OX40/OX40L mRNA在实验性变态反应性 神经炎中的动态变化

目的：研究Oxford 40(OX40)和Oxford 40 ligand(OX40L)mRNA在实验性变态反应性神经炎(experimental allegic neuritis, EAN)大鼠坐骨神经、脾脏、外周血和淋巴结中的动态变化。 方法：36只Lewis大鼠随机分为EAN模型组和完全弗氏佐剂对照组（CFA组）。分别在第9天、第17天、第26天处死动物,采用反转录聚合酶链反应技术检测坐骨神经根、脾脏、外周血单个核细胞和淋巴结中OX40和OX40L mRNA的表达水平。结果：EAN组大鼠在抗原免疫后第17天达到发病高峰,OX40和OX40L mRNA在第9天（发病早期）和第17天时表达均较高,与第26天（恢复期）相比,差异有统计学意义（P＜0.05）,各时间点与对照组相比差异有统计学意义（P＜0.05）;CFA组大鼠无症状;EAN组中OX40和OX40L mRNA在坐骨神经和淋巴结中各时间点表达均升高,在外周血单个核细胞中微量表达。结论：OX40/OX40L可能与EAN发病有关。     

协同刺激分子OX40/OX40L在强直性脊柱炎患者外周血中的表达

目的 探讨协同刺激分子OX40及其配体OX40L在强直性脊柱炎（AS）患者外周血单个核细胞（PBMC）中的表达及其临床意义。方法 收集2017年10月～2019年10月我院收治的AS患者血液标本94例（AS组）,其中稳定期患者52例,活动期患者42例,另取门诊同期健康体检者血液标本60例为对照组。分离PBMC,采用流式细胞仪检测OX40和OX40L在CD+4T细胞和CD+19B细胞表面的表达变化,收集受试者所有临床检查资料,采用Spearman法分析PBMC中OX40和OX40L表达与AS患者Bath强直性脊柱炎指数评分（BASDAI）、Bath强直性脊柱功能指数（BASFI）、高敏C反应蛋白（hs CRP）、血细胞沉降率（ESR）及球蛋白（GLB）水平的相关性。结果 稳定期、活动期AS患者与对照组年龄、性别、BMI、吸烟史比例比较,差异无统计学意义（P＞0.05）。与对照组比较,稳定期、活动期AS患者血清hs CRP水平、外周血WBC、N、ESR、GLB水平、CD+4T细胞表面OX40、CD+19B细胞表面OX40L表达率依次增加（均P＜0.05）。 外周血中CD+4T/ OX40表达率、CD+19B/OX40L表达与AS患者BASDAI、BASFI、血清hs CRP、外周血N、ESR呈正相关（均P＜0.05）;外周血中CD+4t/OX40、CD+ 19B/OX 40L表达与GLB无明显相关性（均P＞0.05）。结论 协同刺激分子OX40/OX40L在AS患者外周血中表达增加,可能与临床分期及疾病活动度有关。     

外周血CTL活化基因在大鼠肾移植急性排斥的表达及意义

目的：探讨大鼠同种异体肾移植外周血淋巴细胞（peripheral blood lymphocyte，PBL）穿孔素、颗粒酶B和FasL mRNA表达与急性排斥反应（acute reiection，AR）的关系。方法：采用TdT介导的脱氧核苷酸原位末端标记法（TUNEL）检测移植肾脏中的凋亡细胞。另外同时检测血清肌酐水平。采用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）检测移植肾和PBL中穿孔素、颗粒酶B和FasLmRNA表达。并以同基因肾移植为对照。结果：病理学检查结果显示实验组大鼠在术后第5、7、9～11天分别发生轻、中、重度排斥。对照组无明显排斥现象。实验组于手术后第5、7、9～11天细胞凋亡数明显高于对照组（P〈0．01）：肾小管上皮细胞凋亡程度与血清肌酐水平、病理学检查结果一致。RT-PCR结果显示实验组于术后3～5天起，肾组织和PBL中穿孔素、颗粒酶B和FasLmRNA表达水平即显著升高，于术后7-9天达到高峰。与对照组相比差异有显著性（P〈0．01）。外周血和肾组织中FasL、穿孔素和颗粒酶BmRNA的表达水平平均在急性排斥反应发生前3～5天开始明显上升，其变化趋势早于血清肌酐。结论：定量RT-PCR测定外周血淋巴细胞中穿孔素、颗粒酶B和FasLmRNA表达可以较敏感预测肾移植急性排斥反应的发生，具有临床诊断参考价值。     

外周血淋巴细胞穿孔素、颗粒酶B在大鼠肾移植急性排斥的表达及意义

目的:探讨大鼠同种异体肾移植外周血淋巴细胞(peripheralbloodlymphocyte,PBL)穿孔素、颗粒酶B的表达与急性排斥反应(acuterejection,AR)的关系。方法:实验组:异基因移植组(SD→Wister),对照组:同基因移植组(Wister→Wister)。采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测移植肾和PBL穿孔素、颗粒酶B的表达,并以同基因肾移植为对照。结果:病理学检查结果显示实验组大鼠在术后第5、7、9、11天分别发生轻、中、重度排斥,对照组无明显排斥现象。RT-PCR结果显示急性排斥反应发生在肾移植术后3天,即急性排斥早期均表达穿孔素、颗粒酶B基因mRNA,4天后表达明显增强,并贯穿整个排斥反应全过程,而同基因对照组术后11天内均不表达两基因。外周血和肾组织中穿孔素、颗粒酶BmRNA的表达水平平均在急性排斥反应发生前3￣5天开始明显上升,其变化趋势早于血清肌酐。结论:穿孔素、颗粒酶B是一种有价值的AR标志物。定量RT-PCR测定外周血淋巴细胞中穿孔素、颗粒酶BmRNA表达可以较敏感预测肾移植急性排斥反应的发生,这一非侵入性检查方法可以为急性排斥反应的监测和诊断提供客观依据。     

急性移植肾排斥反应类固醇冲击治疗后淋巴细胞凋亡的作用

目的: 探讨在初始类固醇冲击治疗后急性肾移植排斥反应中浸润淋巴细胞的凋亡情况. 方法: 64例发生急性细胞性排斥反应的患者的肾活检标本,活检均于类固醇冲击治疗后3 d进行. 检测活检标本的细胞凋亡并与40例有淋巴细胞浸润的非特异肾损伤标本进行比较. 采用原位末端标记法(TUNEL)检测细胞凋亡. 结果: 在急性排斥组(n=64)中有44例患者标本中观察到淋巴细胞凋亡,34例中观察到肾小管上皮细胞凋亡,20例中未检测到细胞凋亡. 对照组(n=40)中有24例检测到肾小管上皮细胞凋亡(P＝0.2351),淋巴细胞凋亡在4例患者中发现(P＝0.000). 根据Banff分类Ⅰ级排斥反应为16例,Ⅱ级为34例,Ⅲ级为14例,检测到淋巴细胞凋亡分别为:14例,22例和8例(P=0.1530). 结论: 在初始类固醇冲击治疗后急性肾移植排斥反应中浸润淋巴细胞凋亡是重要的,可能与排斥反应的转归有关.     

Impact of acute rejection episodes on long-term renal allograft survival

Objective To assess the impact of the number, and time of acute rejection (AR) and outcome of anti-rejection therapy on the long-term survival of renal allografts and the relative risk factors. Methods The Kaplan-Meier analysis and log-rank test were used to calculate the survival rates of patients and grafts in no acute rejection group (NAR, 895 patients), 1 rejection episode group (1AR, 183), 2 and more than 2 rejection episodes group (2AR, 17), acute rejection group ［AR (1AR+2AR), 200］, early acute rejection group (within 90 days after transplantation, EAR, 125), late acute rejection group (91 days later, LAR, 58), completely AR reversed group (CAR, 105), and incompletely AR reversed group (IAR, 68). The relative risk factors were analyzed by the Cox proportional hazards regression. Results The 5- and 10-year survival rates of renal allografts were 75.4% and 17.1% in AR and 93.2% and 86.5% in the NAR group (P<0.0001). The long-term graft survival was much lower in the 2AR group than in the NAR or 1AR groups (P<0.0001 and P=0.002, respectively). It was similar in either the NAR or CAR groups (P=0.31), but it was significantly lower (P<0.0001) in the IAR group. Multivariate Cox regression analysis revealed that the outcome of anti-rejection therapy is an important risk factor affecting the long-term survival of allografts. Conclusions AR is significantly associated with poor long-term survival of renal allografts. But the long-term graft survival of patients with one acute rejection but completely reversed is not significantly different from that of patients without acute rejection.     

Blockade of the OX40/OX40L pathway and induction of PD-L1 synergistically protects mouse islet allografts from rejection

Background OX40/OX40 ligand （OX40/OX40L） and programmed death-1/programmed death ligand-1 （PD-1/PD-L1） co- stimulator/signals play important roles in T cell-induced immune responses. The aim of this study was to investigate the roles of OX40/OX40L and PD-1/PD-L1 costimulatory pathways in mouse islet allograft rejection. Methods Lentiviral vectors containing OX40L siRNA sequences and an adenovirus vector containing the PD-L1 gene were constructed. The streptozotocin-induced model of diabetes was established in C57BL/6 （H-2b） mice. Diabetic C57BL/6 mice were randomly allocated into five groups： group 1, untreated control; group 2, Ad-EGFP treatment; group 3, Ad-PD-L1 treatment; group 4, OX40L-RNAi-LV treatment; group 5, OX40L-RNAi-LV combined with Ad-PD-L1 treatment. Lentiviral vector and the adenovirus vector were injected, singly or combined, into the caudal vein one day before islet transplantation. The islets of DBA/2 （H-2d） mice were transplanted into the renal subcapsular space of the diabetic recipients. Recipient blood glucose and the survival time of the allografts were monitored. Antigen-specific mixed lymphocyte reaction was also evaluated.     

OX40／OX40L在动脉粥样硬化不稳定斑块中的作用

动脉粥样硬化（As）是一种慢性炎症疾病^[1]，炎症反应参与了在As的发生发展、斑块破裂及血栓形成的所有阶段。T细胞的激活是AS发生、发展中重要的炎性致病因素^[2]。体内存在多种激活T细胞的受体一配体信号通路，近年来OX40／OX40L受体一配体途径与AS的发生、发展逐渐受到关注。     

单剂半量赛尼哌预防移植肾急性排斥的临床观察

目的观察单剂半量赛尼哌对肾移植急性排斥(AR)的预防作用及安全性评估。方法选择同期肾移植病人187例,根据术后肾功能恢复情况及术前是否使用赛尼哌分为A/90例、B/73例、C/11例、D/13例4组,其中A、B组移植后肾功能恢复良好,即术后1周血肌酐<176.6μmol/L,C、D组术后出现移植肾功能延迟恢复,术后1周血血肌酐>353μmol/L。A、C两组术前2h静滴赛尼哌25mg(0.5mg/kg)和口服霉酚酸酯0.75g,B、D组仅口服霉酚酸酯0.75g;术后四组病人均予甲基强的松龙500mg×3d冲击,常规强的松、环孢霉素A和霉酚酸酯三联抗排斥治疗。观察术后6个月内AR发生率、发生时间、强度及排斥逆转率,同时观察胃肠道反应、感染及血液系统损害等副作用。结果A组13例(14.4%)发生AR,B组18例(24.6%),C组6例(54.5%),D组7例(53.8%),A组AR发生率明显低于B、C、D三组(P均<0.01);B组AR发生率显著低于C、D组(P<0.01),C、D组差异不显著(P>0.05),A组排斥开始时间3-9d(6.2±3.2d)较B组2-8d(4.5±3.1d)、C组2-7d(4.3±4.2d)、D组2-9d(3.9±3.5d)明显延迟(P均<0.05)。但B、C、D三组排斥开始时间无明显差异(P>0.05)。A组AR经强化治疗均逆转,B组16例逆转,另2例失败,C组5例逆转,1例因移植肾排斥破裂出血切除,D组5例逆转,2例失败;C、D组各2例于术后13-32d再次排斥,经甲基强的松龙强化治疗逆转。感染、胃肠道反应及血液系统损害四组差异不显著(P均>0.05)。结论移植后肾功能恢复良好病人,术前25mg赛尼哌可显著降低AR发生率,且安全性好。但对于移植肾功能延迟恢复病人,术前25mg赛尼哌并不能有效预防排斥发生。     

排斥反应时肾移植受者移植肾组织及外周血中CD40的表达

【目的】检测排斥反应时移植肾组织内和外周血中CD40的表达情况。【方法】采取同种异体移植肾患者不同阶段的植肾活检组织和外周血，用免疫组化和流式细胞学方法检测活检组织中和外周血中CD40的表达情况。【结果】53例肾移植受体共行肾活检198次；CD40移植前表达阴性；移植后肾功能稳定期的穿刺标本中偶见弱阳性表达；急性排斥反应（AR）时CD40表达增加，内皮细胞、上皮细胞和炎性浸润细胞的阳性率分别为21％、39％和60％，抗排斥治疗后CD40表达转阴性；非急性排斥反应（N-AR）组中CD40阳性表达率显著低于急性排斥反应组。AR时外周血中CD40^＋和CD154^＋细胞比率显著高于术前水平，抗排斥治疗后恢复至术前水平。【结论】移植肾组织和外周血中CD40分子表达与排斥反应的发生密切相关。     

外周血CXCL9和CXCR3在大鼠肾移植急性排斥反应的表达及意义

目的 探讨大鼠肾移植手术前后趋化因子CXCL9及其受体CXCR3 mRNA的动态变化在术后急性排斥早期诊断的作用.方法 以BN和LEW大鼠作为供体,LEW大鼠作为受体,建立大鼠同种异体肾移植模型.采用ELISA法和逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)分别动态检测大鼠术前后血清CXCL9和外周血淋巴细胞CXCR3 mRNA的变化.同时检测血清肌酐水平.结果 实验组大鼠血清CXCL9、外周血淋巴细胞CXCR3 mRNA及血清肌酐表达均明显升高,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.01).术前实验组与对照组血清CXCL9和外周血淋巴细胞CXCR3 mRNA表达比较无统计学差异(P>0.05),术后第1、3、5、7天实验组均高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05).术前及术后第1天实验组和对照组血清肌酐表达比较无统计学差异,术后第3、5、7天实验组均高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05).结论 血清趋化冈子CXCL9和外周血淋巴细胞CXCR3 mRNA的表达与排斥反应密切相关,可以作为早期诊断急性排斥反应的辅助敏感指标.     

肾移植患者外周血淋巴细胞穿孔素的表达

目的：探讨外周血淋巴细胞(PBL)免疫标记物穿孔素在移植肾急性排斥反应(AR)诊断方面的价值。方法：选肾移植手术后近期稳定患者30例,AR18例,肾移植手术后长期稳定患者10例和健康对照组20例,应用聚蔗糖-泛影葡胺密度梯度离心法分离PBL,免疫细胞化学ABC法检测PBL中穿孔素表达。结果：AR患者PBL穿孔素表达阳性率明显高于肾功能近期与长期稳定组(60．95％ vs 16．66％)．并且穿孔素表达出现的时间可比AR的临床表现出现早2—3d,AR时应用甲基强的松龙冲击治疗可显著降低PBL穿孔素阳性细胞数。结论：穿孔素是一种有价值的AR标志物,对PBL中穿孔素表达的动态检查有助于早期诊断肾移植术后可能发生的AR。     

miR-663在肾移植急性排斥反应中的调控作用

目的比较肾移植急性排斥（acute rejection, AR）病人及非AR病人血清miR-663表达水平,在细胞水平上探讨miR-663参与肾移植AR的调控作用,为临床早期诊治AR提供新思路。方法Real time PCR 检测肾移植AR病人及非AR病人血清miR-663表达水平。设置miR-663 mimic组、miR-663 inhibitor组、阴性对照组及空白对照组;MTT及Annexin V-FITC分别检测过表达miR-663和抑制miR-663表达对人肾小球内皮细胞（HRGEC）生存率和凋亡率的影响;ELISA检测过表达miR-663和抑制miR-663表达对IL-6、IFN-γ、CCL-2及TNF-α表达水平的影响;Transwell 实验检测过表达miR-663和抑制miR-663表达对巨噬细胞趋化性的影响。结果AR组患者血清miR-663表达水平明显较非AR组的肾移植患者升高（4.73±0.28 vs 1.06±0.04;P<0.01）。MTT显示过表达miR-663可以降低HRGEC的生存率并且明显增加其凋亡率,而抑制miR-663则可以降低HRGEC凋亡。过表达miR-663可以明显提高相关炎症因子的表达,同时明显增加巨噬细胞的趋化性。结论miR-663在肾移植AR过程中发挥着重要作用,可做为早期诊断AR的外周血标志物,并有望成为治疗肾移植AR的一个潜在分子靶点。     

系统性红斑狼疮患者外周血OX40和OX40L分子的表达

目的探讨OX40和OX40L分子在系统性红斑狼疮（SLE）患者外周血T淋巴细胞和单核细胞上的表达及其在SLE发病机制中的可能作用。方法采用流式细胞术检测26例SLE患者和15例健康志愿者外周血T细胞上OX40和单核细胞上OX40L的表达水平。结果 SLE患者外周血CD4＋T细胞OX40表达水平为8.91±5.07,显著高于正常对照组（3.46±1.72）（P〈0.05）,而CD8＋T细胞OX40表达水平为3.89±1.94,与对照组（3.34±1.44）的差异无统计学意义（P〉0.05）;外周血单核细胞上OX40L表达水平（31.23±10.05）显著高于正常对照组（21.01±6.92）（P〈0.05）。结论 SLE患者外周血T细胞和单核细胞上存在OX40和OX40L的异常表达,提示OX40/OX40L信号在T细胞与单核细胞相互作用过程中可能有助于T细胞的持续活化,从而参与SLE的发生发展。     

外周血单个核细胞CXCR3 mRNA表达与大鼠心移植急性排斥的关系

目的探讨外周血单个核细胞(PBMC)趋化因子受体CXCR3mRNA动态变化与大鼠心移植急性排斥的关系及其在早期诊断中的价值。方法以Wistar和SD大鼠作为供体,SD大鼠作为受体,建立腹部异位心脏移植模型,按移植前后处理方法不同随机分3组:A组为SD大鼠同基因移植对照组,移植前后未作处理;B组为Wistar-SD急性排斥组,移植前后未作处理;C组为Wistar-SD异基因移植治疗组,移植日开始给予环胞素A(CsA)5mg/kg/d腹腔注射×14d。术后第1、3、5、7d分批处死,采用实时定量PCR检测PBMC的CXCR3mR-NA表达,并对心肌进行病理组织学检查,每组留5只用于观察生存期。结果A组大鼠移植心存活时间均大于100d,B、C组分别为(7.40±1.14)d、(24.00±2.35)d,C组较B组存活时间明显延长(P<0.01),A组较B、C组存活时间更长(P<0.01)。A组各时间点均未发生排斥反应,PBMC的CXCR3mRNA呈低水平表达;B组术后PBMC的CXCR3mRNA动态变化与急性排斥反应的进程呈正相关,术后5d PBMC的CXCR3mRNA表达上调至峰值4.30±0.82;C组经环胞素A治疗后排斥反应发生率明显下降,各时间点PBMC的CXCR3mRNA表达明显低于B组,术后7d达到峰值1.50±0.76,与B组相比差异具有显著性(t=7.08,P<0.01)。结论PBMC的CXCR3mRNA表达与排斥反应密切相关,提示可作为诊断急性排斥反应或者观察抗排斥反应疗效的指标。     

IA在预防肾移植后超急性排斥反应中的应用观察

目的观察葡萄球菌蛋白A免疫吸附(IA)治疗在预防肾移植术后超急性排斥反应(HAR)的疗效,探讨IA治疗方案。方法16例群体反应性抗体(PRA)50%~98%的肾移植患者在术前行IA治疗151人次,每次再生血浆3000~4500mL,强化IA时,每次再生血浆7500mL,检测每次IA治疗前后血清免疫球蛋白(Ig)、补体(C3、C4)及PRA,追踪患者肾移植术的转归。结果16例患者经IA治疗5~12次后,PRA均降至10%以下(其中3例阴性),Ig、C3、C4均明显下降(P<0.05),肾移植术后均未发生HAR,观察6~12个月经过良好。结论IA能迅速清除患者体内的抗体,降低PRA水平,预防HAR的发生。     

移植肾急性排斥反应中外周血CD40、CD40L分子的表达及临床意义

目的 研究移植肾出现急性排斥反应时,受者外周血中白细胞CD40、CD40L分子的表达及临床意义.方法 将患者分成2组,急性排斥反应组15例,未出现排斥反应组(对照组)41例,采用流式细胞仪检测56例肾移植受者外周血CD40、CD40L在CD4 、CD8 T细胞表面的表达.结果 当发生急性排斥反应时,受者的外周血CD40、 L分子的表达均增强,排斥组与未排斥组间差异有显著性.结论 肾移植急性排斥反应的发生与CD40、CD40L共刺激通路的活化有十分密切关系,CD40、CD40L分子的表达随急性排斥反应的增加而显著上升.可作为临床上对急性排斥反应的无创性诊断方法之一.     

肾移植急性排斥反应早期诊断尿液蛋白质组学研究

目的 利用二维凝胶电泳和生物信息学技术,从严格筛选的2例肾移植术后发生急性排斥反应患者尿液标本中,寻找急性排斥反应早期标志物.方法 在pH值为4～7范围,采用Sypro-Ruby染色,对发生急性排斥反应过程的不同时间点(-3,-2,-1,7,14,21 d)的患者尿液二维凝胶电泳(Two-dimensional Gel Electrophoresis,2-DE)图谱进行比较,挑选了30个有上调或者下调趋势的蛋白点.将这些蛋白点进行切胶、胰酶消化后用MALDI-TOF-MS/MS分析.结果 得到了重复性好、分辨率高的肾移植术后尿蛋白2-DE图谱.30个差异蛋白点经质谱分析和数据库检索,鉴定了16个蛋白点,对应13种蛋白质.根据蛋白功能查询结果,发现了3个蛋白含量变化趋势与排斥反应密切相关的蛋白,分别是α-1抗胰凝乳蛋白酶(alpha-1-antichymotrypsin,AACT)、肿瘤排斥抗原gp96(tumor rejection antigen gp96)和锌-α2糖蛋白(Zn-Alpha-2-Glycoprotein).结论 肾移植术后发生急性排斥反应患者的不同时间点尿液2-DE图谱存在明显差异.AACT、肿瘤排斥抗原gp96和锌-α2糖蛋白可能作为临床诊断肾移植术后急性排斥反应的标志物候选蛋白.     

OX40对CD4记忆T细胞的调节

CD4记忆T细胞在保护机体免受病毒、细菌、寄生虫等物质感染中起十分重要的作用,并与自身免疫反应、变态反应等有关异常的免疫反应相关理解免疫记忆反应有效的控制机制对于疫苗的设计以及调控异常免疫反应有着重要的意义.近年来,肿瘤坏死因子受体超家族成员-OX40(CD134),作为一共刺激分子对于维持CD4+T细胞的活化、增值、...