α干扰素促进急性髓性白血病来源的树突状细胞的成熟分化

目的:研究α干扰素(interferon alpha,IFN-α)对不同亚型的急性髓性白血病(acute myeloid leukemia,AML)细胞来源的树突状细胞(dendritic cell,DC)免疫表型及功能的影响。方法:5例初发AML患者(其中M2 1例、M4 2例、M5 2例)的外周血单个核细胞,在含GM-CSF、IL-4、TNF-α的无血清培养液中培养11 d,其后加入IFN-α-2a(1 000 U/ml)继续培养3 d,获得DC(IFN-AML-DC),光镜下观察细胞形态,流式细胞仪测定细胞免疫表型,同种异体混和淋巴细胞反应检测DC的免疫功能。结果:所有患者白血病细胞培养14 d后均转化为IFN-AML-DC,与正常人外周血单核细胞由GM-CSF IL-4 TNF-α培养获得的DC(monocyte-derived DC,MoDC)及AML细胞由GM-CSF IL-4 TNF-α培养获得的DC(AML-DC)相比,IFN-AML-DC具有典型成熟形态的细胞明显增多,表达CD83 细胞的比例显著增加,HLA-DR、CD86分子的表达水平增高,对同种异体T淋巴细胞的激活能力明显高于MoDC及AML-DC。结论:IFN-α能够促进AML-DC的体外成熟,形成更强的免疫激活能力,为AML的免疫治疗提供更有力的手段。     

香菇多糖促进急性髓细胞性白血病患者DC的成熟并增强其功能

目的： 研究香菇多糖（lentinan, LNT）对急性髓细胞性白血病（acute myeloid leukemia, AML）患者树突状细胞（dendritic cell,DC）成熟及功能的影响,探索白血病免疫治疗的新途径。 方法： 分离AML完全缓解期患者（AML-complete remission,AML-CR）的骨髓单个核细胞（bone marrow mononuclear cell,BMC）,用GM-CSF和IL-4诱导7 d培养DC,然后分组：LPS阳性对照组、LNT实验组和对照组。培养48 h后以瑞氏－吉姆萨(Wright-Giemsa)染色观察各组DC形态,流式细胞术检测各组DC表面分子CD80、CD83、CD86、CD1a和HLA-DR的表达,ELISA法检测各组DC上清液中IL-12的水平。免疫磁珠法分离AML-CR患者经LNT治疗后的外周血DC,ELISA法检测治疗后DC上清液中IL-12的水平。 结果： 体外实验中,LNT处理后DC呈典型树突状形态;其表面分子CD80、CD83、CD86、CD1a及HLA-DR的表达上调（P<0.05）;DC分泌IL-12较阴性对照组显著增高（P<0.05）,且呈LNT浓度依赖性。患者体内试验结果显示,LNT治疗后AML患者的DC上清液中IL-12分泌水平较治疗前显著提高（P<0.05）。 结论： LNT在体内外均能促进AML患者的DC成熟和增强DC功能。     

树突状细胞在髓性白血病免疫治疗中的作用

髓性白血病治疗失败的主要原因之一是疾病的复发,而复发的根源是由于白血病微小残留病灶的存在.采用特异性免疫治疗以清除白血病微小残留病灶已日益引起人们的重视.     

治疗急性髓系白血病的树突状细胞疫苗的研究进展

摘 要 本文综述了免疫治疗急性髓系白血病（acute myeloid leukemia, AML）的树突状细胞（dendritic cells, DC）疫苗的近期研究进展，主要涉及各种类型的白血病肿瘤抗原的确认与制备，包括AML特异融合蛋白及相关多肽、癌症睾丸抗原、酸洗脱多肽、白血病细胞冻融抗原/凋亡细胞、AMLDC融合细胞、白血病细胞来源的DC等；DC的制备与特性以及优化方法；临床试验研究的初步结果等，还对今后的研究方向进行了分析和展望。     

免疫疗法治疗急性髓系白血病的新进展

急性髓系白血病（acute myeloid leukemia,AML）是最常见的白血病,发病率居高不下,尽管随着科技的发展,可以延长其生存期,但对新型治疗方法的需求仍十分紧迫。当前的癌症免疫学和免疫疗法概念具有相关性,因此可以考虑从免疫治疗的角度上治疗AML,但在设计针对这种白血病的合理免疫疗法时,还应考虑AML免疫失调的独特方面。本文主要从改善免疫系统和白血病靶标之间的平衡,直接针对白血病的抗体,T细胞和NK细胞进行干预,使用呈递白血病抗原的增强抗原呈递细胞重新设计并重新激活患者T细胞的疫苗三方面进行综述。     

不同亚型急性髓性白血病细胞转化为树突状细胞的研究

目的 :探讨利用一定组合的细胞因子 ,将不同亚型的急性髓性白血病 (acute m yeloidleukemia,AML)细胞在体外转化为树突状细胞 (dendritic cell,DC)。方法 :8例初发 AML 患者 (其中M1 1例、M2 a3例、M32例、M4 c1例、M51例 )的骨髓单个核细胞 (BMMNC) ,在含 GM- CSF、IL- 4和TNF-α的完全培养液中培养 14天 ,通过光镜及电镜下观察细胞形态、流式细胞仪测定细胞免疫表型和 MTT法混和淋巴细胞反应来鉴定 DC。结果 :6例患者的 BMMNC培养 14天后转化为 DC。 DC的免疫表型 CD1 a、CD83、CD86 、HL A- DR较培养前明显上调 (P<0 .0 5 )。 DC对同种异体 T淋巴细胞有较强的刺激作用 ,远高于对照 (P<0 .0 5 ) ,而且随 DC数量的增加刺激 T细胞增生的活性越强。2例患者(M2 a1例 ,M31例 )的 BMMNC未转化为 DC,免疫表型分析显示 CD83及 CDla的表达较低 ,但 CD86 及HL A- DR的表达明显增高。结论 :利用一定组合的细胞因子可以将 AML细胞在体外转化为形态、表型和功能符合 DC特征的细胞。某些 AML患者的原始细胞不能转化为 DC,与其亚型无关 ,原因有待进一步探讨     

急性混合细胞白血病合并母细胞性浆细胞样树突细胞肿瘤一例并文献复习

目的 提高对急性混合细胞白血病(MAL)合并母细胞性浆细胞样树突细胞肿瘤(BPDCN)的认识.方法 通过报道1例MAL合并BPDCN患者并复习相关文献,分析BPDCN的临床特点、治疗方案及预后.结果 患者为中年女性,临床表现脾大、淋巴结肿大,骨髓涂片可见肿瘤细胞呈母细胞形态,形态单一,核不规则,染色质细,可见数个小核仁,胞质量少,无颗粒状且嗜碱性,骨髓免疫分型可见30.79 %的细胞CD56-、CD4-、CD123st+、HLA-DRst+、BDCA2+,为异常浆细胞样树突细胞,根据相关评分系统,表达CD123及BDCA2,总分为3分,可诊断为BPDCN.患者有长期服用硫唑嘌呤以及血小板减少的病史,染色体核型检测发现存在7号染色体缺失,提示该患者有可能存在骨髓增生异常综合征病史,骨髓细胞免疫分型提示同时存在髓系幼稚细胞及异常单核细胞的表达,急性粒-单核细胞白血病诊断明确.结论 MAL合并BPDCN的诊断需综合临床表现、形态学、免疫学、分子遗传学等,应争取对疾病尽早诊断及治疗.     

母细胞性浆细胞样树突状细胞肿瘤一例并文献复习

目的 提高对母细胞性浆细胞样树突状细胞肿瘤(BPDCN)的认识.方法 通过1例病例报告和文献复习,分析BPDCN患者的临床特点、治疗选择及预后.结果 BPDCN患者以中老年男性居多,绝大多数发病时表现为皮疹和骨髓浸润,特征性免疫表型为CD4+、CD56+、CD123+.在诱导治疗方面,淋系方案比髓系方案治疗的总反应率高,复发率较低,总生存较长.异基因造血干细胞移植可能带来长期生存.患者发病时白细胞和血小板总数可能是影响BPDCN预后的危险因素.结论 BPDCN在临床表现和免疫表型上都具有显著特点,治疗方案建议以淋系方案为主,在首次完全缓解期行异基因造血干细胞移植是改善预后、获得远期生存的重要手段.     

Toll样受体7及9在慢性粒细胞白血病患者浆细胞样树突状细胞内的表达

目的:研究Toll样受体7(Toll-like receptor 7,TLR7)mRNA及TLR9 mRNA在慢性粒细胞白血病(chronic myeloid leukemia,CML)患者外周血浆细胞样树突状细胞(plasmacytoid dendritic cell,pDC)内的表达及pDC分泌干扰素-α(interferon-α,IFN-α)的能力。方法:收集兰州大学第二医院血液科2010年11月至2011年7月间收治的30例CML患者(初诊未治组15例,缓解组15例)和体检中心的15例健康对照者,运用免疫磁珠法分选外周血pDC,利用real time-PCR检测pDC内TLR7及TLR9 mRNA表达水平。CpG ODN 2216刺激pDC 24 h后,ELISA检测上清液中IFN-α水平。结果:初诊组CML患者外周血pDC内TLR7 mRNA表达水平显著低于缓解组[(0.34±0.11)vs(0.93±0.21),P<0.05],初诊CML患者TLR9 mRNA表达水平显著低于缓解组[(0.44±0.15)vs(0.94±0.18),P<0.05]。CpG ODN 2216刺激后,初诊组pDC产生的IFN-α明显低于缓解组及健康对照组[(408.61±77.11)vs(611.39±84.86)、(651.67±93.39)ng/L,P<0.05]。结论:CML患者pDC内TLR7和TLR9 mRNA明显降低可能是pDC功能缺陷的主要原因,提示TLR7和TLR9可能参与CML的发病。     

母细胞性浆细胞样树突状细胞肿瘤发病机制、诊断和治疗的研究进展

母细胞性浆细胞样树突状细胞肿瘤(blastic plasmacytoid dendritic cell neoplasm,BPDCN)是一种罕见的血液学克隆性恶性肿瘤,来源于树突状细胞前体,常累及皮肤、骨髓及淋巴结,预后不佳.BPDCN的发病通常与复杂的核型、肿瘤抑制基因的频繁缺失以及影响DNA甲基化或染色质重塑途径的...     

Activation of plasmacytoid dendritic cells promotes AML-cell fratricide

Acute myeloid leukemia (AML) is characterized by the proliferation of immature myeloid blasts and a suppressed immune state. Interferons have been previously shown to aid in the clearance of AML cells. Type I interferons are produced primarily by plasmacytoid dendritic cells (pDCs). However, these cells exist in a quiescent state in AML. Because pDCs express TLR 7–9, we hypothesized that the TLR7/8 agonist R848 would be able to reprogram them toward a more active, IFN-producing phenotype. Consistent with this notion, we found that R848-treated pDCs from patients produced significantly elevated levels of IFNβ. In addition, they showed increased expression of the immune-stimulatory receptor CD40. We next tested whether IFNβ would influence antibody-mediated fratricide among AML cells, as our recent work showed that AML cells could undergo cell-to cell killing in the presence of the CD38 antibody daratumumab. We found that IFNβ treatment led to a significant, IRF9-dependent increase in CD38 expression and a subsequent increase in daratumumab-mediated cytotoxicity and decreased colony formation. These findings suggest that the tolerogenic phenotype of pDCs in AML can be reversed, and also demonstrate a possible means of enhancing endogenous Type I IFN production that would promote daratumumab-mediated clearance of AML cells.     

TRAIL-mediated killing of acute lymphoblastic leukemia by plasmacytoid dendritic cell-activated natural killer cells

Acute lymphoblastic leukemia (ALL) still frequently recurs after hematopoietic stem cell transplantation (HSCT), underscoring the need to improve the graft-versus-leukemia (GvL) effect. Natural killer (NK) cells reconstitute in the first months following HSCT when leukemia burden is at its lowest, but ALL cells have been shown to be resistant to NK cell-mediated killing. We show here that this resistance is overcome by NK cell stimulation with TLR-9-activated plasmacytoid dendritic cells (pDCs). NK cell priming with activated pDCs resulted in TRAIL and CD69 up-regulation on NK cells and IFN-γ production. NK cell activation was dependent on IFN-α produced by pDCs, but was not reproduced by IFN-α alone. ALL killing was further enhanced by inhibition of KIR engagement. We showed that ALL lysis was mainly mediated by TRAIL engagement, while the release of cytolytic granules was involved when ALL expressed NK cell activating receptor ligands. Finally, adoptive transfers of activated-pDCs in ALL-bearing humanized mice delayed the leukemia onset and cure 30% of mice. Our data therefore demonstrate that TLR-9 activated pDCs are a powerful tool to overcome ALL resistance to NK cell-mediated killing and to reinforce the GvL effect of HSCT. These results open new therapeutic avenues to prevent relapse in children with ALL.     

自然杀伤细胞治疗急性髓系白血病的研究进展

自然杀伤细胞(natural killer cell,NK)为一种存在于天然免疫系统中的淋巴细胞,具有杀伤肿瘤细胞和抗病毒感染的能力,在天然免疫和过继免疫治疗中发挥重要作用。随着NK细胞的特征和功能越来越被熟知,其已被广泛应用于临床抗肿瘤治疗,特别是血液系统恶性肿瘤如急性髓系白血病(acute myeloid leukemia,AML)、淋巴瘤等治疗。目前,基于NK细胞的免疫治疗主要包括自体NK细胞输注、异体NK细胞输注、嵌合抗原修饰NK(chimeric antigen receptor,CAR)细胞输注以及基于NK细胞的其他免疫治疗等。以NK细胞为基础的免疫治疗旨在增强NK细胞的抗肿瘤能力以及克服肿瘤免疫逃逸。随着研究进展,NK细胞将成为治疗AML的有效方法。     

急性髓系白血病细胞对树突状细胞分化、成熟和调节性T细胞生成的影响

Objective To investigate the effects of soluble factors secreted by acute myeloid leukemia (AML) cells on the phenotypical and functional properties of DCs derived from normal mononuclear cells. Methods Mononuclear cells were cultured with interleukin-4 (IL-4) and granulocyte-macrophage colony-stimulating factor (GM-CSF), in the presence or absence of 24 h culture supernatants from fresh primary AML cells, to generate immature DCs. The maturation of DCs was induced by cytokines IL-1beta, IL-6, tumor necrosis factor-alpha (TNF-alpha), and prostaglandin-2 (PGE-2). The phenotypic alterations of DCs and DCs-primed CD4 T cells were evaluated using flow cytometry. Precursor frequency (PF) was calculated to monitor the allostimulatory effects of DCs on CD4 and CD8 T cells. ResultsAML cell supernatant-treated DCs showed significantly lower expression of co-stimulatory molecules CD80 and CD86, and reduced response to cytokines IL-1beta, IL-6, TNF-alpha,and PGE-2. The allostimulatory effects of AML cell supernatant-treated DCs on CD4 and CD8 T cells were significantly lower than those of normal mature DCs [PF (1.8±0.5)% vs. (5.2±1.6)% for CD4 T cells, (2.1±0.6)% vs. (6.5±2.0)%for CD8 T cells, P＜0.01]. These AML supematant-induced DCs could also induce allogeneic CD4 T cells to differentiate into CD4 CD25high T cells, which had immunophenotyping characteristics of regulatory T cells, i.e. they expressed Foxp3 but not active maker CD69. Conclusion This study demonstrates that soluble factors secreted by AML cells can inhibit development and functions of DCs. In addition, AML supematant-induced DCs can induce the generation of CD4 CD25high T cells from CD4 T cells, which may be a mechanism of increased prevalence of CD4 CD25high regulatory T cells and immune dysfunction in AML patients.     

抑制吲哚胺2，3-双加氧酶活性促进慢性粒细胞白血病源树突状细胞的功能

目的: 研究吲哚胺2,3双加氧酶（indoleamine 2,3dioxygenase,IDO）在慢性粒细胞性白血病源性树突状细胞（dendritic cells derived from chronic myeloid leukemia,CMLDCs）中的表达,及抑制IDO活性对CMLDCs免疫刺激功能的影响。方法: RTPCR检测17例患者CMLDCs的IDO mRNA的表达情况,流式细胞仪检测CMLDCs免疫表型。在有或无IDO抑制剂1甲基色氨酸（1methyltroptophan,1MT）作用下,分别以不成熟CMLDCs（imDCs）和成熟CMLDCs（mDCs）为刺激细胞,完全缓解期（complete remission,CR）CML患者外周T淋巴细胞为反应细胞建立混合淋巴细胞反应体系,ELISA法检测CMLDCs上清液IL12水平,MTT法检测CMLDCs刺激自体T淋巴细胞的增殖能力。结果: 随着CMLDCs的诱导分化和成熟,IDO mRNA表达逐渐上调;经TNFα诱导的DCs免疫表型除CD1a外,CD80、CD86、CD83、HLADR的表达均明显上调(P<005),且上述分子的表达不受1MT的影响。用1MT抑制IDO活性后的imDCs和mDCs,其IL12水平均明显增加(P<005,P<001),且激发自体T淋巴细胞增殖的能力也明显增强(P<0.05,P<0.01)。结论: 抑制IDO活性可提高CMLDCs的IL12分泌水平,增强其对自体T细胞增殖的刺激能力,IDO对DCs的负性调节为白血病生物治疗提供了新的思路。     

流感疫苗促进髓系白血病骨髓细胞来源树突状细胞的功能

目的: 研究流感疫苗对髓系白血病骨髓源性树突状细胞（dendritic cells,DCs）功能的影响及其机制。方法：分离髓系白血病患者\[急性髓细胞白血病(acute myeloid leukemia, AML)19例, 慢性髓细胞白血病（chronic myeloid leukemia,CML) 8例\]骨髓单个核细胞（mononuclear cell,MNC）,用GMCSF和IL4诱导7 d,获得未成熟白血病DCs,然后加入全病毒灭活流感疫苗（whole inactivated influenza vaccine, WIV）、裂解病毒流感疫苗（split influenza vaccine,SIV）或TNFα继续培养24 h。R显带法分析DCs染色体核型,流式细胞仪检测DCs表型,ELISA法测定DCs培养上清IL12的水平,CCK8法检测DCs诱导的CTL对自体白血病细胞的细胞毒作用。结果：19例AML患者中的15例及8例CML患者的MNC全部成功诱导出DCs。与TNFα刺激的白血病DCs相比,流感疫苗刺激的白血病DCs表面分子（CD80、CD83、CD86、HLADR）表达明显上调（P<005）,培养上清中IL12的分泌水平明显增加（P<0.05）,其诱导的CTL可显著杀伤自体白血病细胞（P<0.05）;WIV刺激的DCs在表型、IL12分泌水平及细胞毒作用方面均较SIV刺激的DCs显著增高（P<0.05）。结论： 流感疫苗促进髓系白血病源DCs表型成熟及IL12的分泌,增强其诱导的CTL对自体白血病细胞的杀伤作用。