人血管内皮细胞生长因子165基因转染大鼠内皮祖细胞的实验研究

目的探讨人血管内皮细胞生长因子165（hVEGF165）基因转染骨髓源性内皮祖细胞（EPCs）及对其影响。方法体外分离、培养、鉴定大鼠骨髓EPCs,ELISA检测转基因EPCs表达VEGF蛋白,MTT法检测对其增殖的影响。结果FITC-UEA-I和DiI-ac-LDL荧光双染证实分化的EPCs,脂质体介导pcDNA3-hVEGF165质粒转染组EPCs培养基上清中表达VEGF,hVEGF165基因转染促进EPCs增殖,注射转基因EPCs的大鼠皮下局部血管增加。结论hVEGF165基因可成功转染EPCs,并且具有血管内皮增殖刺激活性,为进一步研究hVEGF165基因修饰EPCs治疗血管内膜损伤性疾病提供实验依据。     

人VEGF166基因转染兔骨髓内皮祖细胞及对其增殖的影响

目的探讨人血管内皮生长因子165（hVEGF165）基因转染兔骨髓源性内皮祖细胞（EPCs）及对EPCs增殖的影响。方法体外分离、培养、扩增并鉴定EPCs,脂质体介导转染携带增强型绿色荧光蛋白标记的VEGF166质粒、空白质粒,同时经ELISA法检测转基因EPCs表达VEGF蛋白,并采用CCK-8法检测对其增殖的影响。结果FITC标记剂豆凝集素I和Dil标记的乙酰化低密度脂蛋白荧光双染证实正在分化的EPCs,同时经免疫组化法证实VEGF受体2FLk-1和VIII因子的表达;VEGF165质粒转染组EPCs上清液中表达VEGF166,VEGF165转染EPCs的转染率约22．5％;hVEGF165基因转染促进EPCs增殖。结论hVEGF165基因可成功转染EPCs,且可促进EPCs的增殖,为基因治疗血管性疾病提供了动物实验基础。     

人VEGF 165基因转染大鼠内皮祖细胞及对其增殖的影响

目的探讨人血管内皮细胞生长因子165（hVEGF165）基因转染骨髓源性内皮祖细胞（EPCs）及对EPCs增殖的影响。方法体外分离、培养、鉴定EPCs,脂质体介导pcDNA3-hVEGF165质粒转染组、pcDNA3空质粒转染组、空白对照组。ELISA检测EPCs表达VEGF蛋白,MTT法检测hVEGF165基因修饰对EPCs增殖的影响。结果FITC-UEA-Ⅰ和DiI-ac-LDL荧光双染证实分化的EPCs,脂质体介导pcDNA3-hVEGF165质粒转染组EPCs培养基上清中表达VEGF,hVEGF165基因转染促进EPCs增殖。结论EPCs可以成功转染hVEGF165基因,并且可促进EPCs的增殖,为进一步研究hVEGF165基因修饰EPCs治疗血管内膜损伤性疾病提供实验依据。     

人VEGF165基因转染兔骨髓内皮祖细胞及对其增殖的影响

目的 探讨人血管内皮生长因子165(hVEGF165)基因转染兔骨髓源性内皮祖细胞(EPCs)及对EPCs增殖的影响.方法 体外分离、培养、扩增并鉴定EPCs,脂质体介导转染携带增强型绿色荧光蛋白标记的VEGF165质粒、空白质粒,同时经ELISA法检测转基因EPCs表达VEGF蛋白,并采用CCK-8法检测对其增殖的影响.结果 FITC标记荆豆凝集素Ⅰ和Dil标记的乙酰化低密度脂蛋白荧光双染证实正在分化的EPCs,同时经免疫组化法证实VEGF受体2 FLk-1和Ⅷ因子的表达;VEGF165质粒转染组EPCs上清液中表达VEGF165,VEGF165转染EPCs的转染率约22.5%;hVEGF165基因转染促进EPCs增殖.结论 hVEGF165基因可成功转染EPCs,且可促进EPCs的增殖,为基因治疗血管性疾病提供了动物实验基础.     

血管内皮生长因子基因转染对放疗后组织血管生成的影响

目的：研究血管内皮生长因子基因转染对放疗后损伤区组织血管生成的影响。方法：用重组质粒pcDNA3／VEGF165转染大鼠右后肢照射区肌肉组织细胞,每次每只大鼠转染质粒200μg,共治疗2次,间隔2周,治疗结束后行VEGF蛋白检测、血管染色体视学图像分析、血管超微结构观察以及血管造影等。结果：经重组质粒pcDNA3／VEGF165基因转染后,照射区组织VEGF蛋白明显增高,微血管密度、平均截面积、平均管径和血管造影计数均达到正常组织水平,血管超微结构基本恢复正常。结论：VEGF基因转染治疗可逆转放疗对大鼠组织血管造成的损伤,有效地恢复血管生成能力。     

血管内皮生长因子基因修饰内皮祖细胞对内膜损伤血管修复的影响

目的 探讨人血管内皮细胞生长因子165(hVEGF165)基因转染骨髓源性内皮祖细胞(EPCs)及对EPCs增殖的影响,在体研究VEGF基因修饰EPCs对内膜损伤血管再内皮化的影响.方法 体外分离、培养、鉴定EPCs,脂质体介导pcDNA3-hVEGF165质粒转染组、pcDNA3空质粒转染组、空白对照组.ELISA法检测EPCs表达VEGF蛋白,MTT法检测hVEGF165基因修饰对EPCs增殖的影响.基因修饰EPCs移植到内膜损伤血管模型中,观察基因修饰对EPCs修复内膜损伤的效应.结果 FITC-UEA-Ⅰ和DiⅠ-acLDL荧光双染证实分化的EPCs,脂质体介导pcDNA3-hVEGF165质粒转染组EPCs培养基上清中表达VEGF,hVEGF165基因转染促进EPCs迁移、黏附和增殖.基因修饰EPCs促进损伤内膜修复.结论 EPCs可以成功转染hVEGF165基因,并且促进EPCs的迁移、黏附和增殖,增强EPCs对损伤内膜修复的能力.     

重组腺病毒介导血管内皮生长因子基因在骨髓间充质干细胞中的表达及其影响

目的观察重组腺病毒介导血管内皮生长因子基因(AdVEGF165)转染后大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)中血管内皮生长因子的表达情况以及腺病毒载体对大鼠骨髓间充质干细胞的生长影响情况。方法体外培养大鼠骨髓间充质干细胞,用腺病毒载体转染BMSCs。采用ELISA法检测血管内皮生长子因子(VEGF)的表达和分泌。转染后用胰酶消化传代培养,MTT法绘制细胞生长曲线。结果AdVEGF165转染组上清液中VEGF蛋白表达量极显著高于空白对照组(P<0.01)。且AdVEGF165转染BMSCs后,生长曲线与正常培养细胞无显著差异(P>0.05)。结论重组腺病毒载体能够在BMSCs中介导VEGF的表达,且对BMSCs生长无影响。     

氧相关HRE启动子控制下表达hVEGF165基因重组2型腺相关病毒的获得及鉴定

目的包装及鉴定低氧反应元件（HRE）启动子控制下缺氧诱导目的基因hVEGF165基因表达的2型重组腺相关病毒。方法磷酸钙三质粒共转染方法将pAAV—HRE9-VEGF165、pAAV—Rep／cap、pHelper质粒转染HEK293T细胞，制备2型重组腺病毒相关病毒（rAAV2）。分离培养S—D大鼠心肌细胞，转染rAAV，细胞固定后做免疫细胞荧光染色，检测细胞内血管内皮细胞生长因子（VEGF165）蛋白的表达。结果pAAV—HRE9-VEGF165质粒经测序鉴定，结果与NCBIGenBank公布的人VEGF165 eDNA核苷酸序列（AB021221）完全一致，含HRE启动子及目的基因hVEGF165的2型重组非复制型腺相关病毒包装成功，可感染原代培养的大鼠心肌细胞，缺氧可诱导VEGF165蛋白表达。结论成功包装并鉴定了rAAV—HRE9-hVEGF165载体，可有效转染心肌细胞，VEGF165基因的适时表达，为缺血性心肌疾病的“分子搭桥”治疗提供了更可能的安全性。     

phVEGF165原位转染缺血肌肉后hVEGF及其蛋白的表达

目的：探讨慢性下肢动脉缺血的基因治疗。方法：选用血管内皮生长因子（VEGF）作为治疗基因，通过建立实验兔慢性下肢动脉缺血模型，将构建的人VEGF165cDNA真核表达载体phVEGF165注入缺血肌肉内，采用PT-PCR和原位杂交法测定肌肉hVEGF165基因表达，采用组化和Western印迹法测定其蛋白产生的表达。结果：骨骼肌细胞外源hVEGF165基表达量于注射后1周达到高峰，持续2-3周。蛋白表达于注射后2周达到高峰，维持至注射后4周。结论：骨骼肌细胞能摄取并表达外源性hVEGF165基因，并能进一步合成分泌hVEGF165蛋白。PhVEGF165肌肉直接注射的作用时间有限、范围局限、使用安全性高。     

转染血管内皮细胞生长因子基因的同种异体骨髓间充质干细胞移植大鼠缺血心肌的实验研究

目的 腺病毒介导血管内皮细胞生长因子基因（AdVEGF165）转染同种异体大鼠骨髓间充质干细胞（BM-SCs），移植到大鼠缺血心肌后，观察其对心功能的影响。方法 体外培养同种异体大鼠BMSCs，用AdVEGF165转染同种异体大鼠BMSCs，采用ELISA法检测血管内皮细胞生长因子（VEGF）的表达和分泌。结扎Wistar大鼠冠状动脉前降支，4周后随机将其分为4组，组Ⅰ：移植转染后的BMSCs；组Ⅱ：移植单纯BMSCs；组Ⅲ：心肌内注射AdVEGF。（基因治疗）；组Ⅳ：心肌内注射DMEM（对照组）。4周后通过超声检查观察心脏射血分数（EF）变化，评价其对心功能的影响；免疫组织化学观察移植的BMSCs在局部存活、分化情况。结果 ELISA检测提示：转染后BMSCs的培养上清液中有大量VEGF表达，较未转染组差异有极显著性意义（P〈0．01）。超声检查结果提示：组IEF改善幅度较组Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ明显（均P〈0．01）。免疫组织化学检测提示：组Ⅰ、Ⅱ中大部分移植细胞能够在移植处存活并转化为心肌细胞。结论 转染AdVEGF165的同种异体BMSCs能有效修复大鼠心肌，并能改善其心功能。     

Transplantation of bone marrow stromal cells overexpressing human vascular endothelial growth factor 165 enhances tissue repair in a rat model of radiation-induced injury

Background The multilineage differentiation potential ability of bone marrow stromal cells （BMSCs） showed greatpotential in tissue engineering, while vascular endothelial growth factor 165 （VEGF165） promotes vasculogenesis andfurther promotes tissue regeneration. This study aimed to assess the ability of rat BMSCs expressing human VEGF A 165（hVEG165） to promote tissue repair in rat model of radiation-induced injury.     

光化学反应组织黏合技术与组织修复

缝合术是临床常规应用的组织修复技术,但缝线(针)作为一种异物,可能引发患者不同程度的免疫反应,也是术后感染的诱因之一.缝合作为额外的损伤,可增加局部组织炎症反应并残留针眼瘢痕.文章介绍一种新的免缝合组织黏合技术--光化学反应组织黏合技术,即利用可见光激活光敏剂后使组织胶原之间形成交联而黏合组织.目前,该项技术已应用于皮肤、血管、神经、角膜等组织的损伤修复,可明显减轻炎症反应和瘢痕形成,降低血管吻合后的渗漏及吻合口狭窄的发生率,并能促进神经修复后功能的恢复.     

光化学反应组织黏合技术与组织修复

缝合术是临床常规应用的组织修复技术,但缝线（针）作为一种异物,可能引发患者不同程度的免疫反应,也是术后感染的诱因之一。缝合作为额外的损伤,可增加局部组织炎症反应并残留针眼瘢痕。文章介绍一种新的免缝合组织黏合技术——光化学反应组织黏合技术,即利用可见光激活光敏剂后使组织胶原之间形成交联而黏合组织。目前,该项技术已应用于皮肤、血管、神经、角膜等组织的损伤修复,可明显减轻炎症反应和瘢痕形成,降低血管吻合后的渗漏及吻合口狭窄的发生率,并能促进神经修复后功能的恢复。     

激光医学与组织修复

激光在医学领域应用广泛。在组织修复方面,弱激光可通过生物刺激作用促进细胞生长;激光经光致聚合封闭创面,并通过光致氧化作用有效控制创面感染;点阵式激光能够促进瘢痕重塑。相信随着研究的深入和治疗方法的不断优化,激光在组织修复方面的应用将越来越广泛。 更多还原     

激光医学与组织修复

激光在医学领域应用广泛。在组织修复方面,弱激光可通过生物刺激作用促进细胞生长;激光经光致聚合封闭创面,并通过光致氧化作用有效控制创面感染;点阵式激光能够促进瘢痕重塑。相信随着研究的深入和治疗方法的不断优化,激光在组织修复方面的应用将越来越广泛。     

益母草对产后子宫内膜炎大鼠内膜止血修复的实验研究

目的 建立产后大鼠子宫炎症模型,从分子生物学角度探讨益母草对产后子宫复旧的内在机制。方法 将大鼠随机分为4组：空白对照组、模型组、益母草组、三七总皂苷组。建立产后子宫炎症模型,用三七总皂苷作阳性对照,采用ELISA法对各组大鼠血清肿瘤坏死因子-α（TNF-α）的量进行测定,对各组大鼠的子宫组织进行HE染色观察,同时用免疫组化法检测子宫组织中基质金属蛋白酶-13（MMP-13）、金属蛋白酶组织抑制因子-1（TIMP-1）、I型胶原（collagen I）的表达。结果 模型组血清TNF-α水平明显高于空白对照组;与模型组比较,益母草组血清TNF-α水平显著降低。模型组与空白对照组比较,MMP-13、TIMP-1明显升高,collagen I表达上调;与模型组比较,益母草组MMP-13无明显变化,TIMP-1明显降低,collagen I表达下降。结论 益母草可能使产后炎症子宫的TNF-α水平下降,下调TIMP-1的表达,启动止血修复机制,并加快细胞外基质（ECM）降解,从而加速产后子宫复旧。     

正常和肿瘤组织中ZNF165 mRNA的表达及其自发性抗体检测

目的:分析正常和肿瘤组织中ZNF165的表达及其在肝癌患者体内诱导产生的自发性体液免疫反应.方法:采用RT-PCR和定量PCR方法检测16种正常和4种肿瘤(肝癌、胃癌、结肠癌、肺癌)组织中ZNF165 mRNA及表达丰度;将ZNF165基因在原核细胞中进行蛋白表达,亲和层析法纯化重组ZNF165蛋白.Western blot方法对ZNF165在82例肝癌患者体内诱导的自发性抗体进行检测.结果:正常组织中ZNF165 mRNA只在睾丸组织表达,肝癌、胃癌、结肠癌和肺癌组织中ZNF165 mRNA阳性率分别为52.4%、 42.8%、 42.8%和21.4%.定量 PCR结果显示ZNF165 mRNA以高水平在肝癌组织与睾丸组织中表达,而在配对的癌旁组织与其他正常组织中仅存在很低水平的表达(P均＜0.01).82例肝癌患者血清中4例与ZNF165蛋白出现免疫反应,阳性率4.9%;36例正常人血清均为阴性.结论:ZNF165是一个新的肿瘤-睾丸抗原基因,它在机体内可诱导体液免疫反应,有可能作为肿瘤免疫治疗的候选抗原.     

人参辅酶Q10防晒霜对紫外线损伤小鼠的保护作用

目的 研究人参辅酶Q₁₀防晒霜对紫外线损伤小鼠的保护作用。方法 36只小鼠随机分组,皮肤脱毛后分别涂抹相应霜剂,正常对照组不做任何处理,其他组进行紫外线照射,连续8周后,小鼠眼球取血处死进行指标检测。结果 与正常组小鼠比较,模型组小鼠皮肤粗糙有皱纹、且角质层脱落,T-SOD与GSH-Px活力均明显下降,白细胞数与MDA含量明显增高（P<0.05）;与模型组比较,人参辅酶Q₁₀防晒霜组小鼠皮肤光滑、角质层没有脱落,T-SOD活力、红细胞与血红蛋白含量上升,白细胞数量、MDA含量与明显下降（P<0.05）,阳性对照组小鼠皮肤光滑、角质层没有脱落,GSH-Px活力上升,白细胞数量、MDA含量下降（P<0.05）。结论 人参辅酶Q₁₀防晒霜具有抗紫外线损伤的作用,其预防效果与甲氧基肉桂酸辛酯辅酶Q₁₀霜剂相当。     

Smad泛素化调节因子与组织修复及器官纤维化的研究进展

泛素（ubiquitin）因其在整个生物界广泛存在而得名.泛素依赖性的蛋白质降解系统通过降解缺陷无用的蛋白质和失活的各种细胞器,影响着机体的染色体结构与功能、遗传信息的复制与表达、细胞信号传导与调节等常见生命现象.转化生长因子β（transforming growth factor β）及TGF-β/Smad信号传导通路在组织修复及器官纤维化过程中起重要作用.TGF-β/Smad信号传导调节机制复杂,其中探讨TGF-β/Smad信号传导通路的终止机制是近年研究热点.随着泛素-蛋白水解酶复合体可阻断TGFβ/Smad信号分子作用的发现,一类特异性介导Smads泛素化降解的关键泛素酶-Smads泛素化调节因子（Smad ubiquitination regulatory factors,Smurfs）逐渐为学者所重视.本文对Smurfs与组织修复、纤维化过程中的生理及病理研究进展作如下综述.