荧光原位杂交对乳腺癌HER2基因的检测及临床应用

目的探讨荧光原位杂交法(FISH)检测乳腺癌组织中人类表皮生长因子受体2(HER2)表达的临床意义。方法采用FISH和免疫组织化学(IHC)法分别检测28例乳腺癌标本中HER2基因扩增状况和HER2蛋白表达。结果在IHC法检测HER2蛋白表达(++)的22例标本中,FISH检出6例HER2基因扩增,16例无变化。在HER-2蛋白表达(+++)的6例标本中,FISH检出5例HER2基因扩增,1例无扩增。结论对于IHC法初筛为(++)的患者应再进行FISH检测,以确定HER-2基因的状态,从而确定是否应用曲妥珠单抗治疗。     

荧光原位杂交和免疫组织化学技术检测乳腺癌HER-2基因扩增和蛋白表达状态对照研究

目的 比较荧光原位杂交(FISH)与免疫组织化学技术(IHC)在检测乳腺癌患者HER-2基因扩增和表达状态方面的应用.方法 采用FISH技术对66例IHC检测结果为HER-2基因过度表达(3+/2+)和低表达或无表达(1+/-)的乳腺癌石蜡切片进行HER-2基因扩增状态检测.结果 用FISH技术检测42例IHC结果显示HER-2基因过度表达(3+/2+)的标本,31例显示HER-2基因扩增,11例无扩增.检测24例IHC检测显示HER-2基因低度表达或无表达(1+/-)的标本,均未显示HER-2基因扩增.两组之间比较,Kappa系数为0.672,P<0.001,显示两项检测技术具有良好的一致性.另外.用FISH技术检测到部分病例显示17号染色体多体性,并且该多体性在HER-2高表达(3+/2+)的病例发生率显著高于低表达或无表达(1+/-)的病例(x~2=4.688,P=0.03).结论 FISH和ICH两项技术具有良好的一致性.IHC可作为HER-2基因扩增和表达状态检测的筛查手段.FISH技术可以作为检测HER-2基因扩增和17号染色体多体性的确诊手段.

Abstract：

Objective To evaluate the application of the immunohistochemistry (IHC) and the fluorescence in situ hybridization (FISH) in detecting the amplification and the expression of HER-2 gene in the breast cancer patients. Methods Sixty-six cases of paraffin-embeded breast cancer samples with overexpression, low or no expression of HER-2 gene as detected by IHC were analyzed for HER-2 gene amplification using FISH. Results Among the 42 samples with HER-2 gene overexpression (3+/2+) detected by IHC, 31 showed positive HER-2 gene amplification and 11 showed negative HER-2 gene amplification in FISH. In the 24 samples with low or no HER-2 gene expression (1+/-) detected by IHC, no HER-2 gene amplification was detected by FISH. The results of the two testing methods showed a good consistency with the kappa coefficient of 0.672 (P<0.001). We also found that the 17 chromosome polysomy in 42% of the samples and the incidence of 17 polysomy was significantly higher in the HER-2 gene overexpression (3+/2+) group than in low or no HER-2 gene expression (1+/-) group (x~2=4.688, P=0.03). Conclusion IHC can be used as a screening method for detecting HER-2 gene amplification, and FISH should be performed in cases of HER-2 gene overexpression (3+/2+) as detected by IHC.     

血清HER-2neu ECD水平与乳腺癌临床特征及组织中HER-2neu表达的相关性

观察乳腺癌患者血清人类表皮生长因子受体-2（HER-2neu）胞外域部分（ECD）水平,探讨其与乳腺癌临床特征及组织中HER-2neu表达的相关性。方法选取2013 年1 月-2015 年12 月浙江省肿瘤医院乳腺癌患者50 例作为乳腺癌组,健康志愿者50例作为对照组。采用化学发光法测定血清HER-2neu ECD水平。采用免疫组织化学法测定乳腺癌组织中HER-2 蛋白的表达。结果乳腺癌组血清HER-2neu ECD 水平高于对照组（ p<0.05）,乳腺癌组血清HER-2neu ECD阳性率高于对照组（ p<0.05）。50 例乳腺癌组织标本中, HER-2neu阳性表达20 例,阳性率为40.0%。乳腺癌患者TNM 分期Ⅲ期、雌激素受体（ER）阴性、孕激素受体（PR）阴性及肿瘤直径≥3 cm患者血清HER-2neu ECD阳性率高于TNM分期Ⅰ、Ⅱ期及ER 阳性、PR 阳性、肿瘤直径<3 cm患者（p <0.05）。20例乳腺癌组织HER-2阳性患者中,9例血清HER-2neu ECD阳性;30 例乳腺癌组织HER-2阴性患者中,29 例血清HER-2neu ECD阴性,两种方法一致性较好（Kappa=0.455,=0.000）。结论乳腺癌患者血清HER-2neu ECD 水平升高、乳腺癌组织中HER-2 蛋白表达的一致性较好、血清HER-2neu ECD水平与TNM 分期、ER、PR及肿瘤大小相关,可作为乳腺癌组织中HER-2 蛋白表达的补充检测方法。     

Comparison of immunohistochemistry with fluorescence in situ hybridization in determining the human epidermal growth factor receptor 2 status of breast cancer specimens: a multicenter study of 3 149 Chinese patients

Background Accurate detection of human epidermal growth factor receptor 2 （HER2） expression and gene amplification is crucial for the application of HER2-specific therapy and for evaluating the response of patients with breast cancer.A uniform and standard procedure of immunohistochemistry （IHC） and fluorescence in situ hybridization （FISH） needs to be established for evaluating the HER2 status in breast cancer tissues for the treatment of patients with real HER2-positive tumors.The present multicenter study was aimed to examine the HER2 status in breast cancer specimens from Chinese patients using both IHC and FISH methods.Methods A multicenter study was performed on the HER2 status in 3 149 breast cancer specimens from different ethnic populations and areas in China by IHC and FISH assays.The potential association of HER2 status with demographic and clinical characteristics was analyzed.Results The positive rates for HER2 over-expression and HER2 amplification were 23.3％ and 27.5％ in this study,respectively.The concordance between IHC and FISH was 71.2％ （K=0.494,P ＜0.001）.Furthermore,72.9％ of specimens with IHC 2＋ were negative to FISH.The discordance rates among laboratories were from 5％ to 28％ for IHC and 1％ to 16％ for FISH.HER2 amplification was associated significantly with advanced tumor stage （Ⅲ or Ⅳ,P=0.002）,large tumor size （＞5 cm,P=0.002）,moderate and poor histological grades （P ＜0.0001）,post-menopause （P ＜0.0001）,ER-PR-（P=0.002）,and having ＞4 lymph nodes affected （P ＜0.0001） in this population.The positive rates of HER2 amplification in specimens from Man and Hui Chinese were significantly higher than that in other Chinese populations.There are slightly higher positive rates of HER2 expression and amplification in Chinese patients with breast cancer.Conclusion These findings may provide new insights into understanding the epidemiological features of HER2 expression and amplification,and may be valuable for clinical practice.     

乳腺癌HER2基因扩增检测方法——显色原位杂交法的应用及优化

目的:应用显色原位杂交技术(chromogenic in situ hybridization,CISH)检测乳腺癌组织人表皮生长因子受体2(human epidermal growth factor receptor 2,HER2)基因扩增情况,并对操作方法进行优化.方法:选择免疫组织化学(IHC)EnVision法检测结果2 及以上的60例乳腺癌组织作为研究对象,应用CISH技术检测其HER2基因扩增情况,分析二者结果的相关性;总结CISH操作经验,优化操作方法.结果:44例标本IHC检测HER2蛋白表达为3 ,其中40例CISH检测呈现HER2基因高倍扩增,4例无扩增;基因扩增与蛋白表达的符合率为91%.16例IHC检测HER2表达为2 标本基因扩增与蛋白表达的符合率为50%.IHC与CISH符合率为80%(48/60),二者明显相关(P＜0.01).操作过程中应严格控制切片厚度,一般要求4～5 μm;杂交变性一定要彻底,杂交后的洗涤温度和时间也很重要,最好控制在70～75℃;要严格控制苏木精衬染时间;每次实验最好有阳性对照片,可以有效进行质量控制.结论:CISH检测乳腺癌HER2基因扩增的结果与IHC检测的蛋白表达结果符合率较高,可作为乳腺癌HER2基因检测的一项新技术;但在具体操作时,应注意严格控制切片厚度、消化及杂交后洗涤温度与时间以及苏木精衬染时间等因素.     

血清肝细胞生长因子水平与乳腺癌临床病理特征的关系

目的探讨血清肝细胞生长因子(HGF)水平与乳腺癌临床病理特征的关系及临床意义。方法应用酶链免疫吸附法检测100例可手术乳腺癌患者治疗前的血清HGF水平,比较年龄、雌激素受体表达情况、肿瘤大小、组织学分级、淋巴结状况及TNM分期与HGF关系。结果血清肝细胞生长因子与乳腺癌淋巴结状况、临床分期及组织学分级有关(P<0.05),而与患者年龄、肿瘤大小及雌激素水平无关(P>0.05)。结论血清肝细胞生长因子可能在乳腺癌的发生发展中起重要作用,可能是乳腺癌预后的独立指标。     

HER2在胃癌原发灶和淋巴结转移灶中表达的对比研究*

目的：对比胃癌原发灶和淋巴结转移灶中人表皮生长因子受体2(human epidermal growth factor receptor 2, HER2)蛋白表达、基因扩增情况。方法：收集南通大学附属南通第三医院2014年1月—2017年8月46例胃癌伴有淋巴结转移的手术病例,将所有原发灶和淋巴结转移灶标本全部取材,行HER2蛋白免疫组织化学(immunohistochemistry, IHC)和荧光原位杂交(fluorescence in situ hybridization, FISH)检测。结果：IHC显示：胃癌原发灶HER2蛋白过表达率为23.9%,且与肿瘤分化程度、Lauren分型相关(P＜0.05);FISH检测结果显示：原发灶HER2表达0/1+的病例均无扩增,表达2+的病例扩增率为16.7%,表达3+的病例扩增率为100.0%。淋巴结转移灶HER2蛋白的过表达率为21.7%,与淋巴结转移数量之间无明显相关性(P＞0.05),原发灶和转移灶HER2蛋白的过表达率差异无统计学意义(P＞0.05);转移灶HER2表达0/1+的病例均无扩增;表达2+的病例扩增率为16.7%;表达3+的病例扩增率为100%。46例原发灶和对应淋巴结转移灶中,HER2蛋白表达一致率为93.4%,基因扩增一致率为97.8%。结论：通过比较胃癌原发灶和转移灶中HER2的表达,发现原发灶和转移灶的表达具有很高的一致性。     

58例乳腺癌患者ABVS表现与ER、PR及HER-2的价值研究

目的探讨自动乳腺全容积成像(ABVS)特征与雌激素受体(ER)、孕激素受体(PR)及人类表皮生长因子受体2(HER-2)表达的价值研究,为乳腺癌患者的内分泌治疗、预后及评估提供一定帮助。方法回顾性分析经病理证实的58例患者共59个乳腺恶性病灶的术前ABVS和传统手段超声图像特征,分别观察ABVS及两者相结合的临床诊断效果。应用免疫组化法对ER、PR及HER-2进行检测,同时考察其基因表达与超声影像学表现之间的关系。结果58例乳腺癌患者59个乳腺恶性病灶中ER、PR及HER-2的阳性表达分别为61.0%、64.4%、35.6%。ER、PR的阳性表达与冠状面汇聚征和边缘毛刺征相关(P<0.05)。HER-2的阳性表达与腋窝淋巴结转移、ABVS肿块内微钙化和形态不规则相关(P<0.05)。结论分子生物学指标ER、PR及HER-2的表达与乳腺癌ABVS超声征象冠状面汇聚征、边缘毛刺征、肿块内微钙化、形态不规则及腋窝淋巴结转移等有一定的相关性。     

荧光原位杂交技术检测乳腺癌HER2基因状态的影响因素

目的分析荧光原位杂交技术（FISH）在乳腺癌HER2基因状态检测中的影响因素。方法选择30例乳腺癌组织标本采用FISH检测HER2基因状态,分别观察三种不同的酶消化时间及重复使用变性液对实验的影响。结果酶消化15min提示消化时间不足,30min提示消化过度,消化21min癌细胞杂交成功率大于75％,实验稳定;变性液重复使用会导致杂交信号减弱或消失。结论在应用FISH检测HER2基因扩增时每次需新配制变性液,酶消化21min,杂交成功率高,且实验稳定。     

“三阴”型与非“三阴”型乳腺癌患者的生物学行为差异性分析

目的通过回顾性分析总结"三阴"型乳腺癌与非"三阴"型乳腺癌患者的流行病学及生物学行为特点,以便为指导临床个体化治疗、判定预后奠定基础。方法收集并整理宁夏医科大学附属医院及银川市人民医院2002年1月~2004年12月收治、经病理组织学确诊,且有5年完整随访数据的乳腺癌患者231例。采用SPSS11.5统计学软件对"三阴"型与"非三阴"型乳腺癌患者的流行病学、临床病理学特点、复发转移、5年生存等方面进行分析。结果"三阴"型乳腺癌占17.3%,与非"三阴"型乳腺癌患者相比,原发肿瘤大(P<0.05),复发转移率尤其是内脏转移率高,3年、5年生存率明显降低,其中所占比例居多的Ⅱ期及淋巴结阳性患者5年生存率也较对照组明显降低(P<0.05)。Cox比例风险模型进行预后因素分析,本组患者发病年龄、原发肿块大小、临床分期及是否为"三阴"性表达均为乳腺癌的独立危险因素。结论"三阴"型乳腺癌与非"三阴"型乳腺癌相比,局部侵袭性强、复发转移率及内脏转移率高、预后差、生存率低"。三阴"型乳腺癌为影响乳腺癌患者预后的独立危险因素。     

乳腺癌组织中HER2和Topo IIα的表达及其临床意义

目的：检测人类表皮生长因子受体(human epidermal growth factor 2,HER2)和Topo IIα在乳腺癌组织中的表达情况,并分析二者的表达对蒽环类药物新辅助化学治疗(化疗)的临床意义。方法：采用荧光原位杂交(fluorescence in situ hybridization,FISH)和免疫组织化学(免疫组化)方法对189例临床资料完整的浸润性乳腺癌组织样本进行HER2和Topo IIα基因和蛋白表达检测,并对乳腺癌患者接受TAC新辅助化疗后的客观有效率(objective response rate,ORR) 和病理完全缓解率(pathological complete rate,pCR)进行统计和分析。结果：在189例乳腺癌患者组织中,经免疫组化检测的HER2蛋白表达46例(24.3%)3+,Topo IIα蛋白表达55例(29.1%) 3+;FISH检测,HER2蛋白表达阳性49例(25.9%),Topo IIα蛋白表达阳性94例(49.0%)。HER2阴性患者ORR为47.4%,pCR为20.3%;阳性患者ORR为32.7%,pCR为16.3%,两者差异均有统计学意义(均P<0.05)。Topo IIα阳性患者ORR为69.1%,pCR为36%;阴性患者ORR为28.4%,pCR为2.2%,两者差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论：FISH和免疫组化检查HER2和Topo IIα对于乳腺癌治疗具有重要指导意义,Topo IIα基因扩增可以有效改善蒽环类药物辅助治疗效果。     

Her-2、EGFR、PS-2、ER在乳腺癌中的表达及其临床意义

目的 探讨人表皮生长因子受体2（Her-2）、表皮生长因子受体（EGFR）、雌激素调节蛋白（PS-2）、雌激素受体（ER）在乳腺癌中的表达及其临床意义。方法 用免疫组织化学方法检测108例乳腺癌患者Her-2、EGFR、PS-2、ER的表达情况,并进行比较。结果 Her-2、EGFR、PS-2、ER表达阳性者分别为40例（37．0％）、44例（40、7％）、62例（57．4％）和58例（53．7％）。Her-2的表达与EGFR无相关性（p0．05）,与PS-2呈负相关（P〈0．05）,与ER呈负相关（P〈0．05）。Her-2、EGFR、PS-2、ER表达与乳腺癌的组织学分级相关（P〈0．05）。Her-2、EGFR、ER表达与淋巴结转移相关（P〈0、05）,Her-2、EGFR、PS．2、ER与乳腺癌的病理学类型、患者年龄及肿瘤大小无关（P〉0、05）。结论 乳腺癌中Her-2、EGFR表达提示患者预后不良;PS．2、ER表达提示患者预后良好;Her-2、EGFR、PS．2、ER是判断乳腺癌预后的有效指标。     

SATB1与HER2表达和乳腺癌分化程度的相关性

目的 检测特异性核基质结合蛋白(SATB1)和人表皮生长因子受体2(HER2)在乳腺癌中的表达,探讨其与乳腺癌分化程度的关系。方法 应用免疫组织化学方法检测乳腺癌患者SATB1和HER2蛋白的表达,使用荧光原位杂交(FISH)方法检测HER2基因扩增状态,分析二者表达的相关性及与临床病理参数之间的关系。结果 乳腺癌中存在SATB1与HER2的高表达,且二者呈正相关(r=0.425,P＜0.05)。SATB1和HER2的表达与肿瘤组织分级有关,其共表达的肿瘤组织具有更高的组织学分级,与Ⅲ级乳腺癌相关(r=0.472,P＜0.05)。结论 SATB1可调节乳腺癌中HER2的表达,SATB1/HER2双阳性表达是乳腺癌低分化的一个标志。     

高灵敏血清HER2蛋白检测方法的建立及临床应用

本研究采用双抗体夹心ELISA法,以前期研制的抗人表皮生长因子受体2 (HER2)单克隆抗体HuA21与生物素标记HerA分别为包被抗体与检测抗体,培养CHO细胞进行转染HER2胞外区(HER2-ECD)基因的表达载体,选择抗性克隆进行培养,并分离、纯化抗原作为标准抗原,建立可定量检测人血清中HER2含量的技术,为肿瘤患者的治疗及预后评估提供参考.建立的ELISA法检测灵敏度为7.8 pg/ml,检测范围为0 ～ 500 pg/ml,其批内变异系数为0.2％～10.9％,批间变异系数为1.4％ ～12.4％,在人血清中的抗原回收率为86.84％ ～ 116.40％.使用本方法检测临床标本,结果显示HER2阳性的转移性乳腺癌患者血清HER2含量明显高于早期乳腺癌患者及健康人的平均水平(P＜0.05).因此本研究成功建立了双抗体夹心ELISA法检测人血清HER2技术,其检测结果特异、稳定、可靠,可定量检测肿瘤患者血清HER2水平.     

乳腺癌HER2、EGFR表达与生存期的相关性

目的研究乳腺癌人表皮生长因子受体2(Her2)和表皮生长因子受体(EGFR)高表达与生存期的关系,探讨其单独或联合作为预后指标的可行性。方法采用免疫组化检测185例乳腺癌标本的HER2和EGFR表达,并随访其生存时间。结果HER2、EGFR的阳性总表达率分别为57.8%和40.5%;HER2或EGFR过度表达均与生存时间呈负相关(P<0.05和P<0.01);HER2联合EGFR过度表达均与生存期呈负相关(P<0.05和P<0.01)。结论HER2、EGFR无论是单独或者联合高表达都降低乳腺癌患者的生存时间,可作为乳腺癌预后不良的指标。     

P-钙粘蛋白在乳腺癌患者血清中的表达及其临床意义

目的检测P-钙粘蛋白在乳腺癌患者血清中的表达及其临床意义。方法收集乳腺癌患者60例、乳腺良性肿瘤患者46例及健康对照组30名,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测各组研究对象血清中P-钙粘蛋白的表达水平,并分析血清中P-钙粘蛋白水平与乳腺癌病理指征的关系。结果乳腺癌组血清P-钙粘蛋白水平为(36.98±4.53)ng/ml,明显高于乳腺良性肿瘤组(20.24±6.32)ng/ml和对照组(10.31±1.85)ng/ml,差异有统计学意义(P0.05)。乳腺癌临床分期Ⅲ期患者血清P-钙粘蛋白水平为(48.49±3.87)ng/ml,明显高于临床Ⅰ~Ⅱ期患者(26.35±2.04)ng/ml,差异有统计学意义(P0.05)。分化程度Ⅲ级患者血清P-钙粘蛋白水平为(41.13±2.35)ng/ml,明显高于分化程度Ⅰ~Ⅱ级患者(26.35±2.04)ng/ml,差异有统计学意义(P0.05),淋巴结转移患者血清P-钙粘蛋白水平为(42.26±3.32)ng/ml,明显高于无淋巴结转移组(28.73±1.48)ng/ml,差异有统计学意义(P0.05)。结论检测血清P-钙粘蛋白水平对乳腺癌的诊断、病情监测等具有一定的参考作用。     

HER2基因扩增和蛋白表达与胃癌临床病理因素的相关性

目的:探讨HER2基因扩增和蛋白表达与胃癌不同临床因素的相关性。方法:回顾性分析河南省肿瘤医院2012年5月至2013年10月收治的1 002例胃癌患者术后肿瘤组织病理标本,应用免疫组化技术(IHC法)和双色银染原位杂交技术(SISH法)检测HER2基因扩增和蛋白表达情况,比较不同临床特点的胃癌患者亚组间HER2表达阳性率的差异。结果:1 002例术后肿瘤组织病理标本中HER2阳性208例(20.8%)。HER2蛋白过表达与Lauren分型、病理分化程度和浸润深度有明显的相关性,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:在肠型胃癌、分化较好的胃癌、胃癌全层浸润时HER2阳性率明显提高。     

FISH检测平顶山地区乳腺癌组织中HER-2基因的表达

目的 FISH方法检测乳腺癌组织中人表皮生长因子2(Her-2)的扩增情况,并与免疫组化结果相比较,优化实验方法。方法用FISH方法及免疫组化检测乳腺癌Her-2的表达,分析相关性。结果 202例乳腺癌患者中,FISH检测Her-2基因扩增60例,阳性率29.7%(60/202),其中Her-2蛋白阴性,Her-2基因未扩增36例,扩增1例,符合率94.7%;Her-2蛋白(+),Her-2基因扩增12例,符合率18.5%;Her-2蛋白(++),Her-2基因扩增22例,符合率26.8%;Her-2蛋白(+++),Her-2基因扩增26例,符合率92.8%。结论 FISH检测准确率较高,IHC阴性和(+++)时与FISH结果一致性较好,可作为治疗依据,IHC(+)～(++)时仅能作初步筛查,明确Her-2情况仍需FISH检测。     

FISH在乳腺癌组织HER2/neu原癌基因检测上的应用及其临床意义的研究

目的对比研究乳腺癌中免疫组化法检测c-erbB2蛋白表达和荧光免疫原位杂交法(FISH)检测HER2基因扩增,并评估其临床价值。方法免疫组化染色法及FISH法分别检测42例乳腺癌组织中c-erbB2蛋白表达及HER2基因扩增状况,并进行对比分析。结果42例乳腺癌中c-erbB2蛋白表达( )者22例(52.38%),表达( )者20例(47.62%);42例乳腺癌中有20例(47.62%)出现HER2基因扩增,22例(52.38%)无扩增。两种方法的检测结果差异无统计学意义(P>0.05);但二者的吻合度一般,(k=0.430,P<0.05)。结论免疫组化可以作为临床治疗是否应用赫赛汀(Herceptin)的初筛,免疫组化呈阳性或强阳性的病例有必要进一步进行HER2基因扩增的检测,来确定临床治疗是否应用Herceptin,指导化疗药物的选择及判断患者的预后。     

乳腺癌患者血清中环氧化酶-2的表达及意义

目的：检测乳腺癌患者术前及术后血清环氧化酶-2(COX-2)的水平,探讨COX-2与乳腺癌临床病理特征的关系。方法：采用酶联免疫吸附试验(ELISA法)检测乳腺癌组30例、腺病组13例及对照组13例血清COX-2水平,分析不同病理特征患者的血清COX-2表达水平。结果：乳腺癌术前及术后组患者血清COX-2水平均明显高于对照组和腺病组(P<0.01);乳腺癌术前组患者血清COX-2水平明显高于术后组(P<0.01)。乳腺癌患者术前有淋巴结转移者血清COX-2水平高于无淋巴结转移患者(P<0.05),ER阴性的患者血清COX-2水平明显高于ER性患者(P<0.01),HER-2阳性患者血清COX-2水平明显高于HER-2阴性患者(P<0.01)。结论：乳腺癌患者血清中COX-2水平明显高于对照组及腺病组,血清COX-2水平的检测可作为乳腺癌诊断的一项筛选指标,也可用于鉴别乳腺良、恶性疾病。