;肺损伤的组织学半定量评分;测定肺组织匀浆中H2S含量;超氧化物岐化酶（SOD）和丙二醛（MDA）的含量。结果 OA组与对照组比,光镜下肺组织明显受损,中性粒细胞（PMN）计数和肺损伤评分明显增高（P〈0.05或〈0.01）;肺组织匀浆中H2S明显降低（P〈0.01）;MDA显著增加（P〈0.05）;SOD显著降低（P〈0.05）;OA＋NaHS组肺损伤程度减轻;与OA组比肺组织匀浆中H2S明显升高（P〈0.05）;MDA含量显著降低,SOD含量显著升高（P均〈0.05）。结论补充H2S可减轻氧化应激反应,进而对急性肺损伤大鼠产生保护作用。     

肺泡巨噬细胞与急性肺损伤

急性肺损伤（ALI）是一种常见的影响内外科患者、破坏性极大的急性综合征。随着失控的炎症反应引发MODS理论的出现,人们对急性肺损伤的认识转向对炎症发生调控的认识,参与炎症反应的炎症细胞和细胞因子成为研究的热点。它们通过不同的信号传导途径,调控着机体的炎症反应。肺泡巨噬细胞在肺损伤和修复中发挥着中心性的作用,越来越受到人们的重视。     

脂多糖诱导大鼠肺泡II型上皮细胞凋亡的机制研究

目的研究脂多糖诱导大鼠肺泡II型上皮细胞(AT-II)凋亡的机制。方法体外原代培养的AT-II分为对照组和脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)损伤组(LPS浓度10μg/mL),培养24h后分别进行两组细胞的Fas蛋白免疫组织化学检测和Annexin V/PI双染法流式细胞仪细胞凋亡检测。结果LPS组Fas阳性率(35.16±2.37)%明显高于对照组(9.01±1.62)%(P<0.05);LPS组的细胞凋亡率(24.98±1.41)%明显高于对照组(6.16±1.03)%(P<0.05);坏死率(14.85±0.99)%亦明显高于对照组(4.00±0.72)%(P<0.05)。结论Fas/FasL途径可能是LPS诱导AT-II细胞凋亡的重要途径。     

Hydrogen sulfide donor regulates alveolar epithelial cell apoptosis in rats with acute lung injury

Background Acute lung injury (ALl) is a common syndrome associated with high morbidity and mortality in emergency medicine.Cell apoptosis plays a key role in the pathogenesis of ALl.Hydrogen sulfide (H...     

Effect of endogenous hydrogen sulfide on oxidative stress in oleic acid-induced acute lung injury in rats

Background  Acute lung injury (ALI) is a common critical disease in emergency care. Oxidative stress plays an important role in the pathogenesis of ALI. Endogenous hydrogen sulfide (H₂S) can inhibit oxidative stress in rat gastric mucosal epithelium. In this study, we examined the possible role of H₂S in regulation of the oxidative stress in oleic acid-induced acute lung injury in rats.

Methods  The rat model of ALI was induced by intra-tail vein injection of oleic acid (OA). NaHS solution was injected intraperitoneally before OA injection as an OA+NaHS group. A semi-quantitative histological index of quantitative assessment of lung injury was calculated. The levels of superoxide dismutase (SOD), glutathione (GSH) and malondialdehyde (MDA) in plasma and lung tissue were detected with ELISA. The levels of H₂S content in lung tissue were detected with an ion meter.

Results  Compared with the control group, the level of H₂S in lung tissue was significantly decreased, and the level of SOD and GSH were decreased but the level of MDA was increased in plasma and lung tissue in rats with ALI. NaHS lessened the ALI in association with an increase in the level of H₂S in lung tissue, a decrease in the level of MDA but an increase in SOD and GSH levels in plasma and lung tissues.

Conclusion  Endogenous H₂S could inhibit the oxidative stress in lung tissue in oleic acid-induced acute lung injury in rats.

     

氢氧气体共同吸入对百草枯中毒大鼠早期肺损伤的影响

目的探讨氢氧气体共同吸入对百草枯中毒早期肺损伤的影响。方法通过观察百草枯中毒大鼠共同吸入不同浓度的氢氧气体,监测肺损伤指标的变化。结果氢氧气体共同吸入组肺湿/干比、PaCO2较对照组减低,P<0.05;pH值、PaO2较对照组升高,P<0.05。结论氢氧气体共同吸入可有利于重建早期肺损伤的氧化和还原系统的平衡,显著改善、延缓肺组织的氧化损伤进程。     

氢气对急性肺损伤大鼠肺组织p38 MAPK活化的影响

目的探讨氢气对脂多糖（LPS）诱导急性肺损伤大鼠的肺保护作用及其可能的分子生物学机制。方法采用腹腔注射LPS
法建立大鼠急性肺损伤模型。32只雄性SD大鼠（体质量200~250 g）随机分为4组（n=8）：生理盐水组（SA组）、氢气吸入组（SH
组）、急性肺损伤组（LA组）和急性肺损伤+氢气吸入组（LH组）,氢气治疗为腹腔注射生理盐水或LPS后持续吸入混有低浓度
氢气（2%）的空气6 h,用Western blot 技术检测肺组织中p38 MAPK 的表达,用ELISA法检测肺组织及血清中TNF-α的浓度。
结果氢气吸入可以使肺组织中的活化的p38 MAPK明显降低,同时降低其下游因子TNF-α在肺组织及血清中的浓度。结论
氢气吸入可下调肺组织及血清中TNF-α的表达,此作用可能与抑制肺组织中p38 MAPK活化有关。
     

硫化氢对顺铂诱导近端肾小管上皮细胞凋亡的干预研究

目的 探讨硫化氢H2S 对顺铂（DDP）诱导近端肾小管上皮细胞凋亡的干预作用。方法 研究分为阴性对照组、DDP 组、DDP+ 硫氢化钠NaHS 组。DDP 组：DDP 浓度为0、1、2、5、10、20 和40 mg/L ;DDP+NaHS 组：NaHS 浓度分别为0、0.2、0.4、0.5、0.8、1.0 和2.0 mmol/L,加DDP（20 mg/L）共同作用。噻唑蓝（MTT）实验：DDP 组、DDP+NaHS 组与人近端肾小管上皮细胞株（HK-2 细胞）共同培养,24 h 后测光密度（OD）值。NaHS（0.5 和1.0 mmol/L）加DDP（20 mg/L）与HK-2 细胞共同培养24 h。4,6- 联脒-2- 苯基吲哚（DAPI）,Annexin V-FITC/PI 染色通过显微镜观察各组细胞的形态学改变。Annexin V-FITC/PI 流式细胞术检测各组细胞凋亡率。结果 MTT 实验：0、1、2、5、10 和20 mg/L DDP 浓度的OD 值分别为（0.270±0.064）、（0.229±0.022）、（0.198±0.024）、（0.189±0.069）、（0.188±0.030） 和（0.165±0.012）,OD 值随DDP 浓度上升逐渐下降, 在20 mg/L 低于阴性对照组（P <0.05）。20 mg/L DDP 加浓度分别为0.2、0.4、0.5、0.8 和1.0 mmol/L NaHS的OD 值分别为（0.173±0.051）、（0.186±0.023）、（0.259±0.050）、（0.263±0.033） 和（0.268±0.098）, 以上与浓度为20 mg/L DDP 的OD 值（0.153±0.017）比较,差异有统计学意义（P <0.05）。DAPI、Annexin VFITC/PI 染色荧光显微镜显示,对照组HK-2 细胞平均凋亡细胞数为（4.230±1.015）,20 mg/L DDP 影响下为（35.020±6.079）,两者差异有统计学意义（P <0.05）,DDP 组高于阴性对照组。DDP+NaHS 组在0.5 和1.0 mmol/L 的平均凋亡细胞分别为（22.550±2.912） 和（9.780±2.063）,差异有统计学意义（P <0.05）,DDP+NaHS 组低于DDP 组。Annexin V-FITC/PI 流式细胞术检测,阴性对照组HK-2 细胞凋亡率（5.167±0.612）%,在20 mg/L DDP 影响下,为（31.598±1.014）%,细胞凋亡率增加（P <0.05）。合用NaHS 凋亡减少,在0.5 和1.0 mmol/L 的凋亡率为（18.375±2.239）% 和（11.636±1.233）%,差异有统计学意义（P <0.05）,DDP+NaHS 组低于DDP 组。结论 NaHS 对DDP 导致的近端肾小管上皮细胞的凋亡有保护作用。     

丙氨酰谷氨酰胺对脓毒症大鼠肺损伤的保护作用

目的：探讨丙氨酰谷氨酰胺对脓毒症大鼠急性肺损伤的保护作用及其机制。方法：静脉注射内毒素（LPS）3mL（6mg／kg）复制大鼠脓毒症急性肺损伤模型,40只健康Wistar大鼠,分为4组,即对照组（静脉注射等量生理盐水28mL／kg）、内毒素组[先后静脉注射生理盐水25mL／kg和内毒素3mL／kg（6mg／kg）]、丙氨酰谷氨酰胺治疗组[先后静脉注射4．5％力太（丙氨酰谷氨酰胺注射液）25mL/kg和内毒素3mL／kg（6mg／kg）]、谷氨酰胺治疗组[先后静脉注射3％谷氨酰胺25mL／kg和内毒素3mL／kg（6mg／kg）]。在静脉注射前（T0）,注射后6h（T1）,各抽血1mL。注射6h后,处死大鼠,用EusA法测定各时点血清TNF-α,IL-1β,IL-8的浓度,测定肺组织湿／干重比、支气管肺泡灌洗液的总蛋白浓度,光学显微镜下观察肺组织病理改变,原位TUNEL技术进行肺组织细胞凋亡检测分析。结果：与LPs组比较,丙氨酰谷氨酰胺治疗组、谷氨酰胺治疗组的肺组织湿／干重比、支气管肺泡灌洗液的总蛋白浓度,血清TNF-α,IL-1β,IL-8浓度明显降低（P＜0．05）;丙氨酰谷氨酰胺治疗组、谷氨酰胺治疗组的肺组织损伤程度明显减轻而且凋亡指数也较LPS组显著降低（P＜0．05）。结论：静脉给予丙氨酰谷氨酰胺对脓毒症大鼠急性肺损伤有保护作用。     

细胞凋亡在呼吸机相关性肺损伤中的作用

目的:观察细胞凋亡在呼吸机相关性肺损伤(ventilator-induced lung injury,VILI)中的作用,探讨呼吸机相关性肺损伤的发生机制。方法:将50只健康雄性Wistar大鼠随机分为对照组和肺损伤组。对照组插管后不进行机械通气;肺损伤组插管后机械通气,潮气量为20 ml.kg-1,频率为50次.min-1,吸呼比为1∶3,FiO2为21%,通气时间为5 h。观察实验前后动脉氧分压变化,采用Annexin-V/PI双染方法检测肺组织及肺泡灌洗液细胞凋亡率。取各组大鼠左全肺称湿重,置于烘箱内80℃干烤24 h后称干重,并计算肺组织湿/干重(W/D)值;制备肺组织切片进行病理学观察。结果:两组大鼠动脉氧分压差异无统计学意义(P>0.05);肺损伤组肺组织及肺泡灌洗液细胞凋亡明显增加(P<0.01),肺组织W/D值显著高于对照组(P<0.01);肺损伤组肺组织病理切片可见肺组织水肿。结论:机械通气可导致肺损伤,细胞凋亡可能在VILI发生、发展过程中起重要作用。     

爆炸致兔急性肺损伤时细胞凋亡作用机制的研究

目的:探讨细胞凋亡在爆炸致兔急性肺损伤(ALI)中的作用机制。方法:选取兔40只,随机分为空白对照组10只;实验组30只,空气爆炸损伤胸部,制作ALI模型,分别于爆炸损伤4、12、24 h后采样(每时间点各10只),测定肺干/湿重比、动脉血氧分压,原位末端标记检测肺组织细胞凋亡情况,免疫组织化学法检测Caspase-3、Bax、Bcl-2含量。选取肺组织,显微镜观察光镜下肺组织病理形态。结果:光镜下,实验组4 h起可见肺间质、肺泡明显水肿,肺泡腔大量红细胞、炎性细胞及浆液性渗出,肺间质增厚。与对照组比较,各实验组肺干/湿重比均明显升高(P<0.01),动脉血氧分压均明显降低(P<0.01)。凋亡指数均明显升高(P<0.01),Caspase-3与Bax/Bcl-2比值均较对照组升高(P<0.05~P<0.01)。结论:细胞凋亡在兔ALI的发生、发展过程中起重要作用,参与了肺组织损伤,促进ALI病情进展。     

汽化吸入全氟化碳对急性肺损伤小猪小肠黏膜上皮细胞凋亡的影响

目的通过对肺灌洗造成小猪肺损伤模型行全氟化碳（PFC）汽化吸入,了解其对肺损伤小猪小肠黏膜上皮细胞凋亡的影响。方法将健康小猪18只随机分为3组,VMV组（PFC汽化吸入）,CMV组（常规机械通气）和假手术组。取各组小肠,TUNEL法检测细胞凋亡指数,免疫组织化学法及半定量RT-PCR法测定凋亡基因BAX,bcl-2。结果小肠的阳性细胞主要分布在小肠绒毛,CMV组细胞凋亡率为70．6％±3．4％,VMV组为22．9％±2．3％,两组间差异有统计学意义（P〈0．05）。VMV组小肠BAX蛋白表达低于CMV组（P〈0．05）,VMV组小肠bcl-2蛋白表达高于CMV组（P〈0．05）。BAX mRNA、bcl-2 mRNA结果与其蛋白表达结果一致（P〈0．05）。假手术组细胞凋亡数极少,BAX、bcl-2表达均很低。结论汽化吸入PFC可减少急性肺损伤小猪小肠黏膜上皮细胞凋亡,其作用机制可能与抑制BAX基因的蛋白表达及升高bcl-2基因表达有关。     

不同潮气量机械通气对大鼠支气管和肺组织细胞凋亡的影响

目的 研究不同潮气量机械通气对大鼠支气管和肺组织细胞凋亡的影响,初步探讨细胞凋亡在机械通气所致肺损伤中的作用机制及其意义.方法 将30只健康雄性SD大鼠随机分成A、B、C 3组,气管切开、插管后,分别给予不同潮气量(VT)机械通气4h(A组:VT=10 ml/kg;B组:VT=20 ml/kg;C组:VT=40 ml/kg),采用光镜和电镜观察3组大鼠肺组织的病理和超微结构改变,用湿干重比值来比较肺水肿的程度,用脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的末端标记法检测损伤的肺组织中细胞凋亡的发生程度,用免疫组织化学技术检测肺组织caspase-3酶的表达及组织分布.结果 依次给予A、B、C 3组以小、中、大3种不同的潮气量机械通气后,3组动物大体和病理改变依次加重,肺湿干重比值依次增高,支气管和肺组织细胞凋亡明显增加(P<0.01);在细胞凋亡执行阶段起中心作用的caspase-3酶在肺泡上皮细胞、血管内皮细胞的胞浆和核中的表达也明显增强,尤其以在支气管上皮caspase-3酶的表达增强更为显著.结论 给予3组动物3种不同潮气量机械通气后,动物病理改变和细胞凋亡数量及凋亡效应酶caspase-3的变化趋势基本一致,推测细胞凋亡在大潮气量机械通气引起的肺损伤中起重要作用.