芦丁通过抑制TXNIP/TRX-ROS信号通路促进人脐带间充质干细胞成骨分化

目的 探究芦丁对人脐带间充质干细胞(hUCMSCs)成骨分化的作用，并探究其机制。方法 不同浓度芦丁处理成骨分化的hUCMSCs,通过CCK-8检测细胞增殖活性，通过茜素红染色检测细胞矿化结节形成，通过碱性磷酸酶染色检测细胞碱性磷酸酶活性，通过Western blot检测细胞成骨相关蛋白和TXNIP/TRX信号通路蛋白表达，通过ROS探针检测细胞ROS水平。结果 芦丁剂量依赖的促进hUCMSCs增殖，能增加hUCMSCs矿化结节形成及ALP活性；芦丁处理增加hUCMSCs成骨相关蛋白RUNX2和OPN蛋白表达水平，降低hUCMSCs ROS水平和TXNIP蛋白表达，增加TRX蛋白表达。结论 芦丁促进hUCMSCs增殖及成骨分化，其机制可能与其抑制TXNIP/TRX-ROS信号通路有关。     

Effects of RNA silenced HLA-A2 in hBMSCs on secretory function of human allogeneic T lymphocytes and osteogenic ability of hBMSCs

目的:探讨应用RNAi技术沉默HLA-A2表达的人骨髓间充质干细胞(hBMSCs)对人异体T淋巴细胞分泌功能的调节作用及诱导成骨能力的影响.方法:用siRNA转染至第3代hBMSCs将转染前、后各组的hBMSCs与PHA刺激的人异体T淋巴细胞共同培养,用ELISA检测各培养组上清液γ干扰素(IFN-γ)、白细胞介素2(IL-2)的水平;对2组细胞进行成骨诱导分化培养,观察细胞形态变化;碱性磷酸酶染色、计数和Vor- Kossa染色、计数检测成骨能力.结果:hBMSCs表面抗原CD44、CD166阳性.转染前hBMSCs的HLA-A2表达为阳性,转染后hBMSCs的HLA-A2表达为弱阳性;转染前hBMSCs的HLA-A2蛋白表达量高于转染后的HLA-A2蛋白表达量.转染前、后的hBMBCs均能抑制人T淋巴细胞分泌IFN-γ、IL-2,转染前、后比较有差异.ALP染色显示转染前、后的hBMSCs均出现胞质呈棕黑色的阳性反应,ALP活性检测结果显示2组之间无差异.Vor-Kossa染色显示转染前、后的hBMSCs均有钙结节形成,统计2组之间无差异.结论:应用RNAi技术沉默HLA-A2表达的hBMSCs可以抑制PHA刺激人T淋巴细胞分泌因子IFN-γ、IL-2的水平,转染后的hBMSCs比未转染的hBMSCs抑制作用更强.应用RNAi技术沉默HLA-A2表达的hBMSCs,不影响其成骨能力.     

3种组织来源的间充质干细胞体外成骨能力的比较

目的比较成人骨髓间充质干细胞(BMSCs)、人脐带间充质干细胞(UC-MSCs)和人胎盘间充质干细胞(P-MSCs)的成骨能力。方法用含10%胎牛血清的DMEM/Ham's F-12培养液培养3种MSCs,CCK8法检测增殖能力,流式细胞仪鉴定3种细胞。碱性磷酸酶(ALP)和茜素红染色观察细胞经成骨诱导后成骨分化蛋白-ALP的分泌和矿化钙结节的沉积。实时荧光定量PCR(RT-q PCR)法检测MSCs骨再生相关基因的表达。Western blot方法检测MSCs成骨再生相关基因的蛋白表达。结果 MSCs在第3天进入对数增殖期。3种细胞的表面标志物阳性率:CD44、CD90和CD105均高于98%。3种MSCs成骨诱导9 d时,3种MSCs的实验组均表达大量成骨分化蛋白-ALP,成骨诱导18 d时3种MSCs均呈现较好的矿化能力;3种MSCs成骨诱导9 d时,实验组RUNX2和ALP基因显著性高表达(P0.05),成骨诱导18 d时,实验组RUNX2和骨钙素(OCN)亦显著性高表达(P0.05);3种MSCs成骨诱导9 d时,实验组均检测到RUNX2和ALP的蛋白表达;成骨诱导18 d时,实验组细胞亦检测到RUNX2和OCN的蛋白表达。结论 UC-MSCs和P-MSCs具有良好的成骨分化能力,有望作为骨组织工程的种子细胞用于治疗骨缺损。     

携带人骨形态发生蛋白2可诱导慢病毒载体转染人脐带间充质干细胞的成骨

背景：tet-on慢病毒载体除了具有传统慢病毒载体的优点外,因载入一个反向反式激活因子,可通过强力霉素或其类似物对目的基因的表达进行调控。 目的：观察携带骨形态发生蛋白2的tet-on慢病毒载体对人脐带间充质干细胞转染表达及稳定转染后成骨的影响。 方法：取第3代人脐带间充质干细胞分组培养：实验组稳定转染携带骨形态发生蛋白2的tet-on慢病毒载体,并加入10 mg/L强力霉素;未加强力霉素组：同实验组但不加强力霉素;空病毒组转染携带绿色荧光蛋白的慢病毒载体;空白对照组未进行任何处理。 结果与结论：①骨形态发生蛋白2表达：实验组、未加强力霉素组均有表达,且实验组表达量高于未加强力霉素组(P < 0.05);空病毒组、空白对照组未见表达。②碱性磷酸酶染色：实验组可见细胞胞浆中出现大量红色或红棕色颗粒,未加强力霉素组可见少量红色颗粒,实验组碱性磷酸酶活性高于未加强力霉素组(P < 0.05);空病毒组、空白对照组未见明显红色颗粒。③茜素红染色：实验组、未加强力霉素组均可见钙结节形成,实验组较未加强力霉素组矿化结节数量多,面积更大;空病毒组、空白对照组未见明显矿化结节形成。表明携带骨形态发生蛋白2的慢病毒载体可稳定转染人脐带间充质干细胞,显著增强其成骨能力。     

酪蛋白激酶2相互作用蛋白1调控骨质疏松大鼠骨髓间充质干细胞的成骨能力北大核心

背景:目前对酪蛋白激酶2相互作用蛋白1(casein kinase 2-interaction protein-1,CKIP-1)分子机制的体外研究主要集中在基因敲除小鼠来源成骨细胞或骨髓间充质干细胞,鲜见报道骨质疏松模型大鼠来源骨髓间充质干细胞中CKIP-1表达的研究。目的:探讨下调CKIP-1基因前后骨质疏松状态骨髓间充质干细胞成骨分化能力的变化。方法:用维甲酸诱导雌性SD大鼠骨质疏松模型,采用全骨髓贴壁法体外培养骨质疏松组、正常组大鼠骨髓间充质干细胞。成骨诱导后进行茜素红染色、碱性磷酸酶染色及实时定量RT-PCR检测骨桥蛋白、Runx2 mRNA的相对表达,实时定量RT-PCR检测成骨诱导过程中2组细胞中CKIP-1的动态表达;通过基因转染沉默CKIP-1基因,成骨诱导后进行茜素红染色、碱性磷酸酶染色及实时定量RT-PCR检测骨桥蛋白、Runx2 mRNA的相对表达。结果与结论:①与正常组相比,骨质疏松组骨髓间充质干细胞茜素红染色钙结节定量、碱性磷酸酶活性及骨桥蛋白、Runx2的mRNA水平降低(P<0.05),骨质疏松组骨髓间充质干细胞中CKIP-1基因动态表达水平总体偏高;②与未下调CKIP-1的骨质疏松组骨髓间充质干细胞相比,下调CKIP-1基因表达后,骨质疏松组骨髓间充质干细胞茜素红染色钙结节定量、碱性磷酸酶活性及骨桥蛋白、Runx2的mRNA水平明显升高(P<0.05);③结果表明,维甲酸诱导的骨质疏松大鼠骨髓间充质干细胞成骨能力降低,下调CKIP-1基因可以部分提高其成骨分化能力。     

miR-302对脂肪间充质干细胞向成脂和成骨分化的调控

背景：间充质干细胞具有自我更新能力,在一定条件下能够分化为一定谱系的细胞,但很多机制至今未明。 目的：探究miR-302b对脂肪间充质干细胞向成脂和成骨分化的调控作用。 方法：miR-302模拟物转染作用于脂肪间充质干细胞进行成骨成脂诱导,对照组转染miR-302阴性对照模拟物miR-NC。采用碱性磷酸酶染色及活性分析、茜素红染色、油红O染色和萃取实验观察miR-302上调对脂肪间充质干细胞成骨和成脂分化的影响,以及Western blot检测miR-302上调后成骨分化转录因子Runx2和成骨早期标志物碱性磷酸酶在脂肪间充质干细胞中的表达。 结果与结论：①碱性磷酸酶沉淀物在miR-302过表达细胞中产生的量均明显少于对照组,进一步发现miR-302过表达实验组碱性磷酸酶活性明显低于对照组(P < 0.05)。②miR-302过表达明显抑制了矿物质沉积钙结节的形成,miR-302上调实验组橘红色的钙结节明显少于对照组。③miR-302过表达实验组油红O染色阳性的细胞数明显高于对照组,进一步表明实验组细胞萃取得到的油红O吸光度值明显上升(P < 0.05)。④成骨诱导第6天时成骨分化转录因子Runx2和成骨早期标志物碱性磷酸酶在miR-302过表达的细胞中都有不同程度的下降。⑤以上结果表明miR-302的上调能够抑制脂肪间充质干细胞的成骨分化,同时促进其向成脂分化。miR-302在间充质干细胞向成脂和成骨分化平衡发挥了双向调控作用。中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞;骨髓干细胞;造血干细胞;脂肪干细胞;肿瘤干细胞;胚胎干细胞;脐带脐血干细胞;干细胞诱导;干细胞分化;组织工程     

人骨髓间充质干细胞向成骨细胞分化中26RFa的作用

背景:研究表明26RFa在骨形成、痛觉、内分泌、心血管以及能量代谢等方面都有重要的调节作用。目的:观察26RFa在成骨培养体系中对人骨髓间充质干细胞增殖分化的影响。方法:通过MTT实验,以此确定26RFa对人骨髓间充质干细胞是否有促增殖作用及其起作用的最大活性浓度;将人骨髓间充质干细胞接种于6孔培养板上,实验分为2组:实验组含有10-11mol/L的26RFa,对照组不含26RFa。取成骨诱导8,12,16 d细胞用碱性磷酸酶试剂盒测定细胞内碱性磷酸酶活性;成骨诱导21,28 d后行茜素红染色和Von Kossa染色,计算每张玻片钙化结节数,Western blot检测cbfa1的表达。结果与结论:成骨诱导8,12,16 d后细胞内碱性磷酸酶活性实验组高于对照组(P0.05,P0.01,P0.05);21,28 d后茜素红染色和Von Kossa矿化结节数实验组均高于对照组;实验组细胞cbfa1表达明显高于对照组(P0.05)。说明在适宜的培养条件下,26RFa可促进人骨髓间充质干细胞向成骨细胞分化。     

MicroRNA-373 regulates the osteogenisis of human adipose tissue-derived Flk1 + mesenchymal stem cells

目的 用microRNA-373(miR-373)的模拟物转染人脂肪来源Flk1+间充质干细胞(MSC),探讨microRNA-373对Flk1+ MSC成骨分化的影响.方法 利用脂质体作为载体,用miR-373模拟物瞬时转染Flk1+ MSCs,然后对其进行成骨诱导,碱性磷酸酶(ALP)染色和茜素红染色观察成骨情况,real-time PCR技术检测成骨标志性基因的表达.结果ALP染色和茜素红可见明显差异；real-time PCR检测结果显示,实验组(miR-373组)成骨标志基因runt相关转录因子2(RUNX2)(0.543±0.021)、ALP(0.556 ±0.024)和骨钙蛋白(OC) (0.499±0.017)的表达都明显低于对照组(NC组)(P＜0.05).结论 miR-373参与调控Flk1+ MSC向骨细胞分化.     

聚左旋乳酸多孔支架材料复合人脐带间充质干细胞的异位成骨

背景：聚左旋乳酸材料有良好的支撑作用,具有三维模板作用,为细胞黏附、增殖和分化提供场所。 目的：以人脐带间充质干细胞作为种子细胞、多孔聚左旋乳酸作为支架材料构建组织工程化骨异位成骨的可行性及效果。 方法：制备聚左旋乳酸多孔支架材料。用酶消化法分离培养人脐带间充质干细胞,传代培养、鉴定及诱导成骨,ALP染色检测骨向分化。将人脐带间充质干细胞与聚左旋乳酸材料复合培养,MTT及扫描电镜检测细胞增殖和细胞材料复合情况,应用矿化诱导7 d的细胞材料复合物植入兔大腿肌袋模型观察组织工程骨的异位成骨能力。4周后应用组织学观察新骨的形成情况。 结果与结论：与聚左旋乳酸多孔支架材料复合的人脐带间充质干细胞生长良好,细胞增殖未受影响,扫描电镜示细胞在支架材料上吸附、生长良好。体外对人脐带间充质干细胞骨向诱导后ALP染色阳性。矿化诱导的人脐带间充质干细胞复合聚左旋乳酸材料植入动物4周时,形成明显的块状组织,质地坚硬。组织学检查见新形成的组织有成骨细胞及其周围有血管长入。提示聚左旋乳酸多孔材料对种子细胞人脐带间充质干细胞的增殖无影响;人脐带间充质干细胞细胞与聚左旋乳酸多孔材料复合体可在异位形成骨组织。     

bFGF对人脐带间充质干细胞增殖及胶原产生的影响

 目的：观察碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）对人脐带间充质干细胞（hUCMSCs）增殖及I、III型胶原产生的影响。方法：贴壁培养hUCMSCs, 流式细胞术分析其表面标记(CD45、CD34、CD105、CD29和HLA-DR),成脂及成骨诱导其分化,以鉴定其为间充质干细胞,确定bFGF促增殖最适浓度为20 μg/L。分为实验组和对照组,实验组添加 bFGF (20  μg/L) 于DMED/F12培养液中,对照组使用DMED/F12常规培养液。MTT法测定hUCMSCs 存活和增殖能力, 分析bFGF 对hUCMSCs 增殖的影响,RT-PCR测定其I、III型胶原 mRNA的变化;Western blotting测定其I、III型胶原蛋白的含量。结果：MTT生长曲线提示bFGF促进hUCMSCs的增殖。用含与不含bFGF培养基培养的hUCMSCs 均表达 CD29,不表达 CD34、CD45和 HLA-DR,油红O染色和茜素红染色阳性。RT-PCR结果显示了实验组 I、III型胶原mRNA表达较对照组减少(P<0.05)。Western blotting检测结果显示了实验组I、III型胶原蛋白的表达较对照组减少(P<0.05)。结论：bFGF可显著促进hUCMSCs增殖,且不改变细胞的表面标志物表达。bFGF对hUCMSCsⅠ、Ⅲ型胶原mRNA和蛋白的表达呈抑制效应,提示其在促进创面愈合的同时可能不会引起Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白沉积,从而减少瘢痕增生。     

新型化学转染试剂对人脐带间充质干细胞的转染优化

背景：人脐带间充质干细胞的基因修饰技术多种多样,它们在效率、可靠性及安全性方面各有不同。 目的：对比3种新型化学转染试剂在人脐带间充质干细胞中的瞬时转染效率。 方法：采用Fugene HD、Lipofectamine LTX及Attractene分别转染人脐带间充质干细胞,荧光显微镜下观察阳性细胞,流式细胞术分析不同转染试剂的转染效率,锥虫蓝染色观察转染后人脐带间充质干细胞的生存率。 结果与结论：Lipofectamine LTX转染效率最高,显著高于Fugene HD和Attractene[(32.50±2.12)%,(4.30±0.64)%,(1.70±0.08)%,P < 0.05]。Lipofectamine LTX转染后的细胞生存率略低于Fugene HD及Attractene,但差异无显著性意义[(69.8±6.3)%,(92.4±4.2)%,(106.6±3.9)%,P > 0.05]。提示Lipofectamine LTX是人脐带间充质干细胞较为理想的化学转染试剂。     

乙型肝炎病毒上调HepG2细胞表面HLA-I表达的机制

目的 :探讨HBV野生株 (WT)及核壳蛋白变异株L97、V6 0上调HepG2细胞表面HLA I表达的机制。方法 :将已构建的重组表达载体EBO WT、EBO L97及EBO V6 0 ,分别经脂质体介导转染HepG2细胞 ,以空载体EBO作为对照。用RT PCR半定量法 ,检测细胞内HLA A基因及抗原提呈相关基因LMP2、TAP1和tapasinmRNA的表达 ;用Westernblot测定细胞内HLA I蛋白的表达。结果 :3株HBV重组表达载体转染的细胞 ,均呈现明显的HLA AcDNA的PCR扩增条带及HLA I蛋白条带 ,但其条带的强度有差异 ,EBO L97、EBO WT和EBO V6 0依次减弱。TAP1cDNA扩增带清晰 ,3株HBV间无明显差别。对照细胞未呈现HLA A的条带和仅呈现微弱的TAP1扩增带。各转染细胞均未检出LMP2及tapasinmRNA的表达。 结论 :HBV能诱导HepG2细胞内HLA I分子的合成量 ,使TAP1基因转录增强 ,HLA I的表达上调。核壳蛋白变异株L97和V6 0 ,可使宿主细胞内HLA ImRNA和其蛋白的表达水平发生变化     

5-氮杂胞苷诱导人脐带间充质干细胞向心肌样细胞的分化

背景：5-氮杂胞苷能诱导人脐带间充质干细胞分化为心肌细胞。 目的：以5-氮杂胞苷诱导人脐带间充质干细胞分化为心肌细胞。 方法：采用贴壁培养法分离、纯化人脐带间充质干细胞,以5-氮杂胞苷诱导第3代人脐带间充质干细胞分化为心肌样细胞。 结果与结论：诱导前人脐带间充质干细胞呈典型的梭形;诱导后一二周细胞体积变大,三四周后相邻细胞间胞膜有接触,逐渐相连呈肌管状,细胞胞质内可见细丝样结构。诱导4周后免疫组织化学鉴定人脐带间充质干细胞cTnI表达阳性,未诱导细胞cTnI表达阴性;诱导组Nkx2.5、GATA 4 mRNA表达水平较未诱导组显著增加(P < 0.05)。提示5-氮杂胞苷可能通过调控GATA4、Nkx2.5基因的表达促进人脐带间充质干细胞分化为心肌样细胞,并促进其成熟。     

转肝细胞生长因子的脐带间质干细胞移植促进大鼠脑出血后髓鞘再生

目的： 研究转人肝细胞生长因子（hHGF）人脐带间质干细胞(hUCMSCs)移植对脑出血后脱髓鞘再生和神经功能恢复的影响。方法：SD大鼠60只,随机分为3组：脑出血＋hUCMSCs-HGF组、脑出血＋hUCMSCs 组和脑出血＋PBS组,每组20只。胶原酶诱导建立脑出血模型,据不同组别于术后7 d 立体定向下进行侧脑室相应的移植。分别于移植前1 d 和移植后1、7、14、21、28、35 d 利用mNSS (modified neurological severity scores)评分检测大鼠神经功能情况,应用劳克坚牢蓝检测脑损伤区的神经纤维恢复情况,利用免疫组化和Western blotting检测髓鞘碱性蛋白（MBP）的表达变化。结果：脑出血模型大鼠术后3周（即移植术后2周）mNSS评分检测的神经功能,hUCMSCs-HGF组和hUCMSCs组的神经功能改善较PBS组明显提高（P＜0.05）,而且hUCMSCs-HGF组较hUCMSCs组神经改善更加显著（P＜0.05）。hUCMSCs-HGF组的神经纤维修复较其它组明显改善,髓鞘碱性蛋白的表达较其它组亦明显提高（P＜0.01）。结论：转hHGF人脐带间质干细胞移植较单纯细胞移植能明显提高神经纤维髓鞘再生能力,促进脑出血后神经功能缺失的修复。     

siRNA沉默HLA-A2表达的hMSCs对人异体T淋巴细胞分泌IFN-γ和IL-2功能的影响

目的探讨应用siRNA技术下调HLA-A2表达的人骨髓间充质干细胞(human mesenchymal stemcells,hMSCs)对人异体T淋巴细胞分泌功能的调节作用。方法从成人骨髓中分离和培养hMSCs,并且通过免疫细胞化学检测其表面标志;利用人工合成HLA-A2靶向小分子干扰RNA转染至第3代hMSCs,然后将转染前后的hMSCs,与经植物血凝素(PHA)刺激的人异体T淋巴细胞共同培养。用ELISA分别检测各培养上清液中T淋巴细胞分泌IFN-γ和IL-2的水平。结果原代培养3d后,约70%hMSCs贴壁生长,7d后细胞迅速增殖,进入对数生长期,14d左右进入平台期,第3代细胞多呈梭形生长,形态比较均一,hMSCs表面抗原CD44、CD166阳性。HLA-A2靶向小分子干扰RNA转染3天后,可见少量细胞死亡,免疫荧光染色可见细胞核和部分胞浆呈阳性表达。转染HLA-A2靶向小分子干扰RNA的和未转染的hMSCs均能抑制人T淋巴细胞分泌IFN-γ和IL-2,转染后的hMSCs抑制作用强于未转染的hMSCs(<0.05)。结论体外沉默HLA-A2基因表达可增强hMSCs抑制PHA刺激人T淋巴细胞分泌因子。     

Differential expression of the HLA-B7 and the HLA-A2 gene in transfected mouse L(tk-) cells after stimulation by mouse interferon

Mouse L(tk-) cells were transfected with recombinant genomic clones encoding the human major histocompatibility antigens HLA-A2 or HLA-B7. The exposure of 15 different transfected cell clones to mouse interferon resulted in an up to 2.9-fold enhancement of the HLA-A2 antigen at the cell surface but in an up to 5.5-fold enhancement of the HLA-B7 antigen as shown by quantitative radioimmunoassay with monoclonal antibodies directed against different HLA epitopes. Using the HLA-Bw6 specific monoclonal antibody 2BC4, an even higher increase of the HLA-B7 antigen (up to 12-fold) could be observed. This higher inducibility of an HLA-B versus HLA-A locus gene may reflect distinct regulatory mechanism controlling the expression of HLA class I subregion antigens.     

小鼠睾丸支持细胞对人脐带间充质干细胞增殖能力的影响

目的 探讨睾丸支持细胞（SCs）对体外培养人脐带间充质干细胞(hUCMSCs）增殖能力的影响。方法 体外分离培养并鉴定hUCMSCs和SCs;
Transwell-insert系统共培养SCs 和hUCMSCs（共培养组）;普通DMEM-F12培养基培养的hUCMSCs作为对照（对照组）;添加细胞因子
(白细胞介素-3,粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子) 的DMEM-F-12培养基培养的hUCMSCs作为阳性对照 (细胞因子组）。用流式细胞术、免疫细胞
化学等方法检测SCs对hUCMSCs增殖、细胞周期、表面标记分子表达的影响,透射电镜观察细胞超微结构。结果 与对照组相比,共培养组和细胞
因子组hUCMSCs增殖明显加快,以共培养组尤为显著（P<0.05）;共培养组和细胞因子组hUCMSCs 表面分子CD29和CD105阳性率均增高;细胞周
期分析显示,共培养组G₀/G₁期细胞数与对照组相比无明显改变,而细胞因子组略有减少。透射电镜观察对照组与共培养组细胞均呈现原始细胞
的超微结构特点。结论 SCs共培养可促进hUCMSCs增殖,且共培养后仍保持其干细胞特性。     

Combined transfection with EBV-specific epitopes and HLA-A2 genes is more effective than separate transfection in promoting CTL lysis against nasopharyngeal carcinoma

To augment specific cytotoxic T lymphocyte(CTL)lysis is a promising strategy for cancer therapy,in this study,we examined the boosting effect of CTLs upon autologous lymphoblastoid B cell lines(LCLs)transfected withdiverse plasmids,to explore the possible CTL-based immunotherapy of nasopharyngeal carcinoma(NPC).FCM analysis displayed rather high ratio(>30%)of successfully transfected LCLs by utilizing the DMRIE-Ckit.CTL assays demonstrated that substantially higher ratio of CTL specific lysis was observed upon the LCLstransfected with both expression vectors encoding EBV-specific epitopes and their presentation moleculeHLA-A2,in contrast with those transfected separately.By transfecting the vector encoding HLA-A2 alone,onlythe LCLs of HLA-A2~+ donors elicited markedly higher CTL lysis.CTL assays also showed that there existed nomarked differences upon transfection by either different vectors(pcDNA3,pNGVL3 or pNGVL3-hFlex),ordifferent EBV-derived peptides(LMP_2Pepl or LMP_2Pep2),or with or without the doubled DNA sequenceencoding peptides.This study indicated a promising immunotherapy strategy on NPC through boosting andeliciting the EBV-specific CTL activation by transferring vectors encoding both EBV-specific epitopes and theirpresentation molecule HLA-A2 into autologous LCL,the presentation cells of MHC/peptide tetramericcomplex.Cellular & Molecular Immunology.2004;1(3):229-234.     

应用肺癌细胞系诱生肿瘤特异性T细胞的初步研究

目的 探讨通过构建表达人白细胞抗原(HLA)HLA-A2的肺癌细胞系以诱生肿瘤特异性细胞毒性T淋巴细胞(CTL).方法 将编码HLA-A2基因的质粒pcDNA3.1D/V5转染人肺腺癌A549细胞,得到能够稳定表达HLA-A2的肺腺癌细胞系.将其用丝裂霉素(MMC)处理后,行混合淋巴细胞肿瘤细胞培养(mixed lymphocyte tumor cell culture,MLTC)以诱导HLA-A2 的健康人外周血淋巴细胞(peripheral blood lymphocyte, PBL)产生肿瘤特异性CTL,并通过特异性杀伤实验、单克隆抗体阻断实验、淋巴细胞增殖实验进行检验.结果 HLA-A·0201基因在A549细胞中的瞬时与稳定表达率分别为0.32、0.91.成功获得稳定表达HLA-A2的A549细胞株.MLTC诱导最终产生4组T淋巴细胞,且符合肿瘤特异性CTL的形态学特征与大量增殖的特点,但CTL杀伤实验和单克隆抗体阻断实验结果示肿瘤细胞未被有效杀伤,可能与肿瘤特异性CTL的数量较少及活性较低有关.结论 本研究通过构建表达HLA-A2的肺癌细胞系,对建立肿瘤特异性CTL模型作了初步探讨,为进一步完善肺癌特异性CTL细胞模型并为研究肿瘤免疫逃避、免疫耐受及反杀伤淋巴细胞等生物学行为打下基础.