用原位杂交技术探讨EB病毒受体（EBVR／CR_2）在鼻咽癌发病中的作用

本文经原位杂交技术检测发现部分人胚鼻咽上皮细胞、鼻咽癌细胞株及高分化鼻咽癌中均有限强的Ｅｐｓｔｅｉｎ－Ｂａｒｒ病毒受体（ＥＢＶＲ／ＣＲ＿２）的病毒结合区ＳＣＲ１和ＳＣＲ２的表达，而低分化鼻咽癌中未检测到其表达，提示ＳＣＲ１和ＳＣＲ２的表达与ＥＢＶ的复制有关，ＥＢＶＲ／ＣＲ＿２可以介导ＥＢＶ感染鼻咽上皮细胞导致鼻咽癌的发生。     

EB病毒DNA在正常全鼻咽组织及鼻咽癌中的表现

作者应用原位核酸杂交技术，采用ＥＢ病毒ＢａｍＨＩ－Ｗ片段为探针，检测了湘南地区正常鼻咽粘膜、鼻咽低分化鳞癌和未分化癌，高分化和中分化鳞癌，颈淋巴结转移性低分化鳞癌，颈淋巴结其它部位转移癌及鼻咽临近区恶性肿瘤标本。ＥＢＶＤＮＡ阳性例数分别为０／１０个，２４／２６个，２／７个，６／６个，０／４个和４／２４个。同时，对上述病例进行血清ＥＢ病毒壳抗原免疫球蛋白Ａ抗体检测，低分化鳞癌和未分化癌阳性例数为２３／２６个，与ＥＢＶＤＮＡ检测结果一致，经统计学处理，两者具相关性。实验结果表明：（１）湘南地区鼻咽癌的发生中ＥＢＶ感染起非常重要作用，ＥＢ病毒与鼻咽低分化鳞癌及未分化癌关系密切。（２）血清ＥＢＶ壳抗原ＩｇＡ抗体检测可作为对鼻咽癌早期诊断的有效监测指标。（３）在颈部原发灶不明的转移癌中有ＥＢＶＤＮＡ片段的检出，对确定鼻咽癌的诊断具有一定的价值。     

鼻咽癌病人多项免疫功能及EB病毒PCR检测的综合研究

为进一步了解ＥＢ病毒与鼻咽癌的关系,全面综合调查鼻咽癌病人的免疫功能,应用ＰＣＲ方法检测鼻咽病人组织块ＥＢ病毒ＤＮＡ,并对处国咽癌病人血清中ＥＢ病毒（ＥＢＶ－ＶＣＡ／ＩｇＡ）抗体、超氧化物歧化酶（ＳＯＤ）活性、脂质过氧化物降解产物（ＭＤＡ）及数种微量元素含量进行测定。结果：从鼻咽癌病人鼻咽部活检组织中成功地检测出ＥＢ病毒ＤＮＡ片断。进一步证实了ＥＢ病毒与鼻咽癌的发生有密切关系。并对鼻咽癌病人血清Ｖ     

非鼻咽部T细胞淋巴瘤与EB病毒的相关性

探讨ＥＢ病毒感染与非鼻咽部Ｔ细胞淋巴瘤的关系。用单克隆抗体ＵＣＨＬ－１，Ｌ２６及ＥＢ病毒编码的潜在膜蛋白－１，免疫组化染色确定肿瘤的免疫表型及ＥＢ病毒转化蛋白的表达。采用原位杂交方法检测ＥＢＶ编码的ＥＢＥＲＳ。结果；２１例非鼻咽部Ｔ细胞淋巴瘤ＥＢＥＲＳ５例阳性，其中结内淋巴瘤３例，肺和胃肠淋巴瘤各１例。阳性细胞约占肿瘤细胞的１０％－７０％。５例ＥＢＥＲｓ阳性病例中仅１例表达ＬＭＰ－１，为结内淋巴瘤     

EB病毒与原发性鼻咽部B细胞性淋巴瘤有关与继发性者无关

目的：对１９ 例鼻咽部Ｂ细胞性恶性淋巴瘤与ＥＢ 病毒（ＥｐｓｔｅｉｎＢａｒｒ ｖｉｒｕｓ,ＥＢＶ） 感染的相关性进行研究。方法：利用免疫组织化学及原位杂交方法对ＥＢＶ 进行检测,并用免疫组化及原位杂交双染法标记肿瘤细胞,以鉴定ＥＢＶ阳性的细胞为Ｂ淋巴瘤细胞。结果：ＥＢＶ 编码的小ｍ ＲＮＡ探针（ＥＢＥＲ） 原位杂交显示,８ 例原发性鼻咽部Ｂ细胞性恶性淋巴瘤中３ 例绝大多数肿瘤细胞呈阳性表达,１ 例潜在性膜蛋白１（ｌａｔｅｎｔ ｍｅｍｂｒａｎｅ ｐｒｏｔｅｉｎ １,ＬＭＰ１）阳性。而１１ 例继发性鼻咽部Ｂ细胞性恶性淋巴瘤ＥＢＥＲ全部为阴性。全部病例进行了ＬＭＰ１ 检测,除１ 例原发者,全部阴性。利用ＥＢＥＲＩＳＨ（ＥＢＥＲ原位杂交） 和免疫组化ＣＤ 标记物进行双标记染色证实,ＥＢＥＲ 和ＬＭＰ１阳性细胞为ＣＤ２０ 阳性,ＣＤ４５ＲＯ 阴性。鼻咽部原发性Ｂ细胞性恶性淋巴瘤ＥＢＶ 表达４／８ ,而继发者为０／１１。结论：ＥＢＶ 与鼻咽部原发性Ｂ细胞恶性淋巴瘤有较高的相关性,而与继发性者无关。     

EB病毒受体的放射配基结合分析

用３Ｈ－ＴｄＲ标记爱波斯坦－巴尔病毒（ＥＢＶ）进行结合饱和实验和竞争性抑制实验检测３种类型细胞的ＥＢＶ受体。结果表明，Ｂ淋巴细胞性白血病细胞系Ｒａｊｉ细胞存在高低两种亲和性ＥＢＶ结合位点，其Ｋｄ１＝１．２５×１０（－１３）ｍｏｌ／Ｌ，Ｂ（ｍａｘ）１＝９．８９病毒粒子／细胞；Ｋｄ２＝２．８０×１０（－１２）ｍｏｌ／Ｌ，Ｂ（ｍａｘ）２＝１７０．３５病毒粒子／细胞，而ＥＢＶ不与红白血病细胞系Ｋ５６２细胞结合。上皮细胞性低分化鼻咽癌细胞系ＣＮＥ－２Ｚ细胞也表达ＥＢＶ受体，其Ｋｄ＝６．１７×１０（－１３）ｍｏｌ／Ｌ，Ｂ（ｍａｘ）＝１０．２４病毒粒子／细胞。ＥＢＶ及α干扰素均能阻止３Ｈ－ＥＢＶ与Ｒａｊｉ细胞或ＣＮＥ－２Ｚ细胞的特异性结合。     

应用重组抗原检测鼻咽癌血清EBVTK抗体

应用重组抗原检测鼻咽癌血清ＥＢＶＴＫ抗体①陈尚武１，②黄迪２马涧泉１（中山医科大学１生化教研室２肿瘤研究所；广州，５１００８９）主题词鼻咽肿瘤／诊断；疱疹病毒４型，人；抗体，病毒／诊断应用；胸苷激酶／诊断应用中图号Ｒ７３９．６３鼻咽癌（ＮＰＣ）是我...     

EB病毒抗体检测在鼻咽癌早诊应用中的评价

作者在广东鼻咽癌高发区四会市、广州市的５４４２５名。年龄在３０－５９岁自然人群中，应用多项ＥＢ病毒（ＥＢＶ）血清学指标结合鼻咽光导纤维镜、病理组织学检查等手段，进行前瞻性观察、验证及评价这些鼻咽癌“高危人群”血清学指标的应用价值。我们认为：在鼻咽癌高发区人群筛查中，应用ＥＥＶ抗体检测，凡具下列指标之一者。为患鼻咽癌高危人群，应给予鼻咽光纤镜及病理检查，以期发现早期病人。①ＥＢＶＩｇＡ／ＶＣＡ≥１：８０或ＥＤＡｂ≥５０％。②ＥＢＶＩｇＡ／ＶＣＡ、ＩｇＡ／ＥＡ、ＥＤＡｂ３项中任何两项阳性。③ＥＢＶＩｇＡ／ＶＣＡ、ＩｇＡ／ＥＡ、ＥＤＡｂ３项中任何单项持续高滴度或滴度持续上升。     

鼻咽癌及鼻咽部粘膜中EB病毒DNA的检测

目的 检测鼻咽部粘膜及鼻咽中的ＥＢＶ ＤＮＡ片段,作为癌前病变的确立和癌变风险的评估指标。方法 用ＰＣＲ扩增ＥＢＶ的Ｂａｍ ＨＩＷ片段。结果 鼻咽癌中阳性率为８７．９％（１０２／１１６）,颈淋巴结转移灶６６．６％（２／３）,鼻咽癌放疗后鼻咽生炎７５．６％（２８／３７）,鼻咽粘膜不典型增生７１．１％（１５／２１）,鼻咽粘膜慢性炎和正常鼻咽粘膜上皮分别为２１％及２０％。结论：ＥＢＶ感染在鼻咽癌发生过程     

丙型肝炎病毒包膜蛋白基因片段的克隆与表达

应用ＲＴ－ＰＣＲ和基因重组技术，从湖南地区丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）感染者血清中克隆了ＨＣＶ包膜蛋白基因片段（Ｅ１，Ｅ２／ＮＳ１）经与已知基因型的ＨＣＶ－１，ＨＣＶ－Ｊ，ＨＣＶ－Ｊ６和ＨＣＶ－Ｊ８进行核苷酸序列的比较分析，这些基因片段属１ｂ型ＨＣＶ基因。将克隆基因重组于表达质粒ＰＭＡＬ－ＣＲＩ中，在大肠杆菌内进行高效表达，获得了融合蛋白ＭＢＰ－Ｅ１，ＭＢＰ－Ｅ２／ＮＳ１，经ＷｅｓｔｅｍＢｌｏｔ分析证实     

EB病毒及鼻咽癌患者淋巴细胞自发转化后旧培养液转化人胚鼻咽上皮样细胞

ＥＢ病毒及鼻咽癌患者淋巴细胞自发转化后旧培养液转化人胚鼻咽上皮样细胞中山医科大学实验动物中心（５１００８９）焦晓蓉中山医科大学肿瘤研究所　黄玫玲鼻咽癌（ＮＰＣ）细胞中存在ＥＢ病毒基因组，ＥＢ病毒核抗原（ＥＢＮＡ）检测阳性［１，２］，所有未分化和低分化...     

PCR法在疱疹病毒性脑炎诊断及疗效观察中的应用

选择疱疹病毒科病毒ＤＮＡ多聚酶基因高保守区中的一对引物，一次ＰＣＲ可同时扩增疱疹病毒科的４种病毒［单纯疱疹病毒Ｉ型（ＨＳＶ１）、单纯疱疹病毒Ｉ型（ＨＳＶ２）、ＥＢ病毒（ＥＢＶ）、及巨细胞病毒（ＣＭＶ）］相应的ＤＮＡ片段。根据扩增产物分子的大小及对扩增产物酶切分析，可将标本中的４种病毒准确分型。用该法检测临床疑为病毒脑炎患者和其他中枢神经系统疾病患者（对照组）的脑脊液（ＣＳＦ），脑炎组ＣＳＦ阳性率３０％（９／３０），对照组ＣＳＦ阳性率６．７％（２／３０）；其中８例为ＨＳＶ１阳性，２例为ＣＭＶ阳性，１例为ＨＳＶ２阳性。２例病毒脑炎患者经用无环鸟苷抗病毒治疗７～１０ｄ后其ＣＳＦ中的ＨＳＶ１ＤＮＡ由阳转阴。由此说明ＰＣＲ法不仅可早期诊断疱疹病毒性脑炎，还可显示抗病毒药物的疗效。     

PCR法检测EB病毒基因及其与鼻咽癌发病的关系

目的　研究患者颈部转移性淋巴结中是否存在ＥＢ病毒。方法　①采用聚合酶链反应（ＰＣＲ） 技术检测５０ 例患者的颈部淋巴结穿刺液;②采用ＰＣＲ法检测１５ 例石蜡包埋鼻咽癌（ＮＰＣ） 组织;③对１２例ＥＢ病毒ＶＣＡＩｇＡ 抗体阳性患者血清进行ＥＢ 病毒基因检测。结果　①３０ 例ＮＰＣ 患者中,２７ 例ＥＢＶＤＮＡ 阳性（ 阳性率９０ ％ ） ;７ 例头颈部其他肿瘤患者中１ 例阳性（１４－３ ％ ） ;８ 例其他部位肿瘤患者中１ 例阳性（１２－５ ％ ） ;５ 例鼻咽部炎症患者ＥＢＶＤＮＡ 检测均为阴性。经χ２ 检验,ＮＰＣ 组与其他肿瘤及鼻咽部炎症组相比,阳性率差异有非常显著意义（ Ｐ＜ ０－００５） 。②１５ 例石蜡包埋ＮＰＣ 组织,ＥＢＶ基因阳性者有１２ 例（ 阳性率８０ ％ ） ;１ 例鼻咽部慢性粘膜炎石蜡包埋组织末检测到ＥＢＶＤＮＡ。③３ 例临床诊断为ＮＰＣ 的血清中均检测到ＥＢＶＤＮＡ（２５ ％ ） 。结论　对于隐性鼻咽癌和原发灶不明的颈部转移癌中确认是否为鼻咽癌,ＥＢ 病毒基因检测是有价值的,ＰＣＲ 技术可以为ＮＰＣ 的诊断和鉴别诊断提供参考依据。     

EB病毒壳抗原在大肠杆菌中的表达与应用

目的;获得足够的ＥＢ病毒壳抗原,建立ＥＬＩＳＡ方法用于鼻咽癌的诊断,方法：将ＢＡＬＦ４基因克隆进入载体ｐＵＲ２９１,在大肠杆菌中表达ＥＢ病毒壳抗原与β－半乳糖苷酶的融合蛋白,并通过ＤＥＡＥ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ Ｆａｓｔ Ｆｌｏｗ离子交换柱层析对融合蛋白进行纯化,将纯化的蛋白用于ＥＬＩＳＡ方法检测人血清中的ＩｇＧ／ＶＣＡ和ＩｇＡ／ＶＣＡ抗体,用带有ｐＵＲ２９１质粒的宿主菌裂解液吸收待血清中的抗β－半     

用PCR技术研究疱疹病毒与新生儿黄疸的相关性

用聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术检测了３９例新生儿黄疸患儿。结果１３例外周血淋巴细胞检出疱疹病毒ＤＮＡ，总检出率３３３％，其中巨细胞病毒（ＣＭＶ）１１例，Ⅱ型单纯疱疹病毒（ＨＳＶⅡ）２例，检出率分别为２８２％（１１／３９）和５１％（２／３９），未检出Ⅰ型单纯疱疹病毒（ＨＳＶⅠ）和ＥＢ病毒（ＥＢＶ）ＤＮＡ。提示新生儿黄疸与疱疹病毒感染有关     

EB病毒壳抗原在大肠杆菌中的表达与应用

获得足够的ＥＢ病毒壳抗原,建立ＥＬＩＳＡ方法用于鼻咽癌的诊断。方法：将 ＢＡＬＦ４基因克隆进入 载体ｐＵＲ２９１,在大肠杆菌中表达ＥＢ病毒壳抗原与β－半乳糖苷酶的融合蛋白,并通过ＤＥＡＥ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ　Ｆａｓｔ　Ｆｌｏｗ离子 交换柱层析对融合蛋白进行纯化,将纯化的蛋白用于 ＥＬＩＳＡ方法检测人血清中的ＩｇＧ／ＶＣＡ和 ＩｇＡ／ＶＣＡ抗体,用带 有ｐＵＲ２９１质粒的宿主菌裂解液吸收待检血清中的抗β－半乳糖苷酶抗体。结果：ＥＬＩＳＡ方法与免疫荧光方法检测的 结果呈正相关（ｒ＝０．６２３６,Ｐ＜０．００１;ｒ＝０．９２２５,Ｐ＜０．００１）。免疫荧光方法检测为阳性的血清,ＥＬＩＳＡ检测均为 阳性;ＩｇＧ／ＶＣＡ和ＩｇＡ／ＶＣＡ抗体的几何平均滴度（ＧＭＴ）分别是免疫荧光方法的１３倍和１５倍。在４０份免疫荧光检 测ＩｇＡ／ＶＣＡ阴性的血清中,ＥＬＩＳＡ检测有３例阳性,表明ＥＬＩＳＡ方法比免疫荧光方法更敏感。结论：在原核系统中 表达抗原,为ＥＬＩＳＡ方法在鼻咽癌的诊断和大规模血清学普查中的应用提供了一个有效手段。     

102例乳腺癌中的EB病毒感染

探讨国人乳腺癌中ＥＢ病毒ＤＮＡ的检出率及ＥＢ病毒基因编码蛋白的表达情况。方法 １：在１０２例乳腺癌中用聚合酶链反应技术扩增ＥＢＶ内部重复序列ＢａｍＨＩＷ区域，并以３４例服民腺纤维腺瘤，３例管内乳头状瘤和１０例乳腺导管上皮增生作为对照组；２．肜ＡＢＣ免疫组织化学技术检测其中７３例乳腺癌中的ＥＢＶ潜在膜蛋白和ＥＢＶ核抗原２．结果 １．ＰＣＲ检测显示２９例乳腺癌有ＥＢＶＣ－ＤＮＡ，而对照组中仅２例纤维腺     

丙肝核酸免疫效果初步观察

目的 观察丙肝核酸疫苗的免疫效果。方法 用丙肝病毒Ｃ＋Ｅ１区基因的真核表达重组质粒ｐＳＶＬ－ＨＣＶ／Ｃ＋Ｅ１免疫蛇毒预处理的ＢＡＬＢ／Ｃ和Ｃ５７ＢＬ小鼠，两周后采用ＥＬＩＳＡ法开始检测抗体滴度。结果 真核表达重组质粒ｐＳＶＬ－ＨＣＶ／Ｃ＋Ｅ１免疫能诱导习免疫应答，产生高水平的特异抗体。特别是Ｃ５７ＢＬ小鼠抗体反应最好，初次免疫就能产生高水平的特异抗体，加强后能持续数周，最高滴度ＯＤ值达１．４５。结     

HCV E2和HBV preS融合蛋白真核表达载体的构建及在哺乳动物细胞 …

目的 构建丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）Ｅ２和乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）ｐｒｅＳ融合蛋白的真核表达载体。方法 用ＰＣＲ方法扩增ＨＢＶｐｒｅＳ和ＨＣＶＥ２蛋白基因,并将二者克隆到真核表达载体ｐｃＤＮＡ３中,用脂质体转染试剂将其转入ＣＯＳ７细胞,通过免疫荧光检测细胞瞬时表达的融合蛋白,结果Ｅ２－ｐｒｅＳ融合蛋白基因包括了全长的ＨＢＶｐｒｅＳ和ＨＣＶＥ２蛋白基因,嵌合基因长度约１．６ｋｂ表达载体在ＣＯＳ７细胞表达出     

鼻咽癌和肝癌联合筛查的流行病学及卫生经济学研究

【目的】评估在鼻咽癌和肝癌高发区进行联合筛查方案的成效。【方法】采用酶联免疫吸附（ＥＬＩＳＡ）法检测血清ＥＢ病毒相关抗体（ＥＢＮＡ１／ＩｇＡ,ＶＣＡ／ＩｇＡ）和乙肝表面抗原（ＨＢｓＡｇ）,对评估为高危人群做进一步的临床检查。【结果】联合筛查１２８２９人,ＥＢＮＡ１／ＩｇＡ阳性率和ＶＣＡ／ＩｇＡ阳性率分别为５．６０％和８．１８％;ＨＢｓＡｇ阳性率为１５．９９％;总人群中,ＥＢ病毒与ＨＢｓＡｇ感染的双重感染率２．２５％,关联性分析显示两病毒感染有关联（ＯＲ＝ １．１５７,Ｐ ＝ ０．０３７）;确诊鼻咽癌１０例,肝癌１１例;发现１例早期癌症病例平均费用５６ ７９７元,联合筛查早期发现成本系数（ＥＤＣＩ）１．４８。【结论】ＥＢ病毒与乙肝病毒感染在普通人群中可能有相互协同作用;鼻咽癌高发区进行联合筛查,可以显著降低筛查成本,提高筛查效益。