黄芪甲苷基于PI3K/Akt/Bcl-2 信号通路对PC12 细胞OGD/R 损伤的保护机制研究

目的：探究黄芪甲苷（astragaloside IV,AS-IV）对大鼠嗜铬细胞瘤（pheochromocytoma 12,PC12）细胞缺氧缺糖复供（oxygen deprivation reoxygenation,OGD/R）损伤的保护作用及基于磷脂酰肌醇3 激酶（phosphatidylinositol 3 kinase,PI3K）/ 蛋白激酶B（protein kinase B,PKB,又称Akt）及B 细胞淋巴瘤-2 蛋白（B-cell lymphoma-2,Bcl-2） PI3K/Akt/Bcl-2 信号通路的机制研究。方法：体外培养 PC12 细胞,细胞随机分为空白对照组、模型组（OGD/R）,尼莫地平阳性对照组（5 μmol·L-1）和黄芪甲苷组（1.00、0.10、0.01 μmol·L-1）,除空白组外其余各组均建立体外PC12 细胞OGD/R 模型。CCK-8 试剂盒法检测PC12 细胞存活率;乳酸脱氢酶（lactate dehydrogenase,LDH）试剂盒法测定乳酸脱氢酶的漏出量;采用Hoechst33342 和碘化丙啶（propidium iodide,PI） 双染法检测各组细胞凋亡与坏死情况;Western blot 检测各组细胞Akt、p-Akt、Bcl-2、Bcl-2 相关 X 蛋白（Bcl-2 associated X protein,Bax）和含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶-3 （cysteinyl aspartate specific proteinase-3,Caspase-3）的蛋白表达情况。结果：黄芪甲苷提高PC12 细胞OGD/R 损伤的细胞存活率,降低LDH 漏出量和细胞凋亡。黄芪甲苷浓度依赖性上调p-Akt/Akt、Bcl-2 的蛋白表达和下调促凋亡蛋白Bax、Caspase-3 的表达。PI3K/Akt 通路的抑制剂LY2940002 能抑制黄芪甲苷对OGD/R 损伤的PC12 细胞中凋亡相关蛋白的影响。结论：黄芪甲苷对OGD/R 损伤的PC12 细胞具有保护作用,且其保护作用机制可能与PI3K/Akt/Bcl-2 信号通路有关。     

大蒜提取物二烯丙基化三硫对人膀胱癌T24细胞凋亡的影响

目的:研究大蒜提取物二烯丙基化三硫(diallyl trisulfide,DATS)在体外对T24细胞凋亡的诱导作用,并探讨其诱导凋亡的分子机制.方珐:应用荧光染色形态学观察DATS作用后T24细胞凋亡形态学改变.并应用流式细胞仪检测细胞凋亡率的变化.采用蛋白质印迹法检测不同浓度DATS作用后T24细胞中caspase-3、PARP蛋白的表达,并进一步研究其分子机理.结果:DATS可明显诱导T24细胞细胞凋亡并呈显著剂量依赖性.DATS作用于T24细胞后,procaspase-3表达减少,同时出现PARP的裂解片段,并呈显著的剂量依赖性.DAlS作用于T24细胞后,p-PDK1,p-Ser 473-Akt的表达逐渐降低,呈剂量依赖性,但t-Akt的表达不受影响.DATS作用于T24细胞后,Bax表达逐渐增高,Bcl-2的表达逐渐降低,呈显著的剂量依赖性.结论:DATS能诱导T24细胞凋亡,凋亡的诱导作用呈显著剂量依赖性.DATS诱导产生凋亡的机理可能通过抑制124细胞PI3K/Akt信号通路的激活从而调节Bcl-2家族蛋白,并最终诱导凋亡发生.     

基于虚、瘀、湿、毒理论探讨前列腺癌病机特点及西黄丸的运用

初步分析提炼前列腺癌及西黄丸相关文献,提出前列腺癌中医病机特点为"虚""瘀""毒""湿",治疗核心应为扶正和祛邪,临床应根据疾病的正邪盛衰特点调整侧重扶正或祛邪.西黄丸作为治疗恶性肿瘤的经典名方,功效上侧重于祛邪为主,且具有祛邪不伤正的药性特点,可适用于正气充盛或正不甚虚证型前列腺癌.综合现代药理研究进展,西黄丸可介导...     

脑红蛋白改善AD双转基因（APPswe/PS1dE9）小鼠认知功能及其机制研究

目的：观察过表达脑红蛋白（neuroglobin,Ngb）对阿尔茨海默病（Alzheimer’s disease,AD）双转基因（APPswe/PS1dE9）小鼠认知功能的影响,并探讨其机制。方法：成功构建过表达Ngb质粒pNgb和对应的空质粒pCDNA3.1,对AD双转基因小鼠进行侧脑室注射,使其过表达Ngb。采用Morris水迷宫评价过表达Ngb对AD小鼠学习记忆能力和空间探索能力的影响;采用免疫组织化学法检测其对β淀粉样蛋白-42(amyloid β-protein 42,Aβ42)生成的影响;半胱氨酸蛋白酶Caspase-3和Caspase-9酶活性检测试剂盒检测酶活性变化;Western blot检测海马组织中磷酸化蛋白激酶B p-Akt(ser473)、总Akt、Caspase-3和Caspase-9表达。结果：过表达Ngb提高了AD转基因小鼠的学习记忆和空间探索能力（P<0.05）;明显降低了转基因小鼠海马组织中Caspase-3和Caspase-9酶活性及Aβ42生成（P<0.05）;Western blot显示过表达Ngb能抑制脑组织中Caspase-3和...     

丙泊酚后处理对离体大鼠缺血再灌注心肌的保护作用及机制

目的 研究丙泊酚后处理对离体大鼠缺血再灌注心肌细胞的保护作用以及对PI3 K/Akt信号通路的影响.方法 选用SD大鼠28只,按照随机数字表法分为缺血再灌注组(I/R组)、丙泊酚后处理组(PPC组)、丙泊酚后处理+Wortmannin后处理组(PPC+W组)、Wortmannin组(W组).4组均建立Langendorff离体心肌缺血再灌注模型.各组心肌做相应分组处理后,观察缺血前及再灌注120 min时左室心功能变化情况,免疫组化检测Bcl-2蛋白的表达,Tunel法检测各组心肌细胞凋亡情况,Western blot测定p-Akt( Ser473)蛋白表达.结果 与I/R组相比,PPC组LVEDP降低[(43.31±4.70)vs(29.93±3.72),P＜0.05],+dp/dtmax和-dp/dtmax均明显升高[(1140±138)vs(1622±160),(749±99) vs(1008±178),P＜0.05],心肌组织Bcl-2蛋白和p-Akt的表达均增加[(0.1719±0.0121)vs(0.1991±0.0144),(0.2414±0.0539)vs(0.4363±0.0817),P＜0.05],心肌细胞凋亡明显减少[(33.87 ± 1.72) vs (29.84±1.83),P＜0.05].Wortmannin能阻断丙泊酚后处理的心肌保护效应(P＜0.05).结论 丙泊酚后处理能减少离体大鼠缺血再灌注心肌细胞凋亡,发挥心肌保护作用,其保护机制与激活PI3K/Akt信号通路及上调Bcl-2蛋白的表达有关.     

PI3K/Akt通路在UC-MSCs移植治疗新生大鼠HIBD中的作用机制

目的 探讨磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B （PI3K/Akt）通路在脐带间充质干细胞（UC-MSCs）移植治疗新生大鼠缺氧缺血性脑损伤（HIBD）中的机制。方法 10日龄SD大鼠分为假手术组、移植组（MSCs组）、抑制剂组（LY组）及HIBD组,制作HIBD动物模型,5-溴脱氧嘧啶尿苷标记UC-MSCs后侧脑室移植,移植后24 h、48 h, TUNEL、Western blot分别检测细胞凋亡及caspase3、磷酸化Akt（P-Akt）蛋白表达。结果 移植后24 h、48 h, MSCs组细胞凋亡数及caspase3蛋白表达量较LY组及HIBD组减少（ P<0.05）,而P-Akt表达较LY组及HIBD组增加（ P<0.05）,且随移植后时间的延长,各指标的表达均呈下降趋势（ P<0.05）。结论 UC-MSCs移植治疗HIBD新生大鼠时,脑组织细胞凋亡减少,caspase3表达下调,P-Akt表达上调,PI3K/Akt信号通路可能为其重要机制。     

PI3K/Akt/GSK3β信号通路及内质网应激蛋白在大鼠难免性压疮形成中表达变化

目的：探讨磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）/蛋白激酶B（Akt）/糖原合成激酶3 β（GSK3 β）信号通路及内质网（ER）分子伴侣在大鼠难免性压疮中的表达变化.方法：54只雄性SD大鼠按照随机数字表法分为正常对照组（Con组）,1个周期受压组（1c组）、3个周期受压组（3c组）、6个周期受压组（6c组）、9个周期受压组（9c组）和恢复期1 d组、3d组、5 d组、7 d组,每组各6只.取各时间点受压部位肌肉组织,行HE染色观察组织的形态变化,SABC免疫组织化学法检测受压组织caspase-3的表达;蛋白质印迹（Western blotting）法检测受压组织中ER分子伴侣及Akt、GSK3β的变化.结果：HE染色结果显示,与Con组比较,各受压组局部肌肉组织呈现逐步退化的病理改变,在恢复组病理现象仍然存在;受压组和恢复组caspase-3蛋白表达均高于Con组,棕黄色颗粒表达主要在胞浆;Western blotting法检测受压组织中ER分子伴侣发现,其蛋白表达总体上呈上升趋势;与Con组比,受压组和恢复组p-Akt蛋白表达呈先上升后下降的趋势;与Con组比,受压组p-GSK3 β蛋白表达首先表现为先上升后下降的趋势,在恢复组表达呈先下降后上升趋势.结论：难免性压疮难以愈合的原因可能与受压肌肉细胞凋亡有关;ER应激及PI3K/Akt/GSK3β信号通路可能参与了难免性压疮损伤过程.     

来氟米特通过 PI3K／Akt／mTOR信号通路诱导大鼠系膜细胞凋亡的作用

目的：探讨来氟米特（A771726）对大鼠肾小球系膜细胞凋亡的影响及可能机制。方法体外培养大鼠肾小球系膜细胞,分为正常对照组（加入含5％胎牛血清的DM EM 培养液）、A771726组（在对照组基础上加入 A771726,使其终浓度为50μg／mL）、LY294002组（在正常对照组基础上加入LY294002,使其终浓度为2μg／mL）,LY294002＋A771726组（先加2μg／mL的LY294002干预系膜细胞4 h后,加入50μg／mL的A771726）,采用流式细胞术检测各组干预48 h后对大鼠肾小球系膜细胞凋亡的影响,采用免疫荧光法检测各组干预48 h对大鼠系膜细胞中mTOR蛋白表达的影响,采用免疫印迹法检测各组干预48 h后对大鼠系膜细胞中Caspase‐3表达的影响。结果与正常对照组比较,A771726、LY294002、LY294002＋ A771726组大鼠肾小球系膜细胞的凋亡率均明显升高,mTOR蛋白表达均明显降低,Caspase‐3蛋白表达均明显增加;与 A771726组比较,LY294002、LY294002＋ A771726组大鼠肾小球系膜细胞的凋亡率均明显升高,mTOR蛋白表达均明显降低,Caspase‐3蛋白表达均明显增加;与LY294002组比较,LY294002＋A771726组大鼠肾小球系膜细胞的凋亡率明显升高,mTOR蛋白表达明显降低,Caspase‐3蛋白表达明显增加。结论来氟米特可能通过下调PI3K／Akt／mTOR信号通路而诱导大鼠肾小球系膜细胞的凋亡,且来氟米特可协同LY294002共同诱导大鼠系膜细胞的凋亡。     

COX-2通过PI3K/Akt通路调节氧诱导视网膜病变模型中视网膜新生血管的形成

目的 探讨环氧化酶-2(COX-2)调节氧诱导视网膜病变(OIR)模型中视网膜新生血管形成的信号转导机制.方法 将乳鼠随机分为正常对照组、OIR模型组以及COX-2选择性抑制剂NS-398组(每组18只乳鼠).正常对照组小鼠生长于正常空气氧浓度(21%),OIR模型组和NS-398组小鼠于出生后第7天放置于高浓度氧环境(75%)生长,第12天调整氧浓度为正常.NS-398组小鼠于出生后第12～17天每日腹腔注射10 mg/kg NS-398.于第17天,获取3组视网膜标本,采用常规病理学检查在光镜下观察视网膜新生血管的变化;应用免疫组织化学法、Real-time PCR以及West-ern blot技术检测视网膜组织中COX-2、VEGF和PI3K/Akt的表达.结果 正常对照组病理切片未见视网膜新生血管形成,OIR模型组和NS-398组均出现与内界膜相连的新生血管,以OIR模型组为甚.COX-2、VEGF和PI3K/Akt在正常对照组均存在一定表达,在OIR模型组呈强表达,在NS-398组的表达明显低于OIR组,但仍高于正常对照组.3组间COX-2、VEGF的吸光度值、mRNA和蛋白相对量及PI3K/Akt的蛋白相对量两两比较,差异均有显著性意义(均P<0.05).结论 COX-2表达受到抑制后通过下调VEGF的表达减少OIR模型中的视网膜新生血管形成,在此过程中涉及到PI3K/Akt信号通路的作用.     

PI3K/Akt信号通路抑制剂对胃癌细胞SGC7901中Skp2和NAG-1表达的影响及其效应

目的 研究PI3K/Akt信号转导通路靶向抑制剂LY294002对胃癌细胞SGC7901中S期激酶相关蛋白2(Skp2)和非甾体抗炎药诱导基因-1(NAG-1)表达的影响.方法 将LY294002作用于胃癌细胞株SGC7901,四甲基偶氮唑蓝(MTT)法测定细胞增殖抑制率,流式细胞术AnnexinV2FITC/PI染色法检测细胞凋亡率,RT-PCR检测NAG-1、Skp2 mRNA的表达情况,Western blot检测p-Akt(Ser473)和总Akt(t-Akt)的表达情况.结果 LY294002可明显抑制SGC7901的生长,呈时间-剂量依赖性,并出现典型的细胞形态学改变;10、30、50 μmol/L的LY294002作用12 h后细胞凋亡率分别为(12.7±0.42)%、(36.5±0.45)%和(64.1±0.79)%,显著高于空白对照组的(2.3±0.36)%,差异均有统计学意义(P<0.01);LY294002可下调p-Akt的蛋白表达,而t-Akt的表达未发生改变;LY294002可上调NAG-1 mRNA的表达,并下调Skp2 mRNA的表达.结论 阻断PI3K/Akt信号转导通路可改变胃癌细胞株SGC7901中Skp2和NAG-1的表达,并能明显抑制细胞增殖,诱导细胞凋亡,其机制可能与其抑制Akt磷酸化及调控NAG-1、Skp2 mRNA表达水平有关.     

PI3K/Akt信号通路与肿瘤关系的研究进展

PI3K/Akt信号通路作为细胞内重要信号转导通路之一,通过影响下游多种效应分子的活化状态,在细胞内发挥着抑制凋亡、促进增殖的关键作用,与人类多种肿瘤的发生、发展密切相关。该信号通路的成分在人类大多数恶性肿瘤中都发生了变化,在肿瘤的增殖、存活和抵抗凋亡、血管发生以及细胞运动中发挥了重要作用。因此,通过对PI3K/Akt信号通路的研究有望寻求肿瘤药物治疗的新靶点。本文将重点就PI3K/Akt信号通路的组成及其与肿瘤发生、发展的关系予以综述。     

WORT对血清饥饿及辐射诱导血清饥饿的SHG44增殖抑制作用的影响

目的研究磷脂酰肌醇-3-激酶的相对特异性抑制剂WORT(Wortmannin,渥漫青霉素)对血清饥饿的SHG44细胞及辐射诱导血清饥饿的SHG44增殖抑制作用的影响。方法用甲基噻唑基四氮唑盐(Methyl thiazolyltetrazolium,MTT)比色法测定不同浓度的WORT处理的血清饥饿及血清饥饿后5 Gy照射的SHG44细胞的存活率。结果血清饥饿后,1.00×10-8mol/L~5.00×10-7mol/L的WORT使细胞存活率随WORT浓度的升高而降低(P<0.05),5.00×10-7mol/L~5.00×10-6mol/L的WORT使细胞存活率的降低出现平台期,1.50×10-5~3.00×10-5mol/L范围内细胞存活率再一次出现下降(P<0.05)。实验结果表明WORT可使血清饥饿后再接受5 Gy照射的细胞存活率进一步降低(P<0.05)。结论血清饥饿后,渥漫青霉素可抑制SHG44细胞的增殖,并提高辐射诱导血清饥饿细胞的增殖抑制作用,其机制可能与抑制PI3K通路以及PI3K家族其他成员相关。     

心肌细胞凋亡与PI 3K/Akt信号途径表达及其调控机制的研究

磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B(phosphatidylinositol 3-kinase/ protein kinase B,PI3K/Akt)信号通路作为细胞内重要信号转导通路之一, 通过影响下游多种效应分子的活化状态, 在细胞内发挥着抗凋亡、促细胞生存等功能.     

氯通道阻滞剂对大鼠心肌缺血再灌注损伤致心肌细胞凋亡的作用

目的本研究应用大鼠在体心肌缺血再灌注损伤（I/RI）动物模型,观察氯通道阻滞剂DIDS（4,4＇-disothiocya-nostibibene-2,2＇-disulfonic acid）对心肌细胞凋亡的作用以及与磷脂酰肌醇3激酶蛋白激酶B（PI3K-Akt）信号通路可能存在的相互作用,明确DIDS心肌保护作用的可能机制。方法 75只大鼠随机分成5组：假手术组,I/RI组,I/RI＋DIDS（14 mg/kg）,I/RI＋LY294002（PI3K-Akt特异性阻断剂）,I/R＋DIDS＋LY294002组。TTC染色检测心肌梗死范围;TUNEL法测定细胞凋亡;Caspase-3试剂盒检测caspase-3活性;免疫印迹法检测p-Akt水平。结果与I/R组比较DIDS可以减少心肌梗死范围（各组n=4,P〈0.01）,可以明显抑制心肌细胞凋亡（各组n=5,P〈0.01）,降低凋亡效应子caspase-3活性（各组n=5,P〈0.01）,提高I/RI心肌的p-Akt水平（各组n=5,P〈0.01）,LY294002可以部分阻断这些作用,LY294002自身并无减少心肌梗死范围的作用。结论氯离子通道阻滞剂DIDS对缺血再灌注损伤的心肌具有保护作用,其作用部分是通过PI3K/Akt信号通路来实现的。     

葛根素通过抑制PI3K/Akt/GSK-3β信号通路诱导人肾癌786-O细胞凋亡的研究

目的 研究葛根素对人肾癌786-O细胞凋亡的影响及其机制。方法 分别以DMSO(空白对照组)、不同浓度葛根素10、20、40 mg/L和LY294002(PI3K抑制剂)15 mg/L干预对数生长期人肾癌786-O细胞48 h,采用CCK-8法检测细胞增殖抑制率,流式细胞术检测细胞凋亡水平,Western blot法检测磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)、磷酸化PI3K(Tyr317) [p-PI3K(Tyr317)]、蛋白激酶B(Akt)、磷酸化Akt(Ser473)[p-Akt(Ser473)]、糖原合成酶激酶-3β(GSK-3β)、磷酸化GSK-3β (Ser21)[p-GSK-3β(Ser21)]、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-9(Caspase-9)、激活型Caspase-3(Cleaved Caspase-3)、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax）表达。结果 与空白对照组比较,葛根素10、20、40 mg/L组和LY294002 15 mg/L组786-O细胞增殖抑制率升高[(17.04±2.92)%、(26.48±4.77)%、(42.79±6.81)%、(35.73±6.12)%比(3.47±0.53)%,P<0.01]、凋亡率升高[(13.72±2.38)%、(30.41±4.05)%、(55.39±6.72)%、(36.08±4.32)%比(2.64±0.51)%,P<0.01];。与空白对照组比较,葛根素20、40 mg/L组和LY294002 15 mg/L组786-O细胞p-PI3K(Tyr317)、p-Akt(Ser473)、p-GSK-3β(Ser21)、Bcl-2表达下调[p-PI3K(Tyr317)：(0.58±0.13)、(0.32±0.07)、(0.38±0.08)比(1.03±0.24);p-Akt(Ser473)：(0.25±0.06)、(0.09±0.03)、(0.11±0.03)比(0.51±0.12);p-GSK-3β(Ser21)：(0.12±0.03)、(0.07±0.02)、(0.09±0.03)比(0.58±0.13);Bcl-2：(0.31±0.08)、(0.18±0.05)、(0.21±0.07)比(0.48±0.12),P均<0.01],Caspase-9、Cleaved Caspase-3、Bax表达上调[Caspase-9：(0.37±0.08)、(0.66±0.13)、(0.58±0.11)比(0.17±0.04);Cleaved Caspase-3：(0.25±0.06)、(0.72±0.16)、(0.43±0.12)比(0.11±0.03);Bax：(0.36±0.08)、(0.62±0.12)、(0.20±0.05)比(0.08±0.02),P均<0.01],PI3K、Akt、GSK-3β磷酸化率降低[PI3K磷酸化率：(0.55±0.15)、(0.29±0.08)、(0.34±0.09)比(0.92±0.28);Akt磷酸化率：(0.24±0.07)、(0.09±0.03)、(0.11±0.04)比(0.53±0.14);GSK-3β磷酸化率：(0.14±0.04)、(0.08±0.03)、(0.10±0.04)比(0.62±0.15),P均<0.01],Bax/Bcl-2比值升高[(1.16±0.27)、(3.41±0.65)、(0.95±0.22)比(0.17±0.04),P<0.01]。与LY294002 15 mg/L组比较,葛根素40 mg/L组786-O细胞增殖抑制率升高[(42.79±6.81)%比(35.73±6.12)%,P<0.05]、凋亡率升高[(55.39±6.72)%比(36.08±4.32)%,P<0.01],Cleaved Caspase-3、Bax表达上调[Cleaved Caspase-3：(0.72±0.16)比(0.43±0.12);Bax：(0.62±0.12)比(0.20±0.05),P均<0.01],Bax/Bcl-2比值升高[(3.41±0.65)比(0.95±0.22),P<0.01],两组间其他指标比较,差异无统计学意义（P>0.05）。结论 葛根素具有诱导人肾癌786-O细胞凋亡的作用,其机制可能与抑制PI3K/Akt/GSK-3β信号通路有关。     

Herceptin下调HER2表达后对PI3K/Akt通路蛋白表达的影响

目的:研究Herceptin下调乳腺癌细胞HER2表达对PI3K/Akt通路相关蛋白表达的影响,探讨该通路在Herceptin抗肿瘤效应中的作用。方法:Herceptin处理HER2过表达的乳腺癌细胞株SKBR-3,免疫细胞化学检测HER2、p21Cip1和p27Kip1的表达,Westernblot检测p-Akt和Bad的表达。结果:Herceptin处理组细胞HER2阳性表达率(37.4%)显著低于对照组(78.3%)(P<0.01)。Herceptin处理组与对照组比较,p-Akt蛋白含量降低53.5%(P<0.01),Bad蛋白含量升高0.83倍(P<0.01)。Herceptin处理组细胞p21Cip1和p27Kip1阳性表达率(分别为67%和56.1%)显著高于对照组(分别为19%和21.4%)(P<0.01)。结论:Herceptin下调HER2表达后,通过下调p-Akt表达而上调其下游Bad、p21Cip1和p27Kip1的表达,从而抑制肿瘤细胞增殖,促进肿瘤细胞凋亡。     

甲状腺功能亢进症模型大鼠心肌细胞PI3K/Akt通路与胰岛素抵抗的关系

目的探讨甲状腺功能亢进症模型大鼠心肌细胞PI3K/Akt通路与胰岛素抵抗的关系。方法建立甲状腺功能亢进症模型大鼠,随机分为模型组、LY294002组（PI3K抑制剂）、740Y-P组（PI3K激动剂）,每组12只;另取12只SD大鼠设为对照组。分组处理后,酶联免疫吸附法（ELISA）检测甲状腺功能指标血清游离三碘甲状腺原氨酸（FT3）、游离甲状腺素（FT4）、促甲状腺素（TSH）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白细胞介素-6（IL-6）水平;测定空腹血糖水平（FBG）、胰岛素抵抗指数（IRI）;TUNEL染色检测心肌细胞凋亡情况;蛋白免疫印迹法检测大鼠心肌组织PI3K/Akt通路蛋白表达。结果与对照组比较,模型组大鼠血清FT3、FT4、TNF-α及IL-6水平、心肌细胞凋亡比例、FBG、IRI显著升高（P<0.05）,TSH、心肌组织p-PI3K/PI3K及p-Akt/Akt显著降低（P<0.05）;与模型组比较,LY294002组大鼠血清FT3、FT4、TNF-α及IL-6水平、心肌细胞凋亡比例、FBG、IRI升高（P<0.05）,TSH、心肌组织p-PI3K/PI3K及p-Akt/Akt降低（P<0.05）;740Y-P组大鼠血清FT3、FT4、TNF-α及IL-6水平、心肌细胞凋亡比例、FBG、IRI降低（P<0.05）,TSH、心肌组织p-PI3K/PI3K及p-Akt/Akt升高（P<0.05）。结论PI3K/Akt通路可调控甲状腺功能亢进症模型大鼠胰岛素抵抗,激活该通路,可使甲状腺功能恢复正常,减轻炎症反应,抑制心肌细胞凋亡,改善胰岛素抵抗。     

PI3K/Akt/GSK3β信号通路及内质网应激蛋白在大鼠难免性压疮形成中表达变化

目的：探讨磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）/蛋白激酶B（Akt）/糖原合成激酶3β（GSK3β）信号通路及内质网（ER）分子伴侣在大鼠难免性压疮中的表达变化。方法：54只雄性SD大鼠按照随机数字表法分为正常对照组（Con组）,1个周期受压组（1c组）、3个周期受压组（3c组）、6个周期受压组（6c组）、9个周期受压组（9c组）和恢复期1 d组、3 d组、5 d组、7 d组,每组各6只。取各时间点受压部位肌肉组织,行HE染色观察组织的形态变化,SABC免疫组织化学法检测受压组织caspase-3的表达;蛋白质印迹（Western blotting）法检测受压组织中ER分子伴侣及Akt、GSK3β的变化。结果：HE染色结果显示,与Con组比较,各受压组局部肌肉组织呈现逐步退化的病理改变,在恢复组病理现象仍然存在;受压组和恢复组caspase-3蛋白表达均高于Con组,棕黄色颗粒表达主要在胞浆;Western blotting法检测受压组织中ER分子伴侣发现,其蛋白表达总体上呈上升趋势;与Con组比,受压组和恢复组p-Akt蛋白表达呈先上升后下降的趋势;与Con组比,受压组p-GSK3β蛋白表达首先表现为先上升后下降的趋势,在恢复组表达呈先下降后上升趋势。结论：难免性压疮难以愈合的原因可能与受压肌肉细胞凋亡有关;ER应激及PI3K/Akt/GSK3β信号通路可能参与了难免性压疮损伤过程。     

大黄素介导IRS-2/PI3K/Akt通路干预大鼠非酒精性脂肪性肝炎的实验研究

目的探讨大黄素通过介导IRS-2/PI3 K/Akt通路对非酒精性脂肪性肝炎(NASH)的影响。方法随机选取25只雄性大鼠给予高脂饲料喂养12周制备NASH模型,12周后取5只大鼠进行检测,确定NASH模型制备成功,剩余20只大鼠数字表法随机分为模型组(10只)和大黄素组(10只),另取同龄10只雄性未造模大鼠作为正常对照组。大黄素组大鼠给予20 mg/kg的大黄素灌胃,正常对照组和模型组给予等量生理盐水,连续给予8周。对大鼠肝脏进行称重,计算肝指数;检测空腹血糖和空腹胰岛素,计算胰岛素抵抗指数(HOMA-IR),检测血生化指标。对肝组织进行HE染色,检测肝组织中IRS-2、p-IRS-2、PI3K、p-PI3K、Akt、p-Akt蛋白相对表达量。结果模型组大鼠肝指数、空腹血糖、空腹胰岛素、HOMA-IR、ALT、AST、TG、TC和LDL-C水平较正常对照组增高,HDL-C水平较正常对照组降低(P<0.01);大黄素组大鼠肝指数、空腹血糖、空腹胰岛素、HOMA-IR、ALT、AST、TG、TC和LDL-C水平较模型组降低,HDL-C水平较模型组增高(P<0.05)病理检测发现,模型组出现大量脂肪变性,存在炎性细胞浸润和细胞气球样变性,大黄素组病灶明显较模型组减轻。模型组大鼠IRS-2、p-IRS-2、PI3K、p-PI3K、Akt、p-Akt蛋白相对表达量较正常对照组降低(P<0.05),大黄素组大鼠IRS-2、p-IRS-2、PI3K、p-PI3K、Akt、p-Akt蛋白相对表达量较模型组增高(P<0.05)。结论大黄素可以提高IRS-2/PI3K/Akt通路的活性,改善高脂诱导的NASH大鼠肝脏脂肪沉积及胰岛素抵抗。     

E6相关蛋白与前列腺癌细胞迁移浸润的实验研究

目的：研究E6相关蛋白与前列腺癌细胞迁移浸润的相关性,为探讨前列腺癌的浸润转移机制提供实验依据。方法：应用电穿孔方法将线性化的PrevTet—off-in调控质粒和PrevTRE2-flag—E6AP重组质粒导入前列腺癌细胞（Lncap）,建立稳定表达E6-AP的前列腺癌细胞。应用MTT实验检测细胞的增殖;应用Matrigel Invasion Chamber检测肿瘤细胞迁移浸润特性。结果：MTT结果显示,稳定转染表达E6-AP的前列腺癌细胞比未转染的细胞具有较强的增殖活性;在细胞的迁移浸润试验中,表达E6-AP的稳定转染细胞具有较强的爬行与附着能力。结论：E6相关蛋白与前列腺癌细胞迁移浸润性密切相关。