病变侧亚低温对大鼠局灶性脑缺血再灌注后凋亡相关蛋白变化的影响

目的:观察病变侧亚低温对大鼠局灶性脑缺血再灌注后生长抑制和DNA损伤诱导基因45(Gadd45)和Bcl-2蛋白变化的影响。方法:实验于2004-11/2005-07在哈尔滨医科大学病理教研室实验室完成。将雄性Wistar大鼠48只随机分为4组:①常温缺血组(n=20):采用改良线栓法建立大鼠大脑中动脉缺血2h再灌注模型,再灌3,12,24,48和72h分别处死,每个时间点4只。②亚低温缺血组(n=20):造模和处死时间同常温缺血组,并于栓塞后30min实施病灶侧亚低温(设定制冷器温度为6～8℃,脑内缺血区温度为32℃左右)并持续4h。③假手术组(n=4):手术,但不栓塞,术后24h处死。④正常组(n=4):不干预。各组大鼠处死前进行神经功能缺陷评分(0～4分,评分越高,神经功能缺陷越重);苏木精-伊红染色观察组织病理变化;采用免疫组化的方法检测Gadd45和Bcl-2蛋白的表达。结果:48只进入结果分析。①神经功能缺陷评分:亚低温缺血组大鼠各时间点均明显低于常温缺血组(P<0.05)。②Gadd45表达:在再灌注3h表达增强,且随再灌注时间的延长而逐渐增强(P<0.05),至48h达高峰,其后又随之下降。亚低温缺血组各时间点表达明显少于常温缺血组(P<0.05)。③Bcl-2表达:再灌注3h增多,随再灌注时间的延长,其表达逐渐增多(P<0.05),至24h达高峰,其后又随之下降,亚低温缺血组各时间点表达明显高于常温缺血组(P<0.05)。结论:Gadd45在脑缺血再灌注损伤过程中,早期能修复受损的DNA,损伤加重时则促进细胞凋亡;Bcl-2在脑缺血再灌注损伤过程中主要起抑制细胞凋亡的作用。亚低温能减少Gadd45的表达,增加Bcl-2的表达;能明显减轻缺血所致的损伤,并能明显抑制细胞调亡;对大鼠缺血后神经功能的恢复有确切的疗效。     

亚低温在大鼠脑缺血再灌注中的脑保护作用

目的 探讨亚低温在脑缺血再灌注损伤中的保护作用。方法 采用大鼠大脑中动脉线栓闭塞／再通法建立大鼠局灶性缺血-再灌注模型，常温组和亚低温组分别于脑缺血3h再灌注6h、12h、24h、48h、72h后断头取脑，假手术组则于再灌注24h断头取脑，测定MPO的活性和免疫组化法观察ICAM—1、Mac-1的表达。同时常温组和亚低温组在再灌注24h进行神经功能评分和脑梗死体积的比较。结果 （1）脑缺血再灌注6h后，脑缺血灶ICAM-1和Mac-1表达逐渐出现增高趋势，脑组织MPO活性也逐步增高，再灌注48h达高峰，它们与假手术组比较差异有统计学意义（P〈0．05，P〈0．01）。（2）缺血早期进行亚低温干预，能明显抑制ICAM-1、Mac—1的表达和MPO活性（P〈0．05，P〈0．01）。（3）亚低温可以改善大鼠脑缺血再灌注后的神经功能障碍，减少脑梗死体积（P〈0．01）。结论 脑缺血再灌注后炎症反应是造成脑损伤的重要因素之一；亚低温干预能明显抑制再灌注后脑组织炎症反应，起到神经保护作用，这可能是亚低温在脑缺血再灌注损伤中的重要保护机制之一。     

亚低温状态对大鼠脑缺血再灌注损伤的保护途径

目的：大鼠局灶性脑缺血再灌注造成的脑损伤系炎症反应的细胞因子细胞间黏附分子1表达上调，并使中性粒细胞聚集的结果。髓过氧化物酶活性可作为中性粒细胞浸润的定量指标，观察亚低温状态下细胞因子和酶动态变化的特点。方法：实验于2004-09／12在武汉大学人民医院实验中心完成。选取90只SD大鼠，随机分为3组：①假手术组（n=10）：仅分离并牵拉左侧颈内动脉，不阻断其血流，肛温稳定在37℃，术后24h麻醉状态下处死。②常温组（n=40）：采用大鼠大脑中动脉线栓闭塞／再通法建立大鼠局灶性缺血再灌注模型，缺血期肛温稳定在37℃，分别于脑缺血3h再灌注6，24．48和72h麻醉状态下处死，每个时间点10只。③亚低温组（n=40）：同前造模，缺血期间肛温保持在32-33℃，缺血结束后立即自然复温，处死时间和只数同常温组。细胞间黏附分子1阳性微血管数用免疫组化测定，同时检测髓过氧化物酶活性。结果：经补充后90只大鼠进入结果分析。①细胞间黏附分子1阳性微血管数：常温组再灌注6h缺血侧脑组织中可见到和增高，48h达到高峰[（98．01&;#177;9．00）条]，再灌注72h仍保持一定水平的表达，亚低温组各时间点均低于相应的常温组（P〈0．05，P〈0．01），但两组均高于假手术组[（5．35&;#177;3．07）条，P〈0．05，P〈0．01]。②髓过氧化物酶活性：常温组再灌注6h增高，48h达高峰，显著高于假手术组[（0．5594&;#177;0．1662），（1．9099&;#177;0．2507），（0．2037&;#177;0．0637）kat／g，P〈0．01]，亚低温组各时间点均低于相应的常温组（P〈0．05，P〈0．01），但仍高于假手术组。结论：脑缺血再灌注后炎症反应是造成脑损伤的重要因素之一。亚低温所起到的脑保护作用，其途径为抑制脑缺血再灌注后缺血区细胞间黏附分子1的表达和脑组织中的髓过氧化物酶活性，从而使白细胞聚集浸润减少。     

亚低温对大鼠缺血性脑水肿及水通道蛋白AQP4表达的影响

背景：亚低温（28～35℃）正成为一种治疗急性缺血性卒中较有前景的方法，低温可有效地减轻脑水肿是其神经保护作用之一。 目的：观察亚低温对大鼠脑缺血再灌注后脑含水量和水通道蛋白4（AQP4）表达的影响，探讨亚低温脑保护的作用机制。 设计：随机对照实验。 单位：徐州医学院神经生物实验室。 材料：选择健康雄性SD大鼠110只，体质量250-300g，由徐州医学院实验动物中心提供[No．SYNK（苏）2002—0079]。应用SPsS11．0统计软件将大鼠随机分3组：①假手术组m=10）；②常温组（n=50）；③亚低温组（33℃，n=50）。常温组及亚低温组又分为缺血后再灌注6h，1d，2d，3d，7d各亚组，每亚组各10只大鼠。每组中5只用于脑含水量测定，5只用于苏木精-伊红染色及免疫组织化学染色。 方法：参考Pulsinelli方法对常温组及亚低温组大鼠制备四动脉结扎全脑缺血模型，缺血时间为15min。假手术组大鼠仅电凝双侧椎动脉及分离颈总动脉，不作结扎，手术后24h断头取脑。对常温组及亚低温组大鼠脑组织切片，HE染色及免疫组化染色，分别于再灌注后6h，1d，2d，3d，7d观察脑组织病理学和AQP4表达水平的动态变化；干湿重法测定各组大鼠各时间点脑含水量。 主要观察指标：①常温组及亚低温组大鼠脑组织病理学变化。②所有大鼠各时间点脑含水量及AQP4表达水平。 结果：①常温组大鼠在缺血再灌注后6h可见血管周围间隙增宽、细胞外间隙扩大、脑组织变疏松等脑组织水肿表现，以缺血再灌注后2d最明显；亚低温组大鼠各时间点与相应的常温组比较，脑组织水肿表现相对减轻。②常温组及亚低温组大鼠缺血再灌注后6h内即出现脑含水量增高，2d达高峰，7d时脑含水量明显减少，但仍高于假手术组。亚低温组脑含水量均较相应时间点的常温组少（6h，7d组P〈0．01，余各组P〈0．05）。③常温组及亚低温组大鼠AQP4表达水平在再灌注后6h增高，2d达最高水平，7d时明显降低，但仍较假手术组高。亚低温组AQP4表达水平均较相应时间点的常温组降低（P〈0．01）。 结论：脑缺血再灌注后AQP4表达水平的变化趋势与脑含水量变化趋势在时间上一致，表明AQP4表达上调可能是缺血性脑水肿形成的分子机制之一。亚低温可减轻缺血性脑水肿，而通过抑制AQP4表达可能是亚低温减轻缺血性脑水肿的作用机制之一。     

姜黄素对大鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用

目的：研究姜黄素对大鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用，并探讨其作用的机制。方法：采用线栓法制作大鼠大脑中动脉缺血再灌注模型，50只Wistar雄性大鼠被随机分为假手术组、缺血组和100mg／kg、300mg／kg姜黄素治疗组。缺血组和姜黄素治疗组分别在脑缺血再灌注后24h处死，观察大鼠神经功能缺失的评分．应用TTC染色观察梗死体积，应用TUNEL法及免疫组化染色检测脑组织凋亡细胞数及Bcl-2、Bax蛋白表达。结果：与损伤模型组比较．姜黄素治疗组改善大鼠神经功能的受损程度和减少脑梗死体积．各剂量姜黄素治疗组均可明显减少TUNEL染色阳性细胞数（P〈0.01），明显增加Bcl-2蛋白表达（P〈0.01），并且姜黄素治疗组Bax表达低于缺血组（P〈0．05）。结论：姜黄素可通过上调Bcl-2蛋白下调Bax蛋白表达而减少脑缺血再灌注后神经细胞凋亡．从而改善受损的神经功能．对脑缺血再灌注损伤起保护作用．     

亚低温治疗对大鼠缺血再灌注损伤脑组织中Survivin和Bcl-2基因表达的影响

目的观察亚低温治疗对大鼠缺血再灌注损伤脑组织细胞中Survivin和Bcl-2基因表达的影响。方法 90只wister大鼠制作大脑中动脉闭塞(MCAO)脑缺血再灌注损伤模型。随机将大鼠分为假手术组,对照组(建模后常温处理)和观察组(建模后亚低温处理)。将对照组和观察组大鼠大脑中动脉缺血处理2,4,8小时,再灌注3h,24h,48h,7d,14d后处死。亚低温组于缺血20分钟后亚低温处理5小时。用免疫组织化学法检测Survivin和Bcl-2在缺血再灌注损伤脑组织细胞中的表达情况。结果大鼠神经功能评分:假手术组(0.15±0.04)分,对照组(3.54±0.36)分,观察组(3.72±0.55)分。亚低温处理后Survivin和Bcl-2蛋白的表达增加。结论亚低温治疗后的大鼠脑缺血组织中的Survivin和Bcl-2蛋白表达增加,对大鼠的神经细胞有保护作用,改善大鼠再灌注治疗的预后。     

亚低温对脑缺血性损伤后基因修复蛋白和增殖性抗原表达的影响

目的 观察脑缺血再灌注后核苷酸切除修复交叉互补基因蛋白p80和增殖性细胞核抗原表达的时空变化及趋势，判断亚低温在缺血性脑损伤中是否具有作用。方法实验于2004-10／2005-05在哈尔滨医科大学病理教研室实验室完成。①取44只大鼠随机分为3组：假手术组（n=4），常温组和亚低温组（n=20），后两组根据再灌注时间分为再灌注3，12，24，48和72h5个亚组，每亚组4只。②用线栓法建立局部脑缺血模型，假手术组不插入栓线。③亚低温组于缺血30min时实施病灶侧脑部亚低温，脑温控制在32～35℃，持续4h，其他两组脑温保持在37℃左右。④各组在相应时间点断头处死大鼠取脑，用免疫组织化学方法检测p80和增殖性细胞核抗原的表达。结果 44只大鼠进入结果分析。①p80表达：在假手术组极少，主要见于细胞质中；常温组p80的表达随再灌注时间延长而升高，48h达到峰值，72h时有下降的趋势；亚低温组的表达与常温组趋势一致，且均高于同一时间点的常温组。②增殖性细胞核抗原表达：假手术组有广泛表达，主要见于细胞核中；与假手术组相比，常温组在再灌3h表达即明显下降，随着再灌注时间的延长，表达逐渐升高，24h达到高峰，随后逐渐下降；亚低温组的表达在缺血再灌注后持续升高，且高于相应的常温组。结论亚低温能显著抑制或延迟p80和增殖性细胞核抗原在脑缺血再灌注损伤后表达的下降，提高DNA的修复能力，进而减轻缺血再灌后神经细胞的损伤。     

亚低温对大鼠局灶性脑缺血再灌注后白细胞髓过氧化酶、环氧合酶-2表达的影响

目的探讨亚低温对大鼠局灶性脑缺血再灌注后白细胞髓过氧化物酶（MPO）、环氧合酶-2（COX-2）等炎性反应介质表达的影响。方法将48只Wistar大鼠随机分为亚低温组和对照组，每组再分为4个亚组．每个亚组6只。应用改良线栓法制作大鼠大脑中动脉缺血再灌注模型，亚低温组大鼠给予亚低温治疗，对照组不作亚低温治疗。分别于缺血再灌注后4，8，12，16h处死1个亚组。用免疫印迹及免疫组化方法观察各个亚组脑组织细胞间白细胞MPO的含量及COX-2的表达。结果对照组缺血再灌注后4，8，12，16h缺血区皮质及纹状体中自细胞MPO的含量与亚低温组相应时间段的数值比较，亚低温组均显著低于对照组（P〈0．01）。对照组缺血再灌注后4，8，12，16h缺血区皮质及纹状体中COX-2表达的相对灰质度值与亚低温组相应时间段的数值比较，亚低温组均显著低于对照组（P〈0．01）。结论亚低温能降低再灌注后不同时间脑组织细胞间白细胞MPO含量及COX-2的表达活性，减轻缺血区的炎症反应及脑组织的继发性损伤，提示亚低温对局灶性脑缺血区神经元有保护作用。     

亚低温缺血预处理对大鼠肠缺血再灌注诱导细胞凋亡的保护

背景：细胞凋亡在肠缺血再灌注损伤中起关键性作用。细胞凋亡的发生与凋亡抑制基因Bcl-2和凋亡促进基因Bax蛋白表达程度密切相关。目的：探讨亚低温缺血预处理对大鼠肠组织缺血再灌注后凋亡相关基因Bcl-2和Bax蛋白表达的影响。设计：随机对照实验。单位：湖北省咸宁学院医学院外科学教研室与生物化学教研室。材料：实验于2002-04／12在咸宁学院医学院中心实验室完成。选用Wistar健康雄性大鼠32只，术前禁食24h，自由饮水。随机分为假手术对照组、缺血再灌注组、缺血预处理组、亚低温预处理组，8只／组。方法：除假手术对照组外，其余3组建立缺血再灌注模型。①假手术对照组仅暴露肠系膜上动脉而不夹闭，共2h，结束实验后取材；缺血再灌注组夹闭肠系膜上动脉60min后松夹60min再取材；缺血预处理组夹闭肠系膜上动脉5min和松夹5min作为预处理，余同缺血再灌注组；亚低温预处理组实施缺血预处理前在小肠周围充填碎冰造成小肠亚低温（33-35℃），余同缺血预处理组。②各组大鼠取中段小肠4cm，分为两段，分别置于甲醛和戊二醛中固定，制作电镜标本。免疫组化后显微镜下用图像分析系统检测各组吸光度值，每组选10个视野进行测量，计算平均值，肠黏膜损伤按Chiu标准进行分级。0级：正常黏膜绒毛；Ⅰ级：上皮下间隙增大，通常在绒毛的尖端，常伴有毛细血管淤血：Ⅱ级：上皮下间隙扩张伴随上皮层同固有层中度分离；Ⅲ级：绒毛两侧上皮层大量的同固有层分离，部分绒毛顶端破损；Ⅳ级绒毛破损伴随固有层毛细血管暴露，可能观察到固有层的细胞成分增多；Ⅴ级：固有层破坏和不完整、出血和溃疡。主要观察指标：①各组肠缺血再灌注后Bcl-2与Bax蛋白吸光度值的变化。②各组肠黏膜损伤分级。③各组肠黏膜组织学变化。结果：32只大鼠全部进入结果分析，中途无脱落。①各组肠缺血再灌注后Bcl-2与Bax蛋白吸光度值的变化：与假手术对照组比较，缺血再灌注组均明显升高（4．03&;#177;1．02，9．56&;#177;1．32，P〈0．01；5．67&;#177;1．34．19．07&;#177;1．63，P〈0．01）；与缺血再灌注组比较，缺血预处理组Bcl-2表达升高（9．56&;#177;1．32，15．03&;#177;1．44，P〈0．01），Bax表达降低（19．07&;#177;1．63，14．11&;#177;1．21，P〈0．01）；与缺血预处理组比较，亚低温预处理组Bcl-2表达仍有所升高（15．03&;#177;1．44，18．17&;#177;2．03，P〈0．05），Bax表达仍降低（14．11&;#177;1．21，11．58&;#177;1．04，P〈0．05）。②各组肠黏膜损伤分级情况：假手术对照组肠黏膜基本正常，损伤均为0级；缺血再灌注组肠黏膜损伤Ⅱ级2只，Ⅲ级3只，Ⅳ级3只，明显高于假手术对照组（P〈0．01）；缺血预处理组肠黏膜损伤Ⅰ级2只，Ⅱ级4只，Ⅲ级2只，明显低于缺血再灌注组（P〈0．01）；亚低温预处理组肠黏膜损伤0级1只，Ⅰ级3只，Ⅱ级4只，低于缺血预处理组（P〈0．05）。③各组肠黏膜组织学形态电镜观察结果：假手术对照组肠黏膜上皮微绒毛排列整齐，各细胞器形态正常；缺血再灌注组肠黏膜上皮微绒毛稀疏、变短、脱落，线粒体明显肿胀，空泡变性，内质网排列紊乱、肿胀；缺血预处理组肠黏膜上皮微绒毛排列基本整齐，线粒体内质网轻度肿胀；而亚低温预处理组肠黏膜上皮微绒毛排列整齐，线粒体内质网肿胀不明显。结论：肠缺血再灌注前进行缺血预处理可以上调Bcl-2蛋白的表达，并下调Bax蛋白的表达，从而抑制肠缺血再灌注诱导的细胞凋亡以保护缺血再灌注肠损伤。亚低温状态能增强缺血预处理的保护作用。     

局部亚低温干预对大鼠脑缺血再灌注后内皮-单核细胞激活多肽表达的影响

目的通过观察局部亚低温干预对大鼠脑缺血再灌注后缺血半暗带区内皮-单核细胞激活多肽Ⅱ（EMAPⅡ）、EMAPⅡ前蛋白（proEMAPⅡ）表达的影响,从而探讨局部亚低温干预的脑保护机制。 方法共选取雄性Wistar大鼠44只,采用随机数字表法将其分为假手术组、常温组及亚低温组。采用改良Longa线栓法将常温组及亚低温组大鼠制成大脑中动脉缺血再灌注模型,亚低温组于再灌注后立即给予亚低温干预（持续治疗6h）。于脑缺血再灌注后6h、12h、24h、48h及72h时处死大鼠并取脑,采用HE染色观察各组大鼠神经细胞受损情况,采用免疫组化染色法比较各组大鼠缺血脑组织EMAPⅡ、proEMAPⅡ阳性细胞表达情况。 结果常温组及亚低温组EMAPⅡ阳性细胞均于缺血再灌注6h时明显表达,于再灌注24h时达到峰值,随后逐渐下降;2组大鼠proEMAPⅡ阳性细胞均于缺血再灌注6h时明显表达,之后亚低温组逐渐下降,常温组于再灌注12h达到峰值后开始下降,至再灌注72h时2组大鼠proEMAPⅡ阳性表达均已接近假手术组水平。亚低温组EMAPⅡ阳性表达在脑缺血再灌注6h、12h、24h、48h及72h时均较常温组显著减少（P<0.05）。常温组proEMAPⅡ阳性细胞数量在脑缺血再灌注6h、12h及24h时均较亚低温组明显增多。 结论局部亚低温干预能减弱大鼠缺血半暗带区EMAPⅡ、proEMAPⅡ阳性表达,抑制缺血再灌注损伤导致的细胞凋亡及炎性反应,从而发挥神经保护作用。     

The focal study

Representing a new approach to assessing the quality of nursing care, the focal study provides an effective and systematic method for resolving particular nursing problems. This article summarizes a focal study carried out by two nurses in the psychiatric unit of a major hospital in Sherbrooke, Québec. It addresses problems associated with the use and completion of the nursing history for each client. The methodology used is explained in detail and accompanied by specific examples.     

Sonographic features of focal orchitis

High-resolution sonography is a very sensitive imaging modality for detecting intratesticular pathology and is an accurate means of distinguishing intratesticular lesions (usually malignant) from extratesticular ones (usually benign). Unfortunately, there are no reliable sonographic criteria to distinguish testicular neoplasms from focal benign intratesticular lesions such as infarction, hemorrhage, or infection. We describe three cases of focal orchitis in which the sonographic features did allow a confident diagnosis of intratesticular infection. In each case a focal peripheral hypoechoic intratesticular abnormality was seen that was poorly defined or crescent-shaped, adjacent to an enlarged epididymis. The specific sonographic features suggest the diagnosis of focal orchitis and orchiectomy can be prevented. Rapid improvement (2 to 4 weeks) should be seen sonographically and in all cases the intratesticular lesions should be followed to complete resolution.     

Ultrasound of focal liver masses

Detecting and characterizing focal liver lesions is one of the most difficult challenges in imaging today. All standard noninvasive imaging modalities are less sensitive than generally perceived, and characterization is imperfect. Liver sonography's main strengths are its ability to definitively characterize common benign lesions (eg, cysts and hemangiomas), safety, low cost, and its ability to guide biopsy. Sonography's weaknesses include its inability to image the entire liver in many patients and its inferiority to CT as a means of detecting extrahepatic malignant disease. Sonography is less sensitive than CT or MRI in detecting focal lesions. Ultrasound contrast agents will certainly improve liver lesion detection and characterization, but their impact is not yet clear.Typical findings in common focal liver lesions are discussed, and some hints to improve sonographic diagnosis are presented. Increased color Doppler flow should bring the possibility of hepatocellular carcinoma and focal nodular hyperplasia to mind, but Doppler diagnosis is ultimately not highly specific. Sonography, including Doppler analysis, is useful to assess the resectability of malignant masses. Intraoperative ultrasound is the most sensitive imaging modality in detecting focal liver lesions.     

Ultrasound focal beam surgery

High intensity beams of ultrasound may be focused at depth within the body, thereby producing selective damage within the focal volume, with no harm to overlying or surrounding tissues. The technique is thus noninvasive, insofar as the source of ultrasound energy is situated outside the body. The mechanism for cell killing is predominantly thermal, although acoustic cavitation may also occur. Ultrasound focal surgery was first conceived in the 1940s as a possible tool for creating selective damage in the brain for neurosurgical research; its potential for more widespread clinical use was not exploited at that time, probably because of the lack of facilities for providing precise visualisation and localisation of the damage. The availability of modern imaging techniques has encouraged a revival of clinical interest, and applications in ophthalmology, urology and oncology are currently being developed.